本发明公开了生产头孢菌素C的基因工程菌及其构建方法。本发明通过在顶头孢霉C10菌株(头孢菌素C高产菌株)中敲除Acrpn4基因,极大地提高了头孢菌素C的产量,并增强了发酵过程中菌体的存活能力,对降低头孢菌素C的生产成本具有重要意义。本发明具有重要的应用价值。