本发明涉及生物化工领域,公开了一种羰基还原酶突变体及其构建方法和应用,本发明通过将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第143位亮氨酸突变为丙氨酸,136位亮氨酸突变为丙氨酸以及135甘氨酸突变为异亮氨酸,使得羰基还原酶突变体的酶活提高8倍,且e.e.值提高到了99％,与甲酸脱氢酶偶联成功实现了辅酶循环,最终在菌体终浓度为20g(dcw)/L能将450g/L的底物在12h之内转化率以及e.e.值均在99％以上,有效解决了底物浓度不高、转化率低、产率低以及e.e.值低以及生产成本较高等问题。