阅读说明：本技术 N-苯甲酰苯胺类衍生物、其制备方法和用途 (N-benzoylaniline derivatives, preparation method and application thereof ) 是由 李松 肖军海 袁波 林凤 郑志兵 钟武 李行舟 周新波 曹瑞源 樊士勇 肖典 于 2019-04-04 设计创作，主要内容包括：本发明涉及式I所示的N-苯甲酰苯胺类衍生物、其制备方法和用途。本发明涉及式I所示化合物、其药学可接受的盐、溶剂合物、水合物,含有该化合物的药物组合物具有抑制细菌AI-2型群体感应作用,可用于预防和/或治疗细菌感染所致的相关疾病。<Image he="365" wi="540" file="DSA0000181381470000011.GIF" imgContent="drawing" imgFormat="GIF" orientation="portrait" inline="no"></Image>(The invention relates to N-benzanilide derivatives shown in a formula I, and a preparation method and application thereof. The invention relates to a compound shown in formula I, and pharmaceutically acceptable salts, solvates and hydrates thereof, and a pharmaceutical composition containing the compound has the effect of inhibiting bacterial AI-2 type quorum sensing, and can be used for preventing and/or treating related diseases caused by bacterial infection.)

N-苯甲酰苯胺类衍生物、其制备方法和用途

技术领域

本发明属于医药化工领域，具体涉及N-苯甲酰苯胺类衍生物、其制备方法、以及其用于制备预防和/或治疗革兰氏阴性菌引起的疾病的药物中的用途。

背景技术

在菌群生长过程中细菌能够不断产生化学信号分子(又称自诱导物)并分泌到周围环境中，当信号分子的浓度达到一定阈值时，就会调控或启动菌体相关基因的表达如生物发光、生物背膜的形成、毒力因子的释放、毒性基因的表达等，以适应环境的变化，这一调控系统被称为细菌的群体感应(Quorom Sensing，QS)信号系统。

根据群体效应不同的信号分子分子种类，大致分为四种类型：(1)革兰氏阴性菌的LuxI/LuxR型信号系统，由AHL(acylated homoserine lactone)介导；(2)革兰氏阳性菌的小分子多肽(autoinducing peptide，AIP)介导型信号系统；(3)LuxS/AI-2型信号系统；(4)AI-3/肾上腺素/去肾上腺素型信号系统。

QS系统首先是在海洋费氏弧菌(V.fischeri)中发现的，当菌体密度较高时，该细菌会产生生物发光现象，以此捕获食物、躲避天敌等。通过对其机制进行研究发现，在V.fischeri中，LuxI蛋白合成的N-乙酰基高丝氨酸内酯(acyl homoserine lactones，AHL)可以与LuxR编码的AHL受体蛋白氨基残端相结合并形成特定构象，使羧基端与靶DNA序列结合，从而激活发光基因的转录表达。在革兰氏阳性菌中主要以寡肽类作为信号分子介导群体效应，这类信号分子是由更长的前体肽经过加工修饰得到的，由于其组成及长短不一，所以形成的信号分子区别也较大，并且AlP信号分子不能自由穿过细胞膜，需要经过转运蛋白ABC或者其他转运体的运输到达细胞外发挥作用。AI-2信号分子是1990年在革兰氏阴性菌哈氏弧菌中首次发现。当时发现一株缺乏AHL的菌株仍旧可以产生生物发光，经实验验证发现AI-2，随后又有人将哈氏弧菌放入其他细菌的培养液，同样也可以产生生物生物发光，这系列实验表明有大量的细菌可以产生和利用AI-2，如大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌。随后实验验证了AI-2广泛存在于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌中，一共约有70个菌种，它也被称作“通用自诱导剂”。在革兰氏阴性菌肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157：H7中发现了一种结构新颖的信号分子AI-3，其合成和结构目前尚不清楚，但有研究表明，肾上腺素和去甲肾上腺素能够替代AI-3发挥作用。

其作用机制均表现为当细菌群体密度较低时，可产生少量的自身诱导信号，这些信号扩散到细胞外并立即被周围环境稀释。而当细菌群体密度不断上升，浓度达到一定阈值时，信号分子就会进入细胞内与相应的转录调节蛋白结合，形成转录调节蛋白信号分子聚合物，此聚合物能够调节群体效应调控蛋白的转录翻译和信号分子的合成。细菌之间的这种信息交流传导虽然早已被提出来，但系统研究主要集中在近十年，如今这种效应已被证实存在于多种细菌之中。

20世纪70年代末，科学家们发现利用天然的或者人工合成的群体感应调节剂(包括激动剂或抑制剂)可以干扰信号系统的传导，调节细菌不良基因的表达。细菌群体感应抑制剂不干扰体内细胞的正常生理功能，只是通过调节病原菌有害基因的表达，从而使其失去致病能力，因此被视为抗菌药发展的新方向，其中细菌群体感应抑制剂可以与抗生素联合用药，提高致病细菌对抗生素的敏感性，增强药物疗效，主要治疗多种革兰氏阴性菌阳性菌引起的如心内膜炎、腹膜炎、胃肠炎、胆囊炎、膀胱炎、腹泻、脓胸、败血症等各种疾病。本发明的目的在于寻找新的AI-2细菌群体感应抑制剂，以用于革兰氏阴性和阳性菌，特别是耐药革兰氏阴性和阳性菌所致疾病的预防和/或治疗。

发明内容

本发明的第一方面涉及式I所示N-苯甲酰苯胺的衍生物、其消旋体或旋光异构体、其药学可接受的盐、溶剂合物或水合物，

其中R₁为Br原子或苯基；R₂为Br或H原子；R₃为羟基或酚酯基；R₄为硝基或羧基或酯基，R₅为Br或H原子；R₆为卤素或烷基；R₇为碳酸酯链。

根据本发明第一方面任一项所述的N-苯甲酰苯胺类衍生物、其消旋体或旋光异构体、其药学可接受的盐、溶剂合物或水合物，其选自：

2，6-二溴-4-((2-溴-4-硝基苯基)氨基甲酰基)苯基乙酸酯(化合物1)；

3，5-二溴-N-(2-溴-4-硝基苯基)-4-羟基苯甲酰胺(化合物2)；

2，6-二溴-4-((2-溴-4-硝基苯基(甲基辛基碳酸酯))苯基乙酸酯(化合物3)；

4-(4-乙酰氧基-3，5-二溴苯甲酰氨基)-3-溴苯甲酸甲酯(化合物4)；

3-溴-4-(3，5-二溴-4-羟基苯甲酰氨基)苯甲酸(化合物5)；

3-溴-4-(3，5-二溴-4-羟基苯甲酰氨基)苯甲酸甲酯(化合物6)；

3-溴-4-(3，5-二溴-4-羟基苯甲酰氨基)苯甲酸乙酯(化合物7)；

4-(4-乙酰氧基-3，5-二溴苯甲酰胺基)-3-溴苯甲酸(化合物8)；

4-(4-乙酰氧基-3，5-二溴苯甲酰胺基)-3-溴-5-甲基苯甲酸甲酯(化合物9)；

3-溴-4-(3，5-二溴-4-羟基苯甲酰氨基)-5-甲基苯甲酸(化合物10)；

3-溴-4-(3，5-二溴-4-羟基苯甲酰氨基)-5-甲基苯甲酸甲酯(化合物11)；

4-(4-乙酰氧基-3，5-二溴苯甲酰胺基)-3-氯苯甲酸甲酯(化合物12)；

3-氯-4-(3，5-二溴-4-羟基苯甲酰氨基)苯甲酸(化合物13)；

3-氯-4-(3，5-二溴-4-羟基苯甲酰氨基)苯甲酸甲酯(化合物14)；

4-(4-乙酰氧基-3，5-二溴苯甲酰胺基)-3-氟苯甲酸甲酯(化合物15)；

3-氟-4-(3，5-二溴-4-羟基苯甲酰氨基)苯甲酸(化合物16)；

3-氟-4-(3，5-二溴-4-羟基苯甲酰氨基)苯甲酸甲酯(化合物17)；

3-氟-4-(3，5-二溴-4-羟基苯甲酰氨基)苯甲酸(化合物18)；

3-氟-4-(3，5-二溴-4-羟基苯甲酰氨基)苯甲酸甲酯(化合物19)；

5-((2-溴-4-硝基苯基)氨基甲酰基)-[1，1′-联苯基]-2-基乙酸酯(化合物20)；

本发明第二方面涉及本发明第一方面任一项所述的N-苯甲酰苯胺类衍生物、其消旋体或旋光异构体、其药学可接受的盐、溶剂合物或水合物可示例性通过下面的反应路线制备：

其中R_1-7的定义如本发明第一方面任一项所述，d_a、e_a为以a为原料得到的中间体，d_b，e_b为以b为原料得到的中间体。

本发明的第三方面涉及药物组合物，其包含本发明第一方面任一项所述的N-苯甲酰苯胺类衍生物、其消旋体或旋光异构体、其药学可接受的盐、溶剂合物或水合物，以及任选的一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。

根据本发明第三方面任一项的药物组合物，其还包含至少一种抗生素。

根据本发明第三方面任一项的药物组合物，其中所述抗生素包括但不限于β-内酰胺类(美罗培南、头孢氨苄、头孢他啶、头孢匹罗等)、氨基糖苷类(例如丁胺卡那、链霉素、妥布霉素、异帕米星等)、糖肽类(例如万古霉素、替考拉宁、多粘菌素等)、大环内酯类(例如罗红霉素、克拉霉素、阿奇霉素等)、四环素类(例如多西环素、米诺环素、替加环素等)、喹诺酮类(例如诺氟沙星、环丙沙星、加替沙星、帕珠沙星等)等。

本发明的第四方面涉及本发明第一方面任一项所述的N-苯甲酰苯胺类衍生物、其消旋体或旋光异构体、其药学可接受的盐、溶剂合物或水合物用于制备作为细菌群体感应抑制剂的药物的用途。

在本发明的实施方案中，选自以下的化合物、其消旋体或旋光异构体、其药学可接受的盐、溶剂合物或水合物，可以用于制备作为细菌群体感应抑制剂的药物，

2，6-二溴-4-((2-溴-4-硝基苯基)氨基甲酰基)苯基乙酸酯(化合物1)；

3，5-二溴-N-(2-溴-4-硝基苯基)-4-羟基苯甲酰胺(化合物2)；

2，6-二溴-4-((2-溴-4-硝基苯基(甲基辛基碳酸酯))苯基乙酸酯(化合物3)；

4-(4-乙酰氧基-3，5-二溴苯甲酰氨基)-3-溴苯甲酸甲酯(化合物4)；

3-溴-4-(3，5-二溴-4-羟基苯甲酰氨基)苯甲酸(化合物5)；

3-溴-4-(3，5-二溴-4-羟基苯甲酰氨基)苯甲酸甲酯(化合物6)；

3-溴-4-(3，5-二溴-4-羟基苯甲酰氨基)苯甲酸乙酯(化合物7)；

4-(4-乙酰氧基-3，5-二溴苯甲酰胺基)-3-溴苯甲酸(化合物8)；

4-(4-乙酰氧基-3，5-二溴苯甲酰胺基)-3-溴-5-甲基苯甲酸甲酯(化合物9)；

3-溴-4-(3，5-二溴-4-羟基苯甲酰氨基)-5-甲基苯甲酸(化合物10)；

3-溴-4-(3，5-二溴-4-羟基苯甲酰氨基)-5-甲基苯甲酸甲酯(化合物11)；

4-(4-乙酰氧基-3，5-二溴苯甲酰胺基)-3-氯苯甲酸甲酯(化合物12)；

3-氯-4-(3，5-二溴-4-羟基苯甲酰氨基)苯甲酸(化合物13)；

3-氯-4-(3，5-二溴-4-羟基苯甲酰氨基)苯甲酸甲酯(化合物14)；

4-(4-乙酰氧基-3，5-二溴苯甲酰胺基)-3-氟苯甲酸甲酯(化合物15)；

3-氟-4-(3，5-二溴-4-羟基苯甲酰氨基)苯甲酸(化合物16)；

3-氟-4-(3，5-二溴-4-羟基苯甲酰氨基)苯甲酸甲酯(化合物17)；

3-氟-4-(3，5-二溴-4-羟基苯甲酰氨基)苯甲酸(化合物18)；

3-氟-4-(3，5-二溴-4-羟基苯甲酰氨基)苯甲酸甲酯(化合物19)；

5-((2-溴-4-硝基苯基)氨基甲酰基)-[1，1′-联苯基]-2-基乙酸酯(化合物20)；

本发明的第五方面涉及本发明第一方面任一项所述的N-苯甲酰苯胺类衍生物、其消旋体或旋光异构体、其药学可接受的盐、溶剂合物或水合物用于制备预防和/或治疗由细菌感染所引起的疾病的药物中的用途。

根据本发明第五方面任一项的用途，其中所述的细菌为革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌，优选为革兰氏阴性菌。

根据本发明第五方面任一项的用途，其中所述的革兰氏阴性菌选自哈氏弧菌、大肠杆菌、肺炎杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌、布氏杆菌、流感(嗜血)杆菌、副流感(嗜血)杆菌、卡他(摩拉)菌、不动杆菌属、耶尔森菌属、巴斯德菌属、志贺菌属、百日咳杆菌、副百日咳杆菌、副溶血性杆菌、嗜肺军团菌、霍乱弧菌。

根据本发明第五方面任一项的用途，其中所述的由细菌感染所引起的疾病包括但不限于心内膜炎、腹膜炎、胃肠炎、胆囊炎、膀胱炎、腹泻、脓胸、败血症等各种疾病；优选地，所述疾病为对抗生素不敏感的上述耐药菌株所致的疾病。

本发明的第六方面涉及本发明第一方面任一项所述的N-苯甲酰苯胺类衍生物、其消旋体或旋光异构体、其药学可接受的盐、溶剂合物或水合物用于制备预防和/或治疗由细菌群体感应所引起的疾病的药物的用途。

根据本发明第六方面任一项的用途，其中所述由细菌群体感应所引起的疾病，包括并不限于因哈氏弧菌、大肠杆菌、肺炎杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌、布氏杆菌、流感(嗜血)杆菌、副流感(嗜血)杆菌、卡他(摩拉)菌、不动杆菌属、耶尔森菌属、巴斯德菌属、志贺菌属、百日咳杆菌、副百日咳杆菌、副溶血性杆菌、嗜肺军团菌、霍乱弧菌等革兰氏阴性菌引起的包括并不限于心内膜炎、腹膜炎、胃肠炎、胆囊炎、膀胱炎、腹泻、脓胸、败血症等各种疾病；优选地，所述疾病为对抗生素不敏感的上述耐药菌株所致的疾病。

本发明的第七方面涉及本发明第一方面所述的N-苯甲酰苯胺类衍生物、其消旋体或旋光异构体、其药学可接受的盐、溶剂合物或水合物在作为研究细菌群体感应调节的工具药中的用途。

本发明第八方面涉及预防和/或治疗由细菌感染所引起的疾病的方法，所述方法包括给有需要的受试者预防和/或治疗有效量的本发明第一方面所述的N-苯甲酰苯胺类衍生物、其消旋体或旋光异构体、其药学可接受的盐、溶剂合物或水合物的步骤。

根据本发明第八方面任一项的方法，其中所述的细菌为革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌，优选为革兰氏阴性菌。

根据本发明第八方面任一项的方法，其中所述的由细菌感染所引起的疾病包括但不限于因哈氏弧菌大肠杆菌、肺炎杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌、布氏杆菌、流感(嗜血)杆菌、副流感(嗜血)杆菌、卡他(摩拉)菌、不动杆菌属、耶尔森菌属、巴斯德菌属、志贺菌属、百日咳杆菌、副百日咳杆菌、副溶血性杆菌、嗜肺军团菌、霍乱弧菌等革兰氏阴性菌引起的包括并不限于心内膜炎、腹膜炎、胃肠炎、胆囊炎、膀胱炎、腹泻、脓胸、败血症等各种疾病；优选地，所述疾病为对抗生素不敏感的上述耐药菌株所致的疾病。

本发明第九方面涉及预防和/或治疗由细菌群体感应所引起的疾病的方法，所述方法包括给有需要的受试者预防和/或治疗有效量的本发明第一方面所述的N-苯甲酰苯胺类衍生物、其消旋体或旋光异构体、其药学可接受的盐、溶剂合物或水合物的步骤。

根据本发明第九方面任一项的方法，其中所述由细菌群体感应所引起的疾病，包括并不限于因大肠杆菌，肺炎杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌、布氏杆菌、流感(嗜血)杆菌、副流感(嗜血)杆菌、卡他(摩拉)菌、不动杆菌属、耶尔森菌属、巴斯德菌属、志贺菌属、百日咳杆菌、副百日咳杆菌、副溶血性杆菌、嗜肺军团菌、霍乱弧菌等革兰氏阴性菌引起的包括并不限于心内膜炎、腹膜炎、胃肠炎、胆囊炎、膀胱炎、腹泻、脓胸、败血症等各种疾病；优选地，所述疾病为对抗生素不敏感的上述耐药菌株所致的疾病。

发明详述

本发明中使用的各种短语和术语具有本领域技术人员公知的一般含义，但是在本文中有特别定义的，以本文中所定义的含义为准。

如用于本文的R_1-7表示R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇。

如用于本文的，术语“卤素”具有本领域公知的一般含义，并且通常包括F、Cl、Br、I，还可包括它们的同位素形式，在本发明中优选为F、Cl、Br。

如用于本文的，术语“烷基”是指含1-6个碳原子的直链、支链或环状烷基，包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、戊基、新戊基、己基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。

如用于本文的，以下术语所代表的基团具有本领域公知的一般含义：硝基、甲基、酚酯基、酯基、碳酸酯链。

如用于本文的，术语“消旋体”和“旋光异构体”具有其本领域公知的一般含义。

根据本发明，本发明涉及如通式I所示化合物或其立体异构体的合适的可药用盐或水合物，其中可药用的盐包括但是并不局限于通式I化合物与无机酸如盐酸、硫酸、磷酸、亚磷酸、氢溴酸和硝酸所成的盐以及与各种有机酸，如马来酸、苹果酸、延胡索酸、琥珀酸、酒石酸、柠檬酸、乙酸、乳酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、棕榈酸等所成的盐.本发明中的一些化合物可能与水或各种有机溶剂结晶或重结晶，在这种情况下，可能形成各种溶剂化物。本发明包括那些化学计量的溶剂化物，包括水合物，也包括在用低压升华干燥法制备时形成的包含可变量水的化合物。

根据本发明，本发明式I化合物的立体异构体指本发明中部分化合物可能以光学异构体或互交异构体的形式存在，本发明包括其所有存在形式，特别是纯异构体的形式.不同的异构体形式可以以各种常规的手段与其它形式的异构体分离或拆分开，或者某种异构体可以以各种常规的合成方法或立体专一或不对称合成的方法得到.既然式I化合物是以药用为目的的，可以理解它们最好以纯的形式提供，例如至少60％的纯度，更合适的75％，更好的85％，最好至少98％的纯度(％是指重量百分比)。不纯化合物的制备方法可用来用于药用组合物中更纯的形式.这些不够纯的产物中至少含有1％，更适合的5％，更好的至少10％的如通式I所示的化合物或其可药用的衍生物。

根据本发明，上述通式I化合物可用以下典型的示例性的方法制备，所述方法包括以下步骤：

1)将1g乙酸酐(10.1mmol)溶于40mL二氯甲烷，置于250mL烧瓶中，搅拌溶解，加入3，5-二溴-4羟基苯甲酸1g(3.4mmol)，再滴加浓硫酸2d，35℃油浴回流5h，反应完全。加入50mL饱和NaCl溶液搅拌20min，倒入分液漏斗中静置分层，取有机相，用饱和NaCl溶液将其洗至中性后，用无水硫酸钠干燥5h后旋干得到中间体d_a白色固体1.2g，产率100％。

2)取中间体d_a1g(2.8mmol)与氯化亚砜10mL置于50mL烧瓶中，搅拌溶解，滴入2滴DMF，70℃油浴回流4h，反应完成，停止加热。旋干得到在中间体e_a白色固体1.05g，产率100％。

3)取原料h 1g(4.6mmol)，苯硼酸0.8g(6.5mmol)溶于12mL 1，4-二氧六环，加入3mL水溶解的3g K₂CO₃(21mmol)混悬液，抽真空后，氮气氛围下加四三苯基膦钯0.29g(0.25mmol)，100℃回流10h，加水和二氯甲烷各50mL，搅拌，加1N HCl调pH至酸性搅拌10min，静置，取二氯甲烷层，再用二氯甲烷萃取水层，将有机相旋干，柱层析得到0.15g白色固体，即中间体c。

4)取中间体c 0.15g(0.7mmol)，乙酸酐0.21g(2.1mmol)，溶于7mL二氯甲烷，滴入4d浓硫酸，40℃回流3h，加饱和NaCl溶液7mL搅拌，静置取有机相，用饱和NaCl溶液洗有机相至中性，干燥旋干得0.12g白色固体，即中间体d_b。

5)取中间体d_b50mg，溶于SOCl25mL，加入2d DMF，70℃回流3h，旋干得白色固体50mg，即中间体e_b。

6)中间体h由以下步骤得到：在冰浴条件下，向反应瓶中加入氯甲酸氯甲酯5.7g(44.98mmol)，用40mL DCM溶解后，再加入1-辛醇5.8g(44.98mmol)，再缓慢逐滴加入三乙胺4.55g(44.98mmol)后冰浴反应10min后撤去冰浴，室温搅拌21h，将反应产物依次在分液漏斗中用40mL稀盐酸、40mL饱和碳酸氢钠、40mL蒸馏水洗涤至中性，取有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后得到油状产物干燥后直接投入下一步反应(6.72g)，产率67.3％。向反应瓶中加入NaI 4.76g(31.76mmol)，并加入40mL无水乙腈搅拌使其溶解，再加入已合成的氯甲基-1-辛基碳酸酯6.72g(30.26mmol)，避光搅拌过夜后过滤除去不溶物，滤液浓缩干燥得到中间体h碘甲基-1-辛基碳酸酯，直接投入下一步。

7)将e_a或e_b与式f在三乙胺碱性条件下，常温搅拌得到式g，式g与中间体h在NaH作用下生成式i；当R4为酯基时的式g在NaOH作用下水解生成式j，式j与甲醇或乙醇在SOCl₂作用下反应生成式k。其中式g、式i、式j、式k是R不同情况下的式I化合物

其中R_1-7基团的定义同本发明第一方面任一项所述。

本发明还涉及药物组合物，其包括至少一种式I化合物和至少一种药用载体或赋形剂。通式I的化合物或其可药用的盐可以单独使用，或与可药用的载体或赋形剂一起以药物组合物的形式使用，当以药物组合物的形式使用时，通常将有效剂量的本发明通式I化合物或其可药用盐或水合物以及一种或多种可药用载体或稀释剂结合制成适当的施用形式或剂量形式，这一程序包括通过合适的方式将组分混合、粒化、压缩或溶解。

本发明药用组合物可以以下方面的任意方式施与：口服、喷雾吸入、直肠给药、鼻腔给药、***给药、局部给药、非肠道给药如皮下、静脉、肌内、腹膜内、鞘内、心室内、胸骨内或颅内注射或输入，或借助一种外植的储器用药，其中优选口服、肌注、腹膜内或静脉内用药方式。

本发明的药物组合物中含有的药用载体包括但不局限于：离子交换剂，氧化铝，硬脂酸铝，卵磷脂，血清蛋白如人血清蛋白，缓冲物质如磷酸盐，甘油，山梨酸，山梨酸钾，饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物，水，盐或电解质，如硫酸鱼精蛋白，磷酸氢二钠，磷酸氢钾，氯化钠，锌盐，胶态氧化硅，三硅酸镁，聚乙烯吡咯烷酮，纤维素物质，聚乙二醇，羧甲基纤维素钩，聚丙烯酸酯，蜂蜡，羊毛醋等。载体在药物组合物中的含量可以是1重量％～98重量％，通常大约占到80重量％，为方便起见，局部麻醉剂，防腐剂，缓冲剂等可直接溶于载体中。

口服制剂如口服片剂和胶囊可以含有赋形剂如粘合剂，如糖浆，***胶，山梨醇，黄芪胶，或聚乙烯吡咯烷酮，填充剂，如乳糖，蔗糖，玉米淀粉，磷酸钙，山梨醇，氨基乙酸，润滑剂，如硬脂酸镁，滑石，聚乙二醇，硅土，崩解剂，如马铃薯淀粉，或可接受的增润剂，如月桂醇钠硫酸盐.片剂可以用制药学上公知的方法包衣。

口服液形式的本发明药物组合物可以制成水和油的悬浮液，溶液，乳浊液，糖浆或酏剂，也可以制成干品，用前补充水或其它合适的媒质。这种液体制剂可以包含常规的添加剂，如悬浮剂，山梨醇，纤维素甲醚，葡萄糖糖浆，凝胶，羟乙基纤维素，羧甲基纤维素，硬脂酸铝凝胶，氢化的食用油脂，乳化剂，如卵磷脂，山梨聚醣单油酸盐，***树胶；或非水载体(可能包含可食用油)，如杏仁油，油脂如甘油，乙二醇，或乙醇；防腐剂，如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯，山梨酸。如需要可添加调味剂或着色剂。栓剂可包含常规，的栓剂基质，如可可黄油或其它甘油酯。非肠道给药，液态剂型通常由化合物和至少一种消毒或无茵的载体制成。载体首选水.依照所选载体和药物浓度的不同，化合物既可溶于载体中也可制成悬浮溶液，在制成注射用溶液时先将化合物溶于水中，过滤消毒后装入封口瓶或安瓿中。当皮肤局部施用时，本发明化合物可以制成适当的软膏，洗剂，或霜剂的形式，其中活性成分悬浮或溶解于一种或多种的载体中。其中软膏制剂可以使用的载体包括但不局限于：矿物油，液体凡士林，白凡士林，丙二醇，聚氧化乙烯，聚氧化丙烯，乳化蜡和水；洗剂和霜剂可使用的载体包括但不限于：矿物油，脱水山梨糖醇单硬脂酸酯，吐温60，十六烷酯蜡，十六碳烯芳醇，2-辛基十二烷醇，苄醇和水。依据给药方式的不同，组合物中可以含有重量比0.1％，或更合适的重量比10-60％的活性组分.但组合物为单位剂型时，每个单位最好包含50～500毫克活性成分.依据给药途径和给药频率的不同，用于成人的适宜治疗剂量，例如可为每天100-3000毫克，如每天1500毫克。

必须认识到，通式I化合物的最佳给药剂量和间隔是由疾病或症状的严重程度、化合物性质和诸如给药的形式、路径和部位以及所治疗的特定哺乳动物等条件决定的，而这一最佳给药剂量可由临床医生来确定。

发明的有益效果

本发明提供了一系列新型的群体感应抑制剂，群体感应抑制剂不干扰细胞的正常生理活动，只是通过抑制病原菌有害基因的表达，从而使其失去致病能力，因此被视为抗菌药发展的新方向，细菌群体感应抑制剂可以与抗生素联合用药，可用于预防和/或治疗多种革兰氏阴性菌引起的如心内膜炎、腹膜炎、胃肠炎、胆囊炎、膀胱炎、腹泻、脓胸、败血症等各种疾病，特别适用于对现有抗生素不敏感的耐药革兰氏阴性菌所致疾病的预防和/或治疗。

具体实施方式

下面通过具体的中间体和实施例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些中间体和实施例仅用于更详细具体地说明，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。

本发明对试验中所使用的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为达到本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。本领域技术人员清楚，在下文中，如果未特别说明，本发明所用材料和操作方法是本领域公知的。

¹H-NMR光谱由JNM-ECS-400核磁仪测定。质谱由API 3000三重四级杆串联质谱仪测定。

【实施例】

【实施例1】2，6-二溴-4-((2-溴-4-硝基苯基)氨基甲酰基)苯基乙酸酯(化合物1)

取中间体e_a0.5g(1.4mmol)，3-溴-4-氨基硝基苯0.3g(1.4mmol)，三乙胺0.22g(2.1mmol)以及10mL无水二氯甲烷置于50mL烧瓶中，抽真空，N2保护，室温搅拌21h后，旋干后，柱层析得到0.29g黄色固体即为YB-1-1，产率38.6％。¹H-NMR(400MHz，CCID₃)δppm8.74(d，J＝8Hz，1H，-ArH)8.54(br，s，1H，-NH-)8.52(d，1H，-ArH)8.27(dd，J＝4Hz，1H，-ArH)8.10(s，2H，-ArH)2.44(s，3H，-CH₃)ESI-MS m/z理论计算值：C₁₅H₉Br₃N₂O₅537.80，检测值：538.81[M+1]⁺

【实施例2】3，5-二溴-N-(2-溴-4-硝基苯基)-4-羟基苯甲酰胺(化合物2)

取130mg(0.24mmol)化合物1，2.5mL甲醇置于50mL烧瓶中，将50mg(1.25mmol)NaOH溶于2.5mL水中滴入烧瓶中，加入甲醇∶水＝1∶1溶液12mL，65℃油浴回流4h，停止加热，用1NHCl溶液调pH至酸性，出现白色沉淀，搅拌0.5h后过滤，得98mg产物白色固体，产率75.4％。¹H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm10.90(s，1H，-OH)10.35(br，s，1H，-NH-)8.54(d，J＝4Hz，1H，-ArH)8.3(dd，J＝4Hz，1H，-ArH)8.21(s，2H，-ArH)7.88(d，J＝8Hz，1H，-ArH)ESI-MS m/z理论计算值：C₁₃H₇Br₃N₂O₄495.79，

检测值：496.79[M+1]⁺。

【实施例3】2，6-二溴-4-((2-溴-4-硝基苯基(甲基辛基碳酸酯))苯基乙酸酯(化合物3)

将0.25g化合物1(0.47mmol)和4mL无水DMF置于50mL烧瓶中，加入60％NaH 37mg(0.93mmol)搅拌10min，将中间体h碘甲基-1-辛基碳酸酯0.44g溶于4mL无水DMF滴加进化合物1的溶液中，氮气保护，搅拌过夜。加入乙酸2d搅拌10min，加200mL水后用二氯甲烷萃取，旋蒸干得到黄色油液，柱层析得到油状产物55mg，产率16.3％。¹H-NMR(400MHz，CClD₃)δppm8.5(d，J＝2.8Hz，-ArH，，1H)8.1(dd，J＝2.4Hz，-ArH，1H)7.55(s，-ArH，2H)6.08(s，-N-CH2-O-，2H)4.23(t，J＝2.8Hz，-O-CH2-，2H)2.37(s，3H，-COCH3)1.2-1.4(m，12H，6-CH2-)0.88(t，J＝8Hz，3H，-CH3)ESI-MS m/z理论计算值：C₂₅H₂₇Br₃N₂O₈723.21，检测值：724.93[M+1]⁺

【实施例4】4-(4-乙酰氧基-3，5-二溴苯甲酰氨基)-3-溴苯甲酸甲酯(化合物4)

取中间体e_a1.13g(3.2mmol)，4-氨基-3-溴苯甲酸甲酯0.73g(3.2mmol)溶于20mL无水二氯甲烷搅拌，缓慢加入TEA0.48g(4.8mmol)，氮气保护，常温搅拌20h。旋干后柱层析得到0.3g白色固体，产率17％。¹H-NMR(400MHz，CClD₃)δppm 8.59(d，J＝8Hz，1H，-ArH)8.47(s，1H-ArH)8.29(s，1H-ArH)8.10(s，2H，-ArH)8.06(d，J＝8Hz，1H，-ArH)3.93(s，3H，-OCH3)2.45(s，3H，-CH3)ESI-MS m/z理论计算值：C₁₇H₁₂Br₃NO₅550，检测值：551.8[M+1]⁺

【实施例5】3-溴-4-(3，5-二溴-4-羟基苯甲酰氨基)苯甲酸(化合物5)

取0.11g化合物4(0.2mmol)，7mL甲醇置于50mL烧瓶中，取40g(1mmol)NaOH溶于5mL水中，加进甲醇溶液中，再加入2mL水，65℃回流3h。旋蒸除去甲醇后，用1N HCl溶液调pH至3，搅拌20min，过滤，洗滤饼至中性，真空干燥得到90mg白色固体，产率100％。¹H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm13.32(br，s，1H，-COOH)10.84(br，s，1H，-OH)10.23(s，1H，-NH-)8.20(s，2H)8.17(d，J＝4Hz，1H，-ArH)7.97(dd，J＝2Hz，1H，-ArH)7.69(d，J＝8Hz，1H，-ArH)ESI-MS m/z理论计算值：C₁₄H₈Br₃NO₄493.93，检测值：493.8[M]⁺

【实施例6】3-溴-4-(3，5-二溴-4-羟基苯甲酰氨基)苯甲酸甲酯(化合物6)

取90mg(0.18mmol)化合物5溶于10mL甲醇，冰浴条件下滴加SOCl₂2d，70℃回流5h，旋干得到白色固体，用甲醇重结晶得到白色固体50mg，即为7369-3-2，产率50％。¹H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm10.84(br，s，1H，-OH)10.24(s，H)10.20(s，1H，-NH-)8.2(s，2H，-ArH)7.98(dd，J＝4Hz，1H，-ArH)7.72(d，J＝8Hz，1H，-ArH)3.88(s，3H，-CH3)ESI-MS m/z理论计算值：C₁₅H₁₀Br₃NO₄507.96，检测值：507.82[M]⁺

【实施例7】3-溴-4-(3，5-二溴-4-羟基苯甲酰氨基)苯甲酸乙酯(化合物7)

取50mg(0.1mmol)化合物5溶于8mL乙醇，冰浴条件下滴加5dSOCl₂，70℃回流6h旋干后，制备薄层板层析得到46mg白色固体，产率80.5％。¹H-NMR(400MHz，CClD₃)δppm9.33(s，1H，-OH)8.12(s，2H，-ArH)7.95(dd，J＝6.4，1.6Hz，1H，-ArH)7.83(dd，J＝6.8，1.2Hz，1H，-ArH)7.20(t，J＝8Hz，1H，-ArH)6.27(s，1H，-NH-)4.33(q，J＝7.2Hz，2H，-CH2-)1.35(t，J＝6.8Hz，3H，-CH3)ESI-MS m/z理论计算值：C₁₆H₁₂Br₃NO₅521.99，检测值：521.85[M]⁺

【实施例8】4-(4-乙酰氧基-3，5-二溴苯甲酰胺基)-3-溴苯甲酸(化合物8)

取中间体e_a2.4g(6.8mmol)，4-氨基-3溴苯甲酸1.55g(6.8mmol)，溶于40mL无水二氯甲烷，缓慢滴加TEA 1.02g(10.1mmol)，氮气保护，室温搅拌20h。旋干后，柱层析的白色固体0.68g，产率为18.7％。¹H-NMR(400MHz，CClD₃)δppm8.54(s，2H，-ArH)8.21(dd，J＝6.4，1.6Hz，1H，-ArH)8.1(dd，J＝6.4，1.6Hz，1H，-ArH)7.42(t，J＝8Hz，1H，-ArH)2.44(s，3H，-CH3)ESI-MS m/z理论计算值：C₁₆H₁₀Br₃NO₅535.97，检测值：535.8[M]⁺

【实施例9】4-(4-乙酰氧基-3，5-二溴苯甲酰胺基)-3-溴-5-甲基苯甲酸甲酯(化合物9)

取中间体e_a1.24g(3.5mmol)，4-氨基-3-溴-5-甲基苯甲酸甲酯0.85g(3.5mmol)溶于20mL无水二氯甲烷，缓慢加入TEA 0.53g(5.2mmol)，氮气保护，室温搅拌20h。旋干后柱层析得到白色固体0.65g，产率33％。¹H-NMR(400MHz，CClD₃)δppm8.16(s，2H，-ArH)8.14(s，-NH-，1H)7.92(m，1H，-ArH)7.68(m，1H，-ArH)3.94(s，3H，-OCH3)2.46(s，CH3，3H)2.36(s，3H，-ArCH3)ESI-MS m/z理论计算值：C₁₈H₁₄Br₃NO₅564.02，检测值：565.85[M+1]⁺

【实施例10】3-溴-4-(3，5-二溴-4-羟基苯甲酰氨基)-5-甲基苯甲酸(化合物10)

取0.6g(0.12mmol)化合物9溶于40mL甲醇置于500mL烧瓶中，将NaOH 24mg(0.6mmol)溶于10mL水中，加入甲醇溶液中，再加入30mL水，65℃回流4h。旋蒸除去甲醇，用1N HCl溶液调pH至3，搅拌20min，过滤，洗滤饼至中性，真空干燥得到0.5g白色固体。产率82.5％。¹H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm13.36(br，s，1H，-COOH)10.85(br，s，1H，-OH)10.26(s，1H，-NH-)8.20(s，2H，-ArH)8.02(m，1H，-ArH)7.89(s，1H，-ArH)7.82(s，1H-ArH)2.3(d，J＝1.2Hz，3H，-CH3)ESI-MS m/z理论计算值：C₁₅H₁₀Br₃NO₄508.81，检测值：509.82[M+1]⁺

【实施例11】3-溴-4-(3，5-二溴-4-羟基苯甲酰氨基)-5-甲基苯甲酸甲酯(化合物11)

取0.34g(0.66mmol)化合物10溶于30mL甲醇溶液中，冰浴条件下滴加SOCl₂0.16g(1.32mmol)，70℃回流5h，旋干得到白色固体，柱层析得到0.14g，产率40.9％。¹H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm10.82(s，1H，-OH)10.27(s，1H，-NH-)8.20(s，2H，-ArH)8.06(m，1H，-ArH)7.92(m，1H，-ArH)3.88(s，3H，-OCH3)2.29(s，3H，-ArCH3)ESI-MS m/z理论计算值：C₁₆H₁₂Br₃NO₄521.99，检测值：521.84[M]⁺

【实施例12】4-(4-乙酰氧基-3，5-二溴苯甲酰胺基)-3-氯苯甲酸甲酯(化合物12)

取中间体e_a0.27g(0.76mmol)，4-氨基-3-氯苯甲酸甲酯0.14g(0.76mmol)，溶于8mL无水二氯甲烷，缓慢加入TEA 0.17g(1.13mmol)，氮气保护，室温搅拌20h，旋干后柱层析得到白色固体70mg，产率18.4％。¹H-NMR(400MHz，CClD₃)δppm8.60(d，J＝8Hz，1H，-ArH)8.44(b_r，s，1H，-NH-)8.13(d，J＝2Hz，1H，-ArH)8.08(s，2H，-Ar)8.02(m，1H，-ArH)3.99(s，3H，-OCH3)2.44(s，3H，-CH3)ESI-MS m/z理论计算值：C₁₇H₁₂Br₂FNO₅505.54，检测值：505.88[M]⁺

【实施例13】3-氯-4-(3，5-二溴-4-羟基苯甲酰氨基)苯甲酸(化合物13)

取0.69g(1.3mmol)化合物12，加入40mL甲醇溶液搅拌，将NaOH 0.27g(6.7mmol)溶于10mL水，加进甲醇溶液，再加入30mL水，70℃回流5h。旋蒸除去甲醇，用1N HCL溶液调pH至3，搅拌20min，过滤，洗滤饼至中性，用甲醇重结晶得到白色固体0.44g，产率为75.7％，¹H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm13.32(s，1H，-COOH)10.84(s，1H，-OH)10.27(s，1H，-NH-)ESI-MSm/z理论计算值：C₁₄H₈Br₂ClNO₄449.48，检测值：449.86[M]⁺

【实施例14】3-氯-4-(3，5-二溴-4-羟基苯甲酰氨基)苯甲酸甲酯(化合物14)

取0.14g(0.3mmol)化合物13溶于14mL甲醇溶液，冰浴条件下滴加SOCl₂2d，70℃回流5h，旋干后，柱层析得到白色固体90mg，产率为65.1％。¹H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm10.84(br，s，1H，-OH)10.28(s，1H，-NH-)8.19(s，2H，-ArH)8.04(d，J＝2Hz，1H，-ArH)7.95(dd，J＝2Hz，1H，-ArH)7.78(d，J＝8Hz，1H，-ArH)3.88(s，3H，-CH3)ESI-MS m/z理论计算值：C₁₅H₁₀Br₂ClNO₄507.96，检测值：507.82[M]⁺

【实施例15】4-(4-乙酰氧基-3，5-二溴苯甲酰胺基)-3-氟苯甲酸甲酯(化合物15)

取中间体e_a0.5g(1.4mmol)，4-氨基-3-氟苯甲酸甲酯0.24g(1.4mmol)溶于10mL无水二氯甲烷，缓慢滴加TEA 0.22g(2.1mmol)，氮气保护，室温搅拌20h。旋干后用DCM重结晶得到白色固体0.4g，产率为58.7％。¹H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm10.66(s，1H，-NH-)8.3(s，2H，-ArH)7.92(t，J＝8Hz，1H，-ArH)7.83(m，2H，ArH)3.87(s，3H，-OCH3)2.45(s，3H，-CH3)ESI-MS m/z理论计算值：C₁₇H₁₂Br₂FNO₅489.09，检测值：489.91[M]⁺

【实施例16】3-氟-4-(3，5-二溴-4-羟基苯甲酰氨基)苯甲酸(化合物16)

取0.16g(0.33mmol)化合物15，加入16mL甲醇溶液搅拌，将NaOH 0.11g(2.7mmol)溶于7mL水，加进甲醇溶液，再加入9mL水，70℃回流5h。旋蒸除去甲醇，用1N HCl溶液调pH至3，搅拌20min，过滤，洗滤饼至中性，真空干燥得到白色固体0.12g，产率为84.4％。¹H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm13.23(s，1H，-COOH)10.82(br，s，1H，-OH)10.36(s，1H，-NH-)8.19(s，2H，-ArH)7.8(m，3H，-ArH)ESI-MS m/z理论计算值：C₁₄H₈Br₂FNO₄433.03，检测值：433.89[M]⁺

【实施例17】3-氟-4-(3，5-二溴-4-羟基苯甲酰氨基)苯甲酸甲酯(化合物17)

取0.11g(0.25mmol)化合物16溶于10mL甲醇，冰浴条件下滴加SOCl₂59mg(0.5mmol)，70℃回流6h，旋干后用乙酸乙酯重结晶，得到白色固体0.1g，产率为89.9％。¹H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm10.82(br，s，1H，-OH)10.38(s，1H，-NH-)8.18(s，2H，-ArH)7.8(m，3H，-ArH)3.87(s，3H，-CH3)ESI-MS m/z理论计算值：C₁₅H₁₀Br₂FNO₄447.05，检测值：447.91[M]⁺

【实施例18】3-氟-4-(3，5-二溴-4-羟基苯甲酰氨基)苯甲酸(化合物18)

取中间体e_a0.65g(0.85mmol)，4-氨基-3-溴-5-氟苯甲酸甲酯0.43g(0.85mmol)，溶于10mL无水二氯甲烷，缓慢加入TEA 0.28g(1.3mmol)，氮气保护，室温搅拌20h，旋干后柱层析得到白色固体投下一步。取上述产物0.1g(0.18mmol)溶于8mL甲醇溶液，将NaOH 56mg(1.4mmol)加进甲醇溶液，70℃回流5h。旋蒸除去甲醇，用1N HCl溶液调pH至3，搅拌20min，过滤，洗滤饼至中性，用甲醇重结晶得到白色固体67mg，产率为73.2％。¹H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm10.90(br，s，1H，-OH)10.42(s，1H，-NH-)8.22(s，2H，-ArH)8.06(m，1H，-ArH)8.01(s，1H，-ArH)7.84(m，1H，-ArH)ESI-MS m/z理论计算值：C₁₄H₇Br₃FNO₄511.92，检测值：511.80[M]⁺

【实施例19】3-氟-4-(3，5-二溴-4-羟基苯甲酰氨基)苯甲酸甲酯(化合物19)

取170mg(0.33mmol)化合物18溶于15mL甲醇，冰浴条件下滴加SOCl₂4d，70℃回流6h，旋干后用乙酸乙酯重结晶，得到白色固体70mg，产率为40.1％。¹H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm10.90(br，s，1H，-OH)10.44(s，1H，-NH-)8.21(s，2H，-ArH)8.08(m，1H，-ArH)7.86(m，1H，-ArH)3.90(s，3H，-OCH3)ESI-MS m/z理论计算值：C₁₅H₉Br₃FNO₄525.95，检测值：525.81[M]⁺

【实施例20】5-((2-溴-4-硝基苯基)氨基甲酰基)-[1，1′-联苯基]-2-基乙酸酯(化合物20)

取50mg(0.18mmol)中间体e_b，40mg(0.18mmol)2-溴-4-硝基苯胺溶于5mL无水二氯甲烷，加入54mg(54mmol)TEA，氮气保护，室温搅拌20h。旋干后用制备板层析制得白色固体20mg。产率24.4％。¹H-NMR(400MHz，CClD3)δppm8.83(d，J＝8Hz，1H，-ArH)8.73(s，1H，-ArH)8.52(d，J＝2.8Hz，1H，-ArH)8.28(dd，J＝9.2，2.4Hz，1H，-ArH)8.01(d，J＝2Hz，1H，-ArH)7.94(dd，J＝6.4，2Hz，1H，-ArH)7.46(m，5H，-ArH)7.33(d，J＝8Hz，1H，-ArH)2.13(s，3H，-CH3)ESI-MS m/z理论计算值：C₂₁H₁₅BrN₂O₅455.26，检测值：455.01[M]⁺

【实施例21】本发明细菌群体感应抑制剂的活性评价

本发明涉及细菌群体感应抑制剂的活性可以用以下方法检测

1具有抑制活性化合物的初筛方法：

1.1实验原理

哈氏弧菌的生物发光现象受到群体感应的调控，野生型哈氏弧菌在响应AI-2信号分子的同时又能响应AI-1信号分子，为了消除AI-1对活性测试的影响，选用哈氏弧菌BB170型作为测试菌株，该变异菌株缺少LuxN蛋白，不能响应AI-1信号分子。实验中，通过检测生物发光的产生数量判断化合物对细菌的抑制强度，其中IC₅₀值定义为使发光强度降低50％的浓度。

1.2实验过程

1.2.1实验材料

菌种：V.harveyi BB170(ATCC BAA-1117)，阳性化合物C56购于sigma公司。

1.2.1化合物及溶液配制

(1)化合物配制：用二甲基亚砜(DMSO)将粉末状化合物溶解并配制成65mM的浓度，置于-20℃储存备用。

(2)AB培养基(1L)配制：精确称量0.3MNaCl、0.05M Mg₂SO₄、2％酸水解酪蛋白(不含维生素)加入1L蒸馏水混匀后加入1M KOH调PH至7.5，然后121℃高压灭菌20min，冷却至室温后，向培养基中(每1L)加入10mL1M的无菌磷酸钾缓冲液(K₂HPO₄/KH₂PO₄，PH7.0)、10mL0.1M的无菌精氨酸溶液(L-Arg)和20mL50％无菌甘油。混匀后置于4℃储存备用。

(3)1M磷酸钾缓冲液配制(母液的配制)：

1M K₂HPO₄：称取22.822g K₂HPO₄-3H₂O溶于100mL蒸馏水；1M KH₂PO₄：称取13.609gKH₂PO₄溶于100mL蒸馏水；1M K₂HPO₄/KH₂PO₄(PH 7.0)配制：取61.5mL的K₂HPO₄和38.5mL的KH2PO4混匀，高压灭菌备用。

(4)0.1M的无菌精氨酸溶液(L-Arg)配制(100mL)：1.742g精氨酸溶于100mL蒸馏水，用滤膜过滤置于4℃储存备用。Zang等人报道的溴代呋喃酮C56有很好地LuxS抑制活性，可看做是“黄金标准”，故用其作为阳性对照。

1.2.3实验操作

测试菌株为V.harveyi BB170(ATCC BAA-1117)，取10mL AB培养基加入100μL磷酸钾缓冲液、100μL无菌L-Arg(0.1M)、200μL 50％甘油，再接种100μL BB170菌株、10μL卡那霉素(50μg/mL)，充分摇匀后置于30℃、150rpm摇床中过夜培养14h。将培养好的菌液稀释2500倍，采用96孔板二倍稀释法，每行1号孔不加菌液做空白对照，2号孔加198μL稀释后的菌液和2μL待测化合物(C56做阳性对照)，其余加100μL稀释后的菌液，2-11号孔二倍稀释，12号孔不加化合物做阴性对照。将96孔板置于30℃培养箱中培养8h。测其发光值(OD460)和吸光值(OD600)，归一化OD460和OD600的值并运用GraphPad Prism5计算IC50值(IC50值定义为使发光强度降低50％时化合物的浓度)。

1.2.3实验结果

如表2所示，经虚拟筛选得到的10个化合物都显示出一定的活性，其中Str5036，Str629，Str165，Str5015，Str811，Str6793的IC50值达到50μM左右。

表1 V.harveyi BB170中化合物对AI-2的拮抗作用结果表

尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，本领域技术人员将会理解。根据已经公开的所有教导，可以对那些细节进行各种修改和替换，这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。