一种基于Janus微球的液相色谱固定相及其制备方法,涉及液滴微流控技术。基于Janus微球的液相色谱固定相,使用具有双面或多面结构的Janus微球作为色谱固定相,微球的每一面都具有不同的化学组成和色谱选择性。每个Janus微球都具有两个或两个以上的表面区域,可根据需要对每个表面区域的化学组成和性质进行调控。制备方法:根据分离需要,对Janus微球的化学组成进行设计,将每一相的反应前体与引发剂一同配制成对应的分散相溶液;在液滴微流控装置中,连续相的辅助下,均匀生成液滴并收集;引发液滴内反应前体的聚合反应,固化液滴形成Janus微球。可用于制备液相色谱,常规高效液相色谱,或用于纳流、微流液相色谱。