本发明公开一种新型壳聚糖酶及其制备方法,属于基因工程技术领域。本发明壳聚糖酶基因CsnA的核苷酸序列如SEQID NO:1所示,其是通过对来源于天蓝色链霉菌的壳聚糖酶的序列根据毕赤酵母密码子的偏好性进行综合优化得到。本发明壳聚糖酶CsnA的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示,是一种真菌壳聚糖酶,不仅丰富了壳聚糖酶的种类和来源途径,且自身具有较高的酶活性,在较宽的温度和pH范围内均表现出良好的稳定性,具有良好的应用前景和产业价值。
一种重组宿主细胞,其包括编码FLO8蛋白的内源基因,所述FLO8蛋白包括鉴定为SEQ ID NO:1的氨基酸序列或其同源物,所述宿主细胞通过一种或多种基因修饰进行工程改造,以与所述一种或多种基因修饰之前的宿主细胞相比减少所述基因的表达,并且所述宿主细胞包括异源表达盒,所述异源表达盒包括受表达盒启动子(ECP)控制的目的基因(GOI),所述ECP可被非甲醇碳源抑制；以及使用所述重组宿主细胞生产目的蛋白的方法。
本发明公开鲁氏酵母菌基因在提高微生物产HDMF的产量中的应用,涉及微生物领域；所述鲁氏酵母菌基因为QOR基因,或FBA基因和TPI基因的组合；所述QOR基因、FBA基因和TPI基因编码区的核苷酸序列如SEQ ID NO:1-3所示；本发明利用QOR基因,或FBA基因和TPI基因的组合制备的工程菌可大幅提高天然HDMF产量,比化学合成法生产的HDMF香气更好、安全性更高；所述工程菌在分别添加外源1,4-萘醌和D-果糖于YPD培养基中,还可进一步提高HDMF产量,降低了生产成本；同时,生产目标产物时对生产环境要求更低、能耗低、污染小,对环境更加友好,并且合成步骤简单。
一组GH16家族葡聚糖酶的N-糖基化突变体及其应用,包括TlGlu16A-A62T和RhGlu16B-N57A,所述TlGlu16A-A62T的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；RhGlu16B-N57A的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。最终验证表明此N-糖基化位点对GH16家族葡聚糖酶的热稳定性和催化活力具有重要影响。在此改造条件下,发生N-糖基化突变体的热稳定性和催化效率有显著增强。本发明通过Ala62位点的改造可以大大提高葡聚糖酶的热稳定性和催化效率,并对GH16家族葡聚糖酶及其它糖苷水解酶的热稳定性和催化效率改良具有重要的指导意义,还为其在工业生产的应用提供了基础。
