具体实施方式

现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。

另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。

除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。

关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。

本发明实施例所选用大鼠为购自湖南长沙天勤生物技术有限公司的四周龄雄性SPF级SD大鼠，体重约110-120g[许可证号：SCXK(湘)2014-0011]。饲养条件为：清洁级动物房，温度为24±2℃，相对湿度为45-55％，人工照明(12小时光照/12小时黑暗)。动物食用标准维持颗粒饲料[饲料生产许可证号：SCXK(川)2015-01]，自由进食饮水(双蒸水)，为减少实验大鼠额外的NP摄入，选用材质为聚丙烯酰胺的鼠笼。

本发明选用的NP(纯度≥99％)，厂家：东京化成株式会社；玉米油为金龙鱼牌玉米油。

茶叶的准备：凤冈锌硒茶(产地：贵州省遵义市凤冈县。生产商：万壶缘锌硒茶叶有限公司。Zn含量：锌含量为55.4-103.2mg/kg，硒含量为1.38-2.03mg/kg)和普通绿茶(产地：贵州省凤冈县。生产商：贵州味道茶叶有限公司)。

本发明实施例使用的锌硒茶和绿茶均为水煎剂。水煎剂制备步骤为：称取一定质量的茶叶，剪碎，放入3倍质量沸腾的双蒸水(避免用矿泉水等，引入无机离子)中，煎煮10min，过滤，滤渣继续加入3倍质量沸腾的双蒸水，煎煮10min，连续3次，合并3次所得滤液，减压浓缩至茶叶含量为0.2g/mL，2000r/min，常温离心10min，取上清液过0.22μm微孔滤膜，冷藏备用(-20℃)，作为水煎剂。

本发明实施例中数据处理以均数±标准差表示，采用SPSS18.0软件进行统计学分析，多组间均数比较用单因素方差分析，两两比较采用LSD和SNK-q检验，检验水准α＝0.05。

实施例1

大鼠分组及染毒：

选取四周龄雄性SPF级SD大鼠40只，体重约110-120g，适应性喂养一周，然后随机分4组，分别为对照组(Control group)，NP高剂量组(NP group)，绿茶干预组(NP+Greentea group)和锌硒茶干预组(NP+Znse tea group)，每组10只。每日8：00-9：00空腹灌胃一次，对照组给玉米油5mL/kg/d进行灌胃；NP高剂量组给NP灌胃，剂量为40mg/kg/d；绿茶干预组给绿茶水煎剂和NP灌胃，绿茶剂量为1g/kg/d，NP剂量为40mg/kg/d；锌硒茶干预组给锌硒茶水煎剂和NP灌胃，锌硒茶剂量为1g/kg/d，NP剂量为40mg/kg/d，持续灌胃6个月。

实施例2

持续灌胃6个月后，测定大鼠的体重，结果见图2(n＝10；*表示与对照组比较P<0.05)；从图2中可以看出，对NP染毒的大鼠进行茶叶干预后发现大鼠体重降低，各组之间大鼠体重趋势为对照组＜锌硒茶干预组＜绿茶干预组＜NP高剂量组，差异有统计学意义(F＝4.265，P＝0.01)。

实施例3

持续灌胃6个月后，采用HPLC法检测大鼠海马组织中NP的浓度：

大鼠海马组织取样：大鼠断头处死后，用组织剪在颅骨和颈椎连接处剪断。组织剪头部伸入枕骨大孔，尽量贴着骨头。组织剪从枕骨大孔处伸入，朝向同侧眼眶方向，贴着骨头剪，剪到眼眶。从小脑处将脑组织向上推起，用小剪刀剪断脑神经即可以得到整个全脑，用钩镊轻轻地将海马组织分离出来(冰上操作)，取好的海马组织置于负80℃保存。

测定方法：取海马组织100mg放入玻璃试管，加入2ml正己烷和乙醚的混合液(正己烷:乙醚＝7:3)匀浆，3000r/min离心10min，取上清于另一干净试管50℃在通风橱中水浴蒸干，再用0.5ml乙腈洗脱于平底玻璃内插管中，放入进样瓶上机检测，检测条件：流动相:乙腈:冰乙酸＝85:15；激发波长275nm，发射波长312nm；柱温40℃；进样量10μl，流速1.0ml/min，NP出峰时间约在3.4min。

检测结果见图3(n＝10，*表示与对照组比较P<0.05，&表示与NP高剂量组比较P<0.05)。从图3中可以看出，大鼠NP染毒后，海马组织中NP蓄积水平明显升高，茶叶干预后的NP蓄积水平则较NP高剂量组稍有下降，与空白对照组比较有统计学差异(F＝15.182，P＜0.01)，其中锌硒茶干预组效果优于绿茶干预组。

实施例4

持续灌胃6个月后，观察大鼠的行为学：

明暗箱实验检测大鼠焦虑样行为：

大鼠明暗箱由聚丙烯动物盒构成，大小为44×21×21cm，明箱占1/2，暗箱占1/2。明箱暗之间有一小洞可供大鼠自由通过。记录5min内小鼠在明暗箱活动的时间。在暗区停留时间越长表示大鼠焦虑症状越严重。

观察结果见图4(n＝10，*表示与对照组比较P<0.05，&表示与NP高剂量组比较P<0.05)，从图4中可以看出，NP高剂量组大鼠暗区停留时间与对照组相比有延长趋势。茶叶干预后暗区停留时间则较NP高剂量组有所下降，锌硒茶干预组较普通茶干预组下降更明显，与对照组比较，差异有统计学意义(F＝8.334，P<0.01)。

高架十字迷宫实验检测大鼠焦虑样行为：

迷宫装置由两个张开的臂(50×10cm)和两个闭合的臂(50×10cm，高50cm)组成。录大鼠300秒内闭合臂停留的时间和进入次数。进入闭合臂次数越多及停留时间越长，表示焦虑症状越严重。

观察结果见图5(n＝10，*表示与对照组比较P<0.05，&表示与NP高剂量组比较P<0.05)，从图5中可以看出，与对照组相比，NP高剂量组大鼠进入闭合臂的次数明显增加，茶叶组进入闭合臂次数较NP高剂量组进入次数少，且锌硒茶干预组大鼠闭合臂进入次数少于绿茶干预组(F＝4.043，P＝0.014)。

实施例5

持续灌胃6个月后，观察大鼠海马组织病理学变化及NP对海马组织皱缩神经细胞数量的影响：

用氨基甲酸乙酯(0.5ml/100g)麻醉大鼠，取出海马并用4％多聚甲醛固定，包埋，切片，脱蜡，染色和照相。观察海马神经元的形态和细胞水平的变化。

各组大鼠脑海马组织病理切片图见图6，从图6中可以看出，镜下，对照组细胞核形态完整，核圆而大，染色浅，胞质丰富。NP高剂量组和茶叶干预组细胞排列紊乱、稀疏(方框框选处)。茶叶干预组海马组织损伤较NP高剂量组轻，茶叶干预组的细胞排列大致呈一条直线，但NP组细胞排列紊乱，稀疏。均可见较多变性、深染、固缩的神经细胞(箭头所指处)。

对不同处理组间大鼠海马组织皱缩神经细胞数量进行细胞计数，计数结果见图7(n＝10，*表示与对照组比较P<0.05，&表示与NP高剂量组比较P<0.05)。从图7中可以看出，NP染毒后，平均每倍镜下皱缩细胞数量增加。茶叶干预后海马组织病理损伤较NP高剂量组轻，其中锌硒茶干预组海马组织损伤最轻(F＝13.948，P＜0.01)。

实施例6

持续灌胃6个月后，采用ELISA法检测海马组织中BDNF含量：

取50mg海马组织加入一定量的PBS(PH7.4)，用匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟(2000-3000转/分)后仔细收集上清。将上清液收集在EP管中进行后续实验。实验严格按照ELISA试剂盒中的说明书进行。

不同处理组间大鼠海马组织中BDNF的含量测定结果见图8(n＝6，*表示与对照组比较P<0.05)。从图8中可以看出，有NP暴露史的大鼠血清中BDNF水平均明显低于对照组，两茶叶组结果BDNF水平仍稍有降低，其中绿茶干预组比锌硒茶干预组降低更为明显。

脑源性神经营养因子(Brain-derived neurotrophic factor，BDNF)在情绪和焦虑症的发病中起着一个重要的作用。BDNF含量水平的变化也是人体焦虑症产生时的重要指标之一。实施例6的实验结果显示，NP长期暴露后会导致BDNF含量减少，很可能是NP暴露后，导致海马组织损伤，影响了海马的正常生理功能，从而导致了BDNF减少。茶叶干预后发现，绿茶干预组及锌硒茶干预组BDNF水平均较NP处理组有所降低，表明茶叶干预后会减轻NP的神经毒作用，其中锌硒茶的干预作用更为显著。

以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。