阅读说明：本技术 利用提取盒的核酸提取方法 (Nucleic acid extraction method using extraction cassette ) 是由 赵荣植 李孝根 朴海准 李善永 林冠勋 金芢爱 金宰永 朴婋林 金彤宪 于 2018-12-20 设计创作，主要内容包括：本发明提供一种核酸提取方法,上述核酸提取方法包括：步骤(a),使得核酸提取装置的驱动部连接到配置在活塞上部主体内部空间的控制棒模块及与活塞下部主体相结合的旋转调节模块；步骤(b),驱动旋转调节模块及控制棒模块,从提取盒的相互分离的多个腔室向上述内部空间依次吸入样本及多个试剂,向提取盒的腔室排出上述内部空间的混合液；以及步骤(c),驱动旋转调节模块及控制棒模块,在向活塞上部主体内部空间吸入提取盒的主混合珠腔室内部的试剂之后,向核酸扩增模块排出经混合的试剂。(The invention provides a nucleic acid extraction method, which comprises the following steps: a step (a) of connecting a drive section of the nucleic acid isolation apparatus to a control rod module disposed in an inner space of the upper piston body and a rotation adjustment module coupled to the lower piston body; a step (b) of driving the rotation regulating module and the control rod module, sequentially sucking a sample and a plurality of reagents into the internal space from a plurality of chambers separated from each other of the extraction box, and discharging a mixed liquid in the internal space into the chambers of the extraction box; and (c) driving the rotation control module and the control rod module to suck the reagent in the main mixing bead chamber of the extraction cartridge into the inner space of the upper body of the piston and then discharge the mixed reagent to the nucleic acid amplification module.)

利用提取盒的核酸提取方法

技术领域

本发明涉及核酸提取方法，更具体地，涉及为了扩增核酸而利用可从样本分离核酸并提纯的提取盒的核酸提取方法。

背景技术

随着现代生命工程技术的发展，可在基因层面解释疾病的原因。相应地，对用于治愈或预防人类疾病的生物样本的操作及生化分析的要求日益增加。

同时，除了诊断疾病之外，在新药开发、预先检查是否感染病毒或细菌及法医学等的多个领域中，需要一种从包含生物样本或细胞的样本中提取并分析核酸的技术。

在现有的核酸提取装置中，每个预处理步骤(浓缩及提纯)都需要单独的装置，由于需在结束一个预处理步骤后向其他装置移动，因此需要很长时间。并且，如上所述，由于利用现有的核酸提取装置的核酸提取方法需在提取步骤中向分离的废液腔室排出已完成混合及反应的很多废液，因此，存在空间利用效率差的问题。

因此，为了解决这样的问题，正对更有效的核酸提取方法进行研究。

发明内容

(技术问题)

本发明的目的在于，提供更有效的核酸提取方法。

(技术方案)

为了实现如上所述的目的，本发明一实施例的利用提取盒的核酸提取方法包括：步骤(a)，使得核酸提取装置的驱动部连接到配置在活塞上部主体内部空间的控制棒模块及与活塞下部主体相结合的旋转调节模块；步骤(b)，驱动旋转调节模块及控制棒模块，从提取盒的相互分离的多个腔室向上述内部空间依次吸入样本及多个试剂，向提取盒的腔室排出上述内部空间的混合液；以及步骤(c)，驱动旋转调节模块及控制棒模块，在向活塞上部主体内部空间吸入提取盒的主混合珠腔室内部的试剂之后，向核酸扩增模块排出经混合的试剂。

根据本发明的一实施例，在上述步骤(b)中，混合液经核酸捕集过滤器排出。

根据本发明的一实施例，上述步骤(b)包括通过驱动上述旋转调节模块使活塞下部主体的液体接口与提取盒的样本腔室接口重叠，通过驱动上述控制棒模块向上部主体内部空间吸入样本腔室内的样本的步骤。

根据本发明的一实施例，包括通过驱动上述旋转调节模块使活塞下部主体的液体接口与提取盒的第一试剂腔室接口重叠，在通过驱动上述控制棒模块向上部主体内部空间吸入第一试剂之后与样本混合的步骤。

根据本发明的一实施例，还包括通过驱动上述旋转调节模块使活塞下部主体的液体接口与提取盒的第二试剂腔室接口重叠，在通过驱动上述控制棒模块向上部主体内部空间吸入第二试剂之后进行混合的步骤。

根据本发明的一实施例，包括通过驱动上述旋转调节模块使活塞下部主体的过滤器接口与提取盒的第二试剂腔室接口重叠，通过驱动上述控制棒模块向第二试剂腔室接口排出混合液的步骤。

根据本发明的一实施例，上述步骤(b)还包括依次吸入、混合及排出上述多个试剂及其他种类的多个试剂的多个步骤。

根据本发明的一实施例，最后吸入的试剂向提取盒的主混合珠腔室排出。

根据本发明的一实施例，上述步骤(c)包括通过驱动上述旋转调节模块使活塞下部主体的过滤器接口与提取盒的主混合珠腔室接口重叠，通过驱动上述控制棒模块向主混合珠腔室接口排出上述最后吸入的试剂的步骤。

根据本发明的一实施例，还包括：通过驱动上述旋转调节模块使活塞下部主体的液体接口与提取盒的主混合珠腔室接口重叠，在通过驱动上述控制棒模块向上部主体内部空间吸入主混合珠腔室内部的试剂之后进行混合的步骤；以及使上述活塞上部主体内部空间的试剂向扩增模块移动的步骤。

(发明效果)

根据本发明一实施例的利用提取盒的核酸提取方法，可通过利用与现有结构不同的提取盒来在一个提取盒内依次处理多个样本。可由此减少核酸提取时间并简化装置的结构。

并且，根据本发明一实施例的利用提取盒的核酸提取方法，由于可向提取盒内的试剂腔室排出已使用完的废液，因此，可有效地进行核酸提取工序。

附图说明

图1为本发明一实施例的核酸提取方法的流程图；

图2为用于本发明的提取盒的立体图；

图3为用于本发明的提取盒的底面立体图；

图4为在图2中示出的提取盒的分解图。

具体实施方式

以下，将参照附图更详细地说明本发明。在本说明书中，即使是互不相同的实施例，对于相同或类似的结构赋予相同或类似的附图标记，该说明由第一次进行的说明代替。除非上下文中另外明确指出，否则在本说明书中所使用的单数的表达包括复数的表达。并且，对在以下的说明中所使用的结构要素的后缀“模块”及“部”而言，这仅考虑为了便于编写本说明书而给予或混用，自身并不具有互相区别的含义或作用。

图1为本发明一实施例的核酸提取方法的流程图。

参照图1，核酸提取方法包括：步骤S110，向活塞内部空间吸入样本；步骤S210至步骤S280，吸入、混合及排出多个试剂；以及步骤S310至步骤S320，使得经提取的核酸向扩增模块移动。

本发明一实施例的利用提取盒的核酸提取方法经如下步骤进行。

在向活塞内部空间吸入样本的步骤S110中，通过活塞控制棒模块的驱动向活塞上部主体310内部空间吸入配置在提取盒的腔室的样本。

在向活塞内部空间吸入样本的步骤之前，还可包括在向提取盒的各个腔室注入样本及多个试剂之后，在核酸提取装置安装提取盒的步骤。

在将提取盒安装在核酸提取装置之后，使控制棒模块及旋转调节模块与核酸提取装置的驱动部相连接。

在向活塞内部空间吸入第一试剂及第二试剂之后进行混合的步骤S210中，通过旋转调节模块使活塞旋转规定角度来使得活塞下部主体的液体接口与第一试剂腔室接口重叠，使控制棒模块向活塞的上部移动并吸入第一试剂。接着，通过旋转调节模块使活塞再次旋转规定角度来使得活塞下部主体的液体接口与第二试剂腔室接口重叠，使控制棒模块向活塞的上部移动并吸入第二试剂。

接着，控制棒模块沿着上下方向移动，同时，混合内部空间的样本及多个试剂。

接着，通过旋转调节模块使活塞再次旋转规定角度来使得活塞下部主体的过滤器接口与第二试剂腔室接口重叠，使控制棒模块向活塞的下部移动并向第二试剂腔室排出样本及试剂的混合液(步骤S220)。

可通过在活塞下部主体的过滤器接口安装核酸捕集过滤器，来对当排出样本及试剂的混合物时所排出的核酸进行捕集。

通过旋转调节模块使活塞再次旋转规定角度来使得活塞下部主体的液体接口与第三试剂腔室接口重叠，使控制棒模块向活塞的上部移动并吸入第三试剂(步骤S230)。

接着，控制棒模块沿着上下方向移动，同时，混合内部空间的试剂。

通过旋转调节模块使活塞再次旋转规定角度来使得活塞下部主体的过滤器接口与第三试剂腔室接口重叠，使控制棒模块向活塞的下部移动并向第三试剂腔室排出试剂(步骤S240)。

通过旋转调节模块使活塞再次旋转规定角度来使得活塞下部主体的液体接口与第四试剂腔室接口重叠，使控制棒模块向活塞的上部移动并吸入第四试剂(步骤S250)。

接着，控制棒模块沿着上下方向移动，同时，混合内部空间的试剂。

通过旋转调节模块使活塞再次旋转规定角度来使得活塞下部主体的过滤器接口与第四试剂腔室接口重叠，使控制棒模块向活塞的下部移动并向第四试剂腔室排出试剂(步骤S260)。

通过旋转调节模块使活塞再次旋转规定角度来使得活塞下部主体的液体接口与第五试剂腔室接口重叠，使控制棒模块向活塞的上部移动并吸入第五试剂(步骤S270)。

接着，控制棒模块沿着上下方向移动，同时，混合内部空间的试剂。

第五试剂可以为使捕集在核酸捕集过滤器的核酸溶出的溶出试剂。

通过旋转调节模块使活塞再次旋转规定角度来使得活塞下部主体的过滤器接口与主混合珠腔室接口重叠，使控制棒模块向活塞的下部移动并向主混合珠腔室排出试剂(步骤S280)。

排出第五试剂时，使得捕集在核酸捕集过滤器的核酸向主混合珠腔室内部移动。

通过旋转调节模块使活塞再次旋转规定角度来使得活塞下部主体的液体接口与主混合珠腔室接口重叠，使控制棒模块向活塞的上部移动并在吸入主混合珠腔室内部的试剂之后，控制棒模块沿着上下方向移动，同时，混合内部空间的试剂(步骤S310)。

通过旋转调节模块使活塞再次旋转规定角度来使得活塞下部主体的液体接口与扩增模块液体接口重叠，使控制棒模块向活塞的下部移动并使试剂向扩增模块移动(步骤S320)。

以下，参照图2至图4，具体说明提取盒的结构。

图2为用于本发明的提取盒的立体图，图3为用于本发明的提取盒的底面立体图，图4为在图2中示出的提取盒的分解图。

参照图2至图4，核酸提取用提取盒大致可包括第一主体100、第二主体200、活塞300及核酸扩增模块400等。

第一主体100可用作储存多个试剂的用途。

如图所示，可在第一主体100形成有多个腔室110，上述多个腔室110形成相互分离的隔室。在每个腔室110配置互不相同的试剂或样本，各个腔室110形成独立的空间，以使多个试剂互不混合。

第二主体200包括使储存在第一主体100的试剂或样本进行移动的路径。

根据本发明的一实施例，可在第二主体200存在可使液体移动的液体流路及可使空气移动的空气流路，当第二主体200与第一主体100相结合时，为了防止液体的渗漏，可包括配置在上部面的垫板220。若垫板220与提取盒第二主体200相结合，则提取盒第二主体200的液体流路及空气流路通过垫板220来阻隔上部面并形成空间，从而形成完整的流路210。

通过使液体流路与第一主体100相连接来提供可使样本及试剂进行移动或混合的空间。

空气流路起到如下的作用，即，使扩增模块与活塞300的真空控制部位相连接，来对所提取的核酸向扩增模块移动时有可能产生的真空进行控制，防止核酸扩增产物被污染。

可在垫板220形成沿着上下方向贯通垫板220的多个孔。通过多个孔来使提取盒下部的液体流路及空气流路与位于提取盒第一主体100的多个试剂腔室110相连接。

垫板220的中心部以紧贴的方式与活塞下部主体320的底面相结合。

当活塞旋转时，形成在垫板220的中心部的多个孔与活塞下部主体320的过滤器接口或液体接口重叠。

更具体地，可在第二主体200的上部形成多个流路210。每个流路210互不交叉，以从第二主体200的中心部向***部延伸的方式形成。如图所示，一部分流路可使一端配置于相同的圆周上，并且，可使另一端配置于相同的圆周上。

第二主体200的上部可与垫板220相结合。

可在第二主体200的上部形成向下端深陷的放置部201，垫板220能够以啮合的方式与第二主体200上部的放置部201相结合。

垫板220紧贴在第二主体200的上部面，并可封闭多个流路210。上述垫板220可由具有弹性的橡胶或合成树脂形成，以使垫板220可更强劲地紧贴在第二主体200。

可在垫板220形成沿着上下方向贯通垫板220的多个孔。

根据本发明的一实施例，上述多个孔以与多个流路210的末端部分上下重叠的方式配置。换言之，形成在垫板220的多个孔每两个成一对，可通过流路210相连接。

垫板220可包括配置在中心部相同圆周C1上的多个孔221及配置在***部相同圆周C2上的多个孔221。

活塞300可由活塞上部主体310及活塞下部主体320构成。

可在活塞300的上部主体310形成可混合试剂及样本的内部空间，可在上述内部空间配置沿着上下方向移动的活塞300控制棒模块。

活塞控制棒模块可包括：结合部301，与核酸提取装置的驱动部相结合；以及紧贴部302，紧贴在活塞内部空间并沿着上下方向移动。

活塞下部主体320通过与活塞上部主体310相结合来形成一个本体。

活塞下部主体320可与旋转调节模块330相结合。

如图所示，活塞上部主体310***到形成在第一主体100的中心部的孔，活塞下部主体320的轴324***到形成在第二主体200的中心部的孔。

上述活塞下部主体320的轴324以啮合的方式固定于旋转调节模块330，上述旋转调节模块330与第二主体200下端相结合。

核酸扩增模块400可与第一主体100或第二主体200相结合。

可在核酸扩增模块400的内部形成有内部流路210，内部流路210的一端能够以与形成在第二主体200的多个流路210中的至少一个重叠的方式形成。

根据本发明的一实施例，可在核酸扩增模块400设置有固定部件410，上述固定部件410以不使核酸扩增模块400随意分离的方式覆盖核酸扩增模块400并与第一主体100及第二主体200相结合。

第一主体100可包括多个试剂腔室110，每个腔室110以相互隔开的方式形成。

在每个腔室110的下端形成与流路210的一端或在垫板220所形成的多个孔重叠的接口。根据腔室110的用途，接口能够以具有互不相同的半径的方式形成。

各个试剂腔室110包括单一试剂腔室液体接口。各个试剂腔室液体接口通过橡胶垫板220的液体接口连接孔来与提取盒下部的液体流路相连接。样本腔室接口及主混合珠腔室接口分别与单独的样本腔室及主混合珠腔室111相结合。

可使各个样本腔室接口配置在相同圆周上，可使各个主混合珠腔室接口配置在其他圆周上。

样本腔室可包括提取样本所需的多个干珠，主混合珠腔室可包括核酸扩增所需的多个干珠。

样本腔室及主混合珠腔室分别与样本腔室接口及主混合珠腔室接口相连接，各个接口通过与形成在垫板的孔及提取盒第二主体200的流路相连接来形成可使液体移动的结构。

根据如上所述的利用提取盒的核酸提取方法，可通过利用与现有结构不同的提取盒来在一个提取盒内依次处理多个样本。可由此减少核酸提取时间并简化装置的结构。

并且，根据本发明一实施例的利用提取盒的核酸提取方法，由于可向提取盒内的试剂腔室排出已使用完的废液，因此，可有效地进行核酸提取工序。

以上说明的利用提取盒的核酸提取方法并不局限于以上说明的实施例中的结构及方法，可选择性地组合各个实施例的全部或一部分来使上述实施例产生多种变形。