阅读说明：本技术 Nlrp3炎症小体抑制剂及其制备方法和应用 (NLRP3 inflammasome inhibitor and preparation method and application thereof ) 是由 叶娜 郑龙太 镇学初 李婉婉 曹忠强 于 2019-04-29 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一类含一个或多个取代基的1,2,3,5,6,7六氢对称引达省类化合物、其药剂学上可接受的盐、酯或水合物,其制备方法,包含该化合物的药物组合物及其作为新型NLRP3炎症小体抑制剂在制备预防和/或治疗与NLRP3炎症小体相关疾病的药物中的应用。(The invention relates to a 1,2,3,5,6,7 hexahydro symmetrical indacene compound containing one or more substituents, a pharmaceutically acceptable salt, ester or hydrate thereof, a preparation method thereof, a pharmaceutical composition containing the compound and application thereof as a novel NLRP3 inflammation body inhibitor in preparing medicaments for preventing and/or treating diseases related to NLRP3 inflammation bodies.)

NLRP3炎症小体抑制剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及药物学领域，尤其涉及一种NLRP3炎症小体抑制剂及其制备方法和应用。

背景技术

固有免疫是机体的第一道屏障，对外来病原体有清除作用，可以引导机体产生有效的适应性免疫应答。固有免疫细胞表面的模式识别受体(PRR)与病原生物表面的病原体相关分子模式(PAMP)的相互识别和作用是启动固有免疫的关键。NLR是胞浆型PRR家族中的重要成员，是细胞内的感应分子，在固有免疫中发挥独特的功能。其中，NLRP是NLP中最大的亚家族，共有14个家族成员，具有特征的PYD效应结构域。

NLRP3炎症小体是一种多蛋白复合物，由固有免疫受体NLRP3，街头蛋白ASC和Caspase-1组成，是目前研究最多的炎症小体。NLRP3炎症小体通过引发和激活两阶段来产生抗炎作用。第一阶段引发阶段，TLR配体诱导NF-kB介导NLRP3的前体和IL-1β前体在细胞核内进行转录。第二阶段为激活阶段，需要ATP，尼日利亚菌素，尿酸晶体，β淀粉样纤维等第二信使触发促炎反应，使NLRP3的前体激活，之后传感器蛋白寡聚化。然后招募衔接蛋白ASC与Caspase-1前体结合成炎症小体，炎症小体的组装后导致Caspase-1前体的切割和活化，一方面诱导促炎因子IL-1β的成熟和分泌，另一方面导致细胞程序性死亡。

当NLRP3炎性小体功能异常时，将引发或促进多种人类重大疾病的发生与发展。NLRP3自身基因突变常与一系列遗传性自身炎症性疾病相关,这些疾病统称为cryopyrin相关周期性综合症(CAPS)。常见的三种CAPS按发病严重程度由低到高分别为家族性寒冷自身炎症性综合症(FCAS)、Muckle-Wells综合症(MWS)和新生儿多系统炎症性疾病(NO-MID)。而当NLRP3炎症小体被各种代谢产物(包括高血糖、饱和脂肪酸、胆固醇结晶、尿酸结晶、β-淀粉样蛋白等)异常激活时，可能会在2型糖尿病、动脉粥样硬化、痛风、神经退行性疾病、多发性硬化症等疾病的发生中起重要作用。

至今虽然没有一个NLRP3抑制剂进入临床研究，然而已有多个小分子被报道可有效地抑制NLRP3炎症小体活化，例如MCC950、Parthenolide、BAY11-7082、INF39、CY-09等。

其中，MCC950高效抑制IL-1β的释放并不阻断TNF-a，IC₅₀为7.5nM，具有优异的药代动力学特性，是可口服的NLRP3炎症小体强效抑制剂。在多个NLRP3相关疾病的体内小鼠模型中，如多发性硬化症、冷炎素相关周期性综合征、帕金森氏症和阿尔兹海默症等，MCC950均表现出显著的活性，显示了良好的开发前景。

然而已有的文献报道对于MCC950具体作用机制阐述不明，该物质是否存在潜在的脱靶效应还不明确。虽然已有文献报道，MCC950在体外人类肝微粒体的作用下，会发生氧化反应产生主要的代谢产物I，然而基于人体内的复杂代谢环境，利用现有文献推测，呋喃环和氨基磺酰脲连接片段可能在体内经CYP450酶系代谢分别产生活性中间体II和III(如图1所示)。中间体II可与体内的关键氨基酸残基发生1,2-加成或1,4-加成，从而与生物大分子形成轭合物；异氰酸酯III也可与生物大分子如谷胱甘肽形成轭合物；进而产生一系列的代谢物，从而导致药物分子代谢失活，甚至肝毒性，可能导致安全隐患。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种NLRP3炎症小体抑制剂及其制备方法和应用，该NLRP3炎症小体抑制剂为含一个或多个取代基的1,2,3,5,6,7六氢对称引达省类化合物或其衍生物。

本发明的第一个目的是提供一种如式(1)所示的1,2,3,5,6,7六氢对称引达省类化合物、其药剂学上可接受的盐、酯或水合物：

其中，X为

Y为、

n为1-4中任一整数；m为0-4中任一整数；A、B和E独立地选自氢、C1-C8烷基、C2-C10炔基、C2-C10烯基、卤素、C1-C8卤烷基、氰基、硝基、芳基、羟基、羧基、C1-C8烷氧基、烷氧酰基、氨基、酰胺基、酰氧基、酰基、磺酰基、磺酰氨基、脲、硫脲或氨甲酰基；

或者A和B，或者A和E，与它们所连接的原子共同形成取代或未取代的脂族环、杂环、芳环或杂芳环；取代脂族环、杂环、芳环或杂芳环上的取代基选自氢、C1-C8烷基、C2-C10炔基、C2-C10烯基、卤素、C1-C8卤烷基、氰基、硝基、芳基、羟基、羧基、C1-C8烷氧基、烷氧酰基、氨基、酰胺基、酰氧基、酰基、磺酰基、磺酰氨基、脲、硫脲或氨甲酰基；

表示C4-C8脂族环、C6-C10芳环、含有1-3个选自N、O和S原子的4-8元芳杂环或含有1-3个选自N、O和S原子的5-8元芳杂环。

进一步地，所述药剂学上可接受的盐为式(1)所示的化合物与无机酸或有机酸形成的盐，所述药剂学上可接受的酯为式(1)所示的化合物与酸(羧酸或无机含氧酸)或醇形成的酯，所述药剂学上可接受的水合物为式(1)所示的化合物与水以配位键或共价键形成的含水化合物。

优选地，式(1)中，A、B和E的其中两个为氢，另一个选自C1-C8烷基、C2-C10炔基、C2-C10烯基、卤素、卤烷基、氰基、硝基、芳基、羟基、羧基、C1-C8烷氧基、烷氧酰基、氨基、酰胺基、酰氧基、酰基、磺酰基、磺酰氨基、脲、硫脲或氨甲酰基；

选自C6-C10芳环、含有1-3个选自N、O和S原子的4-8元杂环或含有1-3个选自N、O和S原子的5-8元芳杂环。

优选地，式(1)中，Y为

m为0-4中任一整数，优选地，m为0或1。

更优选地，式(1)中，X为Y为

本发明中，卤素可以为氟、氯、溴或碘；

卤烷基中卤素的个数和种类不限，如三氟甲基、二氟甲基、单氟甲基或三氟乙基；

烯基可以为乙烯、丙烯、丁烯、苯乙烯或苯丙烯；

炔基可以为乙炔、丙炔、丁炔、苯乙炔或苯丙炔；

烷基(R₁)、烷氧基(R₁O-)、烷氧酰基(R₁OC(＝O)-)、酰胺基(R₁C(＝O)N-)、酰氧基(R₁C(＝O)O-)、酰基(R₁C(＝O)-)、磺酰基(R₁S(O)₂-)、磺酰氨基(R₁S(O)₂NH-)、氨甲酰基(R₁(R₂)NC(＝O)-)、氨甲硫酰基(R₁N(R₂)C(＝S)-)、脲(R₁N(R₂)C(＝O)NH-)、硫脲(R₁N(R₂)C(＝S)NH-)、烷氧酰甲基(R₁OC(＝O)CH₂-)、烷氨基(R₁NH-)以及二烷基氨基(R₁(R₂)N-)，上述基团中的R₁或R₂具体包括脂肪族烷基和芳香族烷基，其中：

脂肪族烷基优选为C1～C8烷基，如直链烷基、支链烷基、螺环烷基、桥环烷基、烯烷基、炔烷基、环烷基、环烯基、环炔基、烷氧烷基、烷氧酰基烷基、环烷基烷基，优选地，非限制性地包括：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、环丙烷基、环丁烷基、环戊烷基、环己烷基、烯丙基、炔丙基、环丁烯基或环己烯基；

芳香族烷基非限制性地包括：取代或未取代的苯甲基、苯乙基、苯异丙基，苯环丙基等；

芳环非限制性地包括：取代的或未取代的苯环，萘环，连苯环等；

芳杂环非限制性地包括：取代或未取代的芳杂环和苯并杂环，非限制性地包括喹啉、异喹啉、吲哚、苯并呋喃环、呋喃环、苯并噻吩环、噻吩环、吡啶环、吡咯环等；

另外，氨甲酰基(R₁(R₂)NC(＝O)-)、氨甲硫酰基(R₁N(R₂)C(＝S)-)、脲(R₁N(R₂)C(＝O)NH-)、硫脲(R₁N(R₂)C(＝S)NH-)、二烷基氨基(R₁(R₂)N-)中R₁和R₂还可以和与其相连的N原子形成环状胺、如哌嗪、哌啶、吗啉或四氢吡咯；

更优选地，本发明的1,2,3,5,6,7六氢对称引达省类化合物的结构式如下所示：

本发明的第二个目的是提供一种上述式(1)所示的1,2,3,5,6,7六氢对称引达省类化合物的制备方法：

当X为时，式(1)所示的1,2,3,5,6,7六氢对称引达省类化合物的制备方法包括以下步骤：

将式(2)所示的化合物与式(3)所示的化合物在CDI和DBU的作用下，在有机溶剂中于60-70℃下反应，反应完全后得到式(4)所示的1,2,3,5,6,7六氢对称引达省类化合物：

当X为时，式(1)所示的1,2,3,5,6,7六氢对称引达省类化合物的制备方法包括以下步骤：

将式(5)所示的化合物与式(3)所示的化合物在HOBt、EDCI和三乙胺的作用下，在有机溶剂中于20-30℃下反应，反应完全后得到式(6)所示的1,2,3,5,6,7六氢对称引达省类化合物：

进一步地，通式(2)所示的化合物的合成可参考文献ASC.Med.Chem.Lett.2016,7,1034–1038或Bioorganic&MedicinalChemistryLetters,13(5),837-840,2003进行，反应路线如下：

进一步地，通式(5)所示的化合物的合成可参考文献ASC.Med.Chem.Lett.2016,7,1034–1038进行，反应路线如下：

如无特殊说明，本发明中，BuOH是叔丁醇，Et₃N是三乙胺，CDI是N,N-羰基二咪唑，DBU是1.8-二氮杂二环十一碳-7-烯，HCl为盐酸，EA为乙酸乙酯，DCM为二氯甲烷，THF是四氢呋喃；BOC是二羰酸二叔丁酯，dioxian是1,4-二氧六环，HOBt是1-羟基苯丙***，EDCI是1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺。

本发明的第三个目的是提供一种药物组合物，包括治疗有效量的本发明的上述1,2,3,5,6,7六氢对称引达省类化合物、其药剂学上可接受的盐、酯或水合物。

本发明的第四个目的是公开1,2,3,5,6,7六氢对称引达省类化合物、其药剂学上可接受的盐、酯或水合物作为NLRP3炎症小体抑制剂在制备预防和/或治疗与NLRP3炎症小体相关疾病的药物中的应用。

进一步地，与NLRP3炎症小体相关疾病包括先天性免疫综合征和适应性免疫综合征。

进一步地，适应性免疫综合征包括痛风、二型糖尿病、动脉粥样硬化或阿尔茨海默症。

借由上述方案，本发明至少具有以下优点：

本发明在保留MCC950的左侧1,2,3,5,6,7六氢对称引达省胺的基础上，对潜在的毒性代谢位点进行改造，尤其是引入含取代基的苯环替代右侧的呋喃环并用其他linker替换氨基磺酰脲，从而提供一类新型的1,2,3,5,6,7六氢对称引达省衍生物作为NLRP3炎症小体抑制剂来制备预防和/或治疗与NLRP3相关疾病的药物。

上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例并配合附图详细说明如后。

附图说明

图1是推测的MCC950在体内发生氧化反应所产生的代谢产物示意图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

本发明以下实施例中，¹H-NMR用安捷伦400MHz或600MHz仪测定；MS用GCTPremier^TM(CI)质谱仪测定，除注明外均为EI源(70ev)；所有溶剂在使用前均经过重新蒸馏，所使用的无水溶剂均是按标准方法干燥处理获得；除说明外，所有反应均是在氮气保护下进行并TLC跟踪，后处理时均经饱和氯化钠水溶液洗涤和无水硫酸钠干燥过程；产品的纯化除说明外均使用硅胶(200～300目)柱色谱法；其中硅胶(200～300目)由青岛海洋化工厂生产，GF254薄层硅胶板由烟台江友硅胶开发有限公司生产。

以下实施例中，化合物简称同说明书上文中的物质相对应。

实施例1(1,2,3,5,6,7-六氢-s-茚满-4-基)氨磺酰氨基甲酸叔丁酯(LW-01-7-1)的制备

0℃下向搅拌的氯磺酰异氰酸酯(CSI)(0.3ml，2.65mmol)的无水二氯甲烷(3mL)溶液中加入叔丁醇(0.26,2.65mmol)，反应30分钟后，将所得溶液和三乙胺(0.375mL，2.65mmol)缓慢加入到2mL含有1当量1,2,3,5,6,7-六氢-s-茚满-4-胺的二氯甲烷溶液中。使所得反应溶液升温至室温反应2小时。将反应混合物用30mL二氯甲烷稀释，用0.1N HCl和水洗涤。将有机层用Na₂SO₄干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗产物。通过硅胶柱色谱(PE/EA：3/1)纯化残余物。

实施例2 LW-01-7-2的制备

为了除去Boc保护基团，将上述产物(LW-01-7-1)于6mL HCl：EA＝1:2(体积比)混合物中，并在室温下反应1小时。然后将其在真空下浓缩。用氨中和后，将反应混合物用30mL二氯甲烷稀释，用水洗涤。将有机层用Na₂SO₄干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗产物。通过硅胶柱色谱(PE/EA：2/1)纯化残余物，得到产物(332mg，49.7％)。LW-01-7-2化合物的结构式即为上文中的式(2)。

实施例3 3-溴-N-(N-(1,2,3,5,6,7-六氢-s-茚满-4-基)氨磺酰基)苯甲酰胺(LW-01-18-1)

氮气保护下，将3-溴苯甲酸(40mg，0.2mmol)和CDI(65mg，0.4mmol)溶于THF(2mL)中，在70℃加热回流45分钟，冷却至室温并加入LW-01-7-2(80mg，0.32mmol)和DBU(0.09mL，0.6mmol)。混合物常温下搅拌22小时。将反应混合物用30mL二氯甲烷稀释，用0.1N HCl和水洗涤。有机层用Na₂SO₄干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗产物。通过硅胶柱色谱(DCM/MeOH：70/1)纯化，得到产物白色固体(96mg，64％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ12.03(s,1H),9.70(s,1H),8.04(s,1H),7.89(d,J＝7.4Hz,1H),7.81(d,J＝7.6Hz,1H),7.48(t,J＝7.6Hz,1H),7.00(s,1H),2.78(d,J＝8.1Hz,8H),1.92–1.81(m,4H).¹³C NMR(151MHz,DMSO)δ164.85,143.93,141.05,135.81,135.12,131.27,131.14,128.52,127.64,122.16,119.88,32.97,30.89,25.79。

实施例4 2-氟-N-(N-(1,2,3,5,6,7-六氢-s-引达省-4-基)氨磺酰基)苯甲酰胺(LW-01-34-1)

利用2-氟苯甲酸和LW-01-7-2按照上述实施例3的方法制备LW-01-34-1(76mg，46％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.95(s,1H),9.71(s,1H),8.01(m,2H),7.42(m,1H),7.40(dd,J＝8.2,5.6Hz,1H),2.78(dt,J＝13.7,6.9Hz,8H),1.92–1.81(m,4H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ166.45,165.09,163.95,159.32,143.99,141.27,133.55,131.45,129.29,129.26,126.01,128.41,120.02,116.25,116.03,32.99,30.89,25.83。

实施例5 N-(N-(1,2,3,5,6,7-六氢-s-茚满-4-基)氨磺酰基)-3-甲基苯甲酰胺(LW-01-58-1)

利用4-甲基苯甲酸和LW-01-7-2按照上述实施例3的方法制备LW-01-58-1(46mg，41.4％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.82(s,1H),9.62(s,1H),7.80(d,J＝7.8Hz,2H),7.30(d,J＝7.7Hz,2H),6.99(s,1H),2.83–2.72(m,9H),2.36(s,3H),1.91–1.81(m,4H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ166.11,143.93,143.48,141.24,130.10,129.58,128.66,128.58,119.92,33.00,30.89,25.84,21.53。

实施例6 4-氟-N-(N-(1,2,3,5,6,7-六氢-s-茚满-4-基)氨磺酰基)苯甲酰胺(LW-01-64-1)

利用4-氟苯甲酸和LW-01-7-2按照上述实施例3的方法制备LW-01-64-1(76mg，46％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.95(s,1H),9.71(s,1H),7.97(dd,J＝8.2,5.6Hz,2H),7.34(t,J＝8.7Hz,2H),7.00(s,1H),2.78(dt,J＝13.7,6.9Hz,8H),1.92–1.81(m,4H).¹³CNMR(101MHz,DMSO)δ166.45,165.09,163.95,143.99,141.27,131.55,131.45,129.29,129.26,128.41,120.02,116.25,116.03,32.99,30.89,25.83。

实施例7(N-(1,2,3,5,6,7-六氢-s-茚满-4-基)氨磺酰基)-2-(3-甲氧基苯基)乙酰胺(1w-01-66-1)

利用3-甲氧基苯乙酸和LW-01-7-2按照上述实施例3的方法制备LW-01-66-1(55mg，76.3％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.59(s,1H),9.49(s,1H),7.23(d,J＝7.1Hz,1H),6.99(s,1H),6.85(s,3H),3.73(s,3H),3.49(s,2H),2.72(d,J＝24.6Hz,8H),1.91–1.77(m,4H).¹³CNMR(151MHz,dmso)δ169.47,159.59,143.85,141.05,136.01,129.74,128.32,122.09,119.85,115.60,112.63,55.39,42.74,32.95,30.85,25.76。

实施例8 N-(N-(1,2,3,5,6,7-六氢-s-茚满-4-基)氨磺酰基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺(LW-01-68-1)

利用3-三氟甲基苯甲酸和LW-01-7-2按照上述实施例3的方法制备LW-01-68-1(68mg，87％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ12.20(s,1H),9.82(s,1H),8.06(d,J＝7.7Hz,2H),7.90(d,J＝7.8Hz,2H),7.01(s,1H),2.77(s,8H),1.93–1.81(m,4H).¹³C NMR(151MHz,dmso)δ165.19,143.99,141.20,136.58,133.04,132.83,132.61,132.40,129.49,128.29,126.08,126.06,125.06,123.25,120.03,32.95,30.87,25.80。

实施例9 N-(N-(1,2,3,5,6,7-六氢-s-茚满-4-基)氨磺酰基)喹啉-6-甲酰胺(LW-01-69-1)

利用喹啉-6-甲酸和LW-01-7-2按照上述实施例3的方法制备LW-01-69-1(80mg，89.3％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ12.15(s,1H),9.75(s,1H),9.02(d,J＝2.8Hz,1H),8.60(s,1H),8.54–8.43(m,1H),8.18(d,J＝8.8Hz,1H),8.11(d,J＝8.8Hz,1H),7.64(dd,J＝8.2,4.1Hz,1H),6.99(s,1H),2.83(t,J＝6.9Hz,4H),2.75(t,J＝6.9Hz,4H),1.93–1.76(m,4H).¹³C NMR(151MHz,dmso)δ165.88,153.22,149.53,143.94,141.22,137.91,130.63,130.17,129.78,128.49,128.27,127.41,122.87,119.93,32.96,30.91,25.80

实施例10 N-(N-(1,2,3,5,6,7-六氢-s-引达省-4-基)氨磺酰基)异噻唑-5-甲酰胺(LW-01-86-1)

利用异噻唑-5-羧酸和LW-01-7-2按照上述实施例3的方法制备LW-01-86-1(25mg，39.2％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.65(s,1H),9.83(s,1H),8.56(d,J＝2.8Hz,1H),7.26(s,1H),6.56(s,1H),2.83(t,J＝6.9Hz,4H),2.75(t,J＝6.9Hz,4H),1.93–1.76(m,4H).¹³CNMR(151MHz,dmso)δ169.38,159.62,147.83,141.64,129.41,122.61,33.23,28.13,25.30.

实施例11 N-(N-(1,2,3,5,6,7-六氢-s-引达省-4-基)氨磺酰基)嘧啶-4-甲酰胺(LW-01-99-1)

利用嘧啶-4-羧酸和LW-01-7-2按照上述实施例3的方法制备LW-01-99-1(38mg，45％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ12.01(s,1H),9.83(s,1H),9.61(s,1H),9.60(s,1H),8.41(d,J＝2.8Hz,1H),6.56(s,1H),2.77(s,8H),1.93–1.81(m,4H).¹³C NMR(151MHz,dmso)δ169.39,158.79,157.30,156.58,141.64,131.13,122.61,113.10,33.29,28.29,25.38.

实施例12叔丁基(4-((N-(1,2,3,5,6,7-六氢-s-引达省-4-基)氨磺酰基)氨基甲酰基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(LW-01-106-1)

利用4-((叔丁氧基羰基)氨基)苯甲酸和LW-01-7-2按照上述实施例3的方法制备LW-01-106-1(60mg，50.9％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.69(s,1H),9.76(s,1H),9.57(s,1H),7.82(d,J＝8.3Hz,2H),7.54(d,J＝8.2Hz,2H),6.99(s,1H),12.44–1.05(m,93H),2.88–2.67(m,9H),1.93–1.81(m,4H),1.48(s,9H).13C NMR(151MHz,dmso)δ165.46,152.96,144.17,143.88,141.26,129.70,128.50,125.80,119.90,117.62,80.19,32.96,30.84,28.45,25.80。

实施例13氨基-N-(N-(1,2,3,5,6,7-六氢-s-茚满-4-基)氨磺酰基)苯甲酰胺(LW-01-113-1)

将上述产物(LW-01-106-1)(60mg)溶于6mL1：2(v/v)HCl：EA混合物中，并在室温下反应1小时。然后将其在旋转蒸发器上高真空下浓缩。用氨中和后，将反应混合物用30mL二氯甲烷稀释，用水洗涤。将有机层用Na₂SO₄干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗产物。通过硅胶柱色谱(DCM/MeOH：40/1)纯化残余物，得到LW-01-113-1(46mg，497％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.29(s,1H),9.35(s,1H),7.63(d,J＝8.1Hz,2H),6.98(s,1H),6.53(d,J＝8.1Hz,2H),5.94(s,2H),2.87–2.71(m,8H),1.93–1.79(m,4H).¹³C NMR(151MHz,dmso)δ165.62,153.64,143.79,141.22,130.61,128.78,119.73,118.76,112.94,32.98,30.83,25.81。

实施例14乙酰基-N-(N-(1,2,3,5,6,7-六氢-s-茚满-4-基)氨磺酰基)苯甲酰胺(LW-01-120-1)

利用4-乙酰基苯甲酸和LW-01-7-2按照上述实施例3的方法制备LW-01-120-1(26mg，36.3％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ12.09(s,1H),9.76(s,1H),8.00(dd,J＝24.4,8.1Hz,4H),6.98(s,1H),2.80–2.69(m,8H),2.60(s,3H),1.90–1.79(m,4H).¹³C NMR(151MHz,dmso)δ198.10,165.53,143.97,141.24,140.10,136.40,128.91,128.74,128.33,120.02,32.96,30.88,27.46,25.80。

实施例15甲基-3-((N-(1,2,3,5,6,7-六氢-s-茚满-4-基)氨磺酰基)氨基甲酰基)苯甲酸酯(LW-01-29-1)

利用3-(甲氧基羰基)苯甲酸和LW-01-7-2按照上述实施例3的方法制备LW-01-29-1(42mg，77.3％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ12.16(s,1H),9.78(s,1H),8.46(s,1H),8.16(dd,J＝13.2,7.9Hz,2H),7.67(t,J＝7.6Hz,1H),7.01(s,1H),3.89(s,3H),2.84–2.73(m,8H),1.94–1.82(m,4H).¹³C NMR(151MHz,dmso)δ165.91,165.34,143.96,141.18,133.52,133.38,133.10,130.45,129.76,129.29,128.38,119.98,52.88,32.96,30.88,25.78。

实施例16((N-(1,2,3,5,6,7-六氢-s-茚满-4-基)氨磺酰基)氨基甲酰基)苯甲酸(LW-01-128-1)

将LW-01-29-1(38mg，0.09mmol)溶于THF(2mL)，然后将氢氧化锂水溶液(2mL)逐滴滴入于上述混合物中，在室温下反应2小时。旋转蒸发以除去THF，然后向其中加入柠檬酸中和至弱酸性。将反应混合物用30mL二氯甲烷稀释，用水洗涤。将有机层用Na₂SO₄干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗产物。通过硅胶柱色谱(DCM/MeOH：50/1)纯化残余物，得到产物为白色固体(28mg，77.7％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ13.28(s,1H),12.12(s,1H),9.74(s,1H),8.42(s,1H),8.11(dd,J＝20.4,7.4Hz,2H),7.62(t,J＝7.6Hz,1H),6.98(s,1H),2.82–2.69(m,8H),1.91–1.78(m,4H).¹³C NMR(151MHz,dmso)δ166.97,165.59,143.93,141.14,133.62,132.68,131.60,129.51,119.93,32.96,30.88,25.78。

实施例17(1,2,3,5,6,7-六氢-s-茚满-4-基)氨磺酰基)-4-(1-羟乙基)苯甲酰胺(LW-01-141-1)

将实施例11制备的LW-01-120-1(133mg，0.25mmol)溶于2mL乙醇中，并向混合物中加入硼氢化钠(18mg，0.3mg)。反应混合物在80℃回流12小时。反应完全后，用30mL二氯甲烷稀释反应液，然后用水洗涤。将有机层用Na₂SO₄干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗产物。通过硅胶柱色谱(PE/EA：1/1)纯化残余物，得到70mg LW-01-141-1(68mg，70％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.83(s,1H),9.64(s,1H),7.85(d,J＝8.1Hz,2H),7.46(d,J＝8.1Hz,2H),7.00(s,1H),5.33(s,1H),4.78(d,J＝6.1Hz,1H),2.84–2.72(m,8H),1.92–1.83(m,4H),1.33(d,J＝6.4Hz,3H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ166.04,152.82,143.94,141.29,131.05,128.52,128.50,125.88,119.97,68.16,33.00,30.89,26.11,25.85。

实施例18丙烯酰胺基-N-(N-(1,2,3,5,6,7-六氢-s-茚满-4-基)氨磺酰基)苯甲酰(LW-01-127-1)

0℃下，将实施例10制备的LW-0-113-1(70mg，0.188mmol)和DIEA(0.09mL，0.565mmol)溶解在无水DMF(3mL)中，然后逐滴加入丙烯酰氯(0.02mL，0.226mmol)溶液。将反应温度从0℃逐渐升至室温，并在室温下继续搅拌3小时。将反应液加入10％HCl(10mL)中，然后用DCM(30mL)萃取，合并有机萃取液，用饱和碳酸钠溶液(20mL)洗涤，再用无水硫酸钠干燥，蒸发，得到粗产物。残留物经硅胶柱层析纯化(PE/EA：1/1)，得到LW-01-127-1(30mg，37.5％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.77(s,1H),10.46(s,1H),9.58(s,1H),7.88(d,J＝8.3Hz,2H),7.76(d,J＝8.5Hz,2H),6.99(s,1H),6.46(dd,J＝16.8,10.1Hz,1H),6.30(d,J＝16.8Hz,1H),5.81(d,J＝10.1Hz,1H),2.82–2.72(m,8H),1.91–1.82(m,4H).¹³C NMR(151MHz,dmso)δ165.57,163.99,143.87,143.34,141.18,131.95,129.74,128.61,128.21,127.46,119.83,119.07,32.97,30.87,25.80。

实施例19 N-(N-(1,2,3,5,6,7-六氢-s-引达省-4-基)氨磺酰基)-2-(4-甲氧基苯基)乙酰胺(LW-01-155-1)

利用4-甲氧基苯戊酸和LW-01-7-2按照上述实施例3的方法制备LW-01-155-1(29mg，41％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.59(s,1H),9.49(s,1H),7.23(d,J＝7.1Hz,1H),6.99(s,1H),6.85(s,3H),3.73(s,3H),2.62(s,2H),2.34(s,2H),1.59(s,2H),1.53(s,2H),2.72(d,J＝24.6Hz,8H),1.91–1.77(m,4H).¹³C NMR(151MHz,dmso)δ169.47,159.59,143.85,141.05,136.01,129.74,128.32,122.09,119.85,115.60,112.63,55.39,42.74,35.61,35.00,34.80,32.95,30.85,25.76.

实施例20(N-(1,2,3,5,6,7-六氢-s-茚满-4-基)氨磺酰基)-4-甲氧基苯甲酰胺(LW-01-167-1)

利用4-甲氧基苯甲酸和LW-01-7-2按照上述实施例3的方法制备LW-01-167-1(22mg，20.4％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.71(s,1H),9.57(s,1H),7.89(d,J＝8.5Hz,2H),7.07–6.97(m,3H),3.83(s,3H),2.77(dt,J＝13.7,6.9Hz,8H),1.87(dd,J＝14.0,6.9Hz,4H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ165.46,163.24,143.92,141.29,130.73,128.56,124.82,119.93,114.31,55.96,33.00,30.87,25.84。

实施例21制备1-((叔丁氧基羰基)氨基)环丙烷羧酸(LW-01-70-1)

将1-氨基环丙烷羧酸(100mg，0.99mmol)溶于二恶烷(3.0mL)和0.5MNaOH(3.0mL)的混合物液中。向该溶液中加入二碳酸二叔丁酯(0.28mL，1.5mmol)，并将得到的混合物在室温下搅拌15小时。减压浓缩反应混合物，用EtOAc(30mL)和1MHCl(10mL)稀释，将用水和EtOAc(20mL)萃取，并将合并的有机相用盐水(30mL)洗涤，经硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱(PE/EA：1/2)纯化残余物，得到134mg纯产物。

实施例22制备1-氨基-N-(1,2,3,5,6,7-六氢-s-茚满-4-基)环丙烷甲酰胺(LW-01-71-1)

将羧酸衍生物LW-01-70-1(134mg，2eq)溶于DCM(2mL/mmol羧酸)中，接下来加入EDCI(114.34mg，2eq)，HOBt(180mg，2eq)和三乙胺(0.714mL，3eq)，然后加入1,2,3,5,6,7-六氢-s-茚满-4-胺(50.34mg，1eq)。将混合液在室温下搅拌22小时。反应完全后反应混合物用30mL二氯甲烷稀释，用0.1NHCl和水洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗产物。将上述粗产物溶于6mL1：2(v/v)HCl：EA的混合物中，并在室温下反应1小时。然后将其在高真空下浓缩。用氨中和后，将反应混合物用30mL二氯甲烷稀释，用水洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗产物。通过硅胶柱色谱(PE/EA：1/2)纯化残余物，得到LW-01-71-1(100mg，59％)。

实施例23制备(1-((1,-s-茚满-4-基)氨基甲酰基)环丙基)-4-甲基苯甲酰胺(LW-01-65-1)

向搅拌的对甲苯甲酸(21.7mg，3eq)的DCM(2mL/mmol羧酸)悬浮液中加入EDCI(62mg，2eq)，HOBt(44mg，2eq)和三乙胺(0.06mL，3eq)，然后加入相应的胺LW-01-71-1(15mg，1eq)。将澄清溶液在室温下搅拌22h。将反应混合物用30mL二氯甲烷稀释，用0.1NHCl和水洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗产物。通过硅胶柱色谱(DCM/MeOH：40/2)纯化残余物，得到20mg LW-01-65-1(20mg，90％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ9.20(s,1H),8.98(s,1H),7.84(d,J＝7.8Hz,2H),7.26(d,J＝7.8Hz,2H),6.94(s,1H),2.79(t,J＝6.9Hz,4H),2.66(t,J＝7.0Hz,4H),2.35(s,3H),2.00–1.85(m,4H),1.40(d,J＝2.5Hz,2H),1.04(d,J＝2.5Hz,2H).¹³C NMR(151MHz,dmso)δ170.01,167.89,143.02,141.51,138.60,131.93,130.51,128.91,128.20,118.22,35.39,32.93,30.60,25.55,21.40,16.61。

实施例24制备3-氟-N-(1-((1,2,3,5,6,7-六氢-s-茚满-4-基)氨基甲酰基)环丙基)苯甲酰胺(LW-01-74-1)

利用4-氟苯甲酸和LW-01-71-1按照上述实施例23的方法制备LW-01-74-1(137mg，80％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ9.26(s,1H),9.09(s,1H),8.00(s,2H),7.29(t,J＝8.5Hz,2H),6.94(s,1H),2.78(d,J＝6.2Hz,4H),2.64(d,J＝6.4Hz,4H),2.00–1.86(m,5H),1.39(s,2H),1.04(s,2H).¹³C NMR(151MHz,dmso)δ169.91,166.93,165.17,163.53,143.03,138.72,131.26,130.88,130.82,130.50,118.29,115.33,115.19,35.39,32.94,30.59,25.55,16.65。

实施例25制备(1-((1,2,3,5,6,7-六氢-s-茚满-4-基)氨基甲酰基)环丙基)喹啉-6-甲酰胺(LW-01-78-1)

利用喹啉-6-羧酸和LW-01-71-1按照上述实施例23的方法制备LW-01-78-1(37mg，53％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ9.29(s,2H),8.93(d,J＝3.0Hz,1H),8.58(s,1H),8.42(d,J＝8.1Hz,1H),8.23(d,J＝8.6Hz,1H),8.03(d,J＝8.7Hz,1H),7.56(dd,J＝8.0,4.0Hz,1H),6.89(s,1H),2.75(t,J＝6.7Hz,4H),2.64(t,J＝6.7Hz,4H),1.97–1.82(m,4H),1.41(d,J＝1.8Hz,2H),1.07(s,2H).¹³C NMR(151MHz,dmso)δ169.91,167.53,152.43,149.12,143.04,138.77,137.50,128.95,128.92,128.77,127.35,122.54,118.31,35.51,32.94,30.61,25.56,16.70。

实施例26制备(1-((1,2,3,5,6,7-六氢-s-茚满-4-基)氨基甲酰基)环丙基)-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(LW-01-89-1)

利用4-(三氟甲基)苯甲酸和LW-01-71-1按照上述实施例23的方法制备LW-01-89-1(61mg，45.6％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ9.30(s,2H),8.14(d,J＝8.0Hz,2H),7.84(d,J＝8.1Hz,2H),6.94(s,1H),2.80(t,J＝7.0Hz,4H),2.66(t,J＝7.0Hz,4H),2.01–1.86(m,4H),1.42(d,J＝2.6Hz,2H),1.07(d,J＝2.6Hz,2H).¹³C NMR(151MHz,dmso)δ169.71,166.83,143.04,138.79,138.54,131.81,131.60,131.39,131.18,130.45,129.09,125.36,125.34,123.53,118.34,35.40,32.93,30.57,25.54,16.66。

实施例27制备3-溴-N-(1-((1,2,3,5,6,7-六氢-s-茚满-4-基)氨基甲酰基)环丙基)苯甲酰胺(LW-01-90-1)

利用3-溴苯甲酸和LW-01-71-1按照上述实施例23的方法制备LW-01-90-1(130mg，58％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ9.30(s,1H),9.18(s,1H),8.16(s,1H),7.91(d,J＝7.6Hz,1H),7.73(d,J＝7.8Hz,1H),7.43(t,J＝7.8Hz,1H),6.95(s,1H),2.80(t,J＝6.9Hz,4H),2.66(t,J＝7.0Hz,4H),2.01–1.88(m,4H),1.40(d,J＝2.4Hz,2H),1.05(d,J＝2.4Hz,2H).¹³C NMR(151MHz,dmso)δ169.76,166.56,143.03,138.82,137.02,134.27,130.96,130.65,130.48,127.30,121.76,118.34,35.39,32.94,30.57,25.55,16.61。

实施例28制备N-(1,2,3,5,6,7-六氢-s-茚满-4-基)-1-(2-(3-甲氧基苯基)乙酰氨基)环丙烷甲酰胺(LW-01-91-1)

利用2-(3-甲氧基苯基)乙酸和LW-01-71-1按照上述实施例23的方法制备LW-01-91-1(106mg，90.5％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ8.97(s,1H),8.74(s,1H),7.19(t,J＝7.8Hz,1H),6.95(s,1H),6.89–6.81(m,2H),6.78(d,J＝8.0Hz,1H),3.71(s,3H),3.45(s,2H),2.80(t,J＝6.6Hz,4H),2.59(t,J＝6.7Hz,4H),1.99–1.86(m,4H),1.31(s,2H),0.86(s,2H).¹³C NMR(151MHz,dmso)δ172.02,169.81,159.54,143.10,138.46,138.03,130.26,129.55,121.80,118.34,115.20,112.19,55.29,42.82,34.86,32.93,30.54,25.54,16.48。

实施例29制备(1-((1,2,3,5,6,7-六氢-s-茚满-4-基)氨基甲酰基)环丙基)-3-(甲基氨基)苯甲酰胺(LW-01-104-1)

向15mL的封管中加入LW-01-90-1(36mg，1mmol)，甲胺(40％醇溶液，2mL)和铜粉(4mg，0.5mmol)，反应混合物在100℃加热反应22小时。真空旋转干燥。通过硅胶柱色谱(PE/EA：1.5/1)纯化残余物，得到LW-01-104-1(19mg，42.8％)。¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.36(s,1H),7.24(t,J＝7.8Hz,1H),7.09(s,1H),7.05–6.96(m,3H),6.77(d,J＝7.9Hz,1H),2.88(d,J＝8.7Hz,7H),2.80(t,J＝7.1Hz,4H),2.11–1.99(m,4H),1.73(s,2H),1.18(s,2H).¹³CNMR(151MHz,cdcl3)δ169.50,169.29,149.29,143.91,137.06,134.27,129.50,128.95,118.49,116.28,115.21,111.34,77.21,77.00,76.79,36.18,32.94,30.75,29.68,25.61,16.84。

实施例30制备4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酸(LW-01-105-1)

将4-异丙基苯甲酸(100mg，0.6mmol)溶于氢氧化钾(82mg，1.46mmol)的水溶液中(2.5mL)。向反应混合物中加入高锰酸钾(192mg，1.21mmol)的水(2.5mL)溶液。然后将合并的混合物在60℃下搅拌2小时反应完全后将反应混合物冷却至0℃，用乙二醇处理，过滤除去固体，通加入6N HCl溶液将混合物酸化至pH 1。过滤除去固体，用***(30mL)萃取适体。将合并的有机萃取液用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶柱色谱(PE/EA：1/1)纯化残余物，得到102mg产物。

实施例31制备(1-((1,2,3,5,6,7-六氢-s-引达省-4-基)氨基甲酰基)环丙基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(LW-01-107-1)

利用LW-01-105-1和LW-01-71-1按照上述实施例23的方法制备LW-01-107-1(52mg，33.2％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ9.20(s,1H),8.99(s,1H),7.88(d,J＝8.1Hz,2H),7.52(d,J＝8.2Hz,2H),6.93(s,1H),5.13(s,1H),2.79(t,J＝6.9Hz,4H),2.66(t,J＝6.9Hz,4H),2.01–1.86(m,4H),1.48–1.37(m,8H),1.04(d,J＝2.2Hz,2H).¹³C NMR(151MHz,dmso)δ170.01,167.90,154.34,143.01,138.61,132.39,130.54,127.77,124.49,118.22,71.16,35.37,32.94,32.27,30.60,25.56,16.64。

实施例32制备(2-羟基丙烷-2-基)呋喃-2-羧酸(LW-01-95-1)

氮气保护，-78℃下，向异丙胺(0.12mL，0.99mmol)的THF(1mL)溶液中加入2.4M正丁基锂(0.33mL，0.99mol)的己烷溶液搅拌30min。然后加入呋喃-2-羧酸(50mg，0.45mmol)的THF(1mL)溶液，使温度保持在-78℃反应1小时，然后滴加丙酮(28mg，0.495mmol)的THF(1mL)溶液反应30分钟，然后使反应混合物达到室温。将混合物用水淬灭，并通过真空蒸发除去大部分THF。含水残余物用乙酸乙酯(2×20mL)萃取并用5N HCl酸化。产物用乙酸乙酯(3×600mL)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到LW-01-95-1，为油状物(50mg，65％粗产物)。

实施例33制备N-(1-((1,2,3,5,6,7-六氢-s-引达省-4-基)氨基甲酰基)环丙基)-5-(2-羟基丙烷-2-基)呋喃-2-甲酰胺(LW-01-108-1)

利用LW-01-95-1和LW-01-71-1按照上述实施例23的方法制备LW-01-108-1(22mg，27.1％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.28(s,1H),7.37(s,1H),7.28(s,1H),7.12(s,1H),6.98(s,1H),6.32(s,1H),2.87(t,J＝7.0Hz,4H),2.78(d,J＝6.3Hz,4H),2.13–1.99(m,5H),1.70(s,2H),1.61(s,6H),1.18(s,2H).¹³C NMR(151MHz,cdcl₃)δ169.50,169.29,149.29,143.91,137.06,134.27,129.50,128.95,118.49,116.28,115.21,111.34,77.21,77.00,76.79,36.18,32.94,30.75,29.68,25.61,16.84。

实施例34制备叔丁基(4-((1-((1,2,3,5,6,7-六氢-s-引达省-4-基)氨基甲酰基)环丙基)氨甲酰基)苯基)氨基甲酸酯(LW-01-109-1)

利用4-((叔丁氧基羰基)氨基)苯甲酸和LW-01-71-1按照上述实施例23的方法制备LW-01-109-1(91mg，49.1％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ9.61(s,1H),9.19(s,1H),8.91(s,1H),7.85(d,J＝8.4Hz,2H),7.50(d,J＝8.4Hz,2H),6.93(s,1H),2.79(t,J＝6.7Hz,4H),2.65(t,J＝6.8Hz,4H),2.01–1.85(m,4H),1.48(s,9H),1.38(s,2H),1.03(s,2H).¹³C NMR(151MHz,dmso)δ170.08,167.47,153.00,143.01,142.75,138.58,130.53,129.02,128.04,118.21,117.20,79.90,35.36,32.94,30.61,28.50,25.56,16.64。

实施例35制备2-氟-N-(1--((1,2,3,5,6,7-六氢-s-引达省-4-基)氨基甲酰基)环丙基)苯甲酰胺(LW-01-110-1)

利用2-氟苯甲酸和LW-01-71-1按照上述实施例23的方法制备LW-01-110-1(37mg，51％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ9.26(s,1H),9.09(s,1H),8.01(m,2H),7.42(m,1H),7.40(dd,J＝8.2,5.6Hz,1H),6.94(s,1H),2.78(d,J＝6.2Hz,4H),2.64(d,J＝6.4Hz,4H),2.00–1.86(m,5H),1.39(s,2H),1.04(s,2H).¹³C NMR(151MHz,dmso)δ169.91,166.93,165.17,163.53,159.34,143.03,138.72,131.26,130.88,130.82,130.50,126.01,118.29,115.33,115.19,35.39,32.94,30.59,25.55,16.65。

实施例36制备氨基-N-(((1,2,3,5,6,7-六氢-s-茚满-4-基)氨基甲酰基)环丙基)苯甲酰胺(LW-01-115-1)

将LW-01-109-1(100mg)溶于6mL 1：2(v/v)HCl：EA混合物中，并在室温下反应1小时。然后将其在高真空下浓缩。用氨中和后，将反应混合物用30mL二氯甲烷稀释，用水洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗产物。通过硅胶柱色谱(PE/EA：1/2)纯化残余物，得到LW-01-115-1(82mg，91％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ9.10(s,1H),8.60(s,1H),7.65(d,J＝8.3Hz,2H),6.92(s,1H),6.53(d,J＝8.4Hz,2H),5.63(s,2H),2.79(t,J＝6.9Hz,4H),2.65(t,J＝7.0Hz,4H),1.97–1.83(m,4H),1.36(d,J＝2.5Hz,2H),0.99(d,J＝2.5Hz,2H).¹³C NMR(151MHz,dmso)δ170.43,168.05,152.21,143.04,138.34,130.50,129.73,121.29,118.14,112.72,35.37,32.92,30.62,25.56,16.59。

实施例37制备丙烯酰胺基-N-(1-((1,2,3,5,6,7-六氢-s-茚满-4-基)氨基甲酰基)环丙基)苯甲酰胺(LW-01-118-1)

将LW-01-115-1(106mg，0.28mmol)和DIEA(0.09mL，0.565mmol)溶解在无水DMF(3mL)中，并将溶液的温度降至0℃。逐滴加入丙烯酰氯(0.026mL，0.31mmol)溶液。将反应温度从0℃逐渐升至室温，并在室温下继续搅拌3小时。将溶剂悬浮加入10％HCl(10mL)中，然后用DCM(30mL)萃取。将合并的有机萃取液用饱和碳酸钠溶液(20mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，蒸发，得到粗产物。通过硅胶柱色谱(DCM/MeOH：40/1)纯化残余物得到LW-01-118-1(62mg，51.6％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ10.37(s,1H),9.22(s,1H),8.97(s,1H),7.92(d,J＝8.4Hz,2H),7.73(d,J＝8.5Hz,2H),6.94(s,1H),6.45(dd,J＝16.9,10.1Hz,1H),6.29(d,J＝16.1Hz,1H),5.79(d,J＝11.0Hz,1H),2.79(t,J＝6.8Hz,4H),2.66(t,J＝6.9Hz,4H),2.02–1.87(m,4H),1.39(s,2H),1.04(d,J＝2.2Hz,2H).¹³C NMR(151MHz,cdcl3)δ174.78,172.13,168.55,147.76,146.79,143.37,136.81,135.28,134.25,133.86,132.66,123.40,122.98,45.21,45.10,44.96,44.82,44.68,44.54,44.40,44.26,40.13,37.69,35.36,30.31,21.40。

实施例38甲基-3-((1-((1,2,3,5,6,7-六氢-s-茚满-4-基)氨基甲酰基)环丙基)氨基甲酰基)苯甲酸酯(LW-01-123-1)

利用3-(甲氧基羰基)苯甲酸和LW-01-71-1按照上述实施例23的方法制备LW-01-123-1(152mg，89％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ9.29(d,J＝11.0Hz,2H),8.54(s,1H),8.20(d,J＝7.4Hz,1H),8.10(d,J＝7.4Hz,1H),7.62(t,J＝7.6Hz,1H),6.94(s,1H),3.89(s,3H),2.79(s,4H),2.66(s,4H),2.02–1.86(m,4H),1.40(s,2H),1.06(s,2H).¹³C NMR(151MHz,dmso)δ170.43,168.05,152.21,143.04,138.34,130.50,129.73,121.29,118.14,112.72,35.37,32.92,30.62,25.56,16.59。

实施例39制备3-((1,2,3,5,6,7-六氢-s-茚满-4-基)氨基甲酰基)环丙基)氨基甲酰基)苯甲酸(LW-01-129-1)

将LW-01-123-1(100mg，0.09mmol)溶于THF溶液中，然后将氢氧化锂(11.5mg，0.48mmol)的水溶液滴加到上述混合物中，并在室温下反应2小时，旋转干燥除去THF，然后向其中加入柠檬酸以中和至弱酸性。将反应混合物用30mL二氯甲烷稀释，用水洗涤。用无水硫酸钠干燥有机层，过滤，并真空浓缩，得到粗产物。通过硅胶柱色谱(DCM/MeOH：40/1)纯化残余物，得到LW-01-129-1(47mg，48.4％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ9.27(d,J＝18.8Hz,2H),8.53(s,1H),8.12(dd,J＝35.2,7.6Hz,2H),7.58(t,J＝7.7Hz,1H),6.94(s,1H),2.79(t,J＝6.9Hz,4H),2.66(t,J＝7.0Hz,4H),2.03–1.85(m,4H),1.40(s,2H),1.06(d,J＝2.4Hz,2H).¹³C NMR(151MHz,dmso)δ169.87,167.45,167.27,143.01,138.78,135.19,132.44,132.22,131.18,130.54,129.22,128.73,118.28,35.43,32.94,30.59,25.55,16.65。

实施例40制备4-乙酰基-N-(1-((1,2,3,5,6,7-六氢-s-茚满-4-基)氨基甲酰基)环丙基)苯甲酰胺(LW-01-130-1)

利用4-乙酰基苯甲酸和LW-01-71-1按照上述实施例23的方法制备LW-01-130-1(108mg，85.7％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ9.26(d,J＝17.5Hz,2H),8.04(dd,J＝17.7,8.2Hz,4H),6.94(s,1H),2.80(t,J＝6.9Hz,4H),2.65(dd,J＝15.5,8.4Hz,7H),1.95(dd,J＝14.2,7.0Hz,4H),1.42(d,J＝2.3Hz,2H),1.07(d,J＝2.4Hz,2H).¹³C NMR(151MHz,dmso)δ198.22,169.75,167.23,143.04,139.01,138.75,138.57,130.49,128.53,128.21,118.31,35.45,32.94,30.60,27.42,25.55,16.66。

实施例41制备(1,2,3,5,6,7-六氢-s-茚满-4-基)-1-(4-甲氧基苯磺酰氨基)环丙烷甲酰胺(LW-01-136-1)

氮气保护下，将4-甲氧基苯-1-磺酰氯(62mg，0.3mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中。将混合液冷却至0℃，然后加入LW-01-71-1(50mg，0.32mmol)和吡啶0.032mL，0.4mmol)。将得到的混合液在室温下搅拌16小时。将反应混合物倒入250mL分液漏斗中，并用1MHCl水溶液(3×50mL)，水(50mL)和盐水(50mL)洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化，用100％DCM至5％MeOH的DCM溶液作为梯度洗脱，得到LW-01-136-1，为白色固体(48mg，56％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ8.96(s,1H),8.58(s,1H),7.74(d,J＝8.0Hz,2H),7.11(d,J＝8.1Hz,2H),6.95(s,1H),3.83(s,3H),2.80(t,J＝6.7Hz,4H),2.61(t,J＝6.8Hz,4H),1.96(dd,J＝14.8,7.8Hz,4H),1.15(s,2H),0.81(s,2H).¹³CNMR(151MHz,dmso)δ169.46,162.77,143.18,138.00,133.82,130.10,129.14,118.29,114.83,56.07,36.74,32.91,30.61,25.55,14.51。

实施例42制备N-(1,2,3,5,6,7-六氢-s-茚满-4-基)-1-(4-(三氟甲基)苯磺酰胺基)环丙烷甲酰胺(LW-01-138-1)

氮气保护下将4-(三氟甲基)苯-1-磺酰氯(75mg，0.3mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，将悬浮液冷却至0℃，然后加入LW-01-71-1(50mg，0.32mmol)和吡啶0.032mL，0.4mmol)。得到的混合液在室温下搅拌16小时。将反应混合物倒入250mL分液漏斗中，并用1MHCl水溶液(3×50mL)，水(50mL)和盐水(50mL)洗涤。将有机层用MgSO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化，用100％DCM至2.5％MeOH的DCM溶液作为梯度洗脱，得到LW-01-138-1，为白色固体(39mg，45％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ9.04(s,1H),8.99(s,1H),8.01(dd,J＝15.4,8.0Hz,4H),6.94(s,1H),2.78(d,J＝6.5Hz,4H),2.55(d,J＝6.7Hz,4H),1.98–1.89(m,4H),1.23(s,2H),0.87(s,2H).¹³C NMR(151MHz,dmso)δ169.14,146.27,143.17,138.23,132.81,132.60,130.01,127.95,126.94,123.00,118.41,36.83,32.88,30.50,25.48,14.74。

实施例43乙基-2-((4-((1-((1,2,3,5,6,7-六氢-s-引达省-4-基)氨基甲酰基)环丙基)氨甲酰基)苯基)(羟基)甲基)丙烯酸酯(LW-01-146-1)

向搅拌的4-甲酰基-N-(1-((1,2,3,5,6,7-六氢-s-茚满-4-基)氨基甲酰基)环丙基)的EtOH(4mL)溶液中加入苯甲酰胺(40mg，0.154mmol)，丙烯酸乙酯(0.05mL，0.1mmol)和水(0.3mL)。，然后将DMAP(10mg，0.08mmol)加入混合物中，并将反应物在室温下搅拌5天。将混合物用CH₂Cl₂(25mL)稀释，并用1N HCl(3×25mL)和盐水(30mL)洗涤，用无水硫酸钠，并减压蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱(DCM/MeOH：40/1)纯化残余物，得到LW-01-146-1(32mg，42.6％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.33(s,1H),7.77(d,J＝7.8Hz,2H),7.45(d,J＝7.9Hz,2H),7.15(s,1H),6.97(s,1H),6.35(s,1H),5.82(s,1H),5.56(s,1H),4.16(d,J＝7.1Hz,2H),3.43(s,1H),2.85(t,J＝6.9Hz,4H),2.77(t,J＝6.9Hz,4H),2.06–2.00(m,4H),1.67(s,2H),1.25(s,3H),1.13(s,2H).¹³C NMR(151MHz,cdcl₃)δ151.68,145.87,136.92,135.64,131.46,128.91,128.53,128.45,128.23,128.04,127.96,127.90,127.30,126.99,125.12,113.34,77.22,77.00,76.79,74.62,71.09,52.31,41.17,33.52,30.25,23.53,10.51。

实施例44乙酰基-N-(1-((1,2,3,5,6,7-六氢-s-茚满-4-基)氨基甲酰基)环丙基)苯甲酰胺(LW-01-147-1)

将LW-01-130(70mg，0.17mmol)溶于2mL乙醇中，并向混合物中加入硼氢化钠(34mg，0.9mg)。将反应混合物在80℃回流12小时。待反应完全后混合物用30mL二氯甲烷稀释，用水洗涤。将有机层用Na₂SO₄干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗产物。通过硅胶柱色谱(PE/EA：1/2)纯化残余物，得到LW-01-147-1(29mg，42.1％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ9.20(s,1H),9.00(s,1H),7.89(d,J＝7.9Hz,2H),7.40(d,J＝8.0Hz,2H),6.94(s,1H),5.27(d,J＝4.0Hz,1H),4.84–4.70(m,1H),2.79(t,J＝6.9Hz,4H),2.66(t,J＝7.0Hz,4H),1.98–1.89(m,4H),1.40(d,J＝2.2Hz,2H),1.31(d,J＝6.3Hz,3H),1.04(d,J＝2.3Hz,2H).¹³C NMR(151MHz,dmso)δ169.98,167.91,151.19,143.02,138.60,133.00,130.53,128.01,125.16,118.22,68.18,40.38,40.24,40.10,39.96,39.82,39.68,39.54,35.41,32.94,30.60,26.43,25.55,16.62。

实施例45 N-(1-((1,2,3,5,6,7-六氢-s-引达省-4-基)氨基甲酰基)环丙基)异噻唑-5-甲酰胺(LW-01-157-1)

利用异噻唑-5-羧酸和LW-01-71-1按照上述实施例23的方法制备LW-01-157-1(66mg，68％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ9.20(s,1H),8.62(s,1H),8.56(d,J＝7.9Hz,2H),7.26(m,1H),6.94(s,1H),2.78(d,J＝6.5Hz,4H),2.55(d,J＝6.7Hz,4H),1.98–1.89(m,4H),1.23(s,2H),0.87(s,2H).¹³C NMR(151MHz,dmso)δ180.78,161.11,159.69,147.82,141.00,135.50,127.93,39.96,33.22,28.13,25.35,15.92。

实施例46N-(1-((1,2,3,5,6,7-六氢-s-引达省-4-基)氨基甲酰基)环丙基)哒嗪-3-甲酰胺(LW-01-159-1)

利用4-甲氧基苯戊酸和LW-01-71-1按照上述实施例23的方法制备LW-01-159-1(30mg，49％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ9.81(s,1H),9.23(s,1H),8.60(d,J＝8.4Hz,2H),8.02(t,J＝8.5Hz,2H),8.01(s,1H),6.94(s,1H),2.79(t,J＝6.9Hz,4H),2.65(t,J＝6.9Hz,4H),1.97–1.87(m,4H),1.38(s,2H),1.03(d,J＝2.2Hz,2H).¹³C NMR(151MHz,cdcl₃)δ180.75,160.41,151.82,151.16,141.04,135.59,128.09,127.90,118.75,40.32,33.29,28.16,25.31,15.99.

实施例47 N-(1,2,3,5,6,7-六氢-s-引达省-4-基)-1-(2-(4-甲氧基苯基)乙酰氨基)环丙烷甲酰胺(LW-01-160-1)

利用嘧啶-4-羧酸和LW-01-71-1按照上述实施例23的方法制备LW-01-160-1(79mg，38％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ8.97(s,1H),8.74(s,1H),7.19(t,J＝7.8Hz,1H),6.95(s,1H),6.89–6.81(m,2H),6.78(d,J＝8.0Hz,1H),3.71(s,3H),3.45(s,2H),3.32(s,2H),3.19(s,2H)3.05(s,2H),,2.80(t,J＝6.6Hz,4H),2.59(t,J＝6.7Hz,4H),1.99–1.86(m,4H),1.31(s,2H),0.86(s,2H).¹³C NMR(151MHz,dmso)δ172.02,169.81,159.54,143.10,138.46,138.03,130.26,129.55,121.80,118.34,115.20,112.19,55.29,42.82,35.61,35.00,34.86,36.40,32.93,30.54,25.54,16.48。

实施例48(1-((1,2,3,5,6,7-六氢-s-茚满-4-基)氨基甲酰基)环丙基)-4-甲氧基苯甲酰胺(LW-01-165-1)

利用4-甲氧基苯甲酸和LW-01-71-1按照上述实施例23的方法制备LW-01-165-1(98mg，85.7％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ9.19(s,1H),8.91(s,1H),7.91(d,J＝8.4Hz,2H),6.98(d,J＝8.5Hz,2H),6.93(s,1H),3.80(s,3H),2.79(t,J＝6.9Hz,4H),2.65(t,J＝6.9Hz,4H),1.97–1.87(m,4H),1.38(s,2H),1.03(d,J＝2.2Hz,2H).¹³C NMR(151MHz,cdcl₃)δ174.85,172.21,166.82,147.76,143.34,135.29,134.79,131.75,122.96,118.34,60.53,40.13,37.69,35.36,30.31,21.39。

实施例49(N-(1-((1,2,3,5,6,7-六氢-s-引达省-4-基)氨基甲酰基)环己基)喹啉-6-甲酰胺(LW-01-172-1)

利用喹啉-6-羧酸和LW-01-71-1按照上述实施例23的方法制备LW-01-172-1(27mg，49％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ9.29(s,2H),8.93(d,J＝3.0Hz,1H),8.58(s,1H),8.42(d,J＝8.1Hz,1H),8.23(d,J＝8.6Hz,1H),8.03(d,J＝8.7Hz,1H),7.56(dd,J＝8.0,4.0Hz,1H),6.89(s,1H),2.75(t,J＝6.7Hz,4H),2.64(t,J＝6.7Hz,4H),2.17-2.03(m,4H),1.97–1.82(m,4H),1.43-1.53(m,6H),.¹³C NMR(151MHz,dmso)δ169.91,167.53,152.43,149.12,143.04,138.77,137.50,128.95,128.92,128.77,127.35,122.54,118.31,60.61,35.51,33.94,30.61,25.32,25.56,20.80,16.70。

实施例50(1-((1,2,3,5,6,7-六氢-s-引达省-4-基)氨基甲酰基)环丙基)-4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酰胺(LW-01-175-1)

利用4-(2-羟基丙烷-2-基)苯甲酸和LW-01-71-1按照上述实施例23的方法制备LW-01-175-1(51mg，38.9％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ9.20(s,1H),8.99(s,1H),7.88(d,J＝8.1Hz,2H),7.52(d,J＝8.2Hz,2H),6.93(s,1H),5.13(s,1H),2.79(t,J＝6.9Hz,4H),2.66(t,J＝6.9Hz,4H),2.17-2.03(m,5H),2.01–1.86(m,4H),1.48–1.37(m,8H).¹³C NMR(151MHz,dmso)δ170.01,167.90,154.34,143.01,138.61,132.39,130.54,127.77,124.49,118.22,71.16,60.6,35.37,32.94,32.27,30.60,25.56,25.30,20.82,16.64。

实施例51不同化合物的NO含量和细胞活力测定

以下实施例中，所使用的试剂获得途径如下：

DMEM培养基(Hclone,USA)；DMEM/F12培养基(Hyclone,USA)；胎牛血清(Hyclone,USA)；MTT(Solaibio,China)；DMSO(Sigma,USA)；LPS(Sigma,USA)；尼日利亚菌素(Invitrogen,USA)；IL-1β捕获剂(R&D,USA)；IL-1β检测抗体(R&D,USA)；链酶亲和素-HRP(R&D,USA)；染色剂A/B(R&D,USA)；胰蛋白酶(Gbico,USA)；DNaseⅠ(Sigma,USA)。

细胞系培养：BV2小胶质细胞的培养基为含有10％胎牛血清和1％青霉素/链霉素的完全DMEM培养基，在37℃，5％CO₂培养箱中培养。

用Griess试剂测定BV2细胞产生的NO水平。将BV2细胞以1～2×10⁴个/cm²的密度接种在96孔板中，用实验所需化合物处理细胞24小时，然后将BV2上清液(50μL)转移到另一个96孔板中，并与50μL Griess试剂混合，最后，在酶标仪上540nm处测试吸光度。同时，除去残留的细胞培养基，向每个孔中加入30μLMTT(0.5mg/mL)溶液。在37℃孵育2～4小时后，向每个孔中加入100μL二甲基亚砜(DMSO)溶解结晶，通过酶标仪在540nm吸光度下测量吸光度。不同化合物(20μM)对LPS处理的BV-2小胶质细胞中NO生成的抑制活性和细胞的存活度如表1所示。

表1不同化合物对BV-2小胶质细胞中NO生成的抑制作用测试结果

NO是一种重要的神经炎症因子，通过激活小胶质细胞而分泌产生，会导致神经元损伤和凋亡。从表1可以看出，绝大多数的化合物不显示对BV-2小胶质细胞中NO生成的抑制作用。同样在绝大多数化合物的处理下，BV-2小胶质细胞的存活度接近100％，说明化合物的细胞毒性小。

实施例42酶联免疫吸附测定(ELISA)

原代小胶质细胞培养：在无菌条件下，将1-2天新生小鼠用75％酒精消毒，沿头部皮肤切开，将大脑左右半球转移到含有预冷PBS的培养皿中。分离大脑皮层，在显微镜下去除脑膜和血管。将剥离的大脑皮层置于0.25％胰蛋白酶中，剪碎后37℃消化，每5分钟轻轻摇动，15分钟后消化完全。加入10mL含有10％胎牛血清的DMEM/F12培养基终止消化，组织悬液收集于50mL离心管中，以1100rpm离心5min。轻轻倒出上清液，加入10mL DMEM/F12培养基，加DNaseⅠ消化，用移液枪将组织轻轻吹打成单个细胞。将悬浮液收集以1100rpm离心5分钟，弃上清液，加入适量的DMEM/F12完全培养基，将细胞重悬，通过0.22μm细胞筛，接种到预先用多聚赖氨酸包被的培养瓶中，将培养瓶放入含5％CO₂，37℃的细胞培养箱中培养。第二天更换培养基，然后每2天更换一次培养基，14天后，将培养瓶放在37℃振荡器上以250rpm振荡2小时。将上清液收集到50mL离心管中并以1100rpm离心3分钟，重悬后将其用于实验。

将原代小胶质细胞以5×10⁴个/孔的密度接种在96孔板中。用LPS(200ng/mL)刺激3小时，加入化合物(20μM)处理30分钟，然后用尼日利亚菌素(50μM)作用2小时。收集上清液用于ELISA，根据ELISA方案进行测定。使用多通道移液器，分别向ELISA板的每个孔中加入100μL的特异性IL-1β捕获抗体，密封平板并在4℃冷藏过夜。用300μL PBST洗涤三次，向板的每个孔中加入100μL封闭缓冲液(3％BSA)并在室温下孵育2小时。用300μLPBST洗涤五次以确保彻底清除BSA，加入100μL样品和标准品，密封平板并在室温下孵育2小时或在4℃下过夜。用300μLPBST洗涤三次，向ELISA板的每个孔中加入100μL检测抗体，密封平板并在室温下孵育2小时或在4℃下过夜。用300μL PBST洗涤三次，向ELISA板的每个孔中加入100μLStreptavidin-HRP，在室温下避光孵育20分钟。用300μLPBST洗涤五次，向ELISA板的每个孔中加入100μL底物溶液(显色试剂A/B)，在室温下避光孵育20分钟。向ELISA板的每个孔中加入100μL终止溶液(1M H₂SO₄)，立即用酶标仪测量450nm处的吸光度。测量OD值并绘制标准曲线，根据标准曲线计算每个样品的IL-1β含量。

统计分析：数据表示为均值±标准差。对于抑制率高于50％的化合物，通过单因素方差分析(ANOVA)进行统计学评估，结果如表2所示。P<0.05被认为有显著性差异。通过SPSS软件计算IC₅₀。表2中，IC₅₀>50μM用“-”表示。

表2不同化合物对LPS/Nigericin刺激原代神经胶质细胞后产生IL-1β的抑制作用

从表2可以看到，MCC950在20μM的浓度下对LPS/Nigericin刺激原代神经胶质细胞后产生IL-1β的抑制作用的IC₅₀值为3.9μM。大多数化合物对IL-1β的产生均有一定的抑制作用，特别是化合物LW-01-123-1，LW-01-136-1和LW-01-138-1对IL-1β产生的抑制作用明显强于阳性化合物MCC950，IC₅₀值为2μM左右。另外，化合物LW-01-119-1和LW-01-91-1对IL-1β产生的抑制作用与阳性化合物MCC950相当，IC₅₀值为4μM左右。比较化合物的结构特点，可以发现，因MCC950中呋喃环被苯环取代，linker部分氨基磺酰脲被其他链所取代，特别是linker部分的变动，本申请的式(1)所示的化合物对IL-1β产生的表现出不同的抑制作用。因此，这类化合物可作为NLRP3炎症小体抑制剂制备预防和/或治疗与NLRP3相关疾病的药物。

以上仅是本发明的优选实施方式，并不用于限制本发明，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。