阅读说明：本技术 一种乌骨山羊的提纯繁育方法 (Purification breeding method of black-bone goats ) 是由 杨前平 索效军 熊琪 张年 李晓锋 刘洋 陈明新 陶虎 张凤 于 2020-05-29 设计创作，主要内容包括：本发明涉及山羊繁育技术领域,具体涉及一种乌骨山羊的提纯繁育方法；先通过表型特征构建基础群体,再通过构建TYR模型构建纯种群体,根据家系构成将纯种群体划分为两个品系、并分别采用闭锁群体继代选育和快速繁育以获得稳定的世代,最后将两个稳定世代进行杂交,获得所述乌骨山羊的核心群。本发明通过对乌骨山羊体内的酪氨酸酶(TYR)含量的测定,构建了基础乌骨羊遗传TYR模型,能够促进乌骨山羊的快速繁育,使其优良基因被充分、高效和快速地保护和利用。(The invention relates to the technical field of goat breeding, in particular to a method for purifying and breeding black-bone goats; constructing a basic population through phenotypic characteristics, constructing a pure population through a TYR model, dividing the pure population into two strains according to family composition, respectively adopting locked population subculture breeding and rapid breeding to obtain stable generations, and finally hybridizing the two stable generations to obtain the core population of the black-bone goats. According to the invention, a basic Wugu goat genetic TYR model is constructed by measuring the content of Tyrosinase (TYR) in the Wugu goat body, so that the rapid breeding of the Wugu goat can be promoted, and excellent genes of the Wugu goat can be fully, efficiently and rapidly protected and utilized.)

一种乌骨山羊的提纯繁育方法

技术领域

本发明涉及蓄禽育种技术领域，具体涉及一种乌骨山羊的提纯繁育方法。

背景技术

乌骨羊是已被确定为第二种具备可遗传性能的乌质性状动物(除乌骨鸡以外的)，也是目前人类已发现的的唯一具有乌质性状的哺乳类动物，是世界绝无仅有的地方珍稀物种资源。乌骨羊的乌骨膜以及乌肉为其最直接的乌质性状表现，系基因突变产生的能稳定遗传新性状。高含量的黑色素是引起乌骨羊的乌质表现的主因。但是，现存的乌骨山羊数量有限，常规技术快速扩繁受到群体数量的限制，时代间隔也长。

发明内容

本发明的目的在于克服上述技术不足，本发明提出一种乌骨山羊的提纯繁育方法，包括以下步骤：

S1：基础群体的组建：将通过表型特征筛选以构建所述基础群体；

S2：纯种群体的构建：通过测定所述基础群体血浆中酪氨酸酶含量，构建TYR模型，以淘汰TYR低含量或无含量的非乌质性状的个体，并划分家系以组成所述纯种群体；

S3：将所述纯种群体根据家系构成分为品系1和品系2；所述品系1进行闭锁群体继代繁育，以获得稳定的所述品系1的世代；所述品系2进行快速繁育，以获得稳定的所述品系2的世代；

S4：测定所述品系1的稳定世代和所述品系2的稳定世代之间配合力，并进行杂交，即可得到所述乌骨山羊的核心群。

与现有技术相比，本发明的有益效果包括：

1、本发明通过对乌骨山羊体内的酪氨酸酶(TYR)含量的测定，构建了基础乌骨羊遗传TYR模型，能够促进乌骨山羊的快速繁育，使其优良基因被充分、高效和快速地保护和利用。

2、本发明进一步以TYR模型为基础，将其纯化群体分选为两个品系并分别进行闭锁群体继代选育和快速繁育，进行配合力测定和杂交，最终达到核心群，得到的核心群的繁殖性能得到提高，而其TYR、体重和后驱宽的遗传性状进展稳定。

附图说明

图1是本发明实施例提供的选育示意图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明通过对乌骨山羊体内的酪氨酸酶(TYR)含量的测定，构建了基础乌骨羊个体遗传TYR模型，能够促进乌骨山羊的快速繁育，使其优良基因被充分、高效和快速地保护和利用。

具体为，参阅图1，一种乌骨山羊的提纯繁育方法，包括以下步骤：

S1：基础群体的组建：将通过表型特征筛选以构建所述乌骨山羊基础群体；

S2：纯种群体的构建：通过测定所述基础群体血浆中酪氨酸酶含量，构建TYR模型，以淘汰TYR低含量或无含量的非乌质性状的个体，并划分家系以组成所述纯种群体；

S3：将所述纯种群体根据家系构成分为品系1和品系2；所述品系1进行闭锁群体继代繁育，以获得稳定的所述品系1的世代；所述品系2进行快速繁育，以获得稳定的所述品系2的世代；

S4：测定所述品系1的稳定世代和所述品系2的稳定世代之间配合力，并进行杂交，即可得到所述乌骨山羊的核心群。

基础群体的选取

基础群体组建过程中乌骨羊的表型选取特征包括：毛色为纯黑、纯白或黑白杂花，羊角为无角、或角呈半螺旋状，羊颈短无褶皱，羊鬓甲低小，羊胸深宽、背平直、腹大而不下垂，体躯相对短状，尾短小呈圆锥形，头及四肢被毛覆盖不足，及被毛粗；

基础群体选取的乌骨羊共652只，其中公羊32只，公羊年龄均在1岁左右，身体健康结实，精力充沛，膘情适中，两个睾丸大小相同，***望盛，发育正常。母羊620只，母羊选择后驱宽、***发育好。收集和记录每只公羊和母羊的系谱信息、体重、年龄，并以公羊为单位建立32个家系组成基础群0世代，并避免各家系内公羊和母羊间具备亲缘关系。整体的公羊和母羊外貌及生产性能均混合本品种常规的要求和特点，无疾病。并且由于乌骨秧常年发情，一年四季均能交配和产仔，所选取的公羊和母羊均处于育成期。

纯种群体的构建

具体的，所述S2步骤中的纯种群体的构建方法为：采用所述基础乌骨羊个体遗传TYR模型对所述基础群体中的个体进行育种值评估，所述TYR模型为，

Y＝Xn×An

其中，Y为生产性状测量值，n为家系数量，Xn为第n个家系中对应的TYR相关集合值，An为第n个家系中的个体育种估计平均值。

构建酪氨酸酶(TYR)标准曲线和测定个体TYR含量：

通过构建酪氨酸酶标准曲线(具体为酪氨酸吸光值与浓度之间的线性回归曲线)，采取个体内的血浆，处理后测定其OD值，代入所述标准曲线，计算出每一个体内的酪氨酸酶含量，排除低于0.1mg/mL含量的个体。

采血10mL，加肝素钠离心后制备血浆，样品放-20℃保存备用。取试管5支，各加入1mL 2mg/m的L-多巴溶液(L)和0.1mol/L磷酸钠缓冲液(pH为7.0)2.8mL，摇匀，放入25℃恒温水浴锅中预热10min，再向上述试管中分别加入不同浓度的酪氨酸酶(TYR)标准溶液1mL，立即混匀，并准确计时，在第2min时(反应完全)迅速加入0.2mL硫脲-乙醇饱和液，混匀，终止反应，以0.1mol/L磷酸钠缓冲液为空白对照管，在722分光光度计，波长为475nm处测吸光值。血浆TYR活性的测定将上述步骤中酪氨酸酶标准溶液换成血浆1mL。

测定结果表明，排除低含量TYR个体(0.1mg/mL)后的基础群体的TYR含量均值为0.25±0.05mg/mL，对于快速确立基础群体具有重要意义。因为，一般而言，乌骨山羊TYR含量不低于0.1mg/mL，且表现出较高活性。而TYR活性水平决定着真黑素/褐黑素转换机制，高水平的TYR活性导电合成高水平的真黑素，以此来确定作为其考察的遗传性状，能够快速初步地筛选获得构建纯种群体的基础。

Xn的确定：

具体的，所述TYR相关集合值Xn的取得方法为：测定每一所述家系中所有个体血浆中的酪氨酸酶含量，并将其组成集合{Bn}；则当SDn/{Bn}_Bve<0.05时，Xn＝0，当SDn/{Bn}_Bve≧0.05时，Xn＝1；其中{Bn}_Bve为每一所述集合{Bn}中数值的平均值，SDn为每一所述集合{Bn}中数值的标准偏差。

An的确定：

根据基础群体的血液中酪氨酸酶活性、体重、后驱宽三个性状，将每一个体和其亲属的三个性状记录下，根据经典选择指数(Selection index)计算上述三个性状的遗传力、表型方差、经济加权值，以及相应的遗传相关和表型相关，制定一个综合指标I，如此在通过测定个体酪氨酸酶活性淘汰低含量的个体后，对每一家系内的综合指标I进行计算，并计算平均值，An值即每一家系内的所有个体综合指标I的平均值。

应用数量遗传的原理，根据性状的遗传特点和经济价值，把所要选择的几个性状综合成一一个使个体间可以相互比较的数值，这个数值就是选择指数。为便于选种，可把各性状处于羊群的平均数的个体指数值订为100，其他羊群和100相比，超过100越多的个体越好，其公式是:

其中，总共三个性状(酪氨酸酶活性、体重、后驱宽)，W₁h₁ ²+W₂h₂ ²+W₃h₃ ²＝100

个体表型值(Pi)和对应的羊群平均数

可从牧场资料直接计算。性状的遗传力(h²),如缺乏必要的数据，也可以从有关育种文献中查出；各性状的育种或经济重要性(Wi)，可通过调查根据经验确定。如对于某一乌骨羊个体，现假定下列数据为已知：

其中，W₁:W₂:W₃＝0.51:0.22:0.27；而且，W₁+W₂+W₃＝1

设每个性状都处于羊群平均数的个体，其指数为100，于是：

a₁＝W₁h₁ ²/(W₁h₁ ²+W₂h₂ ²+W₂h₂ ²)×100＝44.07

a₂＝W₂h₂ ²/(W₁h₁ ²+W₂h₂ ²+W₂h₂ ²)×100＝44.07

a₃＝W₂h₂ ²/(W₁h₁ ²+W₂h₂ ²+W₂h₂ ²)×100＝11.86

因此，验算a₁+a₂+a₃＝100，即可将a₁、a₂、a₃分别代入公式计算

I＝44.07/0.25P₁+44.07/85P₂+11.86/24P₃

化简后得综合选种指数公式，I＝176.28P₁+0.52P₂+0.49P₃

把每个性状的表型值代入，就可计算出选择指数I。计算第n个家系中的I值即可得到An值。

当Xn和An值确定后，即可计算Y值，32个家系的公羊进行Y值排序，选取占最大Y值60％及以上的公羊及对应的家系。然后，进一步再对每一家系内母羊Y值排序，选取种占最大Y值60％的母羊个体，以构建家系，并且每一家系内选取的母羊数量小于10只，则淘汰此家系。如此，获得最终获得了15个家系，即为所述纯种群体，其结果如下表1所示。

表1

家系	公羊TYR(mg/mL)	母羊数量(只)	母羊平均TYR(mg/mL)
				1#	0.32	25	0.26
2#	0.26	16	0.18
				3#	0.16	13	0.16
4#	0.23	12	0.23
				5#	0.33	11	0.27
6#	0.29	16	0.18
				7#	0.23	25	0.16
8#	0.26	16	0.18
				9#	0.36	12	0.17
10#	0.26	18	0.31
				11#	0.21	20	0.26
12#	0.26	22	0.24
				13#	0.19	11	0.16
14#	0.18	16	0.20
				15#	0.16	12	0.21

核心群构建

将所述纯种群体根据家系构成分为品系1和品系2，具体的家系构成包括每一家系内公羊个体TYR含量水平、母羊数量和母羊平均TYR含量水平，具体如表1所示；所述品系1采用闭锁群体继代选育方法进行选育，根据遗传缺陷，独立淘汰以获得稳定的所述品系1的世代；所述品系2采样快繁选育方法，根据遗传缺陷，独立淘汰以获得稳定的所述品系2的世代；测定品系1和品系2的繁育性能稳定的世代进行配合力，并进行杂交，即可得到乌骨山羊的核心群。

品系1选育：选取表1中3#、6#、7#、8#、9#、13#、14#和15#8个家系组群，家系间无亲缘关系，进行闭锁繁育，采取上述实施例TYR模型并结合综合指数选育，世代间隔为100d。

品系2选育：选取表1中1#、2#、4#、5#、10#、11#和12#7个家系进行快速繁育种，选取每一公羊的***，人工授精至同一家系内的所有母羊，然后采取上述实施例TYR模型并结合综合指数选育后，将筛选得到的羊群建立家系，同一家系内应尽量减少亲缘性，如此得到1世代；2世代以上均采用以上方法，直至获得稳定的高水平TYR的乌骨羊群。品系1和品系2的育种世代优选2-3世代。世代间隔为90d。

获得的品系1的3世代和品系2的3世代和杂交后的核心群的生产性能如下表2。表2表明，繁育过程中，闭锁群体继代选育法会使其TYR性能比较一致，但繁殖性能减少；而快速繁育法，繁殖性能没衰退，但遗传进展不稳定；通过对品系1和品系2进行配合力测定，进行杂交后获得的核心群，得到的核心群的繁殖性能得到提高，而其TYR、体重和后驱宽的遗传性状进展稳定。

表2

	品系1	品系2	核心群
				公羊数量(只)	4	8	12
公羊平均TYR(mg/mL)	0.41	0.38	0.37
				公羊平均体重(kg)	78	85	80
母羊数量(只)	25	31	56
				母羊平均TYR(mg/mL)	0.39	0.31	0.35
母羊平均体重(kg)	65	72	68
				母羊平均后驱宽(cm)	26	35	32

以上所述本发明的具体实施方式，并不构成对本发明保护范围的限定。任何根据本发明的技术构思所做出的各种其他相应的改变与变形，均应包含在本发明权利要求的保护范围内。