阅读说明：本技术 一种小分子羊胎素纳米化的方法 (Method for nanocrystallization of micromolecular sheep placenta ) 是由 袁玉国 钟平 王佳琳 蔡何清 李玲 于 2021-09-02 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种小分子羊胎素纳米化的方法,包括以下步骤：步骤(1)、A溶液与B溶液的配制；其中,A溶液配制方法为：将小分子羊胎素原液用去离子水稀释,再加入含1 MCa～(2+)溶液,配成0.02～0.1M的Ca～(2+)溶液,室温放置10～30 min,得到A溶液；B溶液配制方法为：将含0.02～0.1M CO-(3)～(2-)溶液与0.02～0.1M HPO-(4)～(2-)溶液混合,摇匀,得到B溶液；步骤(2)、溶液A与B溶液混合处理后获得小分子羊胎素纳米化的小分子羊胎素纳米复合材料。本发明方法先进科学,制备的纳米颗粒小于50 nm,分散性好,无异味,提高了小分子羊胎素生物稳定性、提高其穿透皮肤的效率和生物活性,且小分子羊胎素纳米材料对动物眼睛没有明显刺激作用,有较好的安全性。(The invention relates to a method for nanocrystallizing micromolecule sheep placenta, which comprises the following steps: step (1), preparing solution A and solution B; the preparation method of the solution A comprises the following steps: diluting the stock solution of small molecule sheep placenta extract with deionized water, and adding 1 MCa 2+ Preparing 0.02-0.1M Ca from the solution 2+ Standing the solution at room temperature for 10-30 min to obtain solution A; the preparation method of the solution B comprises the following steps: will contain 0.02-0.1M CO 3 2‑ Mixing the solution with 0.02-0.1M HPO 4 2‑ Mixing the solutions, and shaking to obtain solution B; and (2) mixing the solution A and the solution B to obtain the micromolecular sheep placenta element nano-composite material. The method of the invention is advanced scientifically and prepared nano particlesThe particle size is less than 50nm, the dispersibility is good, no peculiar smell exists, the biological stability of the micromolecule sheep placenta is improved, the skin penetrating efficiency and the biological activity of the micromolecule sheep placenta are improved, and the micromolecule sheep placenta nano material has no obvious stimulation to the eyes of animals and has better safety.)

一种小分子羊胎素纳米化的方法

技术领域

本发明涉及一种小分子羊胎素纳米化的方法，属于生物技术和化妆品产品制备领域。

背景技术

纳米材料具有量子尺寸效益、界面效应和宏观量子隧道效应等，在生物学方面表现出许多特殊性质，如良好的透过性、较大的溶解性和吸附性等。纳米药物可增大其暴露于介质中的表面积，促进药物的溶解，增加药物的稳定性；又可减小粒径，增大了药物在体内的分布，从而提高药物的生物利用度。因此，纳米材料具有某些不同于传统材料的优异特性。

目前，小分子羊胎素在化妆品中应用较为广泛，但目前的方法提取出的小分子羊胎素含有的很多成分在皮肤中的渗透性需进一步提高，其所含多肽、活性成分等极不稳定、容易降解，常温下不易保存，且小分子羊胎素溶液冻干后呈微黄色粘稠状，分散性不好，有腥味，且颜色微黄。借助纳米技术,将小分子羊胎素处理后包被在碳酸钙纳米颗粒中，使其具有很好的分散性，除去血色和异味，从而消除由于添加羊胎素导致在化妆品产品中存在的异味，并可增加小分子羊胎素在皮肤中的吸收效果,提高疗效、提高小分子羊胎素的生物利用度。

发明内容

本发明的目的是针对上述现有技术的不足，提供一种小分子羊胎素纳米化的方法。

本发明的目的是这样实现的：一种小分子羊胎素纳米化的方法，其特征是，包括以下步骤：

步骤（1）、A溶液与B溶液的配制；

其中，A溶液配制方法为：将小分子羊胎素原液用去离子水稀释，再加入含1 M Ca²⁺溶液，配成0.02~0.1M的Ca²⁺溶液，室温放置10~30 min，得到A溶液；

B溶液配制方法为：将含0.02~0.1 M CO₃ ^2-溶液与0.02~0.1 M HPO₄ ^2-溶液混合，摇匀，得到B溶液；

步骤（2）、溶液A与B溶液混合处理后获得小分子羊胎素纳米化的小分子羊胎素纳米复合材料。

步骤（1）中，配制A溶液物质为可溶性钙溶液，包括氯化钙、硝酸钙。

步骤（1）中， 配制B溶液物质为可溶性碳酸盐溶液和磷酸盐溶液，包括碳酸钠，磷酸氢二钠。

该方法适用于其他如化妆品类的小分子多肽类纳米材料的合成。

步骤（1）中，含0.02~0.1 M CO₃ ^2-溶液与0.02~0.1 M HPO₄ ^2-溶液以一定体积比例0~100%混合。

步骤（2）中，具体是：将B液缓慢滴加入A液中，搅拌反应溶液，此时可逐渐观察到溶液呈白色、雾状，加完后，再搅拌一段时间,将反应后的溶液在高速离心机上离心，弃上清，用无菌去离子水吹打分散白色沉淀，再次离心，弃上清，加入无菌去离子水，吹打分散白色沉淀，再次离心，弃上清，得到小分子羊胎素纳米化的小分子羊胎素纳米复合材料。

将沉淀和小分子羊胎素原液分别放置在-80℃超低温冰箱中预冷冻,然后在超低温冷冻干燥仪中冻干，获得白色、无味和直径小于50 nm的颗粒状物质，而未纳米化处理的小分子羊胎素原液冻干后为黄色粉末状。

小分子羊胎素纳米化材料和小分子羊胎素原液冻干后，分别用扫描电镜、傅里叶红外光谱仪进行表征、分析，验证纳米颗粒的大小及形态；用无菌去离子水溶解小分子羊胎素纳米化材料，无菌去离子水与小分子羊胎素纳米化材料的质量浓度比为10:1，吹打分散，得到混合溶液，将混合溶液0.3 ml滴入猫或兔子的左眼睛，右眼滴0.3 ml无菌去离子水作对照，共2只猫和2只兔子，连续滴7天，每天1次，观察眼睛反应，是否有红肿、流泪症状，确定小分子羊胎素纳米复合材料的安全性。

本发明方法先进科学，提供的一种小分子羊胎素纳米化的方法，包括以下步骤：（1）A溶液与B溶液的配制；（2）A与B混合处理后获得小分子羊胎素纳米复合材料。其中，步骤（1）具体是：A液：将小分子羊胎素原液用去离子水稀释，再加入含1 M Ca²⁺溶液，配成0.02~0.1M的Ca²⁺溶液，加入肝素钠混匀,室温放置10~30 min；B液：将含0.02~0.1 M CO₃ ^2-溶液与0.02~0.1 M HPO4^2-溶液混合，摇匀；步骤（2）具体是：将B液缓慢滴加入A液中，搅拌反应溶液，此时可逐渐观察到溶液呈白色、雾状，加完后，再搅拌一段时间,将反应后的溶液在高速离心机上离心，弃上清，用无菌去离子水吹打分散白色沉淀，再次离心，弃上清，加入无菌去离子水，吹打分散白色沉淀，再次离心，弃上清，将沉淀和小分子羊胎素原液分别放置在-80℃超低温冰箱中预冷冻,然后在超低温冷冻干燥仪中冻干，可获得白色、无味和直径小于50nm的颗粒状物质（图1），而未纳米化处理的小分子羊胎素原液冻干后为黄色粉末状（图2）。

小分子羊胎素纳米化材料和小分子羊胎素原液冻干后，分别用扫描电镜（图3，4）、傅立叶红外光谱（图5）进行表征、分析，验证纳米颗粒的大小及形态等。用无菌去离子水溶解小分子羊胎素纳米化材料（1:10，W/V），吹打分散，将混合溶液0.3 ml滴入猫或兔子的左眼睛，右眼滴0.3 ml超纯水作对照，共2只猫和2只兔子，连续滴7天，每天1次，观察眼睛反应，是否有红肿、流泪等症状（图6），确定小分子羊胎素纳米材料的安全性。

本发明方法先进科学，利用本发明技术将小分子羊胎素中的有效成份装载在钙纳米材料中，制备的纳米颗粒小于50nm，成球形，颜色为白色，分散性好，无味，可增加小分子羊胎素中有效成分的生物稳定性、提高其穿透皮肤的效率和生物活性，且小分子羊胎素纳米材料对动物眼睛没有明显刺激作用，有较好的安全性。

附图说明

图1是小分子羊胎素纳米材料冻干后形态；

图2是小分子羊胎素原液冻干后形态；

图3是小分子羊胎素纳米材料冻干后扫描电镜分析；

图4是小分子羊胎素原液冻干后扫描电镜分析；

图5是小分子羊胎素纳米材料和羊胎素原液冻干后傅立叶红外光谱分析；

图6是滴入小分子羊胎素纳米材料后猫和兔子眼睛的情况。

具体实施方式

下面结合附图以及附图说明对本发明做进一步说明。

一种小分子羊胎素纳米化的方法，步骤（1）、配制A溶液与B溶液；步骤（2）、将A溶液与B溶液混合处理后获得小分子羊胎素纳米复合材料。

步骤（1）具体是：A溶液：将5 ml小分子羊胎素原液（通过发明专利技术（ZL200610085611.6）方法制备而成）与去离子水（1:2）混合，用羊胎素混合液将1 M CaCl₂储液稀释成0.02 CaCl₂溶液，混匀后室温放置30 min；

B溶液：用去离子水将1 M Na₂CO₃和Na₂HPO₄储液分别稀释成0.02 M溶液，将11.4ml 0.02 M Na₂CO₃与8.6 ml 0.02 M Na₂HPO₄混合，摇匀；

步骤（2）具体是：将B溶液缓慢加入到A溶液中，同时用磁力搅拌器搅拌溶液（30-50转/分钟），此时可观察到溶液中有白色、雾状出现，B溶液加完后，再继续搅拌10 min,然后将反应溶液在高速离心机上离心，条件4℃、10000转/min，离心时间5 min，弃上清，用5 ml去离子水吹打分散白色沉淀，按上述条件再次离心，弃上清，用5 ml去离子水吹打分散白色沉淀，按上述条件再次离心，弃上清，将白色沉淀物和5 ml小分子羊胎素原液在-80℃超低温冰箱中冷冻2 h，然后在超低温冷冻干燥仪中冻干24~48 h，可获得白色、无味、小颗粒状物质（图1），而小分子羊胎素原液冻干后为黄色粉末状粘稠样物（图2）。将小分子羊胎素纳米化冻干产物与小分子羊胎素原液冻干产物用扫描电镜观察，可见小分子羊胎素纳米化冻干产物成白色圆形颗粒状，直径小于50 nm（图3），而小分子羊胎素原液冻干后成微黄色片状（图4）。傅立叶红外光谱分析结果表明（图5），小分子羊胎素原液的全部特有吸收峰均存在于小分子羊胎素纳米化冻干产物中的吸收峰图中，表明小分子羊胎素纳米化冻干产物中含有小分子羊胎素原液中的所有物质。用无菌去离子水溶解小分子羊胎素纳米材料（1:10，W/V），将混合溶液0.3 ml滴入猫或兔子的左眼睛，右眼滴0.3 ml超纯水作对照，共2只猫和2只兔子，连续滴7天，每天1次，观察，猫和兔子左、右眼均无红肿、流泪等症状（图6），可确定小分子羊胎素纳米材料有很好的安全性。