本发明涉及生物技术领域,特别涉及高产N-乙酰基血清素的基因元件组合、重组质粒组合、基因工程菌株和方法。该基因元件组合由基因元件1和基因元件2组成；基因元件1包括5-羟色氨酸脱羧酶基因和芳香烷基胺-N-乙酰基转移酶基因；基因元件2包括分子伴侣基因。本发明对N-乙酰基血清素的安全生物转化提供了简单且有效的实施方法,其是利用T7启动子使5-羟色氨酸脱羧酶和芳香烷基胺-N-乙酰基转移酶在大肠杆菌中串联表达,并通过与分子伴侣质粒共表达,增强了5-羟色氨酸脱羧酶和芳香烷基胺-N-乙酰基转移酶的可溶性表达,显著地提高了产物N-乙酰基血清素的含量,该工程菌生物转化N-乙酰基血清素的产量高达10-20g/L。

本发明涉及生产N-乙酰基-5-甲氧基色胺的基因工程菌、构建方法及应用。生产N-乙酰基-5-甲氧基色胺的基因工程菌包含咖啡酸O-甲基转移酶基因,以及甲硫氨酸腺苷转移酶基因或/和甲硫氨酸合成酶基因,能在细胞内大量表达生成具有生物活性的咖啡酸O-甲基转移酶,以及甲硫氨酸腺苷转移酶或/和甲硫氨酸合成酶。该方法通过过表达咖啡酸-O甲基转移酶COMT基因,和甲硫氨酸腺苷转移酶基因或/和甲硫氨酸合成酶基因,重新构建N-乙酰基-5-甲氧基色胺生物合成途径,明显提升了N-乙酰基-5-甲氧基色胺的合成产量。

本发明提供了一类分离自丹参内生链霉菌的4-酰基-2-氨基咪唑类化合物及其制备方法和用途。本发明提供的4-酰基-2-氨基咪唑类化合物具有抑制植物病原真菌的作用,在防治由植物病原真菌引起的植物病害方面具有一定潜力。

一步法催化合成L-肌肽的方法,属于有机物合成技术领域。其是在填充床反应器中进行酶合成反应,先将L-肌肽酶构建全细胞催化剂装入填充床中,再加入含有β-丙氨酸、L-组氨酸以及催化剂的反应液,以外循环形式流过填充床进行反应转化,反应结束后用高效液相色谐分析测定反应转化率,收集反应液,离心分离,将离心分离获得的全细胞继续催化实现循环利用,得到高浓度的L-肌肽。优点：避免化学合成法所依赖的基团保护和脱保护、有利于免用有毒有害溶剂而得以体现绿色环保生产、有益于摒弃高温高压而得以体现节能。

本发明公开了一种重组酯酶突变体、基因、工程菌及拆分(R,S)-吲哚啉-2-甲酸乙酯的应用,所述重组酯酶突变体氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明对野生型的酯酶BaCE进行了定点突变,得到了立体选择性提高的突变体。该突变体重组质粒转化至大肠杆菌中,构建成大肠杆菌工程菌；该工程菌经超声破碎,过柱纯化得到重组酯酶突变体；利用大肠杆菌工程菌或重组酯酶突变体为生物催化剂拆分(R,S)-吲哚啉-2-甲酸乙酯,得到产物(S)-吲哚啉-2-甲酸,其转化率达49％,产物的光学纯度达到98％以上。

本发明公开了一种采用微通道反应器连续制备2-苄基异吲哚啉酮类化合物的方法,包括如下步骤：(1)将含邻苯二甲醇、醇氧化酶、黄素腺嘌呤二核苷酸和过氧化氢还原酶的混合溶液与空气分别同时泵入微通道反应装置中,于含纳米MnO2的第一微反应器中进行第一反应；(2)将第一反应流出液与苄胺类化合物溶液分别同时泵入第二微反应器中进行第二反应,即得如式IV所示的2-苄基异吲哚啉酮类化合物。本发明方法具有反应时间短,反应转化率高,副反应少,毒性和污染小,生产成本低,产品质量好等优点,在反应过程中不使用贵金属催化,绿色环保且节能高效,适于推广应用,解决现有技术存在的反应时间长,反应条件苛刻及需要贵金属催化催化剂的问题。

本发明公开了一种基于木霉-芽孢杆菌顺序接种共生培养发酵液的生物种衣剂及其制备方法。根据合成生物学原理,将诱导抗病和抗逆性等特点的木霉菌与拮抗病原菌和促进作物生长等特点的芽孢杆菌通过分阶段接种共发酵技术制备共生菌液,该共生菌液不仅满足两类孢子含量的平衡,同时具有还含有两种微生物相互作作特异诱导的成分。共生菌液与硅藻土和芸苔素内酯按比例混合制备粉剂型生物种衣剂,该生物种衣剂含较高含量孢子、拮抗性和促进生长等物质,明显提高玉米、小麦、水稻等作物生长和抗病和抗逆能力,是粮食作物种子益菌化处理的新技术。

本发明提供了一种非天然存在的微生物生物体,其具有己二酸、6-氨基己酸或己内酰胺途径。所述微生物生物体含有至少一种编码己二酸、6-氨基己酸或己内酰胺途径中各自的酶的外源性核酸。本发明另外提供了产生己二酸、6-氨基己酸或己内酰胺的方法。该方法可以包括在产生己二酸、6-氨基己酸或己内酰胺的条件下和足以产生己二酸、6-氨基己酸或己内酰胺的时间内培养产生己二酸、6-氨基己酸或己内酰胺的微生物生物体,其中所述微生物生物体以足以产生各自产物的量表达至少一种编码己二酸、6-氨基己酸或己内酰胺途径酶的外源性核酸。

本发明关于具有增加的碳通量效率的方法和生物,涉及一种非天然存在的微生物,其包括琥珀酰基-CoA合成酶或转移酶的第一衰减以及琥珀酰基-CoA转化酶或编码在具有琥珀酰基-CoA到琥珀酸的净转化的多步骤途径之内的产琥珀酸酶的基因的至少第二衰减。

本发明公开了一种将L-色氨酸转化为色胺和D-色氨酸的方法,包括以下步骤：(1)对L-色氨酸进行消旋处理,获得含有D-色氨酸和L-色氨酸的母液；(2)向母液中投入色氨酸脱羧酶和辅酶PLP,在40-50℃、pH6.0±0.5的条件下特异性催化L-色氨酸转化成色胺；当母液中L-色氨酸含量降至0.001g/L或0.001g/L以下时结束反应,获得含有D-色氨酸和色胺的反应液；(3)调节反应液的pH值至12.0,使反应液中的色胺析出形成沉淀,分离得到色胺；(4)向分离出色胺后的反应液中加盐酸,使D-色氨酸析出,分离得到D-色氨酸。采用本发的方法可以将低价值的L-色氨酸同时转化为高价值的色胺和D-色氨酸；L-色氨酸的转化效率高,转化得到的色胺和D-色氨酸的纯度高。