本发明公开了一种CHO细胞表达的重组新型冠状病毒NCP-RBD蛋白的制备方法及其应用,包括以下步骤：(1)细胞复苏培养：取工作细胞株进行复苏培养,得到细胞复苏培养物；(2)细胞扩增培养：将细胞复苏培养物进行扩增,得到细胞扩增培养物；(3)罐培养：将细胞扩增培养物进行罐培养,得到细胞收获液；(4)纯化：对细胞收获液进行纯化,得到所需产物；其中,工作细胞株为表达重组新型冠状病毒NCP-RBD蛋白的重组CHO细胞株。采用本发明所述方法,可以将CHO细胞表达的重组新型冠状病毒NCP-RBD蛋白高效的分离和纯化,适用于规模化生产,同时能有效地用于生产新冠疫苗。

本发明涉及无细胞体系蛋白质合成技术领域,尤其涉及一种提高无细胞体系蛋白质合成的方法,针对现有的无细胞体系蛋白质合成技术仍存在合成蛋白质的效率较低的问题,现提出如下方案,其中包括以下步骤：S1：材料选择,S2：转录及翻译,S3：蛋白质合成,S4：生物调控,S5：检验成果,本发明的目的是通过荧光标记模板DNA,对蛋白质的合成过程进行观察,便于后续对蛋白质的合成速度进行调控,并通过弱化作用对合成蛋白质的过程进行调控,提高蛋白质的合成效率。

本发明公开了一种以二氧化碳和/或木质纤维素为底物的生物表面活性剂制备方法,包括以二氧化碳固定微生物和/或木质纤维素降解微生物为发酵菌种,以二氧化碳和/或木质纤维素为基础原料,进行发酵得到发酵液；再在合成生物表面活性剂微生物的作用下,合成生物表面活性剂粗品；再提取生物表面活性剂粗品中的表面活性剂,得到生物表面活性剂；本发明通过多级、多菌种发酵工艺,二氧化碳和/或木质纤维素为基础原料发酵得到,进行发酵合成得到不同结构的生物表面活性剂粗品；其是以糖脂或脂肽类生物表面活性作为主要成份；经过过滤、浓缩、提纯得到生物表面活性剂纯品。本发明制备的生物表面活性剂可以应用于石油、食品、日化、环保、医药等行业。

本发明公开一种蛋白质体外合成纯化一体化制备方法、试剂盒及其应用,属于蛋白合成技术领域。所述制备方法,由体外蛋白合成体系和编码目标蛋白的核酸模板构成反应体系,向其中加入可以结合目标蛋白的蛋白固定系统,在体外蛋白合成反应进行过程中,目标蛋白产物能够特异性结合到所述蛋白固定系统上。本发明打破合成、纯化两步走的传统策略,采用一种全新的合成纯化一体化的偶联方法,将传统的蛋白合成、纯化步骤合二为一,大大节约纯化蛋白产物的时间成本,大幅度地提高纯化效率,显著缩短制备周期,并且流程简单,操作便捷,可广泛应用于体外蛋白合成和检测方面；且制备周期的显著缩短,大大提高了实用性。

本发明公开一种抗体型生物磁性微球及其制备方法和应用。本发明第一方面提供了一种生物磁性微球,磁性微球本体外表面固定有至少一种带有线性主链和支链的聚合物,所述生物磁性微球的聚合物的支链末端连接有抗体型标签。本发明还提供了基于第一方面提供的生物磁性微球的制备方法和应用。本发明的生物磁性微球操作使用便捷,可在溶液中的快速分散和快速沉聚,无需使用高速离心机等大型实验设备；所述生物磁性微球是一种抗体磁珠,所述抗体型标签还可通过亲和复合物相互作用连接到所述聚合物的支链末端；用途广泛,作为纯化介质的抗体型标记具有灵活的可选择性,普遍、大规模应用于目标物的分离纯化。

本发明公开了一种提高多肽可溶性表达产量的方法,具体包括以E.coliBL21(DE3)为出发菌株,利用CRISPRi技术抑制蛋白酶基因,减少蛋白酶的形成,从而减少蛋白酶对多肽片段的降解,进而间接提高多肽的产量；同时,采用融合表达,筛选出更适宜的linker显著增加融合蛋白的产量及可溶性,从而进一步提高多肽表达量。

本发明公开了一种提高毕赤酵母碳源转化率的基因工程改进方法,属于基因工程技术领域。本发明在毕赤酵母GS115中同时敲除或沉默表达1,3-β-D-葡聚糖合酶相关基因PAS-chr2-1-0661和α-1,2-甘露糖转移酶相关基因PAS-chr3-0370,使构建的基因工程菌的碳源转化率较原始菌株提高2.23～2.41倍。在同样的发酵条件下,本发明构建的底盘细胞Pichia pastoris GS115ΔPAS-chr3-0370ΔPAS-chr2-1-0661相比Pichia pastoris GS115消耗的碳源更少,菌体生长速率更快,同时,也不影响外源蛋白的表达量,更适用于高密度发酵。

本发明公开了一种缩短培养时间和提高胶原蛋白含量的发酵工艺,通过优化甘油添加量和添加方式,其创新点在于增加甘油的补料量,提高诱导前生物量,同时在甲醇诱导阶段,在甲醇中混合甘油进行诱导,提高菌体的生长速度和产物合成速度,缩短培养时间,发酵水平提高了39.50%,节约生产成本,提高了发酵效率,适合于大规模发酵生产,为生产企业提高经济效益。

本发明涉及一种用于在微生物宿主细胞中产生目标重组多肽的方法,其包括(a)向微生物宿主细胞中引入编码所述目标多肽的多核苷酸,所述微生物宿主细胞已经被修饰,使得所述微生物宿主细胞中的选自酮醇酸还原异构酶(NADP(+))活性(EC 1.1.1.86)、乙酰羟酸合酶活性(EC 2.2.1.6)、天冬氨酸激酶活性(EC 2.7.2.4)、高丝氨酸脱氢酶活性(EC 1.1.1.3)和L-苏氨酸脱水酶活性(EC 4.3.1.19)的酶活性与未经修饰的微生物宿主细胞中的所述酶活性相比被调节；以及(b)在所述微生物宿主细胞中表达所述目标多肽。此外,本发明涉及一种用于减少至少一种非经典支链氨基酸向微生物宿主细胞中表达的目标重组多肽中的错掺的方法。

本发明涉及一种结核分枝杆菌整合型表达质粒及其应用,所述的质粒包括如下结构元件：(1)抗性基因的筛选标记,用于重组质粒的构建和筛选；(2)分别位于抗性基因两侧的γδ序列,用于抗性进行敲除；(3)用于目的基因插入及表达的元件；(4)必要的标签元件,复制子元件以及结核分枝杆菌基因组整合元件。