阅读说明：本技术 东北赤杨提取物及制备方法、应用 (Alnus japonica extract, preparation method and application thereof ) 是由 张昌浩 邬楠 金莉莉 尹雄杰 于 2020-08-10 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种东北赤杨提取物,是按下列方法制备：取东北赤杨干燥的皮,称重；以料液比1g：30mL的比例加入65%~95%乙醇溶液,浸泡24h；在恒温55℃~70℃加热回流提取,提取3次,每次提取时间3h,趁热过滤,舍去滤渣,合并滤液；将滤液减压浓缩至浸膏,放入烘箱干燥；取烘干后浸膏,即得。本发明还公开了一种东北赤杨提取物的制备方法、应用。本发明具有工艺简便,提取速度快,提取率高且活性强等优点,具有较好的提取效果。提取物具有肝保护作用,可用于制备肝保护药物等研究。(The invention discloses a northeast Alnus japonica extract, which is prepared by the following method: weighing dried bark of Alnus japonica in northeast China; 1g of liquid-material ratio: adding 65-95% ethanol solution into 30mL of the mixture, and soaking for 24 hours; heating and refluxing for extraction at the constant temperature of 55-70 ℃, extracting for 3 times, wherein the extraction time is 3h each time, filtering while hot, discarding filter residues, and combining filtrates; concentrating the filtrate under reduced pressure to obtain extract, and drying in oven; and (5) drying the extract to obtain the extract. The invention also discloses a preparation method and application of the Alnus japonica extract. The invention has the advantages of simple and convenient process, high extraction speed, high extraction rate, strong activity and the like, and has better extraction effect. The extract has liver protecting effect, and can be used for preparing liver protecting medicine.)

东北赤杨提取物及制备方法、应用

技术领域

本发明属于植物提取技术领域以及药用植物药理活性，具体涉及一种东北赤杨提取物及制备方法、应用。

背景技术

东北赤杨属于桦木科桤木属植物。桤木属（Alnus Mill）植物为落叶乔木或灌木。本属共40余种，分布于亚洲、非洲、欧洲及北美洲。我国产7种1变种，分布于东北、华北、华东、华南、华中及西南。下级分类包括矮桤木，桤木组和单序组。桤木属植物一般具有抗炎，抗氧化等作用，在东方民间广泛用于治疗发烧、出血、腹泻和酒精的药物。据报道，从该属植物中分离出许多具有生物活性的天然成分，包括二芳基庚烷、多酚、黄酮、萜类和甾体类等。桤木属植物可药用且无毒副作用，具有较好的发展前景与研究潜力。

肝脏负责管理身体中气、血及水的流通。情绪不、睡眠、饮食甚至药物等，均会影响肝的疏泄功能导致肝损伤。如不及时治疗有可能会出现更严重的身体疾病，近年来，在一些药用植物中发现具有肝保护作用，值得深入研究。

发明内容

本发明针对现有现有技术而提供了一种高效提取的东北赤杨提取物及制备方法，以及东北赤杨提取物在肝保护方面的应用，从而在为后续药物开发提供基础。

为实现上述目的，所提供的技术方案为：

一种东北赤杨提取物，是按下列方法制备：

（1）取东北赤杨干燥的皮，称重；

（2）以料液比1g：30mL的比例加入65%~95%乙醇溶液，浸泡24h；

（3）在恒温55℃~70℃加热回流提取，提取3次，每次提取时间3h，趁热过滤，舍去滤渣，合并滤液；

（4）将滤液减压浓缩至浸膏，放入烘箱干燥；

（5）取烘干后浸膏，即得。

进一步地，所述东北赤杨干燥的皮使用95%乙醇回流提取，温度为恒温65℃。

一种东北赤杨提取物的制备方法，包括以下步骤：

（1）取东北赤杨干燥的皮，称重；

（2）以料液比1g：30mL的比例加入65%~95%乙醇溶液，浸泡24h；

（3）在恒温55℃~70℃加热回流提取，提取3次，每次提取时间3h，趁热过滤，舍去滤渣，合并滤液；

（4）将滤液减压浓缩至浸膏，放入烘箱干燥；

（5）取烘干后浸膏，即得。

一种如上所述的东北赤杨提取物在肝保护方面的应用。

本发明提供了一种东北赤杨的最佳提取工艺，采用乙醇溶液进行加热回流提取，可以在较短时间内得到较高的提取效果，有效提高了对东北赤杨的利用率；本发明实验中对小鼠进行肝损伤模型的制造，采用腹腔注射LPS/D-GaIN混合溶液，而后对肝损伤模型小鼠、东北赤杨给药组及空白组肝脏进行比较，确认东北赤杨肝保护作用。

采用本发明所公开的提取工艺，具有工艺简便，提取速度快，提取率高且活性强等优点，具有较好的提取效果。提取物具有肝保护作用，可用于制备肝保护药物等研究。

附图说明

图1为本发明

具体实施方式

中各实验组肝功能检测值（A：空白组；B：模型组；C：低剂量组；D：高剂量组）。

图2为本发明具体实施方式中各实验组肝脏HE染色切片观察图（A：空白组；B：模型组；C：低剂量组；D：高剂量组）。

具体实施方式

一种东北赤杨提取物，是按下列方法制备：

（1）取东北赤杨干燥的皮，称重；

（2）以料液比1g：30mL的比例加入65%~95%乙醇溶液，浸泡24h；

（3）在恒温55℃~70℃加热回流提取，提取3次，每次提取时间3h，趁热过滤，舍去滤渣，合并滤液；

（4）将滤液减压浓缩至浸膏，放入烘箱干燥；

（5）取烘干后浸膏，称重，计算提取率。

本发明东北赤杨提取工艺涉及3个关键条件：乙醇、回流提取温度和回流提取时间。下面就三个方面进行单因素实验。

乙醇浓度的影响

表1是提取温度为65℃，提取时间为3h时的乙醇浓度单因素实验，结果表明：乙醇浓度95%时为最佳。

表1乙醇浓度对提取率的影响

。

提取温度的影响

表2是乙醇浓度为95%，提取时间为3h时的提取温度单因素实验，结果表明：提取温度65℃为最佳。

表2提取温度对提取率的影响

。

提取时间的影响

表3是乙醇浓度为95%，提取温度为65℃时的提取时间单因素实验，结果表明：提取时间3h为最佳。

表3提取时间对提取率的影响

。

东北赤杨提取工艺条件的正交试验

表4正交试验结果

。

以上实验表明：通过单因素实验、正交试验，获得不同提取工艺条件下的提取率，得最佳工艺条件为乙醇浓度95%、提取温度65℃、提取时间3h。

一种如上所述的东北赤杨提取物在肝保护方面的应用，具体在东北赤杨肝保护作用研究，包括以下步骤：

（1）体重23-28g雄性ICR小鼠分为4组（空白组、模型组、高剂量组及低剂量组），每组五只；明暗交替12h，断绝粮食和水；

（2）将LPS（15μg/Kg）与D-GaIN（600mg/Kg）配置成混合液备用；

（3）将东北赤杨浸膏配置成300mg/Kg和100mg/Kg两种剂量备用；

（4）将300mg/Kg和100mg/Kg的东北赤杨分别灌胃于高、低剂量组小鼠；其余组灌胃等量生理盐水；

（5）30min后，除空白组外，其余组腹腔注射LPS/D-GaIN混合溶液，空白组注射等量生理盐水；

（6）6h后经小鼠眼眶静脉丛取血检测血清天冬氨酸酶转氨酶（AST）及丙氨酸转氨酶（ALT）；检测肝指标MDA及SOD，并进行统计分析。

（7）取各组小鼠肝脏进行蜡块包埋，制成组织切片进行HE染色观察。

东北赤杨肝保护作用研究包括造模的成功与否，不同剂量东北赤杨对小鼠肝损伤是否有抑制作用。下面就两个方面进行实验。

对小鼠进行LPS/D-GaIN混合溶液腹腔注射，观察小鼠48h未见小鼠死亡，将模型组小鼠肝脏取出，与正常组小鼠取出的肝脏进行对比，发现前者颜色较深，并且出现一定数量的白色结节，电镜显微镜下模型组肝细胞变形，细胞内大量空泡，证明该组小鼠肝脏具有一定损伤，证明模型制造成功。

小鼠采用高、低两种剂量进行灌胃给药，经检测高、低剂量给药组对比模型组肝脏损伤程度有所改善，表现为AST降低、ALT降低、MDA降低及SOD升高，且高剂量组改善效果更加，所有实验数据以x±s表示,运用 GraphPadPrism5.0统计学软件进行单因素方差分析，P<0.05表示差异具有统计学意义；取出4组肝脏后进行HE染色对比，与模型组相比，给药组肝脏受损程度降低，且高剂量组效果更为明显，证明东北赤杨具有一定的肝保护作用，且没有毒副作用。

各实验组（A：空白组；B：模型组；C：低剂量组；D：高剂量组）肝功能检测值参考图1，肝脏HE染色切片观察图参考图2，以上表明：通过实验研究发现该东北赤杨具有肝保护作用，且没有毒副作用，可用于后续肝保护药物的制备及其他研究。

以上所述仅为本发明的优选实施例，本发明也不限于上述举例。本技术领域的普通技术人员在本发明的实质范围内，做出的修改、变化或替换，均应包含在本发明的保护范围之内。