阅读说明：本技术 一种改善烤烟上六片烟叶质量的方法 (Method for improving quality of six tobacco leaves on flue-cured tobacco ) 是由 杨欣玲 杨永锋 王宝林 申洪涛 张子颖 徐文韬 郑文超 叶校坤 贾世伟 张世英 于 2020-06-10 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种改善烤烟上六片烟叶质量的方法,通过测定优质中部烟叶片型和上六片型其内源激素GA、IAA、ABA、CTK含量,找出差异；明确进行外源激素配施配方组合,通过喷施浓度和喷施次数控制,并在烤烟适熟期,喷施二氧化钛复合氧化石墨烯,以避免强光高温对上六片烟叶生长造成损伤,采用本申请处理后的烤烟,改善了组织结构和理化特性和成熟度,通过外观质量和感官评价,筛选最佳调控方案。通过本调控方案降低了烤后烟叶的单叶重和叶厚,改善了组织结构和理化特性,同时上等烟比例、橘黄色烟比例明显提高,外观质量和物理特性显著增强,香气透发饱满圆润,口感舒适余味纯净。(The invention discloses a method for improving the quality of six tobacco leaves on flue-cured tobacco, which finds out the difference by measuring the contents of endogenous hormones GA, IAA, ABA and CTK of high-quality middle tobacco leaf types and six tobacco leaves; the method specifically combines the formulation of the exogenous hormone, controls the spraying concentration and the spraying times, and sprays the titanium dioxide composite graphene oxide in the proper curing period of the flue-cured tobacco so as to avoid the damage of the high temperature of the strong light to the growth of the last six tobacco leaves. The single leaf weight and leaf thickness of the baked tobacco leaves are reduced through the regulation and control scheme, the tissue structure and the physical and chemical properties are improved, meanwhile, the equal tobacco proportion and the orange tobacco proportion are obviously improved, the appearance quality and the physical properties are obviously enhanced, the fragrance is full and mellow, the taste is comfortable, and the aftertaste is pure.)

一种改善烤烟上六片烟叶质量的方法

技术领域

本发明属于烟草生产技术领域，属于烟草地栽培技术，特别是涉及一种改善烤烟上六片烟叶质量的方法。

背景技术

长期以来，上部烟叶存在成熟度不够、叶片厚、组织结构紧密、单叶超重等缺点，为了解决上述问题，现有技术采用“上六片”烟叶一次性成熟采烤技术能解决部分问题，但是，上部烟叶的成熟期如何避开强光高温来改善外部条件,具有较大局限性，二氧化钛以其优异的紫外吸收性大量应用于紫外线防护剂和遮光剂,为避免强光与高温对上部叶造成损害,改善上部烟叶的组织结构和理化性状。

烟叶的物理特性，包括厚度(mm)、叶面密度(g/m²)、单叶质量(g)、平衡含水率(％)和填充值(cm³/g)等是影响烟叶质量的重要因素，调控其物理性状特征也是提高烟叶质量重要手段。

喷洒不同种类、不同浓度和不同施用时期的外源激素对烟叶生长的调控不同的生长调节剂对烟叶生长的调控效果存在显著的差异。乙烯利抑制生长，其处理植株的内源激素GA3、IAA含量最低，ABA、ZR含量最高；GA3显著促进生长，其内源激素的含量均可以接近正常类型的株高；IAA也表现出促进茎的生长，但调控效果较小。因此，关于外源激素施用的具体效应、最佳浓度和最适时间，由于受到不同环境条件和品种的制约，仍需要进一步探讨和验证。

植物激素之间是相互作用平衡调控的关系。由于不同生长型的组织和器官的发育及延展速率的种间响应差异,以及同化物分配到器官的方式差异，同时，不同基因型和栽培种也存在这一问题，尽管这些反应的机理量化差异不很明显.但是，这些差异可以影响生态系统的响应.个体种或基因型的光温度协同作用的反应方式不一致，同时光温条件的改变引起激素水平的变化。

发明内容

本发明的目的是提供一种改善烟草上六片烟叶片型质量的方法，以解决片型不合理对烟叶的生长、质量的影响等问题。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种改善烤烟上六片烟叶质量的方法，包括以下步骤：

S1、分别检测优质中部烟叶和上六片烟叶的内源激素水平；

S2、通过分析步骤S1检测的内源激素水平，得到上六片烟叶与优质中部烟叶的各种内源激素的差异；

S3、外源激素喷施配方组合的筛选：

选择任一种步骤S2有差异的内源激素对应的外源激素，或者选择两种或两种以上有差异的内源激素对应的外源激素的混合，得到多个外源激素组合；

将每一外源激素组合再依据浓度分为多个不同的组合，共得到多个外源激素待选配方；

S4、使用步骤S3得到的多个外源激素待选配方，分别对不同的烟草的上六片烟叶进行设定间隔及设定次数的喷施调控，

S5、在适熟期，采用二氧化钛复合氧化石墨烯喷施；

S6、通过喷施调控使得上六片烟叶达到正常水平烟叶成熟后采收，进行烘烤后，分别通过外观质量、物理特性及感官质量评价，筛选出最佳上六片烟叶所对应的外源激素待选配方为最佳调控方案。

进一步的，内源激素水平的检测方法包括以下步骤：

1)烟叶样品取样和保存：

分别选取移栽0、15、30、45及60天的优质片型烟叶的烟株及小淡薄片型烟叶的烟株的充分伸展的叶片和茎的生长点，用液氮速冻后于-45℃～65℃下保存；

2)测定时取2.5g样品加入10ml样品提取液，在冰浴中研磨成匀浆，于4℃下提取2h后3000转/分钟离心取上清液，将上清液在C18固相萃取柱萃取后，将萃取物在40℃～45℃水浴中用氮气吹干，再用样品稀释液定容后进行测定；

3)将步骤2)定容后的样品用间接酶联免疫法，测定内源激素GA、IAA、ABA及CTK的含量。

进一步的，步骤2)的样品提取液由80％乙醇内含1mmol/L的二叔丁基对甲苯酚组成。

进一步的，步骤S3中的多个外源激素待选配方包括但不限于GA、IAA、ABA或CTK中的一种或一种以上的混合。

进一步，步骤S4中对上六片烟叶喷施外源激素待选配方是在烟株打顶后，每一烟株进行设定量喷施一种外源激素待选配方，并通过对喷施浓度及喷施次数控制片型结构，直至与优质烟叶的片型相似为止。

进一步的，所述二氧化钛复合氧化石墨烯的喷施浓度为0.3g/L或0.45g/L。

进一步的，所述外观质量评价的指标，采用目测划分的方式，指标包括颜色、色度和油分进行质量档次划分，其中，颜色分青、正黄、金黄、深黄、浅橘红、橘红、红棕和棕褐，共八档；色度分浓、强、中、弱和淡，共五档；油分分多、有、稍有和少，共四档。

进一步的，所述感官质量评价的指标包括香气质、香气量、浓度、柔细度、余味、杂气、刺激性和劲头；

所述感官质量评价总分计算公式为：

T＝(A+B)×2.0+(C+D)×1.5+E+F+G+H，其中，T为感官质量评价总分，A为香气质得分，B为香气量得分，C为浓度得分，D为柔细度得分，E为余味得分，F为杂气得分，G为刺激性得分，H为劲头得分。

进一步的，所述物理特性的指标包括烟叶的厚度、叶面密度、单叶质量、平衡含水率及填充值。

本发明的有益效果是：

本技术方案通过有效利用外源激素调控内源激素，并结合在适熟期喷施二氧化钛复合氧化石墨烯，以实现对烟草的上六片烟叶的调控，是目前烟草香气和质量改良最简便、有效而且切实可行的途径之一。

具体实施方式

以下通过实施例来详细说明本发明的技术方案，以下的实施例仅是示例性的，仅能用来解释和说明本发明的技术方案，而不能解释为是对本发明技术方案的限制。

本申请的各实施例是以正常中烟100品种为基础进行的调控，因为篇幅的原因，不能对其它品种进行一一说明，但并不是说本申请的技术方案仅适用于中烟100品种的调控，为了实际的需要，可以依据本技术方案对其它烤烟品种进行调控。

本申请的外源激素喷施配方筛选包括有两个步骤，首先使用不同浓度外源激素处理，并在适熟期喷施二氧化钛复合氧化石墨烯溶液，其次对处理的烟叶质量进行检测，获得优质烟叶片型的外源激素待选配方作为最佳调控方案。

本申请提供一种改善烤烟上六片烟叶质量的方法，包括以下步骤：

对于本申请技术方案所提及的烟草上六片烟叶，是一个大致的概念，本领域的技术人员均清楚，烟草的每一植株所生长的烟叶数量可能会有区别，至于哪几片烟叶为下部烟叶，哪几片烟叶为中部烟叶或哪几片烟叶为上部烟叶，在不同的地块也可能有所不同，常规的划分方法是在某一地块选取有一定数量的烟草植株进行实际的数，然后再进行划分。另一方面，本申请的技术方案的外源激素的喷施也在烟株打顶后进行，这是因为，烟草在种植长到一定程度后，均要进行打顶，实际上就是将每株烟的叶片基本确定下来。

因此，本申请的技术方案中的上六片烟叶就是自打顶之处向下数的六片烟叶，在实际的烟草生产过程中，该六片烟叶因为营养的供应等问题，烟叶的片型的大小、厚度等均与优质烟叶片型有较大的差异，在烘烤后，烟叶的香气、感官等的等级均较低，影响卷烟的质量。

S1、分别检测优质中部烟叶和上六片烟叶的内源激素水平：使用优质中部烟叶作为对比的原因是因为已经实施调控技术，尽可能将调控后的烟叶能够达到优质烟叶，并且考虑到调控的差异，实际的调控结果达到正常烟叶标准也能够接受。

再一方面，此步骤分别检测优质中部烟叶和上六片烟叶的内源激素水平中的上六片烟叶与优质中部烟叶可以为同一烟株也可以是不同的烟株。

具体的检测包括以下步骤：

1)烟叶样品取样和保存：

选择优质中部烟叶对应的植株，分别在移栽0、15、30、45及60天取充分伸展的叶片和茎的生长点，用液氮速冻后于-45℃～-65℃下保存。

选择上六片(可以选择与优质中部烟叶相同烟株的上六片烟叶或其它的上六片烟叶)对应的植株，分别在移栽0、15、30、45及60天取充分伸展的叶片和茎的生长点，用液氮速冻后于-45℃～-65℃下保存。

2)烟叶样品的处理：

测定时，取2.5g优质中部烟叶的样品加入10ml由80％乙醇内含1mmol/L的二叔丁基对甲苯酚制备的样品提取液中，在冰浴中研磨成匀浆，转入到20ml试管，再用5ml样品提取样分次冲净研钵，均转入到试管中，摇匀后于4℃下提取2小时，然后以3000转/分离心20min，收集上清液，将上清液过C18固相萃取柱，固相萃取柱为现常规技术，不进行详细的说明，仅对大致过程进行描述，步骤为：1mL80％甲醇平衡柱→上样→收集样品→移开样品后用5mL100％甲醇洗柱→5mL100％***洗柱→循环，将固相产物在40～50℃水浴中用氮气吹干，再用样品稀释液定容，待测定，在本技术方案中，样品稀释液可以为纯水、甲醇或乙醇等，在本实施例中，样品稀释液选用纯水。

上六片烟叶也按上述的方式进行制备，并经过样品稀释液定容后待测定。

将上述定容后的优质中部烟叶的样品溶液及上六片烟叶的样品溶液分别使用间接酶免疫法(ELISA)，分别测定内源激素GA、IAA、ABA及CTK含量。

间接酶联免疫法(ELISA)的原理可用下式表示：

Ab+H+HP＝AbH+AbHP

其中Ab表示抗体，H表示游离激素，HP表示吸附在板上的激素－蛋白质复合物，根据质量作用定律，当该反应体系中Ab及HP的量确定时，游离H越多，结合物AbH形成的就越多，而AbHP形成的就越少，即结合在板上的抗体就越少，通过酶标二抗检测结合物AbHP的多少，就可以确定游离H量的多少。

通过检测，分别确定优质中部烟叶与上六片烟叶的内源激素水平的差异，然后根据内源激素种类的差异，进行外源激素配方组合的筛选。

选择任一种有差异的内源激素对应的外源激素，比如，上六片烟叶的检测结果，ABA的含量低于优质中部烟叶的ABA，在进行外源激素配方组合的筛选时，选择外源激素ABA用于对上六片烟叶进行调控，再将外源激素ABA按不同浓度进行分组，以确定具体浓度下的ABA为最佳调整方案。再比如，上六片烟叶的检测结果，乙烯利的含量低于优质中部烟叶的乙烯利的含量，在进行外源激素配方组合的筛选时，选择外源激素乙烯利用于对上六片烟叶进行调控，再将乙烯利按不同浓度进行分组，以确定具体浓度下的乙烯利为最佳调整方案。

再比如ABA和乙烯利的含量均低于优质中部烟叶的ABA和乙烯利的含量，选择外源激素时，选择对应的ABA和乙烯利的混合用于对上六片烟叶进行调控，具体再将上述两种外源激素的用量进行改变，以确定最佳的调控方案。

因此，根据检测的内源激素的差异，可以得到多种外源激素待选配方。

本申请的技术方案中，从多种外源激素待选配方中，依据检测结果，分为三组外源激素待选配方，在本申请的其它实施例中，若内源激素的差异为其它种类，也可以选择其它种的外源激素组合。

实施例1

在本实施例中，仅使用外源激素ABA，具体为采用的浓度分别为3mg/L、5mg/L、10mg/L组成三组外源激素待选配方，用于对上六片烟叶的喷施，当然也可以使用其它的浓度，本申请的实施例仅是示例性的。

具体的实验采用对优质中部烟片的烟株喷清水为对照组1，以上六片烟叶对应的烟株喷清水为对照组2，以3mg/L的ABA喷施烟株为处理组1，以5mg/L的ABA喷施烟株为处理组2，以10mg/L的ABA喷施烟株为处理组3。在本实施例中，每组选用20株植株，共重复6次，在植株打顶后喷施，喷施的次数依据需要确定。

在烤烟适熟期，为避免强光高温对上六片烟叶生长造成损伤，喷施二氧化钛复合氧化石墨烯，喷施的浓度分别为0.3g/L和0.45g/L，其中对照组1和对照组2喷清水，处理组1中选3组共60株烟株喷0.3g/L的二氧化钛复合氧化石墨烯，另三组共60株烟株喷0.45g/L的二氧化钛复合氧化石墨烯；处理组2和处理组3也均按同样的方式喷二氧化钛复合氧化石墨烯。

直到将调控后的上六片烟叶与正常烟片型相似后，经过烤制后，通过外观质量、物理特性、化学成分及感官评价筛选出最佳烟叶所对应的外源激素待选配方为最优调控方案。

采用以上配比浓度处理后的烤烟上等烟比例、橘黄色烟比例明显提高，化学成分和协调性显著增强，香气透发饱满圆润，口感舒适余味纯净。

外观质量评价的指标，采用目测划分的方式，指标包括颜色、色度和油分进行质量档次划分。其中，颜色分青、正黄、金黄、深黄、浅橘红、橘红、红棕和棕褐，共八档；色度分浓、强、中、弱和淡，共五档；油分分多、有、稍有和少，共四档。

所述感官质量评价：

由评吸委员会成员采用感官质量评吸法对喷施处理的感官质量进行评定，各项感官指标项目评价按照9分制，感管总分是各项实际得分乘以权重之和。其中各项指标分别为香气质、香气量、浓度、柔细度、余味、杂气、刺激性和劲头.

感官质量评价总分计算公式为：

T＝(A+B)×2.0+(C+D)×1.5+E+F+G+H，其中，T为感官质量评价总分，A为香气质得分，B为香气量得分，C为浓度得分，D为柔细度得分，E为余味得分，F为杂气得分，G为刺激性得分，H为劲头得分。

物理指标评价：

物理指标包括：厚度(mm)、叶面密度(g/m2)、单叶质量(g)、平衡含水率(％)和填充值(cm3/g)

通过喷施外源激素进行试验对照的烤后烟叶检测进行对比分析，通过合适外源激素喷施可以调控烟叶质量达到优质水平，结果见表1、表2和表3。

表1外观质量评价表

表2感官质量评价表

表3物理指标评价表

可知实施例1喷施ABA的浓度为5mg/L的外源激素待选配方为最佳调控方案。

实施例2

第二组，仅使用外源激素乙烯利，具体为，采用浓度分别为5mg/L、10mg/L及15mg/L的乙烯利组成三种外源激素待选配方，用于对上六片烟叶中内源激素乙烯利含量少的烟株进行喷施调控。

具体的实验采用对优质中部烟叶对应的植株喷清水为对照组1，对上六片烟叶的植株喷清水为对照组2，以5mg/L的乙烯利为处理组1，以10mg/L的乙烯利为处理组2，以15mg/L的乙烯利为处理组3。在本实施例中，每组选用20株植株，共重复6次，在植株打顶后喷施，喷施的次数依据需要确定。

在烤烟适熟期，为避免强光高温对上六片烟叶生长造成损伤，喷施二氧化钛复合氧化石墨烯，喷施的浓度分别为0.3g/L和0.45g/L，其中对照组1和对照组2喷清水，处理组1中选3组共60株烟株喷0.3g/L的二氧化钛复合氧化石墨烯，另三组共60株烟株喷0.45g/L的二氧化钛复合氧化石墨烯；处理组2和处理组3也均按同样的方式喷二氧化钛复合氧化石墨烯。

直到将调控后的上六片烟叶与正常烟片型相似后，经过烤制后，通过外观质量、物理特性、化学成分及感官评价筛选出最佳烟叶所对应的外源激素待选配方为最优调控方案。

外观质量评价的指标，采用目测划分的方式，指标包括颜色、色度和油分进行质量档次划分。其中，颜色分青、正黄、金黄、深黄、浅橘红、橘红、红棕和棕褐，共八档；色度分浓、强、中、弱和淡，共五档；油分分多、有、稍有和少，共四档。

所述感官质量评价：

由评吸委员会成员采用感官质量评吸法对喷施处理的感官质量进行评定，各项感官指标项目评价按照9分制，感管总分是各项实际得分乘以权重之和。其中各项指标分别为香气质、香气量、浓度、柔细度、余味、杂气、刺激性和劲头.

感官质量评价总分计算公式为：

T＝(A+B)×2.0+(C+D)×1.5+E+F+G+H，其中，T为感官质量评价总分，A为香气质得分，B为香气量得分，C为浓度得分，D为柔细度得分，E为余味得分，F为杂气得分，G为刺激性得分，H为劲头得分。

物理指标评价：

物理指标包括：厚度(mm)、叶面密度(g/m2)、单叶质量(g)、平衡含水率(％)和填充值(cm3/g)。

通过喷施外源激素进行试验对照的烤后烟叶检测进行对比分析，通过合适外源激素喷施可以调控烟叶质量达到优质水平，结果见表4、表5和表6。

表4外观质量评价表

表5感官质量评价表

表6物理指标评价表

可知实施例2喷施乙烯利的浓度为10mg/L的外源激素待选配方为最佳调控方案。

实施例3

第三组，使用外源激素ABA与乙烯利的组分，具体为，采用浓度分别为3mg/L～10mg/L的ABA，1mg/L～5mg/L的乙烯利组成三组外源激素待选配方，分别为3mg/L的ABA及1mg/L的乙烯利；10mg/L的ABA及5mg/L的乙烯利；5mg/L的ABA及3mg/L的乙烯利；使用上述三种外源激素待选配方对上六片烟叶的烟株进行喷施调控。

具体的实验采用对优质中部烟叶的植株喷清水为对照组1，以上六片烟叶的植株喷清水为对照组2，以3mg/L的ABA及1mg/L的乙烯利为处理组1，以3mg/L的ABA及1mg/L的乙烯利为处理组2，以5mg/L的ABA及3mg/L的乙烯利为处理组3。在本实施例中，每组选用20株植株，共重复6次，在植株打顶后喷施，喷施的次数依据需要确定。

在烤烟适熟期，为避免强光高温对上六片烟叶生长造成损伤，喷施二氧化钛复合氧化石墨烯，喷施的浓度分别为0.3g/L和0.45g/L，其中对照组1和对照组2喷清水，处理组1中选3组共60株烟株喷0.3g/L的二氧化钛复合氧化石墨烯，另三组共60株烟株喷0.45g/L的二氧化钛复合氧化石墨烯；处理组2和处理组3也均按同样的方式喷二氧化钛复合氧化石墨烯。

直到将调控后的上六片烟叶与正常烟片型相似后，经过烤制后，通过外观质量、物理特性、化学成分及感官评价筛选出最佳烟叶所对应的外源激素待选配方为最优调控方案。

外观质量评价的指标，采用目测划分的方式，指标包括颜色、色度和油分进行质量档次划分。其中，颜色分青、正黄、金黄、深黄、浅橘红、橘红、红棕和棕褐，共八档；色度分浓、强、中、弱和淡，共五档；油分分多、有、稍有和少，共四档。

所述感官质量评价：

由评吸委员会成员采用感官质量评吸法对喷施处理的感官质量进行评定，各项感官指标项目评价按照9分制，感管总分是各项实际得分乘以权重之和。其中各项指标分别为香气质、香气量、浓度、柔细度、余味、杂气、刺激性和劲头.

感官质量评价总分计算公式为：

T＝(A+B)×2.0+(C+D)×1.5+E+F+G+H，其中，T为感官质量评价总分，A为香气质得分，B为香气量得分，C为浓度得分，D为柔细度得分，E为余味得分，F为杂气得分，G为刺激性得分，H为劲头得分。

物理指标评价：

物理指标包括：厚度(mm)、叶面密度(g/m2)、单叶质量(g)、平衡含水率(％)和填充值(cm3/g)。

通过喷施外源激素进行试验对照的烤后烟叶检测进行对比分析，通过合适外源激素喷施可以调控烟叶质量达到优质水平，结果见表7、表8和表9。

表7外观质量评价表

表8感官质量评价表

表9物理指标评价表

可知实施例3喷施乙烯利的浓度为5mg/L的ABA和3mg/L的乙烯利的外源激素待选配方为最佳调控方案。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变形，本发明的范围由所附权利要求及其等同限定。