一种类葡萄糖衍生物及其制备方法和应用
阅读说明：本技术 一种类葡萄糖衍生物及其制备方法和应用 (Glucose-like derivative and preparation method and application thereof ) 是由 贾乙 摄渊婷 黄琰 刘红梅 于 2021-07-27 设计创作，主要内容包括：本发明属于化合物制备技术领域,具体涉及一种类葡萄糖衍生物及其制备方法和应用。本发明公开了如结构式I和结构式Ⅱ所示的类葡萄糖衍生物,具有以下优点：(1)能够显著升高内皮细胞Siglec-9聚糖配体表达水平；(2)能够减少模型动物主动脉动脉粥样硬化病变发生的面积百分比；(3)对LDL-C无显著影响,各组空腹血糖水平无显著差异；(4)能显著降低血管组织及循环中TNF-α水平,因此本发明公开的类葡萄糖衍生物在防治动脉粥样硬化中有很好的应用前景。本发明还提供了相关类葡萄糖衍生物的制备方法,该制备方法具有原料易得、制备方法简单,反应条件较为温和,产率较高。(The invention belongs to the technical field of compound preparation, and particularly relates to a glucose-like derivative, and a preparation method and application thereof. The invention discloses a glucose-like derivative shown as a structural formula I and a structural formula II, which has the following advantages: (1) the expression level of Siglec-9 glycan ligand of endothelial cells can be obviously increased; (2) can reduce the active pulse atherosclerosis of model animalsPercentage of area of lesion occurrence; (3) no significant effect on LDL-C, no significant difference in fasting blood glucose levels among groups; (4) can obviously reduce the TNF-alpha level in vascular tissues and circulation, so the glucose-like derivative disclosed by the invention has good application prospect in preventing and treating atherosclerosis. The invention also provides a preparation method of the related glucose-like derivatives, and the preparation method has the advantages of easily obtained raw materials, simple preparation method, mild reaction conditions and high yield.)
技术领域
本发明属于化合物制备技术领域，具体为一种类葡萄糖衍生物及其制备方法和应用。
背景技术
心脑血管疾病导致的死亡人数在我国居各类疾病首位，而动脉粥样硬化是多数致死性心血管疾病的基础病理改变。既往认为高血脂和高血压是诱发动脉粥样硬化的最重要危险因素，但在目前大量使用多种降脂药物和降压药物有效控制血脂和血压的情况下，并没有扭转心血管疾病导致的死亡率居各类疾病之首的现状，因此提示仍有其他重要的危险因素存在。
近年来，动脉粥样硬化被广泛认可为一种血管的慢性炎症性疾病，其中单核-巨噬细胞的浸润和巨噬细胞源性泡沫细胞的形成是动脉粥样硬化的关键启动步骤，而且由单核-巨噬细胞和中性粒细胞介导的局部炎症反应在动脉粥样硬化发展及转归中具有至关重要作用。研究结果强烈提示除调节血脂等传统危险因素外，特异性降低单核-巨噬细胞/中性粒细胞介导的血管炎症反应可能是防治动脉粥样硬化的极具潜力的新靶点，但现有抗炎药物中尚未发现适用于动脉粥样硬化预防者。
既往研究发现，除常见的细胞因子外，特异性表达在单核/巨噬细胞、中性粒细胞、树突状细胞表面的Siglec-9的活性在维持机体炎症稳态、防止由单核-巨噬细胞/中性粒细胞介导的过度炎症反应等方面具有重要的作用。Siglec-9的生物学活性需要经过其配体激活后才能发挥，所以配体是激活Siglec-9的必要条件，不同组织器官中的糖蛋白配体各不相同，在不同生理/病理过程中发挥着各自的重要作用。例如，红细胞上血型蛋白A作为Siglec-9的配体发挥了维持循环中中性粒细胞“静默”的作用，精浆中的黏蛋白等作为Siglec-9的配体参与了受精过程，T-H糖蛋白作为Siglec-9的配体参与了泌尿系统的炎症反应过程，以及肿瘤细胞大量表达Siglec-9/E配体以达到免疫逃避的目的等。研究证实血管内皮细胞表面能够表达Siglec-9配体，且参与了与单核细胞和中性粒细胞的交互，从而导致血管局部的炎症稳态维持。
目前关于如何调控siglec-9聚糖配体表达水平，进而通过抑制血管局部炎症反应而达到防治动脉粥样硬化的手段尚没有任何报道。故有必要制备能够在细胞水平上增加内皮细胞表面Siglec-9聚糖配体的表达水平的新的化合物。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种类葡萄糖衍生物；本发明的目的之二在于提供一种类葡萄糖衍生物的制备方法；本发明的目的之三在于提供一种类葡萄糖衍生物在制备防治动脉粥样硬化药物方面的应用
为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：
1.一种类葡萄糖衍生物，所述类葡萄糖衍生物具有防治动脉粥样硬化的作用，所述类葡萄糖衍生物如结构式I和结构式Ⅱ所示：
其中R1为烷基氨基；R2为卤素或烷基。
优选的，所述R1为乙基氨基、丙基氨基、异丙基氨基、丁基氨基、异丁基氨基或戊基氨基中的任意一种；
所述R2为H、卤素、甲基、甲氧基、硝基或氨基中的任意一种。
优选的，所述结构式I包括以下I-1～I-6结构式的类葡萄糖衍生物：
所述结构式Ⅱ包括以下Ⅱ-1～Ⅱ-6结构式的类葡萄糖衍生物：
2.上述类葡萄糖衍生物的制备方法，所述结构式I的类葡萄糖衍生物的制备方法如下所示：
(1)向N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)和N-溴代丁二酰亚胺(NBS)中加入甲醇溶解，在氢气气氛下，搅拌并常温反应过夜，过滤得到滤液，减压蒸馏除去溶剂得到黄色固体；
(2)向制备的黄色固体、烷基胺和三乙胺中加入二氯甲烷进行溶解，搅拌下常温反应过夜，过滤得到滤液，减压蒸馏除去溶剂得到白色粗产物；
(3)将粗产物用甲醇重结晶得到白色晶体化合物。
优选的，所述N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)和N-溴代丁二酰亚胺(NBS)的摩尔比为1:1～4。
优选的，所述N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)、烷基胺和三乙胺的摩尔质量比为1:1～10:1～100，mol:mol:g。
优选的，所述烷基胺为乙胺、丙胺、异丙胺、丁胺、异丁胺或戊胺中的任意一种。
3.上述类葡萄糖衍生物的制备方法，所述结构式Ⅱ的类葡萄糖衍生物的制备方法如下所示：
(1)向N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)中加入化合物Ⅲ和氢化钠，再加入四氢呋喃进行溶解，搅拌下降温至0～-78℃下反应过夜，减压蒸馏除去溶剂得到粗产物；
(2)将得到的粗产物进行分离提纯，得到白色晶体化合物即可；
所述化合物Ⅲ的结构式为：其中X为卤素，R2为氢、卤素、硝基、氨基或烷基中的任意一种。
优选的，所述N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)、化合物Ⅲ和氢化钠的摩尔比0.1:1～10:1～10。
优选的，所述R2为H、卤素、甲基、甲氧基、硝基或氨基中的任意一种。
优选的，所述分离提纯具体为将得到的粗产物用乙酸乙酯溶解，采用洗脱剂为体积比为1～10:1的乙酸乙酯和正己烷的混合溶液的柱层析进行分离提纯，得到白色晶体化合物即可。
优选的，上述类葡萄糖衍生物在制备防治动脉粥样硬化的药物中的应用。
本发明的有益效果在于：
1、本发明公开了如结构式I和结构式Ⅱ所示的类葡萄糖衍生物，具有以下优点：(1)能够显著升高内皮细胞Siglec-9聚糖配体表达水平；(2)能够减少模型动物主动脉动脉粥样硬化病变发生的面积百分比；(3)对LDL-C无显著影响，各组空腹血糖水平无显著差异；(4)能显著降低血管组织及循环中TNF-α水平，因此本发明公开的类葡萄糖衍生物在防治动脉粥样硬化中有很好的应用前景。
2、本发明还提供了相关类葡萄糖衍生物的制备方法，该制备方法具有原料易得、制备方法简单，反应条件较为温和，产率较高。
本发明的其他优点、目标和特征在某种程度上将在随后的说明书中进行阐述，并且在某种程度上，基于对下文的考察研究对本领域技术人员而言将是显而易见的，或者可以从本发明的实践中得到教导。本发明的目标和其他优点可以通过下面的说明书来实现和获得。
附图说明
图1为不同物质对Siglec-9配体表达水平的影响，其中a为细胞膜上Siglec-9配体表达量，b为荧光强度；
图2为添加了不同物质后动脉粥样硬化病变区域的变化；
图3为不同物质对降低动物模型动脉粥样硬化斑块形成的影响。
具体实施方式
以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。
实施例1
制备化合物Ⅰ-1，其结构是为：具体制备方法如下：
(1)向50mL的圆底烧瓶中加入2.21g GlcNAc(N-乙酰葡糖胺)，1.78g NBS(N-溴代丁二酰亚胺)和甲醇10mL，将圆底烧瓶中充满氢气，磁力搅拌下常温反应过夜，过滤得到滤液，减压蒸馏除去溶剂得到黄色固体；
(2)将制备的黄色固体加入25mL的圆底烧瓶瓶中，加入乙胺0.45g、二氯甲烷1mL和三乙胺1g，磁力搅拌下常温反应过夜，过滤得到滤液，减压蒸馏除去溶剂得到白色粗产物；
(3)将粗产物用甲醇重结晶得到2g白色晶体化合物Ⅰ-1(化合物1)，(化合物)收率78％。
Ⅰ-1的核磁：1H NMR(600MHz)δ6.93(d,1H),6.14(s,1H),4.32(m,1H),3.70(m,4H),3.48(m,3H),2.66(dd,2H),2.04(s,1H),1.78(s,2H),1.69(s,1H),1.27(s,1H),1.11(t,3H)。
实施例2
制备化合物Ⅰ-2，其结构是为：具体制备方法如下：
(1)向50mL的圆底烧瓶中加入2.21g GlcNAc(N-乙酰葡糖胺)，1.78g NBS和甲醇10mL，将圆底烧瓶中充满氢气，磁力搅拌下常温反应过夜，过滤得到滤液，减压蒸馏除去溶剂得到黄色固体；
(2)将制备的黄色固体加入25mL的圆底烧瓶瓶中，加入丙胺0.57g、二氯甲烷1mL和三乙胺1g，磁力搅拌下常温反应过夜，过滤得到滤液，减压蒸馏除去溶剂得到白色粗产物；
(3)将粗产物用甲醇重结晶得到1.5g白色晶体化合物Ⅰ-2(化合物2)，收率56％。
Ⅰ-2的核磁：1H NMR(600MHz)δ6.89(d,1H),6.11(s,1H),4.28(m,1H),3.66(m,4H),3.42(m,3H),2.62(dd,2H),2.01(s,1H),1.72(s,2H),1.62(s,1H),1.43(m,2H),1.22(s,1H),1.09(t,3H)。
实施例3
制备化合物Ⅰ-3，其结构是为：具体制备方法如下：
(1)向50mL的圆底烧瓶中加入2.21g GlcNAc(N-乙酰葡糖胺)，NBS 1.78g和甲醇10mL，将圆底烧瓶中充满氢气，磁力搅拌下常温反应过夜，过滤得到滤液，减压蒸馏除去溶剂得到黄色固体；
(2)将制备的黄色固体加入25mL的圆底烧瓶瓶中，加入异丙胺0.57g、二氯甲烷1mL和三乙胺1g，磁力搅拌下常温反应过夜，过滤得到滤液，减压蒸馏除去溶剂得到白色粗产物；
(3)将粗产物用甲醇重结晶得到1.7g白色晶体化合物Ⅰ-3(化合物3)，收率63％。
Ⅰ-3的核磁：1H NMR(600MHz)δ6.34(d,1H),6.23(s,1H),4.34(m,1H),4.24(m,4H),3.62(m,3H),3.42(dd,2H),2.52(m,1H),2.12(s,1H),1.88(s,2H),1.71(s,1H),1.33(m,2H),1.12(s,1H),1.09(t,6H)。
实施例4
制备化合物Ⅰ-4，其结构是为：具体制备方法如下：
(1)向50mL的圆底烧瓶中加入2.21g GlcNAc(N-乙酰葡糖胺)，NBS 1.78g和甲醇10mL，将圆底烧瓶中充满氢气，磁力搅拌下常温反应过夜，过滤得到滤液，减压蒸馏除去溶剂得到黄色固体；
(2)将制备的黄色固体加入25mL的圆底烧瓶瓶中，加入丁胺0.69g、二氯甲烷1mL和三乙胺1g，磁力搅拌下常温反应过夜，过滤得到滤液，减压蒸馏除去溶剂得到白色粗产物；
(3)将粗产物用甲醇重结晶得到2.3g白色晶体化合物Ⅰ-4(化合物4)，收率82％。
Ⅰ-4的核磁：1H NMR(600MHz)δ6.86(d,1H),5.56(s,1H),4.30(m,1H),3.76(m,4H),3.65(m,3H),2.57(dd,2H),1.86(s,1H),1.37(m,2H),1.32(m,2H),1.22(s,2H),1.16(s,1H),1.09(t,3H)。
实施例5
制备化合物Ⅰ-5，其结构是为：具体制备方法如下：
(1)向50mL的圆底烧瓶中加入2.21g GlcNAc(N-乙酰葡糖胺)，NBS 1.78g和甲醇10mL，将圆底烧瓶中充满氢气，磁力搅拌下常温反应过夜，过滤得到滤液，减压蒸馏除去溶剂得到黄色固体；
(2)将制备的黄色固体加入25mL的圆底烧瓶瓶中，加入异丁胺0.69g、二氯甲烷1mL和三乙胺1g，磁力搅拌下常温反应过夜，过滤得到滤液，减压蒸馏除去溶剂得到白色粗产物；
(3)将粗产物用甲醇重结晶得到1.9g白色晶体化合物Ⅰ-5(化合物5)，收率68％。
Ⅰ-5的核磁：1H NMR(600MHz)δ6.40(d,1H),5.58(s,1H),3.89(m,1H),3.72(m,4H),3.43(m,3H),2.53(m,1H),2.11(s,1H),1.88(s,2H),1.71(s,1H),1.66(m,2H),1.56(s,1H),1.46(s,1H),0.85(t,6H)。
实施例6
制备化合物Ⅰ-6，其结构是为：具体制备方法如下：
(1)向50mL的圆底烧瓶中加入2.21g GlcNAc(N-乙酰葡糖胺)，NBS 1.78g和甲醇10mL，将圆底烧瓶中充满氢气，磁力搅拌下常温反应过夜，过滤得到滤液，减压蒸馏除去溶剂得到黄色固体；
(2)将制备的黄色固体加入25mL的圆底烧瓶瓶中，加入戊胺0.81g、二氯甲烷1mL和三乙胺1g，磁力搅拌下常温反应过夜，过滤得到滤液，减压蒸馏除去溶剂得到白色粗产物；
(3)将粗产物用甲醇重结晶得到1.8g白色晶体化合物Ⅰ-6(化合物6)，收率62％。
Ⅰ-6的核磁：1H NMR(600MHz)δ6.81(d,1H),5.66(s,1H),4.30(m,1H),3.75(m,4H),3.63(m,3H),3.36(s,1H),2.57(dd,2H),1.86(s,1H),1.74(s,1H),1.37(m,2H),1.33(m,2H),1.32(s,2H),1.24(m,2H),1.16(s,1H),1.09(t,3H)。
上述实施例1～6的制备方法中，N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)和N-溴代丁二酰亚胺(NBS)的摩尔比可以在1:1～4的范围之间，N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)、烷基胺和三乙胺的摩尔质量比(mol:mol:g)可以在1:1～10:1～100之间，均不影响最终产物的形成。
实施例7
制备化合物Ⅱ-1，其结构是为：具体制备方法如下：
(1)在装有温度计和冷凝管的50mL三口瓶中加入0.221g GlcNAc(N-乙酰葡糖胺)、对溴甲苯0.17g、氢化钠0.24g和10mL四氢呋喃，磁力搅拌下降温至-78℃下反应过夜，减压蒸馏除去溶剂得到粗产物；
(2)将得到的粗产物用乙酸乙酯溶解，硅胶拌样后用于柱层析，洗脱剂为体积比为5:1的乙酸乙酯和正己烷的混合溶液，得到0.25g白色晶体化合物Ⅱ-1(化合物7)，收率为80％。
Ⅱ-1的核磁：1H NMR(500MHz,Chloroform)δ7.35(d,J＝5.0Hz,2H),7.32(m,2H),7.19(m,2H),5.65(s,1H),4.64(s,2H),4.34(m,1H),4.02(m,1H),3.86(m,2H),3.70(m,1H),3.46(m,2H),1.99(s,3H),1.68(s,1H),1.16(s,1H),0.76(s,1H)。
实施例8
制备化合物Ⅱ-2，其结构是为：具体制备方法如下：
(1)在装有温度计和冷凝管的50mL三口瓶中加入0.221g GlcNAc(N-乙酰葡糖胺)、对溴甲基氟苯0.19g、氢化钠0.24g和10mL四氢呋喃，磁力搅拌下降温至-78℃下反应过夜，减压蒸馏除去溶剂得到粗产物；
(2)将得到的粗产物用乙酸乙酯溶解，硅胶拌样后用于柱层析，洗脱剂为体积比为5:1的乙酸乙酯和正己烷的混合溶液，得到0.23g白色晶体化合物Ⅱ-2(化合物8)，收率为70％。
Ⅱ-2的核磁：1H NMR(600MHz,Chloroform)δ7.32(s,2H),7.19(s,2H),5.79(s,1H),5.79(s,1H),4.95(s,1H),4.52(s,2H),4.11(s,1H),3.99(s,1H),3.89(s,1H),3.69(m,2H),3.51(m,2H),1.99(s,3H),1.74(s,1H),1.35(s,1H),1.22(s,1H)。
实施例9
制备化合物Ⅱ-3，其结构是为：具体制备方法如下：
(1)在装有温度计和冷凝管的50mL三口瓶中加入0.221g GlcNAc(N-乙酰葡糖胺)、对溴甲基甲苯0.19g、氢化钠0.24g和10mL四氢呋喃，磁力搅拌下降温至-78℃下反应过夜，减压蒸馏除去溶剂得到粗产物；
(2)将得到的粗产物用乙酸乙酯溶解，硅胶拌样后用于柱层析，洗脱剂为体积比为5:1的乙酸乙酯和正己烷的混合溶液，得到0.25g白色晶体化合物Ⅱ-3(化合物9)，收率为75％。
Ⅱ-3的核磁：1H NMR(500MHz,Chloroform)δ7.11(d,J＝20.0Hz,4H),5.79(s,1H),4.95(m,1H),4.53(s,2H),4.12(m,1H),3.99(m,1H),3.89(m,1H),3.69(m,1H),3.51(m,2H),2.19(m,3H),1.99(s,3H),1.73(s,1H),1.36(s,1H),1.22(s,1H)。
实施例10
制备化合物Ⅱ-4，其结构是为：具体制备方法如下：
(1)在装有温度计和冷凝管的50mL三口瓶中加入0.221g GlcNAc(N-乙酰葡糖胺)、1-溴甲基-4-甲氧基苯0.2g、氢化钠0.24g和10mL四氢呋喃，磁力搅拌下降温至-78℃下反应过夜，减压蒸馏除去溶剂得到粗产物；
(2)将得到的粗产物用乙酸乙酯溶解，硅胶拌样后用于柱层析，洗脱剂为体积比为5:1的乙酸乙酯和正己烷的混合溶液，得到0.25g白色晶体化合物Ⅱ-4(化合物10)，收率为80％。
Ⅱ-4的核磁：1H NMR(500MHz,Chloroform)δ6.95(d,J＝40.0Hz,4H),5.79(s,1H),4.95(m,1H),4.49(m,2H),4.11(s,1H),3.94(m,2H),3.79(m,2H),3.69(m,1H),3.51(m,2H),1.99(s,3H),1.73(s,1H),1.36(s,1H),1.22(s,1H)。
实施例11
制备化合物Ⅱ-5，其结构是为：具体制备方法如下：
(1)在装有温度计和冷凝管的50mL三口瓶中加入0.221g GlcNAc(N-乙酰葡糖胺)、1-溴甲基-4-硝基苯(化合物Ⅲ)0.22g、氢化钠0.24g和10mL四氢呋喃，磁力搅拌下降温至-78℃下反应过夜，减压蒸馏除去溶剂得到粗产物；
(2)将得到的粗产物用乙酸乙酯溶解，硅胶拌样后用于柱层析，洗脱剂为体积比为5:1的乙酸乙酯和正己烷的混合溶液，得到0.15g白色晶体化合物Ⅱ-5(化合物11)，收率为41％。
Ⅱ-5的核磁：1H NMR(500MHz,Chloroform)δ8.14(s,2H),7.58(s,2H),5.91(s,1H),5.63(s,1H),4.63(s,2H),4.13(t,J＝24.2Hz,3H),3.82(m,1H),3.69(m,1H),3.49(m,1H),1.99(s,3H),1.71(s,1H),1.06(d,J＝7.1Hz,1H)。
实施例12
制备化合物Ⅱ-6，其结构是为：具体制备方法如下：
(1)在装有温度计和冷凝管的50mL三口瓶中加入0.221g GlcNAc(N-乙酰葡糖胺)、1-溴甲基-4-氨基苯(化合物Ⅲ)0.19g、氢化钠0.24g和10mL四氢呋喃，磁力搅拌下降温至-78℃下反应过夜，减压蒸馏除去溶剂得到粗产物；
(2)将得到的粗产物用乙酸乙酯溶解，硅胶拌样后用于柱层析，洗脱剂为体积比为5:1的乙酸乙酯和正己烷的混合溶液，得到0.18g白色晶体化合物Ⅱ-6(化合物12)，收率为56％。
Ⅱ-6的核磁：1H NMR(500MHz,Chloroform)δ7.13(s,2H),6.38(s,2H),5.78(s,1H),4.95(s,1H),4.41(s,2H),4.11(s,1H),3.93(d,J＝51.0Hz,1H),3.68(s,1H),3.51(d,J＝25.3Hz,2H),3.45(s,1H),1.99(s,3H),1.73(s,1H),1.36(s,1H),1.22(s,1H)。
上述实施例7～12的制备方法中，N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)、化合物Ⅲ和氢化钠的摩尔比在0.1:1～10:1～10的范围之间，加入四氢呋喃后反应温度在0～-78℃均可，在分离提纯过程采用的洗脱剂中乙酸乙酯和正己烷的体积比在1～10:1之间，均不影响最终产物的形成。
实施例13
研究本发明实施例1～12中制备的类葡萄糖衍生物对人脐静脉内皮细胞(HumanUmbilical Vein Endothelial Cells，HUVEC，ATCC，PCS-100-010)上Siglec-9配体表达水平的影响，具体步骤如下：
1、细胞培养：
将HUVEC细胞在培养基(其中培养基为添加了内皮细胞专门试剂(EndothelialCell Growth Kit-BBE，ATCC，PCS-100-040)的血管细胞专用培养基(Vascular Cell BasalMedium，ATCC，PCS-100-030))中进行培养，培养至细胞浓度为1×106/mL后，种植于24孔板上。
2、分组及指标检测：
(1)将上述培养获得的HUVEC细胞接种的孔板每3个孔板为1组，分为14组(其中12组分别加入实施例1～12中制备的类葡萄糖衍生物至终浓度22.2μmol/L，分别为化合物1～12，空白对照组(Control)加入PBS溶液(磷酸盐缓冲盐溶液)，阴性对照组加入同终浓度(22.2μmol/L)的L-葡萄糖(L-Glc))，处理48h后，弃培养基，收集各个孔板上的细胞；
(2)将收集的细胞用DPBS溶液(杜氏磷酸缓冲溶液)洗三次，以500g的离心力离心5min后收集细胞；
(3)向步骤(2)中收集的细胞中加入8μL Recombinant Human Siglec-9 FcChimera(R&D，1139-SL)，在4℃的摇床中孵育1h，收集细胞后在室温下孵育流式抗体PEanti-human IgG Fc(Biolegend，409304)，流式细胞仪检测细胞膜上Siglec-9配体表达量(如图1中a所示)，以空白对照组(PBS溶液)荧光强度均值为1进行统计(如图1中b所示)。
3、统计学分析方法：
数据以mean+SD表示，组间用SPSS10.0统计学软件行单因素方差分析，以p<0.05为相差显著。
4、检测结果：通过上述的检测结果说明本发明实施例2～6和实施例8制备的类葡萄糖衍生物能够显著升高内皮细胞Siglec-9聚糖配体表达水平。
实施例14
本发明实施例2～6制备的类葡萄糖衍生物对降低动物模型动脉粥样硬化斑块形成的影响：
1、动物饲养及分组：取10周龄健康apoE-/-小鼠48只，雄性，体重22～25g，分为对照组、模型组、阳性药物组和化合物(其中化合物2～6分别对应实施例2～6制备的类葡萄糖衍生物)分别为给药组共8组(n＝6)；上述小鼠于无菌层流饲养室中分笼饲养，自由饮水摄食，保持室温22～25℃、相对湿度50％、光照时间为7:30～19:30；除对照组外，以高脂饮食(常规饲料+0.15％胆固醇+21％猪油)饲养12周，模型组给予生理盐水灌胃、阳性对照组给予辛伐他汀10mg/(kg·d)灌胃，各化合物组分别将化合物2～6以10％浓度溶于饮用水，自由取食。
2、检测指标与方法：动脉粥样硬化斑块面积及其占总面积百分比分析：将上述饲养结束后的小鼠处死后分离主动脉，位置从主动脉根部至腹主动脉末端分叉处。经福尔马林固定后用苏丹Ⅳ染色，红染部分即为动脉粥样硬化病变区域(如图2所示)。利用ImagePro Plus 5.0软件计算病变部分面积占总面积的百分比。统计学分析方法同上述实施例13，其结果如图3所示。
3、检测结果：通过上述的检测结果说明本发明实施例2～6制备的类葡萄糖衍生物均能够减少模型动物主动脉动脉粥样硬化病变发生的面积百分比，其中实施例6制备的衍生物的作用效果最好，与模型组相比减少了59.4％。
实施例15
研究本发明制备的类葡萄糖衍生物对模型动物血脂及血糖的影响：
1、试验方法：按照实施例14中的方法对小鼠进行分组和饲养(取10周龄健康apoE-/-小鼠48只，雄性，体重22～25g，分为对照组、模型组、阳性药物组和化合物(其中化合物2～6分别对应实施例2～6制备的类葡萄糖衍生物)分别为给药组共8组(n＝6)；上述小鼠于无菌层流饲养室中分笼饲养，自由饮水摄食，保持室温22～25℃、相对湿度50％、光照时间为7:30～19:30；除对照组外，以高脂饮食(常规饲料+0.15％胆固醇+21％猪油)饲养12周，模型组给予生理盐水灌胃、阳性对照组给予辛伐他汀10mg/(kg·d)灌胃，各化合物组分别将化合物2～6以10％浓度溶于饮用水，自由取食)，饲养结束后将小鼠禁食过夜后取全血1000g离心10min，收集上清后进行低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和血糖水平检测(使用仪器为奥林巴斯AU-2700，统计学分析方法同实施例13)，其结果如表1所示。
表1不同物质对apoE-/-小鼠低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及血糖水平的影响(mmol/L，mean+SD，n＝6，*p<0.05vs模型组)
2、实验结果：从表1的测试结果可知除辛伐他汀和实施例6中制备的衍生物外，实施例2～5中制备的衍生物对LDL-C无显著影响，各组空腹血糖水平无显著差异。
实施例16
研究本发明制备的类葡萄糖衍生物对对血管局部及循环TNF-α水平的影响：
1、试验方法：按照实施例14中的方法对小鼠进行分组和饲养(取10周龄健康apoE-/-小鼠48只，雄性，体重22～25g，分为对照组、模型组、阳性药物组和化合物(其中化合物2～6分别对应实施例2～6制备的类葡萄糖衍生物)分别为给药组共8组(n＝6)；上述小鼠于无菌层流饲养室中分笼饲养，自由饮水摄食，保持室温22～25℃、相对湿度50％、光照时间为7:30～19:30；除对照组外，以高脂饮食(常规饲料+0.15％胆固醇+21％猪油)饲养12周，模型组给予生理盐水灌胃、阳性对照组给予辛伐他汀10mg/(kg·d)灌胃，各化合物组分别将化合物2～6以10％浓度溶于饮用水，自由取食)，饲养结束后进行血清采集(采集方法同实施例15，用蛋白提取液(Tissue Protein Extraction Reagent，Thermo Scientific，T-PER)提取动脉总蛋白)。将血清和动脉蛋白提取液采用Millipore公司液相芯片法测定(Mcytomag-70K-3,Mouse Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel)TNF-α水平(统计学分析方法同实施例13)，测试结果如表2所示。
表2化合物对模型动物血管局部及血管组织TNF-α水平的影响(n＝6，mean+SD，*p<0.05vs模型组)
2.实验结果：如表2的测试结果所示，实施例2～6中制备的衍生物对均能显著降低血管组织及循环中TNF-α水平。
综上所述，本发明公开了结构式为I或Ⅱ的类葡萄糖衍生物，具有以下优点：(1)能够显著升高内皮细胞Siglec-9聚糖配体表达水平；(2)能够减少模型动物主动脉动脉粥样硬化病变发生的面积百分比；(3)对LDL-C无显著影响，各组空腹血糖水平无显著差异；(4)能显著降低血管组织及循环中TNF-α水平，因此本发明公开的类葡萄糖衍生物在防治动脉粥样硬化中有很好的应用前景。本发明还提供了相关类葡萄糖衍生物的制备方法，该制备方法具有原料易得、制备方法简单，反应条件较为温和，产率较高。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
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