本发明涉及一种以热改性乳清蛋白浓缩液为脂肪替代物的低脂酸奶的制备方法。该制备方法包括如下步骤:将得到的乳清蛋白浓缩物调节至pH7.0,加热70℃保温30min后迅速冷却至室温,得到干酪乳清蛋白聚合液;将经巴氏灭菌后的脱脂牛奶预热到70℃,加入7%白砂糖,混合10min,降温至42℃时分别加入0.004%菌种以及干酪乳清蛋白聚合液混合10min,罐装、43℃恒温发酵4h后移至4℃冷库后熟18h即得以热改性乳清蛋白浓缩液为脂肪替代物的低脂酸奶。本发明以干酪副产物乳清为原料,利用膜技术工程分离得到10%乳清蛋白浓缩物,并将其热改性直接利用热聚合干酪乳清浓缩液作为脂肪替代物应制备高蛋白的低脂酸奶。