阅读说明：本技术 识别ebv-lmp2抗原的tcr及相应的核酸分子、载体、细胞和药物 (TCR recognizing EBV-LMP2 antigen and corresponding nucleic acid molecule, vector, cell and drug ) 是由 王明军 董莲花 陈磊 于 2020-06-12 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种识别EBV-LMP2抗原的TCR及相应的核酸分子、载体、细胞和药物。该TCR用于特异性结合HLA-A2-EBV-LMP2<Sub>426-434</Sub>抗原复合物,包含TCRα链可变区和TCRβ链可变区；所述TCRα链可变区的CDR3氨基酸序列为CAYNLIGAGSYQLTF,示于SEQ ID NO：7,和/或所述TCRβ链可变区的CDR3氨基酸序列为CASSSLAGGPNEQFF,示于SEQ ID NO：10。将识别EBV-LMP2抗原的TCR克隆至逆转录病毒载体后转染T细胞,CD8+T细胞的TCR转导率达19.8％；经过TCR基因修饰后的T细胞,能够特异性识别靶细胞并释放细胞因子,能够特异地识别低表达的HLA-A2-EBV-LMP2<Sub>426-434</Sub>抗原复合物。(The invention provides a TCR for identifying an EBV-LMP2 antigen, and a corresponding nucleic acid molecule, a vector, a cell and a medicament. The TCR is used for specifically binding HLA-A2-EBV-LMP2 426‑434 An antigen complex comprising TCR α and TCR β chain variable regions, wherein the CDR3 amino acid sequence of the TCR α chain variable region is CAYNLIGAGSYQLTF as shown in SEQ ID NOID NO 7, and/or the CDR3 amino acid sequence of the TCR β chain variable region is CASSSLAGGPNEQFF, shown in SEQ ID NO 10, the TCR for identifying the EBV-LMP2 antigen is cloned to a retroviral vector and then transfects T cells, the TCR transduction rate of the CD8+ T cells reaches 19.8%, the T cells modified by the TCR gene can specifically identify target cells and release cytokines, and can specifically identify low-expression HLA-A2-EBV-LMP2 426‑434 An antigen complex.)

识别EBV-LMP2抗原的TCR及相应的核酸分子、载体、细胞和 药物

技术领域

本发明涉及T细胞技术领域，尤其是指一种识别EBV-LMP2抗原的TCR及相应的核酸分子、载体、细胞和药物。

背景技术

EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)是一种DNA病毒，属于单纯疱疹病毒的亚型，广泛流行，据悉全世界大于90％的人EBV感染阳性(Thompson MP et al.,Clinical CancerResearch 2004,10(3):803-821.)。EBV可以感染人B淋巴细胞和表皮细胞，其活动周期可分为裂解期和潜伏期。裂解期EBV进行DNA复制并生产感染性颗粒。潜伏期的不同阶段(0、I、II、III)，EBV表达不同种类的病毒蛋白(Macsween KF et al.,The Lancet InfectiousDiseases 2003,3(3):131-140.)。大多数EBV感染者没有任何症状，但有少数感染人群会发生恶性肿瘤病变。目前发现与EBV潜伏感染密切相关的恶性肿瘤有鼻咽癌、Burkitt淋巴瘤、何杰金氏淋巴瘤和胃癌等，这些肿瘤患者的癌细胞可表达不同潜伏周期的外源性EBV抗原，因而，EBV病毒抗原是T细胞介导的细胞免疫治疗的理想靶点。

EBV潜伏膜蛋白LMP1和LMP2的表达是维持病毒II型潜伏感染状态及导致细胞恶性转化的关键。例如，LMP2a可在细胞质膜形成磷酸化酪氨酸聚合物，并与Lyn，Syk协同刺激B细胞受体信号传递，从而诱导PI3K/AKT信号途径的活化(Caldwell RG et al.Immunity1998，9:405-411)。T细胞受体基因修饰的T淋巴细胞过继免疫疗法(Adoptive celltransfer，ACT)通过将可识别病毒/肿瘤抗原的TCR基因整合至患者T细胞中，使得原本不具备抗原特异性的患者T细胞可识别并杀伤肿瘤细胞，从而达到***的效用(Jin,B.Y.,et al.JCI insight 2018,3(8)：e99488)。研究显示T细胞受体基因转导的T细胞能特异性地识别并杀伤EBV转化的LCL细胞；在荷瘤小鼠模型中，LMP2特异性TCR-T能显著抑制LMP2+肿瘤生长，在治疗鼻咽癌和移植后淋巴细胞增多症的I期临床试验中也证实了其应用的安全性和短期临床有效性(Zheng Y,et al.Cancer Immunol Res 2015,3(10):1138-1147.)。

分离并鉴定EBV-抗原特异性的TCR，是进行EBV相关肿瘤免疫治疗的基础。不同的TCR与目标抗原结合的特异性和亲和力不同。制备得到的TCR-T细胞TCR蛋白的表达水平、免疫原性、肿瘤杀伤效用也不相同。这些抗原特异性TCR-T细胞的临床转化将让包括鼻咽癌、NK/T淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、胃癌等多种EBV阳性恶性肿瘤患者受益。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：提供一种能识别并结合HLA-A2-EBV-LMP2_426-434抗原复合物的TCR及相应的核酸分子、载体、细胞和药物。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

一种识别EBV-LMP2抗原的TCR，用于特异性结合HLA-A2-EBV-LMP2_426-434抗原复合物；所述TCR包含TCRα链可变区和TCRβ链可变区；所述TCRα链可变区的CDR3氨基酸序列为CAYNLIGAGSYQLTF，示于SEQ ID NO：7，和/或所述TCRβ链可变区的CDR3氨基酸序列为CASSSLAGGPNEQFF，示于SEQ ID NO：10。

其中，所述HLA-A2-EBV-LMP2_426-434抗原复合物由人白细胞表面抗原HLA-A2及EBV-LMP2_426-434短肽(CLGGLLTMV)组成，表达于目标靶细胞表面。

进一步地，所述TCRα链可变区的3个互补决定区氨基酸序列为：αCDR1：TSESDYY，示于SEQ ID NO：5；αCDR2：QEAYKQQN，示于SEQ ID NO：6；αCDR3：CAYNLIGAGSYQLTF，示于SEQ IDNO：7。

进一步地，所述TCRβ链可变区的3个互补决定区氨基酸序列为：βCDR1：SGHTA，示于SEQ ID NO：8；βCDR2：FQGNSA，示于SEQ ID NO：9；βCDR3：CASSSLAGGPNEQFF，示于SEQ ID NO：10。

进一步地，所述TCRα链可变区的氨基酸序列为与SEQ ID NO：1具有至少90％序列相同性的氨基酸序列，和/或所述TCRβ链可变区的氨基酸序列为与SEQ ID NO：2具有至少90％序列相同性的氨基酸序列。

一种核酸分子，包含用于编码上述任一所述的识别EBV-LMP2抗原的TCR的核苷酸序列和/或相应的互补序列。

进一步地，所述核酸分子中，用于编码TCRα链可变区的核苷酸序列为SEQ ID NO：3，和/或用于编码TCRβ链可变区的核苷酸序列为SEQ ID NO：4。

进一步地，所述核酸分子中，用于编码所述TCRα链可变区的3个互补决定区的核苷酸序列为：αCDR1：示于SEQ ID NO：11；αCDR2：示于SEQ ID NO：12；αCDR3：示于SEQ ID NO：13。

进一步地，所述核酸分子中，用于编码所述TCRβ链可变区的3个互补决定区的核苷酸序列为：βCDR1：示于SEQ ID NO：14；βCDR2：示于SEQ ID NO：15；βCDR3：示于SEQ ID NO：16。

一种载体，包含上述任一所述的核酸分子。进一步地，所述载体为病毒载体。更进一步地，所述载体为逆转录病毒载体或慢病毒载体。

一种细胞，转导上述任一所述的核酸分子、上述所述的载体中的一种或几种；该细胞表达结合HLA-A2-EBV-LMP2_426-434抗原复合物的特异性TCR。进一步地，所述细胞为干细胞或T细胞。

一种药物，其活性成分包含上述任一所述的识别EBV-LMP2抗原的TCR、上述任一所述的核酸分子、上述所述的载体、上述所述的细胞中的一种或几种。

进一步地，该药物用于治疗EBV阳性恶性肿瘤或EB病毒感染。进一步地，所述EBV阳性恶性肿瘤包括鼻咽癌、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤和胃癌。

本发明的有益效果在于：将识别EBV-LMP2抗原的TCR克隆至逆转录病毒载体后转染T细胞，CD8+T细胞的TCR转导率达19.8％；经过TCR基因修饰后的T细胞，能够特异性识别靶细胞并释放细胞因子，能够特异地识别低表达的HLA-A2-EBV-LMP2_426-434抗原复合物。

附图说明

图1为本发明的***逆转录病毒载体的TCR序列元件结构示意图；

图2为本发明采用流式细胞术检测HLA-A2-EBV-LMP2_426-434特异性TCR(A4)基因修饰T细胞(TCR-T细胞)的转导效率的结果图；

图3为本发明采用ELISA检测A4 TCR-T细胞与靶细胞共培养后特异性释放细胞因子的能力的结果图；

图4为本发明采用ELISA检测A4 TCR-T细胞与HLA-A*0201基因转导的人鼻咽癌细胞系C666-1A0201(HLA-A2阳性且EBV-LMP2抗原阳性)共培养后，特异性释放细胞因子的能力的结果图。

具体实施方式

根据本发明的技术内容、构造特征、所实现目的及效果的具体实施方式、配合附图详予进一步说明。

实施例

一种药物，其活性成分包含以下成分中的一种或几种：识别EBV-LMP2抗原的TCR、用于编码相应的识别EBV-LMP2抗原的TCR的核酸分子、包含相应的核酸分子的载体、转导相应的核酸分子或载体的细胞。该药物用于治疗EBV阳性恶性肿瘤或EB病毒感染。所述EBV阳性恶性肿瘤包括鼻咽癌、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤和胃癌。

一种识别EBV-LMP2抗原的TCR，用于特异性结合HLA-A2-EBV-LMP2_426-434抗原复合物；所述TCR包含TCRα链可变区和TCRβ链可变区；所述TCRα链可变区的CDR3氨基酸序列为CAYNLIGAGSYQLTF，示于SEQ ID NO：7，和/或所述TCRβ链可变区的CDR3氨基酸序列为CASSSLAGGPNEQFF，示于SEQ ID NO：10。

进一步地，所述TCRα链可变区的3个互补决定区氨基酸序列为：αCDR1：TSESDYY，示于SEQ ID NO：5；αCDR2：QEAYKQQN，示于SEQ ID NO：6；αCDR3：CAYNLIGAGSYQLTF，示于SEQ IDNO：7。

进一步地，所述TCRβ链可变区的3个互补决定区氨基酸序列为：βCDR1：SGHTA，示于SEQ ID NO：8；βCDR2：FQGNSA，示于SEQ ID NO：9；βCDR3：CASSSLAGGPNEQFF，示于SEQ ID NO：10。

进一步地，所述TCRα链可变区的氨基酸序列为与SEQ ID NO：1具有至少90％序列相同性的氨基酸序列，和/或所述TCRβ链可变区的氨基酸序列为与SEQ ID NO：2具有至少90％序列相同性的氨基酸序列。

一种核酸分子，包含用于编码上述任一所述的识别EBV-LMP2抗原的TCR的核苷酸序列和/或相应的互补序列。

进一步地，所述核酸分子中，用于编码TCRα链可变区的核苷酸序列为SEQ ID NO：3，和/或用于编码TCRβ链可变区的核苷酸序列为SEQ ID NO：4。

进一步地，所述核酸分子中，用于编码所述TCRα链可变区的3个互补决定区的核苷酸序列为：αCDR1：示于SEQ ID NO：11；αCDR2：示于SEQ ID NO：12；αCDR3：示于SEQ ID NO：13。

进一步地，所述核酸分子中，用于编码所述TCRβ链可变区的3个互补决定区的核苷酸序列为：βCDR1：示于SEQ ID NO：14；βCDR2：示于SEQ ID NO：15；βCDR3：示于SEQ ID NO：16。

一种载体，包含上述任一所述的核酸分子。该载体为病毒载体，尤其指逆转录病毒载体或慢病毒载体。

一种细胞，为干细胞或T细胞。该细胞转导上述任一所述的核酸分子、上述所述的载体中的一种或几种。该细胞表达结合HLA-A2-EBV-LMP2_426-434抗原复合物的特异性TCR。

此外，所述HLA-A2-EBV-LMP2_426-434抗原复合物由人白细胞表面抗原HLA-A2及EBV-LMP2_426-434短肽(CLGGLLTMV)组成，表达于目标靶细胞表面。

试验例1

HLA-A2-EBV-LMP2_426-434特异性T细胞的克隆及测序

利用化学合成的短肽CLGGLLTMV(生工生物工程(上海)股份有限公司)体外刺激来源于HLA-A*0201基因型的鼻咽癌患者的外周血单个核细胞(PBMC)。经过2轮多肽刺激后，将多克隆T细胞(1×10⁵)与1×10⁵负载目标短肽(CLGGLLTMV)或非目标短肽的T2细胞(靶细胞或对照细胞)于37℃共培养过夜。第二天检测培养上清中细胞因子IFN-γ的释放量。将阳性多克隆T细胞(靶细胞OD₄₅₀-对照细胞OD₄₅₀>1.0)用PE标记的HLA-A2-EBV-LMP2_426-434四聚体(MBL)染色后采用抗PE的磁珠(美天旎)分离四聚体阳性的细胞。对分离后的多克隆T细胞进行快速扩增：将T细胞与1ⅹ10⁷来自3名健康人的异源PBMC混合，并添加30ng/mL抗CD3抗体(OKT3)，300U/mL人的IL2。混合细胞置于含有10％胎牛血清的20mL X-VIVO15培养液中培养，每隔两天，添加一次IL2。连续培养14天后收获约1.5ⅹ10⁷T细胞。再次用PE标记的HLA-A2-EBV-LMP2_426-434四聚体(MBL)染色后采用抗PE的磁珠(美天旎)分离四聚体阳性的T细胞并进行免疫组库测序(苏州金唯智生物科技有限公司)。根据测序结果将测得频率最高的TCRα链及TCRβ链进行配对，PCR构建包含恒定区的全长TCR并***逆转录病毒载体中。TCR序列的元件结构如图1所示。

其中，TCRα链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO：1。

TCRα链可变区的3个互补决定区氨基酸序列为：

αCDR1：TSESDYY，示于SEQ ID NO：5，

αCDR2：QEAYKQQN，示于SEQ ID NO：6，

αCDR3：CAYNLIGAGSYQLTF，示于SEQ ID NO：7。

TCRα链可变区核苷酸序列为SEQ ID NO：3。

TCRα链可变区的3个互补决定区核苷酸序列为：

αCDR1：accagcgaga gcgattactac，示于SEQ ID NO：11，

αCDR2：caggaggcct acaagcagca gaac，示于SEQ ID NO：12，

αCDR3：tgcgcctaca acctgatcgg cgccggcagc taccagctga ccttc，示于SEQ IDNO：13。

TCRβ链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO：2。

TCRβ链可变区的3个互补决定区氨基酸序列为：

βCDR1：SGHTA，示于SEQ ID NO：8，

βCDR2：FQGNSA，示于SEQ ID NO：9，

βCDR3：CASSSLAGGPNEQFF，示于SEQ ID NO：10。

TCRβ链可变区核苷酸序列为SEQ ID NO：4。

TCRβ链可变区的3个互补决定区核苷酸序列为：

βCDR1：agcggccaca cagcc，示于SEQ ID NO：14，

βCDR2：tttcagggga acagcgcc，示于SEQ ID NO：15，

βCDR3：tgcgccagct ccagcctggc cgggggcccc aacgagcagt ttttc，示于SEQ IDNO：16。

试验例2

制备HLA-A2-EBV-LMP2_426-434特异性TCR基因修饰的T细胞

将目标TCR克隆至逆转录病毒载体pMSGV1中(addgene)构建pMSGV1-A4TCR载体。转染病毒包装细胞系293GP细胞pMSGV1-A4 TCR及pVSV-G质粒，制备逆转录病毒并采用病毒上清转导T细胞。

转染操作如下：第0天将293GP细胞接种至6孔板(6×10⁵/孔)；第1天，pMSGV1-A4TCR及pVSV-G质粒转染293GP细胞(2μg pMSGV1-A4 TCR及1.4μg pVSV-G/孔)，同一天，采用抗人CD3抗体(OKT3)活化健康人的PBMC；第3天，收集含病毒上清的培养液，并添加新鲜的培养液(含10％胎牛血清的DMEM)至293GP细胞中；用收集的病毒上清离心转染活化后的T细胞；第4天采用同样的方法第二次转染活化的T细胞；第5天将转染后的T细胞收集至T25培养瓶中进行培养(培养液为含10％胎牛血清及300U/mL IL2的X-VIVO(Lonza))。第7天流式检测目标TCR的表达水平，结果如图2所示，从图2中分析可知，CD8+T细胞的TCR转导效率(四聚体染色的阳性率)为19.8％。

试验例3

HLA-A2-EBV-LMP2_426-434特异性TCR基因修饰T细胞的体外功能验证

(1)ELISA检测-1：C666-1细胞系来源于未分化型鼻咽癌，可检测到其持续性表达EBV编码的RNA，包括EBNA1，LMP1以及LMP2转录本。通过构建稳定表达GFP以及HLA-A*0201的C666-1细胞系(C666-1_GFP以及C666-1_A0201)用于体外评价A4 TCR-T细胞的功能。具体操作如下：将C666-1_GFP，C666-1_A0201细胞与A4 TCR-T及对照T细胞分别进行共培养(37℃，16h)，取培养上清检测IFN-γ的释放量，检测结果如图3所示。从图3结果可知，对照T细胞不能识别C666-1_A0201靶细胞，而TCR基因修饰后的T细胞能特异性识别靶细胞并释放细胞因子，表明该TCR为HLA-A2限制性且可识别低表达的LMP2抗原。

(2)ELISA检测-2：靶细胞的制备如下，将负载目标EBV-LMP2_426-434多肽及对照多肽EBV-LMP2_356-364的T2细胞(HLA-A2⁺)分别与A4 TCR-T细胞以及对照T细胞于37℃共培养16小时后，ELISA检测培养上清IFN-γ的表达，检测如图4所示。从图4结果中可知，经HLA-A2-EBV-LMP2_426-434特异性TCR基因修饰的T细胞可特异性识别目标抗原表位并释放细胞因子。

综上所述，本发明提供的识别EBV-LMP2抗原的TCR及相应的核酸分子、载体、细胞和药物。将识别EBV-LMP2抗原的TCR克隆至逆转录病毒载体后转染T细胞，CD8+T细胞的TCR转导率达19.8％；经过TCR基因修饰后的T细胞，能够特异性识别靶细胞并释放细胞因子，能够特异地识别低表达的HLA-A2-EBV-LMP2_426-434抗原复合物。应用时，制备含有识别EBV-LMP2抗原的TCR以及相应的核酸分子、载体、细胞等活性成分的药物，能够特异性治疗EBV阳性恶性肿瘤或EB病毒感染。

以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

序列表

<110> 深圳因诺免疫有限公司；深圳市因诺转化医学研究院

<120> 识别EBV-LMP2抗原的TCR及相应的核酸分子、载体、细胞和药物

<130> 123

<141> 2020-06-12

<160> 16

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 116

<212> PRT

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 1

Ala Gln Thr Val Thr Gln Ser Gln Pro Glu Met Ser Val Gln Glu Ala

1 5 10 15

Glu Thr Val Thr Leu Ser Cys Thr Tyr Asp Thr Ser Glu Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Leu Phe Trp Tyr Lys Gln Pro Pro Ser Arg Gln Met Ile Leu Val

35 40 45

Ile Arg Gln Glu Ala Tyr Lys Gln Gln Asn Ala Thr Glu Asn Arg Phe

50 55 60

Ser Val Asn Phe Gln Lys Ala Ala Lys Ser Phe Ser Leu Lys Ile Ser

65 70 75 80

Asp Ser Gln Leu Gly Asp Ala Ala Met Tyr Phe Cys Ala Tyr Asn Leu

85 90 95

Ile Gly Ala Gly Ser Tyr Gln Leu Thr Phe Gly Lys Gly Thr Lys Leu

100 105 110

Ser Val Ile Pro

115

<210> 2

<211> 115

<212> PRT

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 2

Gly Ala Gly Val Ser Gln Ser Pro Ser Asn Lys Val Thr Glu Lys Gly

1 5 10 15

Lys Asp Val Glu Leu Arg Cys Asp Pro Ile Ser Gly His Thr Ala Leu

20 25 30

Tyr Trp Tyr Arg Gln Arg Leu Gly Gln Gly Leu Glu Phe Leu Ile Tyr

35 40 45

Phe Gln Gly Asn Ser Ala Pro Asp Lys Ser Gly Leu Pro Ser Asp Arg

50 55 60

Phe Ser Ala Glu Arg Thr Gly Glu Ser Val Ser Thr Leu Thr Ile Gln

65 70 75 80

Arg Thr Gln Gln Glu Asp Ser Ala Val Tyr Leu Cys Ala Ser Ser Ser

85 90 95

Leu Ala Gly Gly Pro Asn Glu Gln Phe Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu

100 105 110

Thr Val Leu

115

<210> 3

<211> 348

<212> DNA

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 3

gcccagacag tgacacagag ccagcctgag atgagcgtgc aggaggccga gaccgtgacc 60

ctgtcctgca cctacgacac cagcgagagc gattactacc tgttctggta caagcagccc 120

cccagcaggc agatgatcct cgtgatcagg caggaggcct acaagcagca gaacgccaca 180

gagaacagat ttagcgtcaa cttccagaag gccgccaagt cctttagcct gaagattagc 240

gactcccagc tgggcgatgc cgccatgtac ttctgcgcct acaacctgat cggcgccggc 300

agctaccagc tgaccttcgg caaggggacc aagttgagcg tgatcccc 348

<210> 4

<211> 345

<212> DNA

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 4

ggggccggcg tgtcccagtc ccctagcaac aaggtgacag agaagggcaa ggacgtggag 60

ctgaggtgcg accccattag cggccacaca gccctgtact ggtaccggca gcggctgggg 120

caggggctgg agttcctcat ctactttcag gggaacagcg cccccgacaa gtccggcctc 180

ccctccgacc ggtttagcgc cgagaggacc ggggagagcg tgagcaccct gaccatccag 240

cggacccagc aggaggatag cgccgtgtac ctgtgcgcca gctccagcct ggccgggggc 300

cccaacgagc agtttttcgg ccccggcacc aggctgacag tgctc 345

<210> 5

<211> 7

<212> PRT

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 5

Thr Ser Glu Ser Asp Tyr Tyr

1 5

<210> 6

<211> 8

<212> PRT

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 6

Gln Glu Ala Tyr Lys Gln Gln Asn

1 5

<210> 7

<211> 15

<212> PRT

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 7

Cys Ala Tyr Asn Leu Ile Gly Ala Gly Ser Tyr Gln Leu Thr Phe

1 5 10 15

<210> 8

<211> 5

<212> PRT

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 8

Ser Gly His Thr Ala

1 5

<210> 9

<211> 6

<212> PRT

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 9

Phe Gln Gly Asn Ser Ala

1 5

<210> 10

<211> 15

<212> PRT

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 10

Cys Ala Ser Ser Ser Leu Ala Gly Gly Pro Asn Glu Gln Phe Phe

1 5 10 15

<210> 11

<211> 21

<212> DNA

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 11

accagcgaga gcgattacta c 21

<210> 12

<211> 24

<212> DNA

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 12

caggaggcct acaagcagca gaac 24

<210> 13

<211> 45

<212> DNA

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 13

tgcgcctaca acctgatcgg cgccggcagc taccagctga ccttc 45

<210> 14

<211> 15

<212> DNA

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 14

agcggccaca cagcc 15

<210> 15

<211> 18

<212> DNA

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 15

tttcagggga acagcgcc 18

<210> 16

<211> 45

<212> DNA

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 16

tgcgccagct ccagcctggc cgggggcccc aacgagcagt ttttc 45