一种从南蛇藤中提取雷公藤内酯甲的方法
阅读说明：本技术 一种从南蛇藤中提取雷公藤内酯甲的方法 (Method for extracting triptolide A from celastrus orbiculatus ) 是由 宝艳儒 冯贻东 曾伟珍 汪琛 于 2021-06-22 设计创作，主要内容包括：本发明公开一种从南蛇藤中提取雷公藤内酯甲的方法,该方法以南蛇藤为原料,经粉碎,浸泡,超声提取,萃取,硅胶柱层析,ODS柱层析等步骤得到雷公藤内酯甲单体。得率为千分之一,与从雷公藤药材中提取相比,提取率提高5-10倍,是一种大量提取雷公藤内酯甲的有效方法。(The invention discloses a method for extracting triptolide A from celastrus orbiculatus, which takes celastrus orbiculatus as a raw material and obtains triptolide A monomers through the steps of crushing, soaking, ultrasonic extraction, silica gel column chromatography, ODS column chromatography and the like. The yield is one thousandth, compared with the extraction from tripterygium wilfordii, the extraction rate is improved by 5-10 times, and the method is an effective method for extracting triptolide A in large quantity.)
技术领域
本发明涉及天然提取物领域，具体涉及一种从从南蛇藤中提取雷公藤内酯甲的方法。
背景技术
南蛇藤(Celastrus orbiculatus)为卫矛科南蛇藤属植物,又名过山风、黄藤等，主要分布于我国东北、华北、华东、西南地区。南蛇藤的藤、茎、根、果实均可入药，有祛风除湿、活血解毒及消肿抗炎之功效，民间常用来治疗筋骨疼痛、四肢麻木、风湿性关节炎、腰腿痛、闭经、小儿惊风、痧症、痢疾、跌打损伤等病症。
雷公藤内酯甲为中药雷公藤中重要的活性成分，具有抗炎，抗癌等生理活性。目前雷公藤及南蛇腾药材为雷公藤内酯甲提取的主要来源，但经过比较，南蛇藤中雷公藤内酯甲的含量(提取率0.125％)显著高于雷公藤药材(提取率0.01％)，且该药材广泛易得，毒性低。前期虽有专利报道了从南蛇藤中提取雷公藤内酯甲(CN 108603682 A)，但该方法操作需加热提取、反复重结晶，基于上述问题，有必要开发一种简单高效的雷公藤内酯甲的提取方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从南蛇藤中提取雷公藤内酯甲的方法，该方法提取效率高，节约试剂，所得雷公藤内酯甲的纯度较高，不需反复重结晶处理，为雷公藤内酯甲的工业化生产提供基础。
为实现上述目的，本发明包括以下步骤：
(1)将南蛇藤药材粉碎，过20-30目筛，得南蛇藤粉末，加入其重量10～20倍的95％乙醇浸泡24h后进行超声提取，过滤得到南蛇藤提取液；
(2)对(1)中南蛇藤提取液进行减压浓缩处理，得到南蛇藤提取物；
(3)将南蛇藤提取物加水溶解分散后，先用石油醚萃取，回收石油醚层，减压浓缩，得石油醚萃取物，石油醚萃取后剩余水层再用乙酸乙酯进行萃取，回收乙酸乙酯，减压浓缩，得乙酸乙酯萃取物；
(4)将(3)中乙酸乙酯萃取物加等体积乙酸乙酯溶解后拌样于2-10倍量100-200目硅胶中，拌样后样品上样于200-300目硅胶柱中，以石油醚-乙酸乙酯(V/V＝9:1)进行洗脱，每250ml洗脱液收集一份，浓缩后进行TLC点板，合并相同成分的的浓缩液，减压浓缩得粗提物；
(5)将(4)中所得粗提物等体积甲醇溶解后，与等体积ODS填料拌样后上样于中低压ODS柱，以流动相甲醇－水进行梯度洗脱[7.5:2.5]，得雷公藤内酯甲晶体。
所得雷公藤内酯甲的结构式如下：
无色针状结晶，mp 320-321℃,HR-ESI-Ms m/z:453.3414[M-H]-,分子式为C30H46O3,1H NMR(400Hz,MeOD)δ:0.79(3H,s),0.86(3H,s),0.92(3H,s),0.93(3H,s),0.99(3H,s),1.03(3H,s),1.18(3H,s),3.23(1H,m,11-H),4.15(1H,d,J＝5Hz),5.31(1H,m)
13C NMR(100Hz,MeOD)δ:38.5(C-1),27.3(C-2),78.9(C-3),38.4(C-4),55.3(C-5),18.3(C-6),33.5(C-7),39.6(C-8),47.5(C-9),37.1(C-10),23.6(C-11),124.6(C-12),140.3(C-13),42.5(C-14),24.3(C-15),24.1(C-16),35.6(C-17),39.9(C-18),43.6(C-19),39.3(C-20),33.9(C-21),83.2(C-22),28.1(C-23),15.6(C-24),15.7(C-25),17.0(C-26),25.4(C-27),24.8(C-28),182.4(C-29),21.0(C-30),
本发明的有益效果在于：本制备方法为首次对南蛇藤进行超声提取，且使用中低压色谱分离技术，该方法提取效率高(5kg雷公藤内酯最终提取7.2g雷公藤内酯甲，提取率0.144％)，节约试剂，所得雷公藤内酯甲纯度较高(99.9％)，不需重结晶处理。
具体实施方式
一种从南蛇藤中提取雷公藤内酯甲的方法，本发明包括以下实施例：
实施例1一种从南蛇藤中提取南蛇藤提取物的方法，包括以下步骤：
将5kg南蛇藤药材粉碎，过20目筛，得南蛇藤粉末，加入其重量10倍的95％乙醇浸泡24h后进行超声提取，过滤得到南蛇藤提取液；将南蛇藤提取液进行减压浓缩处理，得到南蛇藤提取物为0.60kg；超声提取条件如下：超声功率为600W；超声温度为45℃,超声时间为35min。
实施例2一种从南蛇藤中提取南蛇藤提取物的方法，包括以下步骤：
将5kg南蛇藤药材粉碎，过30目筛，得南蛇藤粉末，加入其重量15倍的95％乙醇浸泡24h后进行超声提取，过滤得到南蛇藤提取液；将南蛇藤提取液进行减压浓缩处理，得到南蛇藤提取物为0.64kg；超声提取条件如下：超声功率为600W；超声温度为55℃,超声时间为45min。
实施例3一种从南蛇藤中提取雷公藤内酯甲的方法，包括以下步骤：
将5kg南蛇藤药材粉碎，过20目筛，得南蛇藤粉末，加入其重量20倍的95％乙醇浸泡24h后进行超声提取，过滤得到南蛇藤提取液；将南蛇藤提取液进行减压浓缩处理，得到南蛇藤提取物为0.71kg；超声提取条件如下：超声功率为600W；超声温度为50℃,超声时间为40min。
取南蛇藤提取物0.71kg，加700mL水溶解分散后，用1000mL石油醚萃取三次，合并后回收石油醚，减压浓缩，得石油醚萃取物0.16kg，石油醚萃取后剩余水层再用1000mL乙酸乙酯进行萃取三次，合并乙酸乙酯后，减压浓缩，得乙酸乙酯萃取物0.31kg。
取乙酸乙酯萃取物0.31kg，加等体积乙酸乙酯310mL溶解后与600g 100-200目硅胶进行拌样，拌样后样品上样于3.0kg的200-300目硅胶柱中，以石油醚-乙酸乙酯(V/V＝9:1)进行洗脱，每250ml洗脱液收集一份，浓缩后进行TLC点板，合并相同成分的浓缩液，减压浓缩得粗提物0.095kg；将所得0.095kg粗提物用100ml甲醇溶解后，与100g ODS填料拌样后上样于600g中低压ODS柱中，以流动相甲醇－水[7.5:2.5]进行梯度洗脱，随行点板，将相同馏分合并，减压浓缩，得雷公藤内酯甲晶体7.2g。
所述的拌样步骤中200-300目硅胶重量为乙酸乙酯萃取物的10倍。
本发明的有益效果在于：本制备方法为首次对南蛇藤药材进行超声提取，且使用中低压色谱分离技术，该方法提取效率高，节约试剂，所得雷公藤内酯甲纯度较高，不需重结晶处理。