一种以食蟾虫治疗耐药肺结核的方法
阅读说明：本技术 一种以食蟾虫治疗耐药肺结核的方法 (Method for treating drug-resistant pulmonary tuberculosis by eating toad pests ) 是由 赵荣华 谢春祥 于 2021-08-27 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种以食蟾虫治疗耐药肺结核的方法,用千佛菌通过发酵器发酵百部、紫河车、川贝母、蛤蚧、白及、天门冬、北沙参、桑白皮、三七、甘草、猫爪草等中草药并与食蟾虫联合制备成食蟾虫水蜜丸。所制备食蟾虫水蜜丸通过调节人体Thl／Th2细胞应答平衡治疗耐药肺结核,副作用小；千佛菌发酵中草药能够有效提高中草药中活性成分的提取、增强活性,并简便各中草药提取过程；所设计的提取器能够有效监控发酵环境中温度、水分和生长情况,保证发酵程度的均一性。(The invention discloses a method for treating drug-resistant tuberculosis by eating toad, which is characterized in that Chinese herbal medicines such as stemona root, human placenta, bulbus fritillariae cirrhosae, gecko, rhizoma bletillae, radix asparagi, radix glehniae, white mulberry root-bark, pseudo-ginseng, liquorice, radix ranunculi ternati and the like are fermented by using Qianfo through a fermenter and are combined with the eating toad to prepare the water-honeyed pill for eating the toad. The prepared toad venom honeyed pill treats drug-resistant tuberculosis by regulating the balance of human body Thl/Th 2 cell response, and has small side effect; the Chinese herbal medicine fermented by the Qianfo bacterium can effectively improve the extraction of active ingredients in the Chinese herbal medicine and enhance the activity, and the extraction process of each Chinese herbal medicine is simple and convenient; the designed extractor can effectively monitor the temperature, moisture and growth conditions in the fermentation environment, and the uniformity of the fermentation degree is ensured.)
技术领域
本发明涉及肺结核领域，特别是涉及一种以食蟾虫治疗耐药肺结核的方法。
背景技术
我国是世界上结核病负担较重的国家之一，目前我国结核病疫情呈患病率高、死亡率高、耐药率高(初始耐药率、继发耐药率)、年递降率低(肺结核患病率年递降率，涂阳患病率年递降率)这三高一低的态势。有调查显示，我国结核病耐药率高达46%，耐多药的初始耐药率为7.6%，获得性耐药率为17.1%，总耐多药率10.7%。耐多药结核患者的传染性强，治疗费用高，患者病情往往难以控制，从而带来巨大困扰以及严重的经济负担。因此，迫切需要一种针对耐药肺结核的治疗案。
发明内容
针对上述情况，本发明之目的在于提供一种以食蟾虫治疗耐药肺结核的方法，以提高耐药肺结核病的治疗效果。
其解决的技术方案是，
一种以食蟾虫治疗耐药肺结核的方法，该方法由以下步骤组成：S1，将百部、紫河车、川贝母、蛤蚧洗净、干燥；白及、天门冬、北沙参、桑白皮、三七、甘草、猫爪草块根洗净，润湿干燥；S2，将经S1步骤处理过的药材与大豆粉按比例混合，粉碎研磨，过80-100目筛，然后装入发酵皿中，用压实板压实，挤压出凹体柱，100-120℃下灭菌30-60min，然后冷却至室温，放至发酵台的凹陷处，控制湿度和温度，然后喷洒千佛菌菌液，培养5-7天；S3，将已长出的菌丝体的固体中草药取出，50℃烘干，打碎，从中称取40g粉末，加入95%乙醇400mL，超声震荡60min，过滤残渣后，再次以95%酒精400mL超声震荡60min萃取滤渣，过滤，合并滤液，加入阿胶，煮沸并搅拌溶解，10-20min后过滤，滤液经减压浓缩至40mL，干燥成粉末后过80目筛，得中药菌粉；S4，将中药菌粉与食蟾虫粉末、混合均匀，然后加入蜂蜜水混合，制丸，70℃干燥，得食蟾虫水蜜丸。
进一步的，所述S2步骤中的百部、白及、天门冬、川贝母、紫河车、北沙参、蛤蚧、三七、甘草、桑白皮、猫爪草、大豆粉的质量体积比为：25-35g:23-32g:18-22g:20-25g:16-21g:22-27g:18-26g:13-18g:5-8g:12-18g:19-23g:10-12g；所述的S3步骤中的阿胶的添加量为3-4g。
进一步的，所述S4步骤中药菌粉、食蟾虫粉末、蜂蜜水的质量体积比为：12-15g:12-15g:20-25mL。
进一步的，所述的千佛菌的培养条件为：温度32.5℃，湿度68.0%，通气量78%，时间5天，接种量2-5mL。
进一步的，所述的蜂蜜水制备方法为：将蜂蜜加热，使温度达到119-122℃，炼成老蜜，老蜜冷却到75℃时，加入0.1倍质量的开水，混匀，得蜂蜜水。
进一步的，所述的食蟾虫粉末的制备方法为：（1）用清水清洗活体蟾蜍，然后将蟾蜍放入混合液中，72h后，取出，再次清洗，击打致昏，最后将蟾蜍打浆均匀，放入待产的大头金蝇进行产蛆，收蛆，清洗，得鲜活的食蟾虫；（2）将食蟾虫加热至45℃，50℃干躁14h除去水份，研磨粉碎，过80目筛，得食蟾虫粉末；所述的混合液的制备方法为：取厚朴100克、枳实100克、芒硝100克、大黄100克，混合粉碎，水煎30min，过滤，向滤液中加入清水25-30千克，水温保持在26-28℃。
进一步的，所述的发酵器包括罐体，罐体下部设有发酵台，发酵台中间有凹陷，发酵台上可盛放发酵皿，发酵皿与凹陷契合，罐体上部设有菌液注入器，菌液注入器由多个第一管道组成，第一管道下面均布有多个圆口，以供菌液滴落，第一管道设有菌液注入口，罐体上部设有洒水器，洒水器由多个第二管道组成，第二管道下面均布有多个圆口，以供水滴落，第二管道连通注水口，罐体顶部设有温度检测器和湿度检测器，罐体右侧部设有灯，罐体上设有进气口和出气口，罐体左侧设有进出口，以供发酵皿进出，进出口由透明玻璃门开合，罐体外侧设有夹层，夹层可连通水流使水流进出夹层，夹层外侧设有控温加热器，整体由支柱支撑。
进一步的，所述的发酵皿配套使用的有压实板，所述的压实板一面设有凸起，凸起的形状与发酵皿一致，压实板的另一面设有均布有多个突起柱，当发酵皿中盛放药材与大豆粉的混合粉末时，凸起可将药材与大豆粉的混合粉末压实，压实后，由压实板另一面的突起柱将药材与大豆粉的混合粉末挤压出多个凹体柱，将发酵皿放入发酵台的凹陷处后，凹体柱与第一管道的圆口在同一垂直线上。
进一步的，所制备的食蟾虫水蜜丸应用于治疗耐药肺结核。
百部味甘苦，微温，功专润肺止咳；紫河车性甘咸，味温，为血肉有情之品，功在补肾益精，养血益气；猫爪草味甘辛，微温，功专化痰散结，解毒消肿；三七味甘微苦，功善活血化瘀，消肿定痛；阿胶味甘，性平，有滋阴润燥补血止血之功；蛤蚧味咸，性平，补肺益肾，定喘止嗽；北沙参味甘、微苦，微寒，功在养阴清肺；甘草，味甘，性平，补脾益气，清热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸药；川贝母，味甘苦；性微寒，清热润肺，化痰止咳，散结消肿；白及，味苦甘涩，性微寒，收敛止血，消肿生肌；天门冬，味苦，性寒，具有滋阴润燥，清肺降火之功效；桑白皮，味甘辛，性寒，泻肺平喘，利水消肿；千佛菌，味甘平，益气健脾；补虚扶正。以百部、天门冬为君药，抗痨杀虫，滋阴清热，润肺止咳以治疗阴虚之本；紫河车、猫爪草、蛤蚧、川贝母、白及、桑白皮等为臣药，增强君药滋阴润肺抗痨杀虫之功；以阿胶、北沙参、三七粉等为佐药，协助君臣滋阴养血以扶正，化痰散结、祛瘀消痈；以甘草为使药，补脾解毒祛痰止咳，调和诸药。方中的北沙参、桑白皮、白及与蒸百部、天门冬相配，润肺燥滋肾阴，填补受损之阴；猫爪草既可散结化痰以治痰热之标，亦可清肺热，阻止热盛和伤阴的循环；阿胶助蛤蚧补肺；三七粉、川贝母相配则有活血化瘀、消肿止痛之效。
蟾蜍，性辛凉，有毒，破症结，行水湿，化毒，杀虫，定痛。治疔疮，发背，阴疽瘰疬，恶疮，症瘕癖积，臌胀，水肿，小儿疳积，慢性气管炎；五谷虫，性咸寒，清热，消滞；为了充分利用蟾蜍和五谷虫的价值，减小蟾蜍毒性，本申请以蟾蜍为食，饲养五谷虫而得到的食蟾虫药物活性高，毒性小，具有较强的抗肿瘤活性和消炎杀毒作用，将其与本申请中的其它中草药联合使用，对耐药性肺结核具有较好的治疗效果。
传统的中药炮制，其加工条件复杂以及对中药的利用率极低等不足，大大消耗了中药资源，而微生物菌种发酵中药一般是在常温、常压的环境下发酵，反应条件相对温和，同时菌种在生长代谢时所产生的一系列酶类代谢产物，如纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、淀粉酶、蛋白酶等可破坏植物的细胞壁，促进有效成分溶出，并能将中药中的糖类、蛋白质、纤维等成分进一步分解、转化为机体易吸收的小分子物质，从而使中药有效成分得到很大程度的保留的同时增强药效。同时这些酶类物质还能与中药中的某些特殊成分发生互作，并对其活性成分进行修饰，促使新物质的形成并降低中药中有毒成分的含量。为了进一步提高药材中的活性物质，更好的发挥治疗效果，本申请将利用千佛菌发酵中本申请中的中草药，通过多次尝试调配，最后加工萃取得到的中药菌粉与食蟾虫并用对耐药肺结核病具有很好的治疗效果，同时也免除了对不同中药材用不同方法制备提取的繁琐过程。
在利用千佛菌发酵中本申请的中草药的过程中，为了保证发酵的质量，设计了发酵器，通过菌液进入第一管道喷洒至发酵皿的中草药中，同时利用第二管道喷洒水调控湿度，利用夹层中的水控制温度，利用发酵罐中的灯和透明玻璃门观察菌的生长情况，加大了对发酵环境中温度、水分和生长情况的监控，保证了发酵程度的均一性，同时减少了受污染的机会。
由于以上技术方案的采用，本发明与现有技术相比具有如下优点；
1.本发明将食蟾虫与百部、紫河车、川贝母、蛤蚧、白及、天门冬、北沙参、桑白皮、三七、甘草、猫爪草、千佛菌联合使用，制备的食蟾虫水蜜丸通过调节人体Thl／Th2细胞应答平衡，从而治疗耐药肺结核，副作用小；
2.本发明通过用千佛菌发酵百部、紫河车、川贝母、蛤蚧、白及、天门冬、北沙参、桑白皮、三七、甘草、猫爪草等中草药，能够有效提高中草药中活性成分的提取、增强活性，并简便各中草药提取过程；
3.本发明为了保证发酵的质量，设计的发酵器，能够有效监控发酵环境中温度、水分和生长情况，保证发酵程度的均一性，减少了发酵过程中受污染的机会。
附图说明
图1为本发明一种发酵器结构图；
图2为本发明一种压实板与发酵皿的配套使用方式图；
图3为本发明一种压实板与发酵皿的配套使用方式图。
具体实施方式
有关本发明的前述及其他技术内容、特点与功效，在以下配合参考附图1对实施例的详细说明中，将可清楚的呈现。以下实施例中所提到的结构内容，均是以说明书附图为参考。
实施例1
一种以食蟾虫治疗耐药肺结核的方法，该方法由以下步骤组成：S1，将百部、紫河车、川贝母、蛤蚧洗净、干燥；白及、天门冬、北沙参、桑白皮、三七、甘草、猫爪草块根洗净，润湿干燥；S2，将经S1步骤处理过的药材与大豆粉按比例混合，粉碎研磨，过80目筛，然后装入发酵皿中，用压实板压实，挤压出凹体柱，100℃下灭菌30min，然后冷却至室温，放至发酵台的凹陷处，控制湿度和温度，然后喷洒千佛菌菌液，培养5天；S3，将已长出的菌丝体的固体中草药取出，50℃烘干，打碎，从中称取40g粉末，加入95%乙醇400mL，超声震荡60min，过滤残渣后，再次以95%酒精400mL超声震荡60min萃取滤渣，过滤，合并滤液，加入阿胶，煮沸并搅拌溶解，10min后过滤，滤液经减压浓缩至40mL，干燥成粉末后过80目筛，得中药菌粉；S4，将中药菌粉与食蟾虫粉末、混合均匀，然后加入蜂蜜水混合，制丸，70℃干燥，得食蟾虫水蜜丸，每粒重量为0.10g。
所述S2步骤中的百部25g、白及23g、天门冬18g、川贝母20g、紫河车16g、北沙参22g、蛤蚧18g、三七13g、甘草5g、桑白皮12g、猫爪草19g、大豆粉10g；所述的S3步骤中的阿胶的添加量为3g。
所述S4步骤中药菌粉12g、食蟾虫粉末12g、蜂蜜水20mL。
所述的千佛菌的培养条件为：温度32.5℃，湿度68.0%，通气量78%，时间5天，接种量3mL。
千佛菌(灰树花)购自华中农业大学菌种实验中心；
将菌种活化后，接种至PDSA培养基平板上，于25℃恒温下培养3天。然后接种至含S1步骤处理过的药材与大豆粉为3％的培养基上，于25℃恒温下培养1天，然后将稀释10倍，得千佛菌菌液，含量为；所述的PDSA培养基制备方法为：马铃薯(去皮)100g、葡萄糖10g、磷酸氢二钾1.5g、硫酸镁0.8g、琼脂10g，蒸馏水定容至500mL，高压灭菌后备用；所述的药材与大豆粉为3％的培养基其余97%为PDSA培养基不含琼脂的成分，配制方法同PDSA培养基。
所述的蜂蜜水制备方法为：将蜂蜜加热，使温度达到119℃，炼成老蜜，老蜜冷却到75℃时，加入0.1倍质量的开水，混匀，得蜂蜜水。
所述的食蟾虫粉末的制备方法为：（1）用清水清洗活体蟾蜍5kg，然后将蟾蜍放入混合液中，72h后，取出，再次清洗，击打致昏，最后将蟾蜍打浆均匀，放入待产的大头金蝇进行产蛆，收蛆，清洗，得鲜活的食蟾虫；（2）将食蟾虫加热至45℃，50℃干躁14h除去水份，研磨粉碎，过80目筛，得食蟾虫粉末；所述的混合液的制备方法为：取厚朴100克、枳实100克、芒硝100克、大黄100克，混合粉碎，水煎30min，过滤，向滤液中加入清水25千克，水温保持在26℃。
如图1，所述的发酵器包括罐体1，罐体1下部设有发酵台2，发酵台2中间有凹陷，发酵台2上可盛放发酵皿3，发酵皿3与凹陷契合，罐体1上部设有菌液注入器，菌液注入器由多个第一管道401组成，第一管道401下面均布有多个圆口403，以供菌液滴落，第一管道401设有菌液注入口402，罐体1上部设有洒水器，洒水器由多个第二管道501组成，第二管道501下面均布有多个圆口，以供水滴落，第二管道连通注水口502，，罐体1顶部设有温度检测器9和湿度检测器10，罐体1右侧部设有灯6，罐体1上设有进气口801和出气口802，罐体1左侧设有进出口，以供发酵皿3进出，进出口由透明玻璃门7开合，罐体1外侧设有夹层11，夹层11可连通水流使水流进出夹层11，夹层11外侧设有控温加热器12，整体由支柱13支撑。
如图2，图3，所述的发酵皿3配套使用的有压实板301，所述的压实板301一面设有凸起303，凸起303的形状与发酵皿3一致，压实板301的另一面设有均布有多个突起柱302，当发酵皿3中盛放药材与大豆粉的混合粉末时，凸起303可将药材与大豆粉的混合粉末压实（图2），压实后，由压实板301另一面的突起柱302将药材与大豆粉的混合粉末挤压出多个凹体柱（图3），将发酵皿3放入发酵台2的凹陷处后，凹体柱与第一管道401的圆口403在同一垂直线上。
实施例2
一种以食蟾虫治疗耐药肺结核的方法，该方法由以下步骤组成：S1，将百部、紫河车、川贝母、蛤蚧洗净、干燥；白及、天门冬、北沙参、桑白皮、三七、甘草、猫爪草块根洗净，润湿干燥；S2，将经S1步骤处理过的药材与大豆粉按比例混合，粉碎研磨，过100目筛，然后装入发酵皿中，用压实板压实，挤压出凹体柱，110℃下灭菌45min，然后冷却至室温，放至发酵台的凹陷处，控制湿度和温度，然后喷洒千佛菌菌液，培养6天；S3，将已长出的菌丝体的固体中草药取出，50℃烘干，打碎，从中称取40g粉末，加入95%乙醇400mL，超声震荡60min，过滤残渣后，再次以95%酒精400mL超声震荡60min萃取滤渣，过滤，合并滤液，加入阿胶，煮沸并搅拌溶解，15min后过滤，滤液经减压浓缩至40mL，干燥成粉末后过80目筛，得中药菌粉；S4，将中药菌粉与食蟾虫粉末、混合均匀，然后加入蜂蜜水混合，制丸，70℃干燥，得食蟾虫水蜜丸，每粒重量为0.12g。
所述S2步骤中的百部30g、白及27g、天门冬20g、川贝母22g、紫河车18g、北沙参25g、蛤蚧22g、三七15g、甘草6g、桑白皮14g、猫爪草21g、大豆粉11g；所述的S3步骤中的阿胶的添加量为3.5g。
所述S4步骤中药菌粉13g、食蟾虫粉末13g、蜂蜜水22mL。
所述的千佛菌的培养条件为：温度32.5℃，湿度68.0%，通气量78%，时间5天，接种量4mL。
所述的蜂蜜水制备方法为：将蜂蜜加热，使温度达到120℃，炼成老蜜，老蜜冷却到75℃时，加入0.1倍质量的开水，混匀，得蜂蜜水。
所述的食蟾虫粉末的制备方法为：（1）用清水清洗活体蟾蜍5kg，然后将蟾蜍放入混合液中，72h后，取出，再次清洗，击打致昏，最后将蟾蜍打浆均匀，放入待产的大头金蝇进行产蛆，收蛆，清洗，得鲜活的食蟾虫；（2）将食蟾虫加热至45℃，50℃干躁14h除去水份，研磨粉碎，过80目筛，得食蟾虫粉末；所述的混合液的制备方法为：取厚朴100克、枳实100克、芒硝100克、大黄100克，混合粉碎，水煎30min，过滤，向滤液中加入清水27千克，水温保持在27℃。
实施例3
一种以食蟾虫治疗耐药肺结核的方法，该方法由以下步骤组成：S1，将百部、紫河车、川贝母、蛤蚧洗净、干燥；白及、天门冬、北沙参、桑白皮、三七、甘草、猫爪草块根洗净，润湿干燥；S2，将经S1步骤处理过的药材与大豆粉按比例混合，粉碎研磨，过100目筛，然后装入发酵皿中，用压实板压实，挤压出凹体柱，120℃下灭菌60min，然后冷却至室温，放至发酵台的凹陷处，控制湿度和温度，然后喷洒千佛菌菌液，培养7天；S3，将已长出的菌丝体的固体中草药取出，50℃烘干，打碎，从中称取40g粉末，加入95%乙醇400mL，超声震荡60min，过滤残渣后，再次以95%酒精400mL超声震荡60min萃取滤渣，过滤，合并滤液，加入阿胶，煮沸并搅拌溶解，20min后过滤，滤液经减压浓缩至40mL，干燥成粉末后过80目筛，得中药菌粉；S4，将中药菌粉与食蟾虫粉末、混合均匀，然后加入蜂蜜水混合，制丸，70℃干燥，得食蟾虫水蜜丸，每粒重量为0.15g。
所述S2步骤中的百部35g、白及32g、天门冬22g、川贝母25g、紫河车21g、北沙参27g、蛤蚧26g、三七18g、甘草8g、桑白皮18g、猫爪草23g、大豆粉12g；所述的S3步骤中的阿胶的添加量为4g。
所述S4步骤中药菌粉15g、食蟾虫粉末15g、蜂蜜水25mL。
所述的千佛菌的培养条件为：温度32.5℃，湿度68.0%，通气量78%，时间5天，接种量5mL。
所述的蜂蜜水制备方法为：将蜂蜜加热，使温度达到122℃，炼成老蜜，老蜜冷却到75℃时，加入0.1倍质量的开水，混匀，得蜂蜜水。
所述的食蟾虫粉末的制备方法为：（1）用清水清洗活体蟾蜍5kg，然后将蟾蜍放入混合液中，72h后，取出，再次清洗，击打致昏，最后将蟾蜍打浆均匀，放入待产的大头金蝇进行产蛆，收蛆，清洗，得鲜活的食蟾虫；（2）将食蟾虫加热至45℃，50℃干躁14h除去水份，研磨粉碎，过80目筛，得食蟾虫粉末；所述的混合液的制备方法为：取厚朴100克、枳实100克、芒硝100克、大黄100克，混合粉碎，水煎30min，过滤，向滤液中加入清水30千克，水温保持在28℃。
对比例1
将实施例1中食蟾虫水蜜丸的制备过程中食蟾虫粉末去掉，其余操作不变，蜂蜜水的添加量减半，制得水蜜丸。
对比例2
将实施例1中食蟾虫水蜜丸的制备步骤改为：S1，将百部、紫河车、川贝母、蛤蚧洗净、干燥；白及、天门冬、北沙参、桑白皮、三七、甘草、猫爪草块根、市购的千佛菌洗净，润湿干燥；S2，将经S1步骤处理过的药材与大豆粉混合，粉碎研磨，过80-100目筛，从中称取40g粉末，加入95%乙醇400mL，超声震荡60min，过滤残渣后，再次以95%酒精400mL超声震荡60min萃取滤渣，过滤，合并滤液，加入阿胶，煮沸并搅拌溶解，10-20min后过滤，滤液经减压浓缩至40mL，干燥成粉末后过80目筛，得中药菌粉；S4，将中药菌粉与食蟾虫粉末、混合均匀，然后加入蜂蜜水混合，制丸，70℃干燥，得水蜜丸。
试验例1
毒性试验：应用NIH小鼠60只，SPF级，体重(20±2)g，雌雄各半，进行急性毒性实验。小鼠随机分为两组，即对照组和给药组，实验前禁食12小时，将本发明的实施例1制备的中食蟾虫水蜜丸溶解在水中(浓度为0.5g/mL，最高浓度)灌胃，灌胃容积为5mL/kg(即单次给药剂量为2.5g/kg)，对照组给予等量生理盐水，1天给药4次，给药间隔时间6小时，给药后连续观察14天，并记录小鼠的毒性反应及死亡数。实验结果表明：与对照组比较，给药后小鼠未见明显差异，实验连续观察14天，小鼠全身状况、摄食、饮水、体重增长均正常。小鼠口服灌胃本发明的食蟾虫水蜜丸＞7.5g/kg，每日最大给药量为7.5g/kg/日。本发明的中药临床用药量为0.5g/日/人，成人体重以60kg计，平均用药剂量为0.008g/kg/日。按体重计：小鼠(平均体重以20g计)口服灌胃本发明的中药的耐受量为临床用量的897倍。因此本发明的中药急性毒性低，临床用药安全。
试验例2
选用昆明种成年小鼠40只，体重(20±2)g，雌雄各半，将转种纯化生长良好的MDR-TB菌落刮取，加无菌生理盐水磨菌制备成lmg/mL的菌液，经尾静且永注射0.2mL菌量感染小鼠，将上述40只小鼠随机分为4组，模型组、实施例1组、对比例1组、对比例2组，每组10只，雌雄各半，另选取昆明种成年小鼠10只，体重(20±2)g，雌雄各半，作为正常组，正常组经尾静且永注射0.2mL生理盐水；治疗：正常组生理盐水5mL灌胃，模型组生理盐水5mL灌胃；实施例1组灌服实施例1制备的食蟾虫水蜜丸的溶解液，每天5mL(浓度1mg/mL)；对比例1组灌服对比例1制备的水蜜丸的溶解液，每天5mL(浓度1mg/mL)；对比例2组灌服对比例2制备的水蜜丸的溶解液，每天5mL(浓度1mg/mL)；灌服之后各组再加入标准饲料，连续4周，第4周后处死动物，收取血清(将血液3000r／min×20min，取上清，灭活，过滤除菌)。采用ELISA法检测小鼠血清中与结核免疫密切相关的细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-12含量的变化，同时分离出单个核细胞，抽提全部RNA，采用RT-PCR法检测单个核细胞中IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-12，检测结果如表1：
从表1可以看出，经MDR-TB感染小鼠血清中IFN-γ、IL-12含量明显下降，IL-4、IL-10含量明显升高，表明结核的发生与人体Thl／Th2细胞应答平衡有关；相比于对比例1和对比例2制备的水蜜丸，本申请的食蟾虫水蜜丸能明显上调模型小鼠血清中IFN-γ、IL-12含量，下调IL-4、IL-10含量，表明食蟾虫水蜜丸对Thl／Th2细胞应答平衡均具有一定的调整作用。
T淋巴细胞是参与免疫应答的主要细胞群，分为调节性T淋巴细胞和效应性T淋巴细胞，其中调节性T淋巴细胞含辅助性T淋巴细胞和抑制性T淋巴细胞根据辅助性T淋巴细胞分泌的细胞因子功能又分为Thl细胞和Th2细胞。辅助T细胞(Th1)，能够产生IFN-γ和IL-12，能增强机体对微生物感染、胞内病原体防御功能。Th2细胞分泌IL-4、IL-10等，主要介导与感染进展、持续化和慢性化有关的应答，能抑制机体对结核分枝杆菌感染的防御能力。IFN-γ、IL-12等细胞因子水平上升，同时促进T细胞向Th2型分化进而相对增强体液免疫、降低细胞免疫功能的细胞因子IL-4、IL-lO等下降，与TNF-α共同作用加强对病灶中结核杆菌的杀灭作用。
以上所述是结合具体实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明具体实施仅局限于此；对于本发明所属及相关技术领域的技术人员来说，在基于本发明技术方案思路前提下，所作的拓展以及操作方法、数据的替换，都应当落在本发明保护范围之内。