阅读说明：本技术 粒子、含粒子组合物以及粒子的制造方法 (Particle, particle-containing composition, and method for producing particle ) 是由 小泉桂一 于 2019-02-07 设计创作，主要内容包括：为了提供通过添加在制剂中从而能够容易地控制硬度、崩解性等特性并且也具有抗氧化力和免疫活化力的新粒子,从加热处理后的酵母中得到最大直径为1nm以上且小于150nm的粒子A或最大直径为150nm以上且1000nm以下的粒子B。(In order to provide new particles which can be added to a preparation to easily control properties such as hardness and disintegratability and also have antioxidant activity and immune activation activity, particles A having a maximum diameter of 1nm or more and less than 150nm or particles B having a maximum diameter of 150nm or more and 1000nm or less are obtained from yeast after heat treatment.)

粒子、含粒子组合物以及粒子的制造方法

技术领域

本发明涉及粒子、含有这些粒子的组合物以及上述粒子的制造方法，该粒子的热稳定性等特性优异且具有抗氧化力和免疫活化力，由加热处理后的酵母得到，并且最大直径为1nm以上且小于150nm或150nm以上且1000nm以下。

背景技术

迄今为止，许多微细粒子被用于各种各样的领域。作为这样的微细粒子，例如，已知富勒烯或碳纳米管等纳米粒子、脂质体等来自天然产物的微细粒子。前者具有耐热性、耐溶剂性等物性，后者则因来自天然产物且确认有易于向人体应用等多种多样的物性、特性。

然而，在各技术领域中，对于这样的微细粒子的物性、特性，就现状而言期望进一步提高。另外，微细粒子越微小化、纳米化，制造越困难，也期望其品质稳定性、生产率的提高。

在使用这样的微细粒子的技术领域中，本发明人着眼于制剂的技术领域。即，在制剂的技术领域中，出于容易进行制剂化、实现品质的稳定化、提高有用性等目的，几乎在所有制剂中添加有赋形剂、稳定剂、保存剂、成形助剂等添加剂(参照专利文献1)。但是，如果使用用于提高制剂的硬度的添加剂，则虽然制剂的硬度提高，但存在产生崩解性下降这样的问题的倾向。另外，反之，如果重视制剂的崩解性，则存在产生无法得到期望的硬度这样的问题的倾向。

另外，在制剂中，对于不需医师等的处方的非处方药(日文：一般用医薬品)，其不同于管理严格的处方药(日文：医療用医薬品)，是陈列于药店等，一般人也能够容易买到。然而，根据药店等的店铺结构不同，店内的温度并非恒定，因此，非处方药与处方药相比，更倾向于需求耐热性、耐寒性。另外，食品、化妆品等也同样更倾向于需求耐热性、耐寒性。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：(日本)特开2015-193600

发明内容

发明欲解决的技术问题

本发明是鉴于以上情况而完成的，其提供一种新的微细粒子，通过将其添加在制剂中，从而能够容易控制硬度、崩解性等特性，而且，能够在不损害这些特性的前提下提高耐热性、耐寒性，并且配合在非处方药中也能够充分发挥特性。

用于解决问题的技术手段

为了实现上述目的，本发明的要点在于以下的[1]～[8]。

[1]一种粒子，由加热处理后的酵母得到，并且最大直径为1nm以上且小于150nm。

[2]一种粒子，由加热处理后的酵母得到，并且最大直径为150nm以上且1000nm以下。

[3]根据[1]或[2]的粒子，其中，所述粒子为球体。

[4]根据[1]～[3]中的任一粒子，其中，所述粒子以糖为主成分。

[5]一种含粒子组合物，其包含[1]～[4]中的任一粒子。

[6]根据[5]的含粒子组合物，相对于组合物整体，包含有10～99重量％的所述粒子。

[7]一种粒子的制造方法，其制造[1]～[4]中的任一粒子，具有：加热酵母的工序；以及从通过所述加热酵母的工序得到的加热物中分离粒子的工序。

[8]根据[7]的粒子的制造方法，其中，所述加热酵母的工序的加热为煮沸。

即，本发明人为得到能够应用于各种各样用途的微细粒子反复进行了各种研究。其结果，发现了迄今为止未知的新的微细粒子。作为此后的研究结果，可知该粒子不仅分散性、耐热性、耐寒性等优异，还具有抗氧化力和免疫活化力。

发明效果

如上所处，本发明的粒子由加热处理后的酵母得到，因此能够享受来自天然食物纤维的健康方面的好处。而且，最大直径极小，为1～1000nm，对于水系和油系均具有耐溶解性，并且耐热性、耐压性、耐寒性、耐干燥性等优异，因此能够配合在广泛的制剂中。另外，如果在制剂中使用本发明的粒子，则能够容易地进行硬度、崩解性等特性的控制，能够得到具备期望特性的制剂。此外，由于本发明的粒子具有抗氧化力和免疫活化力，因此，包含上述粒子的含粒子组合物期待不仅能够抑制活性氧，而且能够进行免疫系统的调节。

其中，如果本发明的粒子为球体，则流动性、分散性优异。

而且，如果本发明的粒子以糖为主成分，则易于成为过敏原的蛋白质含量相对少或完全没有，因此，能够制成在服用时安全性更高的制剂。

另外，在本发明的含粒子组合物中，相对于组合物整体而含有10～99重量％的上述粒子的含粒子组合物能够更得益于本发明的粒子所具有的抗氧化力和免疫活化力。

进而，在本发明的制造粒子的方法中，具备加热酵母的工序以及从通过上述工序得到的加热物分离粒子的工序的方法能够更安全地制造粒子。

其中，若上述加热酵母的工序的加热为煮沸，则能够进一步提高本发明的粒子的制造效率。

另外，在本发明中，“主成分”是指影响该材料的特性的成分，该成分的含量通常为材料整体的50重量％以上。

附图说明

图1是用于说明本发明的一个实施方式的粒子A和粒子B的制造过程的图。

图2中，(a)是示出上述粒子A的集合体的照片，(b)是上述粒子A的透射型电子显微镜照片，(c)是上述粒子B的透射型电子显微镜照片，(d)是上述粒子A和粒子B的制造过程中的另一分级[液体(III)]所包含的粒子的透射型电子显微镜照片，(e)是上述粒子A和粒子B的制造过程中的又一分级[白色悬浮物(IV)]所包含的粒子的透射型电子显微镜照片。

图3是示出上述粒子A的粒径的分布的图。

图4是示出上述粒子B的粒径的分布的图。

图5是示出上述液体(III)所包含的粒子的粒径的分布的图。

图6是示出上述白色悬浮物(IV)所包含的粒子的粒径的分布的图。

图7是示出上述粒子A的拉曼分析光谱的图。

图8中，(a)是示出将使上述粒子A分散在超纯水中而得到的混合物冻结干燥后的状态的照片，(b)是示出使该粒子A再次分散在超纯水中的状态的照片，(c)是该粒子A的透射型电子显微镜照片，(d)是示出该粒子A的粒径的分布的图。

图9中，(a)是示出使冻结干燥了的粒子A再次分散在超纯水中而连同超纯水一同高压加热的状态的照片，(b)是该粒子A的透射型电子显微镜照片，(c)是示出该粒子A的粒径的分布的图。

图10中，(a)是示出使冻结干燥后的粒子A再次分散在超纯水中并经过一周后的状态的照片，(b)是该粒子A的透射型电子显微镜照片，(c)是示出该粒子A的粒径的分布的图。

符号说明

A 粒子

B 粒子

具体实施方式

接着，说明用于实施本发明的方式。但是，本发明不限定于该实施方式。

在本发明中，“酵母”是指属于子囊菌类和担子菌类等的、单细胞且形状大致为球形的真核微生物，且生命周期的大部分以单细胞形态度过，且进行所谓发酵的全体酵母，酵母本身自不必言，并且也指包含冻结状态和干燥状态等各种状态的酵母。从易于大量制造均匀性高的粒子的观点出发，尤其优选使用属于酵母属(Saccharomyces)、裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)的酵母。

在本发明中，“粒子”是指在用电子显微镜观察时其结构也呈2层结构、2层膜结构、多层结构、多层膜结构的粒子。即，本发明的粒子至少最外层与内部具有不同的电子密度。

本发明的一个实施方式的粒子的最大直径为1～1500nm，优选为40～1000nm，更优选为50～800nm，进一步优选为50～500nm。而且，在本发明中，“粒子的最大直径”在粒子为球体时是指其直径，为其他形状时是指其最大长度。对于粒子的直径，例如能够使得到的粒子分散在超纯水中，使用浓厚系粒度分析仪对其分散液进行测定。在使用浓厚型粒度分析仪测定粒径的情况下，以计算出的平均粒径作为该粒子的最大直径，只要计算出的平均粒径处于以最大直径规定的范围即可。

本发明的一个实施方式的粒子通常呈碳纳米管等没有尖锐部分的形状，优选呈球体的形状。另外，粒子的表面平滑，不会观察到因物理接触而形成的磨损痕迹。上述球体不仅包括正球体，也包括蛋形、椭圆体等形状。对于粒子的形状，例如，能够通过用透射型电子显微镜拍摄进行了负染色的粒子，观察其外观，由此进行判别。例如，使集合成颗粒状的粒子分散在超纯水中，使该分散液吸附于网，在其上装载染色剂。然后，用滤纸吸取多余的染色液，干燥后用透射型电子显微镜进行拍摄，由此能够观察粒子的外观。

本发明的一个实施方式的粒子对水系液体的分散性高。另外，其优异的分散性可长期保持。对于粒子的分散性，例如，能够通过使得到的粒子分散在超纯水中，用透射型电子显微镜拍摄其分散液，观察其分散程度，由此进行判别。另外，能够通过将上述分散液与保存一定时间后的分散液进行对比，从而判别分散性保持的程度。

本发明的一个实施方式的粒子的耐压性和耐热性优异，至少2个大气压以下的加压、121℃以下的加热基本不会导致粒径的变化。对于粒子的耐压性、耐热性，例如，针对分散在超纯水中的粒子以及将该分散液加压和加热后的分散液中包含的粒子，分别用浓厚系粒度分析仪计算粒径的分布，并且可以根据在将两者进行对比时两者中粒径的分布未发生变动进行判别。

本发明的一个实施方式的粒子的耐寒性和耐干燥性优异，从-50至-80℃的冷却、干燥基本不会导致粒径的变化。对于粒子的耐寒性和耐干燥性，例如，针对分散在超纯水中的粒子以及将该分散液冻结干燥(-50℃)并使其干燥物再次分散在超纯水中而得到的分散液中包含的粒子，分别用浓厚系粒度分析仪计算粒径的分布，可以根据在将两者进行对比时粒径的分布未发生变动进行判别。另外，即使将使上述冻结干燥物在-80℃保存7天后分散在超纯水中而得到的分散液中包含的粒子同样地进行对比，粒径的分布也没有变动。

本发明的一个实施方式的粒子具有优异的抗氧化力。其中，最大直径为80nm以上、优选为150nm以上、为1500nm以下、优选为1000nm以下、更优选为800nm以下的粒子具有优异的抗氧化力，为80nm以上且1500nm以下、优选为150nm以上且1000nm以下的粒子具有更优异的抗氧化力，150nm以上且800nm以下的粒子具有进一步优异的抗氧化力。对于上述粒子具有抗氧化力的情况，例如，使得到的粒子分散在超纯水中，利用ESR自旋陷阱法(以下称为“ESR法”)，对其分散液测定清除在体内产生的活性氧即超氧自由基、羟自由基和单线态氧的能力，可以根据其结果进行判别。

本发明的一个实施方式的粒子具有优异的免疫活化力。其中，最大直径为1nm以上、优选为50nm以上、小于250nm、优选小于150nm的粒子具有优异的免疫活化力，最大直径为1nm以上且小于250nm、优选为1nm以上且小于150nm的粒子具有更优异的免疫活化力，最大直径为50nm以上且小于150nm的粒子进一步具有优异的免疫活化力。对于上述粒子具有免疫活化力的情况，例如，测定对使巨噬细胞等免疫细胞活化的脂多糖(LPS)进行正控制时的干扰素β(IFNβ)、白介素-6(IL-6)以及肿瘤坏死因子α(TNFα)的产生量，可以根据其结果进行判别。

需要说明的是，即使进行加压、加热、冷却、干燥，本发明的一个实施方式的粒子的结构也不会变化。对于该情况，针对使粒子分散在超纯水中得到的分散液、对该分散液进行加压和加热而得到的分散液，或使进行了冷却和干燥而得到的粒子再次分散在超纯水中，用电子显微镜对比观察它们所包含的粒子的结构，从而能够进行判别。这些是现有的纳米粒子即脂质体等无法得到的特性。

这样的粒子例如能够通过具备加热酵母的工序以及从利用上述工序得到的加热物中分离粒子的工序的方法进行制造。

作为加热上述酵母的工序，例如可举出：将酵母连同培养液一同放入设定在95℃附近的加热干燥室，同时进行加热和干燥；将酵母浸渍在液体中，将酵母连同该液体一起加热；等，更优选的是将酵母连同液体一起加热，更优选加热工序的加热为煮沸。对于将上述液体连同酵母加热，进一步详细进行说明。首先，准备作为材料的酵母。该酵母可以是任意状态，从提高粒子的制造效率的观点出发，优选进行干燥、粉碎。将上述准备的酵母浸渍在另外准备的液体中，通常在60℃以上进行3分钟以上的加热，从而得到使构成上述酵母的成分溶解在液体中的加热物。需要说明的是，会表现出加热时间越长则从酵母得到的粒子的收率越增高的倾向。作为上述液体，例如可举出：将用作水、酒精等各种溶剂的液体单独使用，或混合2种以上使用。但是，考虑到服用粒子等，从关注健康方面的观点出发，优选使用水或水系的液体。

需要说明的是，在本发明中，“使构成酵母的成分溶解在液体中”是指，对细胞壁的基本骨架和基质进行分离等以使酵母的结构崩解，形成在液体中分散有已崩解的酵母的成分的体系，也包含通过使作为酵母的成分之一的多糖分解成尺寸小的多糖等手段，从而使其分散在液体中的情况。

接着，作为从通过上述工序而得到的加热物中分离本发明的粒子的工序，例如可举出离心分离、过滤器过滤、超滤、超离心分离等。这些可根据成为材料的具有细胞壁的生物的种类等，使用更合适的工序。其中，从操作的容易性的观点出发，优选离心分离、过滤器过滤，从提高纯化度的观点出发，优选将它们组合使用。

需要说明的是，在经过加热工序后的酵母为干燥状态的情况下，优选使其浸渍在液体中，并对在液体中分散有已崩解的酵母的成分的体系进行上述分离粒子的工序。

作为上述离心分离，虽然根据粒子的尺寸而有所不同，但例如可举出将加热物以1万～100万G进行离心分离，收集其上清液的方法(粗分离工序)。进而，为了进一步提高纯化度，例如也可以用孔径0.22～0.45μm的过滤器过滤上述上清液，得到其滤液(精密分离工序)。

如上所述，对于本发明的一个实施方式的粒子而言，由于未采用以对构成酵母的成分、例如各种糖类等进行末端分子的取代等为目的的方法(例如使用苛性钠、盐酸等的方法)，因此安全性优异。

本发明的一个实施方式的粒子例如能够通过配合在制剂、食品、化妆品等中，从而作为添加剂来控制各特性、例如硬度、崩解性等。对于制剂等，在考虑使用添加剂时，重要的是添加剂不会对主剂的配合量产生限制。然而，本发明的粒子相对于构成制剂等的组合物能够以较少量的添加来控制各特性，因此不会对主剂的配合量产生限制，能够提高配合的自由度。

在将本发明的一个实施方式的粒子作为添加剂进行配合的情况下，相对于组合物整体，优选含有0.01～95重量％，更优选含有0.01～90重量％，进一步优选含有0.1～50重量％，更进一步优选含有1～10重量％。

另外，本发明的一个实施方式的粒子例如能够通过配合在制剂、食品等中，从而用作具有抗氧化作用的组合物和具有免疫活性化作用的组合物。

在具有抗氧化作用的组合物或具有免疫活性化作用的组合物中配合上述粒子的情况下，例如，相对于组合物整体，优选含有10重量％以上的粒子，更优选含有20重量％以上，进一步优选含有30重量％以上，更进一步优选含有40重量％以上，再进一步优选含有50重量％以上。另外，相对于组合物整体，粒子含量优选为99重量％以下，更优选为90重量％以下，进一步优选为80重量％以下，更进一步优选为70重量％以下，再进一步优选为60重量％以下。这是因为，若含量过少，则为了发挥期望的作用往往需要大量摄取，反之，若含量过多，则为了得到期望的作用的控制往往变得难以进行。

实施例

接着说明实施例。首先，对本发明的粒子本身进行研究(实施例1)，接着对使用了这些粒子的制剂进行研究(实施例2)。但是，本发明不限定于此。

〔对本发明的粒子本身的研究〕

通过以下所示的步骤分别制作本发明的一个实施方式的粒子A和粒子B。然后，对于得到的粒子A和粒子B，如下所述进行粒径分布的计算。然后，对于粒子A，按照下述的各项目进行外观的观察、构成糖和木质素的分析、拉曼分析、耐热性、耐压性、耐寒性和耐干燥性的评价、水分散性和保存性的评价。

进而，对粒子A和粒子B，测定抗氧化力和免疫活化力，分别按照后述的项目进行了评价。

〔实施例1〕

将100g酵母(Nippon Garlic Corporation制，天然啤酒酵母)浸渍在1L的95℃的水中，持续进行3小时加热，得到加热物。将该加热物以13250G进行离心分离，得到去除了尺寸比较大的夹杂物的上清液。将该上清液以140000G进行离心分离，结果如图1所示分级为4个。

即，在图1中，为如下4个分级：附着在离心管底部的透明的颗粒(I)、在该颗粒附近的离心管底部悬浮的白色泥状物(II)、离心管中间部的茶色的液体(III)以及离心管上层的白色悬浮物(IV)。上述透明的颗粒(I)是粒子A集合为颗粒状的颗粒。将仅取出该颗粒(I)而得到的产物示于图2的(a)。另外，上述泥状物(II)是粒子B的集合体。需要说明的是，上述液体(III)通过再次进行超离心，从分级为上述颗粒(I)和上述泥状物(II)，因此认为在上述液体(III)中含有上述粒子A和粒子B。

按照常规方法对得到的粒子A和粒子B进行冻结干燥(东京理化器械株式会社制、EYEL4)，供以下研究。

(粒径的分布的计算)

对于上述粒子A和粒子B，使它们分别分散在超纯水中，对于其分散液，使用浓厚系粒度分析仪(大冢电子株式会社制、FPAR-1000)，利用直方图法计算粒径的分布。在图3中示出粒子A的粒径分布图，在图4中示出粒子B的粒径的分布图。它们均呈现出正态分布。需要说明的是，在图3和图4中虽然出现了极微量的偏离正态分布的粒径的粒子，但可以认为这些是未彻底分级的粒子混入而成。因此，在计算粒子A或粒子B的平均粒径时，也可以用去除了这些混入粒子的粒子来进行。

另外，对于上述液体(III)所包含的粒子和白色悬浮物(IV)所含有的粒子也同样地计算粒径的分布。图5中示出液体(III)所包含的粒子的粒径的分布图，图6中示出白色悬浮物(IV)所包含的粒子的粒径的分布图。

(外观的观察)

对上述粒子A、粒子B、上述液体(III)所包含的粒子和上述白色悬浮物(IV)所包含的粒子分别进行负染色，利用透射型电子显微镜进行摄影。图2的(b)中示出粒子A的照片，图2的(c)中示出粒子B的照片。另外，图2的(d)中示出上述液体(III)所包含的粒子的照片，图2的(e)中示出白色悬浮物(IV)所包含的粒子的照片。在这些中，使得到的各粒子分散在超纯水中，使其分散液吸附于火棉胶贴付网(日新EM株式会社制)，在其上装载乙酸双氧铀(染色剂)。然后，用滤纸吸取多余的乙酸双氧铀，干燥后用透射型电子显微镜(日本电子公司制、JEM-1400TC)进行拍摄。代表性的粒子A如图2的(b)所示，其为最大直径约70nm的球体。另外，代表性的粒子B如图2的(c)所示，其为最大直径约超过500nm的球体。

(构成糖的分析)

对于上述粒子A，进行其构成糖的分析。构成糖的分析如下所述。即，首先，将用真空干燥机使集合成颗粒状且提高了纯化度的粒子A在60℃干燥约1天得到的产物作为供试试样(无水基)，用天平向烧杯中量取适量该供试试样(约0.3g)，加入3mL的72％硫酸，在30℃进行搅拌并放置1小时。将该反应液与84mL精制水混合稀释并完全移送到耐压瓶中后，在120℃在1小时高压加热下进行加热分解。加热分解后，将分解液与残渣进行过滤分离，将加入滤液和残渣的洗液并定容至100mL的液体作为检测液。另外，为了校正分解时的糖的过度分解，同时进行使用单糖的回收率试验。对于检测液中的单糖(鼠李糖、核糖、木糖、***糖、果糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖)，利用高效液相色谱法(荧光检测器)进行定量。分析所使用的装置为GL Sciences公司制，是GL-7400 HPLC system。根据得到的分解液的单糖浓度和试样分解量，计算试样中的构成糖量。在下述的表1中示出得到的结果。需要说明的是，表1的结果是使用由单糖的回收率试验求出的分解时的糖过度分解校正系数(Sf)而校正了的构成糖量。另外，由于果糖容易过度分解，因此Sf为很大的值，包含的误差大。由此，将过度分解校正后的果糖量作为参考值(例如在表1中记载为“※2”)。

[表1]

○过分解补正后的构成糖

(构成糖含量×Sf)

根据上述表1所示的结果可知，上述粒子A的构成糖几乎全部为葡萄糖。可以认为，该结果与酵母的细胞壁主要由β-葡聚糖构成而几乎不含半纤维素和木质素有关。然而，粒子A的构成糖也含有半乳糖，鼠李糖，甘露糖等，因此粒子A不单纯是成分的分离物。

(木质素的分析)

上述粒子A的木质素的分析如下进行。本来，对于木质素测定，常规方法是用有机溶剂等事先去除试样中的可溶成分(油分、单宁、多酚等)，但在上述木质素的分析中未进行提取。即，在上述木质素的分析中，作为酸不溶性木质素的定量，将在上述构成糖分析中过滤得到的残渣在105℃进行干燥并测量重量，计算分解残渣率，进而，测定残渣中的灰分并补正，计算酸不溶性木质素浓度。另外，作为酸可溶性木质素的定量，使用双光束分光光度计(Hitachi High-Tech Science Corporation制、U-2001型)，以210nm的波长测定在上述构成糖分析中过滤得到的滤液，按照下述的式(1)，使用卡瓦胡椒(植物名)的酸可溶性木质素的吸光系数计算浓度。在下述的表2中示出得到的结果。需要说明的是，已知卡瓦胡椒的木质素的吸光系数为110L·g^-1cm^-1附近。

[数1]

d：稀释倍率

v：滤液定容量(L)

As：试样溶液的吸光度

Ab：空白溶液的吸光度

a：木质素的吸光系数(110L·g^-1cm^-1)

w：试样采集量(无水基)(g)

[表2]

酸不溶性木质素	0.4％·干燥
		酸可溶性木质素	0.2％·干燥
木质素(上述之和)	0.6％·干燥

注：上述结果是将未进行事先的溶剂提取的试样供试得到的结果

如上述表2所示，可知上述粒子A中略微含有木质素。

(拉曼分析)

关于上述粒子A的拉曼分析，对于将少量的粒子A在(约0.5mm见方)装载在玻片上得到的对象，使用inVia Reflex显微拉曼光谱仪，按照下述的条件进行。即，使用LD激发绿激光(波长532nm)，设为物镜50倍、照射激光束直径1.5μm、照射激光功率1mW以下、测光拉曼位移范围4000～150cm^-1、波数分辨率6cm^-1、累计次数10次，根据基于与数据库的光谱波形比较对照的图书馆检索来进行分析。在图7中示出得到的光谱。

通过以上分析可知，上述粒子A意外地具有接近淀粉的光谱。另外，同样在图7中，可以观察到以主要归属于羟基的3500～3300cm^-1为中心的宽度大的峰，且可以观察到归属于C-H键的2900cm^-1附近的峰。需要说明的是，对上述粒子A施加碘淀粉反应，结果并未观察到反应。因此，确认粒子A并非淀粉。

<耐热性、耐压性、耐寒性和耐干燥性>

首先，将使上述粒子A分散在超纯水中的产物进行冻结干燥〔图8的(a)〕。然后，对于使其冻结干燥物再次分散在超纯水中的产物〔图8的(b)〕，与上述外观的观察同样地进行观察〔图8的(c)〕，用上述浓厚系粒度分析仪计算粒径的分布〔图8的(d)〕。

接着，对于使上述冻结干燥物分散在超纯水中的产物〔图9的(a)〕，进一步用高压釜进行加热加压(2个大气压、121℃、20分钟)，与上述外观的观察同样地进行观察〔图9的(b)〕，用上述浓厚系粒度分析仪计算粒径的分布〔图9的(c)〕。

通过对以上结果进行对比考察发现，不论进行了冻结干燥或进行了加热加压，粒子A的外观和粒径均未观察到大的变化，粒子A的耐热性、耐寒性和耐干燥性优异。对于粒子B，进行了与粒子A同样的实验，与粒子A同样地具有优异的耐热性、耐寒性和耐干燥性。

<水分散性和保存性>

在图10的(a)中示出将使上述冻结干燥物分散在超纯水中的产物〔图8的(b)〕在4℃保存1周的产物。另外，在图10的(b)中示出与上述外观的观察同样地对该保存后的分散液所包含的粒子A进行观察的结果。并且，在图10的(c)中示出对于该保存后的分散液所包含的粒子A用上述浓厚系粒度分析仪计算粒径的分布的结果。这些结果均示出未观察到经时导致粒子A的外观和粒径产生大的变化，可知即使长期保存，粒子A也可保持水分散性，保存性优异。另外，对于粒子B也进行了与粒子A同样的实验，与粒子A同样地具有优异的水分散性和保存性。

<抗氧化力>

对于实施例1所制作的粒子A和粒子B，测定(1)超氧自由基清除活性值(单位(units)SOD/g)。

另外，对于实施例1所制作的粒子B，测定(2)羟自由基清除活性值(μmoL DMSO/g)和(3)单线态氧清除活性值(μmoL组氨酸/g)。

需要说明的是，上述(1)～(3)的测定均根据ESR自旋陷阱(ESR)法来进行，这些测定条件分别如下所示。

(1)超氧自由基清除活性值(单位SOD/g)

分别对实施例1所制作的粒子A和粒子B，测定超氧自由基清除活性值(单位SOD/g)。在后述的表3中示出结果。需要说明的是，测定方法和测定条件如下所示。

[测定方法]

通过使次黄嘌呤和黄嘌呤氧化酶进行反应从而产生超氧自由基，测定与该超氧自由基的频率共鸣的自由基在含有粒子A或粒子B的试验液中存在多少，从而进行测定。即，使用二甲基亚砜(DMSO)作为超氧自由基捕获剂，使用以下的规程，进行上述各试验液的超氧自由基清除活性的测定。

·试验液(40重量％)：50μL

·8.55M 5,5-二甲基-1-吡咯啉-N-氧化物(DMPO)：30μL·1.25mM次黄嘌呤：50μL

·4.37mM DMSO：20μL

·加入50μL的0.1U/mL黄嘌呤氧化酶，在搅拌后使其反应60秒，进行测定。

[测定条件]

将制备的试验液回收到ESR扁平吸收池中，按照以下的测定条件进行ESR测定。

·磁场：335±5mT

·功率：3mW

·调制宽度：0.079mT

·时间常数：0.1sec

·扫描时间：1min

·放大：250

[表3]

根据表3的结果可知，粒子A和粒子B均具有优异的超氧自由基清除活性。其中，粒径大的粒子B的超氧自由基清除活性更为优异。

(2)羟自由基清除活性值(μmoL DMSO/g)

测定粒子B的羟自由基清除活性值(μmoL DMSO/g)，与登录在数据库中的柠檬的值进行对比。在下述的表4中示出结果。需要说明的是，测定方法和测定条件如下所示。

[测定方法]

通过对过氧化氢照射紫外线从而产生羟自由基，测定与该羟自由基的频率共鸣的自由基在含有粒子B的试验液中存在多少，从而进行测定。即，使用DMSO作为羟自由基捕获剂，使用以下的规程，进行上述试验液的羟自由基清除活性的测定。

·试验液(25重量％)：50μL

·5.7M DMPO：20μL

·2.5mM过氧化氢：90μL

·照射30秒紫外线后，进行测定。

[测定条件]

将制备的试验液回收到ESR吸收池中，按照以下的测定条件进行ESR测定。

·磁场：335±5mT

·功率：3mW

·调制宽度：0.1mT

·时间常数：0.1sec

·扫描时间：1min

·放大：50

[表4]

根据表4的结果可知，粒子B具有远远比抗氧化力高的柠檬和红甜椒优异的羟自由基清除活性。

(3)单线态氧清除活性值(μmoL组氨酸/g)

测定粒子B的单线态氧清除活性值(μmoL组氨酸/g)，与登录在数据库中的柠檬和红甜椒的值进行对比。在下述的表5中示出结果。需要说明的是，测定方法和测定条件如下所示。

[测定方法]

通过对核黄素照射紫外线从而产生单线态氧，测定与该单线态氧的频率共鸣的自由基在含有粒子B的试验液中存在多少，从而进行测定。即，使用2,2,4-三甲基-1,3-戊二醇(TMPD)作为单线态氧捕获剂，使用以下的规程，进行上述试验液的单线态氧清除活性的测定。

·试验液(11.1重量％)：25μL

·44.4mM TMPD：50μL

·2.5mM DMSO：100μL

·55.5mM核黄素：50μL

·照射20秒紫外线后，进行测定。

[测定条件]

将制备的试验液回收到ESR扁平吸收池中，按照以下的测定条件进行ESR测定。

·磁场：336.4±5mT

·功率：3mW

·调制宽度：0.1mT

·时间常数：0.1sec

·扫描时间：1min

·放大：250

[表5]

根据表5的结果可知，粒子B具有远远比抗氧化力高的柠檬和红甜椒优异的单线态氧清除活性。

<免疫活化力>

为了研究实施例1所制作的粒子A和B是否具有对小鼠巨噬细胞即RAW264.7细胞(以下称为“RAW264.7细胞”)的免疫活化能力，按照下述的测定方法和条件，测定(1)干扰素β(IFNβ)、(2)白介素-6(IL-6)和(3)肿瘤坏死因子α(TNFα)的产生量。

[测定方法和条件]

首先，准备超纯水(对照组)、粒子A和粒子B(最终浓度均为10mg/mL)、脂多糖(LPS：最终浓度1ng/mL)，作为被验物质。

接着，准备使RAW264.7细胞以达到5.0×10⁷cells/mL的方式分散在培养液中而得到的细胞液，在1.8mL该细胞液中分别添加200μL被验物质，在37℃、5％CO₂的条件下，培养3小时、6小时、9小时、24小时。然后，使用RLT lysis buffer回收这些细胞。从上述回收的各细胞提取RNA，基于得到的RNA制作上述各细胞的cDNA。

然后，对制作的cDNA进行实时PCR，测定IFNβ、IL-6和TNFα的产生量，按照下述各项目进行评价。

(1)干扰素β(IFNβ)

对使粒子A作用于RAW264.7细胞的产物与使LPS作用于RAW264.7细胞的产物进行了对比，并将其结果示于下述的表6。需要说明的是，表6示出将超纯水(对照组)的上清液中产生的IFNβ量设为1时的粒子A和LPS各自的上清液中产生的IFNβ量。

[表6]

	LPS	粒子A
			IFNβ量	12.5	14.8

根据表6的结果可知，粒子A在产生IFNβ时具有比正对照组即LPS更高的活性。即，粒子A促进产生IFNβ，具有提高抗肿瘤性的能力。

(2)白介素-6(IL-6)

对使粒子A作用于RAW264.7细胞得到的产物以及使LPS作用于RAW264.7细胞得到的产物进行了对比，并将对比结果示于下述的表7。需要说明的是，表7示出将超纯水(对照组)的上清液中产生的IL-6量设为1时的LPS和粒子A各自的上清液中产生的IL-6量。

[表7]

	LPS	粒子A
			IL-6量	2264	14608

根据表7的结果可知，粒子A在产生IL-6时具有远远高于正对照组即LPS的活性。即，粒子A促进产生IL-6，提高抗病毒性的能力极高。

(3)肿瘤坏死因子α(TNFα)

对使粒子A或粒子B作用于RAW264.7细胞的产物与使LPS作用于RAW264.7细胞的产物进行了对比，并将其结果示于下述的表8。需要说明的是，表10示出将超纯水(对照组)的上清液中产生的TNFα量设为1时的LPS、粒子A和粒子B各自的上清液中产生的TNFα量。

[表8]

	LPS	粒子A	粒子B
				TNFα量	6.2	29.6	21.5

根据表8的结果可知，粒子A和粒子B在产生TNFα时均具有比正对照组即LPS更高的活性。即，本发明的粒子不论其粒径大小均能够促进TNFα产生，具有提高抗肿瘤性的能力。

〔对使用了本发明的粒子的制剂的研究〕

接着，制作使用了实施例1所制作的粒子A的制剂(实施例2)以及未使用本发明的粒子的制剂(比较例1)，计算各自的溶出率(％)。另外，对此，也进行硬度和崩解性的测定。

〔实施例2、比较例1〕

准备实施例1所制作的粒子A和下述的材料，对将这些材料搅拌混合而得到的混合物，用压片机(日本市桥精机公司制、HANDTAB-100)以8kN进行压缩，得到200mg的制剂(直径8mm、曲率半径12mm)即实施例2。另外，作为比较例1，使用乳糖代替粒子A，除此以外与实施例2同样地进行，制作200mg的制剂(未使用本发明的粒子的制剂)。下述的表9中示出实施例2和比较例1的配合。

[表9]

(溶出率(％)的计算)

使用溶出试验器(富山产业株式会社制、NTR-3000)，按照日本药典第16版溶出试验法计算其溶出率(％)。需要说明的是，上述试验使用900mL精制水作为试验液，以桨法进行。然后，直到试验开始70分钟后定期对试验液进行采样，将通过0.45μm的膜过滤器的试验液作为测定试样。使用紫外可见吸光光度计(岛津制作所公司制、UV-1800)测定得到的各测定试样的275nm的吸光度。将得到的吸光度代入到下述式(2)中，计算试验开始t分钟后的溶出率(％)。在下述的表10中示出其结果。

溶出率(％)＝试验开始t分钟后的吸光度/试验开始70分钟后的吸光度×100…(2)

[表10]

根据上述表10所示的结果，相对于混合物整体添加仅10重量％的粒子A，从试验开始后5分钟起的时刻到40分钟后的时刻为止，能够确认到约2倍的溶出率的跃升。由此，可知粒子A具有作为速溶/崩解型片剂的添加剂的功能。

另外，对于实施例2和比较例1，按照下述的项目进行硬度和崩解时间的测定。在后述的表11中示出其结果。

(硬度的测定)

使用负荷传感器式片剂硬度计(同田精工公司制，Portable checker PC-30)，对制剂的直径方向逐渐施加载荷，测定制剂破碎时的载荷作为该制剂的硬度。测定以n＝5进行，采用其平均值作为制剂的硬度。

(崩解时间的测定)

使用崩解试验器(富山产业公司制、NT-200)，按照日本药典第16版崩解试验法测定其崩解时间(崩解性)。需要说明的是，在上述试验中，使用1000mL精制水作为试验液，测定温度设为37±2℃。将制剂在试验液中直到崩解/分散所需要的时间作为崩解时间。

[表11]

根据上述表11所示的结果可知，实施例2的硬度高于比较例1。然而，实施例2尽管硬度高，但与比较例1相比，直到制剂崩解的时间却更短。即可知，若将本发明的粒子用于制剂，则可成为对硬度、崩解性和药物的溶出性等特性进行控制的、前所未有的非常优异的添加剂。同样对于粒子B，可观察到与粒子A同样良好的溶出率等，从而可成为非常优异的添加剂。

在上述实施例中虽然示出了本发明的具体方式，但上述实施例不过是单纯的例示，而并非限定性的解释。对于本领域技术人员显而易见的各种各样的变形也应理解为在本发明的范围内。

产业实用性

作为典型的例子，本发明的粒子适于制剂、食品、化妆品等的添加剂。另外，能够用作抗氧化剂和免疫活化剂。