本发明公开了一种细胞色素P450BM3突变体及其在醋酸群勃龙合成中的应用,所述细胞色素P450BM3突变体选自：突变体LG-23/T438S,LG-23/T438A和/或LG-23/T438G,氨基酸序列如SEQ ID NO：1,SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示,其都是在突变体LG-23的基础上定点突变得到。经验证所述细胞色素P450BM3突变体和LG-23都具有甾体化合物11α羟基化催化活性,可应用于醋酸群勃龙的合成中。使用BM3突变体酶和17β-HSD酶一步法催化4,9物生成11α-羟基甲基双烯醇酮,并结合化学催化生成醋酸群勃龙。本发明提供了一种生物酶催化和化学催化结合合成醋酸群勃龙的方法,不仅简化药物合成步骤,提高催化选择性,减少副产物提高产率,并且反应条件温和,成本低廉,绿色环保高效,对推动我国甾体药物的开发进程有着重要的应用价值。