本发明公开了一种利用废弃肠道内容物进行生物转化获得熊去氧胆酸的方法,是以鹅去氧胆酸为底物,利用废弃的动物肠道内容物进行生物转化,从而获得熊去氧胆酸。本发明利用废弃肠道内容物成功催化转化得到了熊去氧胆酸,使废弃肠道内容物得到有效利用,为熊去氧胆酸的生物转化提供了一条新的思路。

本专利介绍了以NH-(2)-Ni-MOF为载体固定荧光假单胞菌脂肪酶,用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺活化脂肪酶的羧基,通过共价键法合成固定化酶PFL@NH-(2)-Ni-MOF的合成方法。以PFL@NH-(2)-Ni-MOF为生物催化剂,在酯交换拆分扁桃酸对映体反应中,固定化酶展现了优异的催化活性,总转化率可高达49.18%,产物对映体过剩量值为97.90%,相同条件下,固定化酶的反应速率是游离酶的1.83倍。该固定化酶具有优异的重复使用性能,在重复使用10次后,仍然保持其初始活性50.18%的催化效率。本专利提供的制备方法具有明显的技术优势。共价键法可以增强游离脂肪酶与载体的相互作用,与游离酶相比,固定化酶热稳定性高,对pH耐受度高,便于循环使用,显著降低了技术成本,而且操作简便,绿色环保。

本发明公开了一种去氢表雄酮的生物制备方法,其以廉价易得的甾体雄烯二酮酯化物出发通过一步生物酶催化反应,最终能以高达94％的收率得到目标产物。此过程没有中间体A的累积,因此不会产生由于中间体A不稳定而产生的氧化性杂质,因此反应的收率比较高,产品质量比较好。

本发明公开了一种重组酯酶突变体、基因、工程菌及拆分(R,S)-吲哚啉-2-甲酸乙酯的应用,所述重组酯酶突变体氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明对野生型的酯酶BaCE进行了定点突变,得到了立体选择性提高的突变体。该突变体重组质粒转化至大肠杆菌中,构建成大肠杆菌工程菌；该工程菌经超声破碎,过柱纯化得到重组酯酶突变体；利用大肠杆菌工程菌或重组酯酶突变体为生物催化剂拆分(R,S)-吲哚啉-2-甲酸乙酯,得到产物(S)-吲哚啉-2-甲酸,其转化率达49％,产物的光学纯度达到98％以上。

本发明公开了一种活性和立体选择性提高的烯键还原酶突变体及其编码基因以及应用,该烯键还原酶突变体包括以SEQ ID NO.1所示野生型的烯键还原酶OYE2p为模板,第84位氨基酸残基发生突变形成的烯键还原酶突变体Y84A,Y84V,Y84L,Y84I,Y84T,Y84C,氨基酸序列如SEQ ID NO.3～8所示。根据本发明提供的烯键还原酶的突变体可高活性、高立体选择性催化柠檬醛制备(R)-香茅醛,具有经济环保、手性选择性高的特点,为(R)-香茅醛的工业化生产提供一个潜在的生物催化剂。

本发明公开了一种制备手性四氢β-咔啉的酶及其制备方法和应用,涉及酶工程技术领域,该酶的蛋白氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；编码其蛋白的DNA分子核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；该酶的制备方法,包括以下步骤：构建DNA片段StnP2的宿主细胞,酶的表达纯化,蛋白的生化分析；该酶作为手性催化剂应用于拆分具有不同构型的四氢β-咔啉。本发明提供了一种高活性和高立体选择性的酶,使其应用于C-1位具有不同构型的四氢β-咔啉拆分,用于合成手性四氢-β-咔啉,本发明提供了制备手性四氢β-咔啉的酶,合成手性四氢β-咔啉产率高,催化条件温和,专一性强,使用广泛。

本发明涉及一种连续流生物催化合成阿扎那韦中间体氯醇的方法,使用羰基还原酶催化(S)-叔丁基(4-氯-3-羰基-1-苯丁基-2-基)氨基甲酸酯不对称还原制备光学活性叔丁基((2S,3R)-4-氯-3-羟基-1-苯丁基-2-基)氨基甲酸酯,葡萄糖脱氢酶提供辅酶循环,酶促反应是在连续流微反应器中发生。与现有技术相比,本发明提供了一种连续流生物催化合成阿扎那韦中间体氯醇的方法,可在连续流微反应器中立体选择性催化(S)-叔丁基(4-氯-3-羰基-1-苯丁基-2-基)氨基甲酸酯的不对称还原,生成相应的光学活性叔丁基((2S,3R)-4-氯-3-羟基-1-苯丁基-2-基)氨基甲酸酯,反应条件温和,催化效率高,转化率高,产品光学纯度好,ee值可高于98.3％,具有很好的工业应用前景。

本发明提供一种苯丙酮单加氧酶,其氨基酸序列由SEQ ID NO:2所示氨基酸序列通过突变获得,并公开基于该苯丙酮单加氧酶的不对称生物催化合成亚砜类药物的技术方法。本发明通过基因挖掘筛选获得来源于Limnobacter sp.的苯丙酮单加氧酶基因,采用基因工程技术构建重组大肠杆菌表达菌株,通过分子改造技术实现酶活力和立体选择性的提高。同时构建了单加氧酶突变体与不同脱氢酶的共表达菌株。以奥美拉唑硫醚为原料,采用全细胞或酶蛋白催化的方法,不对称催化合成光学纯埃索美拉唑。本发明可以在温和的条件下通过一步反应获得目标产物,没有副产物奥美拉唑砜,同时环境友好,是一种绿色生物催化合成途径。