本发明提供一种生物组织粘合剂的制备方法,制备方法包括:S1:以聚合物为原料,经过氧化剂特异氧化下,获得醛基化聚合物,其中聚合物中至少部分第一聚合单体,即多糖单体(己糖)上2位和3位的C-C键发生的断裂,开环并形成醛基,得到第二聚合单体;S2:加入多巴胺,至少部分第二聚合单体与多巴胺发生席夫碱反应,生成第三聚合单体;S3:加入还原剂,至少部分第三聚合单体亚胺键被还原为C-N键,生成第四聚合单体。本发明提供的生物组织粘合剂的制备方法,多巴胺接枝率高,获得的生物组织粘合剂具有良好粘附性能,并且还原亚胺键,提高组织粘合剂稳定性,同时通过制备工艺调控可以使组织粘合剂降解时间可控。