阅读说明：本技术 一种烟花提取物在植物病毒病防治中的应用 (Application of firework extract in plant virus disease prevention and control ) 是由 张建会 刘艳华 杜咏梅 张瑞娜 申莉莉 肖勇 雷云康 绪扩 于 2020-05-14 设计创作，主要内容包括：本发明属于生物源农药的开发与利用技术领域,具体涉及一种烟花提取物在植物病毒病防治中的应用,烟花提取物为含有冷杉醇的烟花提取物,采用烟花提取物制备抗病毒病制剂,作为抗病毒病制剂的烟花提取物中冷杉醇浓度不低于100ppm；烟花提取物以冷杉醇为主效活性成分。本发明所采用的原料为烟花,烟花是烟草生产中的废弃物,种植区域集中,收集方便,生物量大,提取简单,利用含有冷杉醇的烟花提取物防治植物病毒病,具有原料丰富,成本低廉以及清洁环境等优势,该提取物无毒副作用,使用安全,相对目前报道的生物来源制剂,含有冷杉醇的烟花提取物防效高,防治效果显著高于目前生产中应用推广的植物源农药对植物病毒病的防治效果。(The invention belongs to the technical field of development and utilization of biogenic pesticides, and particularly relates to application of a firework extract in plant virus disease prevention and control, wherein the firework extract is a fir extract containing abienol, an antiviral preparation is prepared from the firework extract, and the abienol concentration of the firework extract serving as the antiviral preparation is not lower than 100 ppm; the firework extract contains abienol as main active component. The firework extract containing the abienol has the advantages of no toxic or side effect, safety in use, high prevention effect compared with a biological source preparation reported at present, and the prevention effect of the firework extract containing the abienol is remarkably higher than the prevention effect of a plant source pesticide applied and popularized in the current production on plant virus diseases.)

一种烟花提取物在植物病毒病防治中的应用

技术领域

本发明属于生物源农药的开发与利用技术领域，具体涉及一种烟花提取物在植物病毒病防治中的应用。

背景技术

植物病毒病是农业生产上仅次于真菌的第二大病害，有“植物癌症”之称。病毒侵染植物后可迅速在寄主体内增殖，其生长、扩增所需要的营养物质、能量和场所完全由寄主提供，导致寄主细胞结构变化，进而引起寄主光合作用、呼吸代谢、核酸代谢、蛋白质代谢、激素等代谢异常，造成植物植株弱小、产量下降、品质下降，甚至造成植株死亡。植物病毒病每年给世界各地的农作物生产造成严重的损失，仅在我国每年由于病毒病造成的损失可达300亿，防治病毒病一直是农业生产中的世界难题。

目前，防治病毒病的方法通常是利用无毒苗木、培育抗病品种、利用弱毒株和卫星RNA、应用抗病毒基因工程提高寄主植物抗病性、改变栽培措施、杀死传播介体及抗病毒化学药剂等。但是，植物在田间常受多种病毒的侵染，且病毒株系突变率高，致使常规育种周期长，难度大；而抗病毒基因工程虽取得了较大进展，但是存在一定的环境风险；病毒弱毒株系和卫星RNA生物制剂可能与致病病毒混合侵染，导致病毒症状加重而造成更大的危害；抗病毒化学制剂在防治病毒病、抑制病毒核酸和蛋白合成的同时，会干扰寄主核酸与蛋白的合成，易导致药害，迄今尚未找到一种对植物病毒病真正有效而对寄主无害的抗病毒化学药剂。因此，人们逐渐开始重视化学防治的替代技术“生物防治”。

生物防治是利用生物活体或其代谢产物对有害生物进行防治，生物药剂较化学农药具有选择性强、环境兼容性好、不易产生抗药性、生产原料广泛等优点，可避免化学农药使用过程中的农药残留、环境污染以及生态系统破坏等一系列问题。从自然界生物中寻找抗植物病毒活性物质是筛选、获取抗病毒药物的重要途径，也是植物病毒病防治研究中的热点和难点。活性物质来源的生物种类很多，主要是从高等植物、藻类、微生物、动物或其代谢产物中获取得到。自19世纪50年代以来，国内外先后筛选出挥发性物质、油类、单宁、多糖、蛋白质、生物碱等多种具有抗病毒活性的天然化合物，其中从植物中获得抗病毒物质是近年来研究的热点。

古口武等从灰黎中分离到钝化TMV的物质；vermaH.v等研究表明白花觅的叶片中含有强活性的抗病毒物质；SusumKubo证明紫茉莉蛋白(MAP)可使植株产生系统抗性而抑制TMV、马铃薯Y病毒(PVY)、黄瓜花叶病毒(CMV)等病毒的侵染；裘维蕃教授、朱水芳、赵培洁等发现板兰根、大黄、金银花、薄荷、柴胡鱼腥草、穿心莲等30多种中药的提取物对TMV、TuMV、CMV有明显的治疗和保护作用；刘学端、肖启明利用商陆、甘草、连翘等几种中草药植物自制复配为MH11-4可湿性粉剂，可对TMV和CMV表现强烈的体外钝化作用，并能明显地抑制烟草体内TMV和CMV的增殖。以上天然抗植物病毒物质大多是基于中药材进行提取配制的，存在原料生物量小、生产成本高的缺点，且其生物防效多在30％～60％之间，所以大多数还不能应用于生产实践，因此，筛选生产成本低、防效效果好、无污染、无公害的抗病毒物质是当务之急。目前，利用烟草提取物实现植物病毒病的防治研究与应用还未见报道。

烟草是开花期打顶作物，在烟草生产种植过程中，大量的烟花被废弃，对生态环境造成了不良的影响。而烟花中富含冷杉醇等各种有益活性成分，尤其在一些优异的地方晾晒烟以及具有特异香型的烤烟中，冷杉醇含量更加丰富。目前，有关烟花提取物冷杉醇的研究主要集中在对烟叶香气品质影响方面，利用以冷杉醇为指标成分的烟花提取物对植物病毒病的防治未见报道。

发明内容

本发明的目的在于针对现有植物病毒防治技术周期长、成本高、存在环境污染、防效差等问题，提出了一种烟花提取物在植物病毒病防治中的应用，具体为将含有冷杉醇的烟花提取物用于防治植物病毒病，该提取物对植物病毒病有显著的防治作用，并且无毒副作用，使用安全，防治效果显著高于目前生产中应用推广的植物源农药对植物病毒病的防治效果。

本发明的技术方案是：

一种烟花提取物在植物病毒病防治中的应用，所述烟花提取物为含有冷杉醇的烟花提取物，采用所述烟花提取物制备抗病毒病制剂，作为抗病毒病制剂的烟花提取物中冷杉醇浓度不低于100ppm。

进一步的，所述烟花提取物以冷杉醇为主效活性成分。

本发明所提供的烟花提取物将烟草现蕾至结果整个花期作为废弃物烟花资源高效利用时间周期；将烟花提取物中冷杉醇作为主效成分；以冷杉醇质量分数为提取物浓度标识；抗病毒病制剂烟花提取物冷杉醇浓度不低于100ppm时对植物病毒病防治有效。

进一步的，所述烟花提取物的制备方法为：选择含有冷杉醇的烟草品种；取现蕾至结果整个花期的烟草花序为提取原料；利用乙醇、石油醚、正己烷或其混合对烟花进行提取，提取次数1～10次，合并提取液，将提取液进行浓缩，成浸膏，即得。

进一步的，向烟花提取物浸膏中加入乳化剂，配制成含冷杉醇的制剂；将制剂用水稀释，配制成冷杉醇浓度为100ppm～700ppm的抗病毒病制剂施用液，施用方式为喷施。

进一步的，烟花提取物可以用来防治烟草的植物病毒病，其防治方法具体为：将烟苗移栽后，待返苗15天后，喷施一次烟花提取物制成的抗病毒病制剂施用液，隔3～6天再喷施1～2次，防治效果达65％以上。

进一步的，烟花提取物还可以进行如下所述植物的植物病毒病防治，包括一年生番茄、辣椒、茄子、烟草、黄瓜等。

本发明的有益效果：

(1)本发明通过试验证明了含有冷杉醇的烟花提取物对植物病毒病有显著的防治作用，以冷杉醇浓度作为防治植物病毒病的有效浓度，该提取物无毒副作用，使用安全，相对目前报道的生物来源制剂，含有冷杉醇的烟花提取物防效高，防治效果显著高于目前生产中应用推广的植物源农药对植物病毒病的防治效果。

(2)本发明所采用的原料为烟花，烟花是烟草生产中的废弃物，种植区域集中，收集方便，生物量大，提取简单，利用含有冷杉醇的烟花提取物防治植物病毒病，具有原料丰富，成本低廉以及清洁环境等优势。

(3)本发明所提供的烟花提取物具有天然活性成分的特点，无农药残留，通过钝化病毒和提高植物对病毒病的抗性进行防治，具有无公害、稳定性和安全性的特点。

具体实施方式

下面将结合具体实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下，所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明进行详细说明。

实施例1

冷杉醇对烟草病毒抗性防治的研究

1.1试验设计

利用无水乙醇将购买的纯品冷杉醇配制成10％的溶液，然后用乳化剂1602以1:1的比例配成制剂，经制剂稀释成200ppm、400ppm、600ppm、800ppm、1000ppm、1200ppm、1400ppm施用液，分别进行TMV、CMV病毒的钝化和预防处理。

1.2接种体的制备

在当地主栽烟草品种上采集感染CMV病叶，经过鉴别寄主谱法鉴定，确认是CMV病毒后，把CMV接种到三生-NN(Nicotiana tabacum var.Samsun NN)烟苗上繁殖保存，为了防止保存期病毒致病性发生变异，在使用前15天转接到三生-NN烟苗上复壮一次，制成病毒汁液备用。

在当地主栽烟草品种上采集感染TMV病叶，在枯斑寄主上单斑分离3～5次，经过鉴别寄主谱法鉴定，确认是TMV病毒后，接种到NC89烟苗上繁殖保存，制成病毒汁液备用。

1.3接种

供试材料为本氏烟(Nicotiana benthamiana)和中烟100。当烟苗长至3-4片真叶移栽于直径4cm的花盆内，每盆1株，长至6-7叶期用于试验。

钝化试验：配制同体积TMV病毒汁液+冷杉醇施用液的混合溶液，混合15～30min后接种烟草叶片，对照溶液为同体积的TMV病毒汁液+水；接种时采用半叶法，针对一片烟草叶，半叶接种TMV病毒汁液+冷杉醇施用液的混合溶液，半叶接种对照溶液；每株接种3片叶，每次处理10株烟，接种后36～72h调查发病情况。同理进行CMV+施用液和对照溶液的配制。CMV+施用液每个处理10株烟，重复3次；对照溶液每个处理10株烟，重复3次，并在接种后14天和21天调查发病情况。

预防实验：用清水以1:1稀释成冷杉醇浓度为100ppm、200ppm、300ppm、400ppm、500ppm、600ppm、700ppm的施用液，当烟苗长至4-5片真叶开始喷施施用液，每隔3天喷施一次，共喷3次，每个处理10株烟，重复3次，对照溶液为清水，末次喷完12～24h后接种；TMV预防试验在接种后36-72h调查发病情况，CMV预防试验在接种后14天和21天调查发病情况。

1.4结果

病情指数按GB/T 23222-2008烟草病虫害分级及调查方法执行。

表1钝化抗性试验结果(TMV)

表2预防抗性试验结果(TMV)

表3钝化抗性试验结果(CMV)

表4预防抗性试验结果(CMV)

实施例2

不同品种烟花提取物对烟草病毒病抗性防治研究

1.1不同品种烟草的烟花提取与检测

利用乙醇提取云罗02、沂水连耳烟、Mont Calme Brun、马口烟草、T.I706以及SPG-172共6份烟草资源的烟花，并利用UPLC检测冷杉醇含量，如下表5所示。

表5不同品种烟草资源的烟花中冷杉醇含量

统一编号	品种名称	冷杉醇含量(％)	评价
				000001880	云罗02	2.040	高含量
00001717	织金黑吊把	3.678	高含量
				00001231	MontCalmeBrun	0.980	中等含量
00000772	马口烟	0.970	中等含量
				00001088	T.I.706	0.013	极低含量
00003829	SPG-172	0.010	极低含量

1.2试验设计

6份烟草品种分别用20ml乙醇提取，每份烟草各提取5朵烟花，重复提取三次，得到的提取液浓缩后获得烟花提取物浸膏，称取相同质量的烟花提取物浸膏，然后用同体积的乳化剂和清水配成2ml施用液，备用。

1.3接种鉴定

接种体的制备及接种步骤根据实施例1中1.2和1.3抗TMV试验进行。

1.4结果

6份烟草品种，相同质量的烟花提取物对植物病毒病的防治效果如下表6所示。

表6钝化抗性试验结果(TMV)

实施例3

冷杉醇浓度相同的不同品种烟花提取物对病毒病抗性防治研究

1.1试验设计

大量提取织金黑吊把、长叶柳、Mont Calme Brun以及马口烟的烟花提取物，检测提取物浓度，分别将其稀释成冷杉醇浓度为100ppm的施用液进行病毒病防治试验。

1.2接种

接种体的制备及接种步骤根据实施例1中1.2和1.3抗CMV试验进行。

1.3试验结果

表7预防抗性试验结果(CMV)

实施例4

不同花期烟花提取物对病毒病抗性防治研究

1.1试验设计

对织金黑吊把现蕾、初花期、盛花期的花序进行提取，并烟花提取物检测冷杉醇的浓度，利用上述方法将不同时期的烟花提取物稀释成冷杉醇浓度为100ppm的施用液进行抗病毒鉴定。

1.2接种鉴定

接种体的制备及接种步骤根据实施例1中1.2和1.3中抗TMV试验进行。

1.3结果

表8钝化抗性试验结果(TMV)

上述说明仅为本发明的优选实施例，并非是对本发明的限制，凡在本发明的内容范围内所做出的任何修改、等同替换、改型等，均应包含在本发明的专利保护范围之内。