一种基于酶促化学偶联构建的多羟基聚氨酯蛋白质转染试剂、制备方法及其在转染分子量为10~450kDa蛋白质中的应用,属于生物技术领域。本发明通过酶促开环聚合与缩聚反应相偶联的模式,制备聚氨酯载体材料,利用原子转移自由基聚合反应对聚氨酯材料进一步修饰改性,构建多羟基聚氨酯蛋白质转染试剂,羟基的引入有利于提升试剂与蛋白质药物的相互作用,进而提升对蛋白质药物的组装及转染能力。以人宫颈癌细胞HeLa为目标细胞,对制备的转染试剂与蛋白质的组装能力与转染效率进行了系统评价。结果显示,转染试剂能够与蛋白质形成稳定的纳米复合物,并成功将不同分子量大小的蛋白质转染至细胞内,同时保持了蛋白质的结构与生物学活性。