阅读说明：本技术 一种手性c-KIT抑制剂药物关键中间体及其制备方法 (Chiral c-KIT inhibitor drug key intermediate and preparation method thereof ) 是由 别平彦 安泉林 曹琪 张涛 郑国君 陈磊 蒋国平 于 2019-01-07 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种式(III)所示c-KIT抑制剂的制备方法,以及关键中间体式(I)和式(II)及中间体的制备方法,其中式(I)、式(II)和式(III)中各取代基的定义与说明书中的定义相同。本发明采用手性诱导合成方法,得到单一构型的产物,降低成本,提高ee值。<Image he="375" wi="700" file="DDA0001937758220000011.GIF" imgContent="drawing" imgFormat="GIF" orientation="portrait" inline="no"></Image>(The invention relates to a preparation method of a c-KIT inhibitor shown in a formula (III), and key intermediates of a formula (I), a formula (II) and an intermediate, wherein the definitions of all substituents in the formula (I), the formula (II) and the formula (III) are the same as those in the specification. The invention adopts a chiral induction synthesis method to obtain a product with a single configuration, thereby reducing the cost and improving the ee value.)

一种手性c-KIT抑制剂药物关键中间体及其制备方法

发明领域

本发明涉及一种c-KIT抑制剂的制备方法，以及关键中间体及其制备方法。

背景技术

c-KIT(也称为KIT、CD117和干细胞因子受体)是充当III型受体的145kDa跨膜酪氨酸激酶蛋白。位于染色体4q11-21上的c-KIT原癌基因编码c-KIT受体，其配体是干细胞因子。所述受体具有酪氨酸蛋白激酶活性并且与配体SCF的结合导致c-KIT的自磷酸化和其与底物如磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)的缔合。蛋白质酪氨酸激酶对酪氨酸的磷酸化在细胞信号传导方面特别重要并且可以介导主要细胞过程例如增殖、存活、分化、凋亡、连接、侵袭和迁移的信号。c-KIT突变通常出现在编码近膜区结构域的DNA(外显子11)中。它们还以较低频率出现在外显子7、8、9、13、14、17和18中。突变使得c-KIT功能不依赖于由SCF激活，从而导致高细胞分裂速率和可能的基因组不稳定性。c-KIT基因的功能增加性突变和组成性磷酸化c-KIT的表达可见于大部分胃肠间质瘤(GIST)、肥大细胞增多症和急性髓性白血病中。其在不同的外显子处有不同位置的突变，第一代的c-KIT突变和相关药物主要为伊马替尼、舒尼替尼、达沙替尼和PKC412。

c-KIT已在胃肠道间质瘤、急性髓样白血病、黑色素瘤、乳腺瘤、多形性胶质母细胞瘤、卵巢瘤等组织中被发现，其蛋白表达水平与肿瘤的发生发展有着密切的关系。其中胃肠间质瘤(gastrointestinal stromal tumor，GIST)是胃肠道最常见的间叶来源肿瘤，依照目前的GIST诊断标准，流行病学研究显示发病率0.66～2.20/10万。GIST对传统化学治疗极不敏感，化疗药物有效率不足5％，进展期中位生存率仅约18个月。即使完整切除肿瘤，GIST的5年生存率也仅有35％-65％，2年内复发转移率40％-50％，首诊时多达15％-50％的患者存在转移。研究发现干细胞因子表面的跨膜酪氨酸激酶受体c-KIT和血小板源性生长因子受体PDGFRα基因的功能活化突变是GIST发生发展的关键。血小板源性生长因子受体(PDGF-R)是血小板源性生长因子(PDGF)家族成员的细胞表面酪氨酸激酶受体。PDGF亚基PDGFα和PDGFβ是调控细胞增殖、细胞分化、细胞生长、发育和许多疾病包括癌症的重要调节因子。

随着第一代抑制剂伊马替尼(Imatinib)的临床应用，伊马替尼的获得性耐药问题逐渐成为该类抑制剂临床使用中面临的严重挑战。因此，迫切需要研究开发新的c-KIT抑制剂来满足市场需求。目前在研的c-KIT抑制剂药物包括avapritinib(Blueprint)和ripretinib(Deciphera)，均处于临床3期阶段。c-KIT抑制剂的研究和应用已取得一定的进展，但是提高的空间仍然巨大，仍有必要继续研究和开发新的c-KIT抑制剂。

目前公开了一系列的c-KIT抑制剂专利，其中包括WO2014039714、WO2014100620、WO2015134536A1和WO2015057873等，其中WO2015057873公开了一系列的c-KIT抑制剂的制备方法，同时公开了中间体1-(4-氟苯基)-1-(2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)乙醇的合成，采用HPLC手性拆分消旋体得到光学纯的异构体，产物ee值较低。

发明内容

为了克服现有技术的不足之处，本发明的目的在于提供一种新的合成方法制备手性c-KIT抑制剂，通过S型手性配体诱导格氏试剂对底物进行不对称亲核加成反应，得到的产物产率和ee值显著提高。

本发明提供一种式(I)化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：

其中：

R¹各自独立地选自氢原子、卤素、烷基或烷氧基，其中所述烷基或烷氧基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素或烷氧基的取代基所取代；优选地，R¹各自独立地选自氢原子、氟、氯、甲基或甲氧基；且

m选自0、1、2、3、4或5。

式(I)化合物包括，但不限于：

或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐。

本发明提供一种式(I)化合物或其立体异构体、互变异构体或其盐的制备方法，所述方法包括：

式(II)化合物在酸性条件下，在有机溶剂中反应，脱去氨基保护基R²，得到式(I)化合物的酸式盐，任选进一步在碱性条件下反应，得到式(I)化合物；

其中：

R²选自甲氧基羰基、乙氧基羰基、苄氧基羰基、叔丁氧基羰基、烯丙基氧基羰基、苄基、对甲氧基苄基或2-(三甲基硅基)乙氧基甲基，优选为叔丁氧羰基；

R¹和m的定义如式(I)中所述。

优选地，一种式(I)化合物或其立体异构体、互变异构体或其盐的制备方法，所述酸性条件的酸试剂选自三氟乙酸或氯化氢溶液，所述氯化氢溶液为含有氯化氢的二氧六环或甲醇溶液。

优选地，一种式(I)化合物或其立体异构体、互变异构体或其盐的制备方法，所述碱性条件的碱试剂选自碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸钠、氢氧化钠或氢氧化钾。

优选地，一种式(I)化合物或其立体异构体、互变异构体或其盐的制备方法，所述有机溶剂选自二氯甲烷、乙腈、甲醇、乙醇、甲基叔丁基醚或异丙醚，更优选为乙腈。

本发明提供一种式(II)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：

其中：

R²选自甲氧基羰基、乙氧基羰基、苄氧基羰基、叔丁氧基羰基、烯丙基氧基羰基、苄基、对甲氧基苄基或2-(三甲基硅基)乙氧基甲基，优选为叔丁氧羰基；

R¹和m的定义如式(I)中所述。

式(II)化合物包括，但不限于：

或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐。

本发明提供一种式(II)化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐的制备方法，所述方法包括：

式(IIA)化合物和手性配体式(IIC)化合物溶于无水有机溶剂中，先降温至-45～0℃，再加入式(IIB)化合物，然后升温至0～50℃进行反应，得到式(II)化合物；

其中：

R⁵选自-MX；

M为金属元素，优选为Mg；

X选自卤素，优选为溴；

R选自氢原子、苯基或

R^A选自甲基、甲氧基或乙氧基；

n选自0、1、2、3、4或5，优选为0或1；

手性配体式(IIC)优选为：

且

R¹和m的定义如式(I)中所述，R²的定义如式(II)中所述。

优选地，一种式(II)化合物或其立体异构体、互变异构体或其盐的制备方法，所述的式(IIA)化合物、式(IIB)化合物和手性配体式(IIC)的摩尔比为1:(4～6):1，更优选为1:(5～6):1。

优选地，一种式(II)化合物或其立体异构体、互变异构体或其盐的制备方法，所述的无水有机溶剂选自无水四氢呋喃、无水甲苯、无水乙醚、无水异丙醚、无水甲基叔丁基醚或无水1,4-二氧六环，更优选无水四氢呋喃。

优选地，一种式(II)化合物或其立体异构体、互变异构体或其盐的制备方法，所述降温的温度为-45～-35℃，更优选为-45℃。

优选地，一种式(II)化合物或其立体异构体、互变异构体或其盐的制备方法，所述升温的温度为0～30℃，更优选为15～30℃。

本发明提供一种式(III)所示化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐的制备方法，

所述的方法包括步骤：

(i)在碱性条件下，式(I)化合物与式(IIIA)化合物反应，得到式(IIIB)化合物；

(ii)将式(IIIB)化合物与硼酸或R³取代的硼酸酯反应，得到式(III)化合物；

其中：

R¹各自独立地选自氢原子、卤素、烷基或烷氧基，其中所述烷基或烷氧基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素或烷氧基的取代基所取代；优选地，R¹各自独立地选自氢原子、氟、氯、甲基或甲氧基；

R³选自为杂环基或杂芳基，优选为吡唑基或四氢吡啶基，其中所述吡唑基任选进一步被一个或多个选自烷基、杂环基和-C(O)R⁴的取代基所取代；所述四氢吡啶基优选为

R⁴为烷基；

X¹为卤素，优选为氯或溴；

X²为卤素，优选为溴；

所述的R³取代的硼酸酯优选为：

且

m选自0、1、2、3、4或5；

优选地，

步骤(i)中，所述反应的溶剂选自二氯甲烷、甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、乙酸乙酯、甲苯、四氢呋喃、甲基叔丁基醚、1,4-二氧六环、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺N,N-二甲基乙酰胺或水中的一种或多种，优选为二氯甲烷；

步骤(i)中，所述反应的温度选自0～50℃，优选为15～45℃；

优选地，

步骤(ii)中，所述反应的溶剂选自二氯甲烷、甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、乙酸乙酯、甲苯、四氢呋喃、甲基叔丁基醚、1,4-二氧六环、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺或水中的一种或多种，优选为1,4-二氧六环和水的混合溶剂，其中水和1,4-二氧六环的体积比为3:1；

步骤(ii)中，所述反应的温度选自80～120℃，优选为80～90℃。

优选地，一种式(III)化合物或其立体异构体、互变异构体或其盐的制备方法，所述式(I)化合物由式(II)化合物在酸性或碱性条件下，在有机溶剂中反应，脱去氨基保护基R²制备得到：

其中：

R²选自甲氧基羰基、乙氧基羰基、苄氧基羰基、叔丁氧基羰基、烯丙基氧基羰基、苄基、对甲氧基苄基或2-(三甲基硅基)乙氧基甲基，优选为叔丁氧羰基；

R¹和m的定义如式(I)中所述；

所述酸性条件的酸试剂选自三氟乙酸或氯化氢溶液，氯化氢溶液优选为含有氯化氢的二氧六环或甲醇溶液；

所述碱性条件的碱试剂选自碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸钠、氢氧化钠或氢氧化钾；

所述有机溶剂选自二氯甲烷、乙腈、甲醇、乙醇、甲基叔丁基醚或异丙醚，更优选为乙腈。

优选地，一种式(III)化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐的制备方法，其中所述的式(III)化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐包括，但不限于：

或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐。

发明的详细说明

除非有相反陈述，否则本发明在说明书和权利要求书中所使用的部分术语定义如下：

“烷基”当作一基团或一基团的一部分时是指包括C₁-C₂₀直链或者带有支链的饱和脂肪烃基团。例如，C₁-C₂₀是指包含1至20个碳原子，例如，可包含1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子、4个碳原子、5个碳原子、6个碳原子、7个碳原子、8个碳原子、9个碳原子、10个碳原子、11个碳原子、12个碳原子、13个碳原子、14个碳原子、15个碳原子、16个碳原子、17个碳原子、18个碳原子、19个碳原子或20个碳原子。优选为C₁-C₁₀烷基，更优选为C₁-C₆烷基。烷基基团的实施例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代或未取代的。

“杂环基”、“杂环”或“杂环的”在本申请中可交换使用，都是指非芳香性杂环基，其中一个或多个成环的原子是杂原子，如氧、氮、硫原子等，包括单环、稠环、桥环和螺环。优选具有4至7元单环或7至10元双-或三环，其可以包含1，2、3或4个选自氮、氧和/或硫中的原子。“杂环基”的实例包括但不限于吡唑基、四氢吡啶基、吗啉基、氧杂环丁烷基、硫代吗啉基、四氢吡喃基、1,1-二氧代-硫代吗啉基、哌啶基、2-氧代-哌啶基、吡咯烷基、2-氧代-吡咯烷基、哌嗪-2-酮、8-氧杂-3-氮杂-双环[3.2.1]辛基和哌嗪基。杂环基可以是取代或未取代的。杂环基可包含3至14个(例如3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个或14个)原子。

“螺杂环基”指5至18元，两个或两个以上环状结构，且单环之间彼此共用一个原子的多环基团，其一个或多个环可以含有1个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧和/或S(O)_p(其中p选自0、1和/或2)的1，2、3或4个杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺杂环基分为单螺杂环基、双螺杂环基或多螺杂环基，优选为单螺杂环基和双螺杂环基。更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺杂环基。“螺杂环基”的非限制性实施例包括但不限于：1,7-二氧杂螺[4.5]癸基、2-氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬基、7-氧杂螺[3.5]壬基和5-氧杂螺[2.4]庚基。螺杂环基可包含3至18个(例如3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个或18个)原子。

“稠杂环基”指包含两个或两个以上环状结构彼此共用一对原子的全碳多环基团，其一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧和/或S(O)_p(其中p选自0、1和/或2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、吡啶酮或多环稠杂环基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环稠杂环基。“稠杂环基”的非限制性实施例包括但不限于：八氢吡咯并[3,4-c]吡咯基、八氢-1H-异吲哚基、3-氮杂二环[3.1.0]己基、八氢苯并[b][1,4]二噁英(dioxine)。稠杂环基可包含3至18个(例如3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个或18个)原子。

“桥杂环基”指5至14元，5至18元，包含两个或两个以上环状结构，彼此共用两个不直接相连接的原子的多环基团，其一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧和/或S(O)_p(其中p选自0、1和/或2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、吡啶酮或多环桥杂环基，优选为双环、三环或吡啶酮，更有选为双环或三环。“稠杂环基”的非限制性实施例包括但不限于：2-氮杂二环[2.2.1]庚基，2-氮杂二环[2.2.2]辛基和2-氮杂二环[3.3.2]癸基。所述杂环基环可以稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基。杂环基可以是任选取代的或未取代的。桥杂环基可包含3至18个(例如3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个或18个)原子。

“杂芳基”是指芳香族5至6元单环或9至10元双环，其可以包含1至4个选自氮、氧和/或硫中的原子。“杂芳基”的实施例包括但不限于呋喃基，吡啶基，2-氧代-1，2-二氢吡啶基，哒嗪基，嘧啶基，吡嗪基，噻吩基，异噁唑基，噁唑基，噁二唑基，咪唑基，吡咯基，吡唑基，三唑基，四氮唑基，噻唑基，异噻唑基，1，2，3-噻二唑基，苯并间二氧杂环戊烯基，苯并咪唑基，吲哚基，异吲哚基，1，3-二氧代-异吲哚基，喹啉基，吲唑基，苯并异噻唑基，苯并噁唑基和苯并异噁唑基。杂芳基可以是取代或未取代的。杂芳基可包含6至10个(例如6个、7个、8个、9个或10个)原子。所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，非限制性实施例包括但不限于：

“烷氧基”是指(烷基-O-)的基团。其中，烷基见本文有关定义。C₁-C₆的烷氧基为优先选择。其实例包括，但不限于：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基等。

“卤素”是指氟、氯、溴和碘。

“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1-3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。

本说明书所述的“取代”或“取代的”，如无特别指出，均是指基团可被一个或多个选自以下的基团取代：烷基、烷氧基、卤素、巯基、羟基、杂环基、芳基、杂芳基或-C(O)R⁴；

R⁴选自烷基，烷基见本文有关定义。

“可药用的盐”是指上述化合物能保持原有生物活性并且适合于医药用途的某些盐类。

室温的温度范围是15～30℃，优选为25℃。

本发明化合物的合成方法

为了完成本发明的目的，本发明采用如下技术方案：

本发明式(I)或(II)所述的化合物或其可药用的盐或其药物组合物的制备方法，包括以下步骤：

式(IIA)化合物和手性配体式(IIC)化合物溶于无水有机溶剂中，先降温至-45～0℃，再加入式(IIB)化合物，然后升温至0～50℃进行反应，得到式(II)化合物；式(II)化合物在酸性条件下，在有机溶剂中反应，脱去氨基保护基R²，得到式(I)化合物的酸式盐，任选进一步在碱性条件下反应，得到式(I)化合物；在碱性条件下，式(I)化合物与式(IIIA)化合物反应，得到式(IIIB)化合物；将式(IIIB)化合物与R³取代的硼酸酯或R³取代的硼酸反应，得到式(III)化合物；

其中：

R³选自为杂环基或杂芳基，优选为吡唑基或四氢吡啶基，其中所述吡唑基任选进一步被一个或多个选自烷基、杂环基和-C(O)R⁴的取代基所取代；所述四氢吡啶基优选为

R⁴为烷基；

X¹为卤素，优选为氯或溴；

X²为卤素，优选为溴；

所述的R³取代的硼酸酯优选为：

且

R⁵选自-MX；

M为金属元素，优选为Mg；

X选自卤素，优选为溴；

R选自氢原子、苯基或

R^A选自甲基、甲氧基或乙氧基；

n选自0、1、2、3、4或5，优选为0或1；

手性配体式(IIC)优选为：

且

R¹和m的定义如式(I)中所述，R²的定义如式(II)中所述。

具体实施方式

以下结合实施例用于进一步描述本发明，但这些实施例并非限制着本发明的范围。

实施例

实施例给出了式(I)、式(II)和式(III)表示的代表性化合物的制备及相关结构鉴定数据。必须说明，下述实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。¹H NMR图谱是用Bruker仪器(400MHz)测定而得，化学位移用ppm表示。使用四甲基硅烷内标准(0.00ppm)。¹HNMR的表示方法：s＝单峰，d＝双重峰，t＝三重峰，m＝多重峰，br＝变宽的，dd＝双重峰的双重峰，dt＝三重峰的双重峰。若提供偶合常数时，其单位为Hz。

质谱是用LC/MS仪测定得到，离子化方式可为ESI或APCI。

手性化合物的ee值的测定是在Agilent Technologies 1260Infinity高效液相色谱仪上进行，手性柱采用ChiralPakAD-H,250×4.6mm I.D.,5μm、ChiralPak OD-RH,250×4.6mm I.D.,5μm和ChiralPak IC,250×4.6mm I.D.,5μm。

薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。

柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。

在下列实施例中，除非另有指明，所有温度为摄氏温度，除非另有指明，各种起始原料和试剂来自市售或者是根据已知的方法合成，市售原料和试剂均不经进一步纯化直接使用，除非另有指明，市售厂家包括但不限于Aldrich Chemical Company，ABCR GmbH&Co.KG，Acros Organics，广赞化工科技有限公司和景颜化工科技有限公司等处购买。

CD₃OD：氘代甲醇。

CDCl₃：氘代氯仿。

DMSO-d₆：氘代二甲基亚砜。

氩气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气气球。

实施例中无特殊说明，反应中的溶液是指水溶液。

对化合物进行纯化，采用硅胶柱层析洗脱剂体系和薄层色谱法，其中洗脱剂体系选自：A：石油醚和乙酸乙酯体系；B：二氯甲烷和甲醇体系；C：二氯甲烷和乙酸乙酯体系；其中溶剂的体积比根据化合物的极性不同而不同，也可以加入少量的酸性或碱性试剂进行调节，如醋酸或三乙胺等。

实施例1

(R)-1-(2,4-二氟苯基)-1-(2-(1-(6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)嘧啶-5-基)乙-1-醇

第一步

(2,4-二氟苯基)溴化镁

氩气保护下，将镁屑(374mg,15.6mmol)、碘(45mg,0.35mmol)溶于10mL的干燥四氢呋喃中。将1-溴-2,4-二氟苯1a(2.3g,12.0mmol)溶于2mL的干燥四氢呋喃中，然后取0.4mL1-溴-2,4-二氟苯1a的四氢呋喃溶液滴加到上述反应液中，并以吹风机加热反应瓶底，引发反应。缓慢加入剩余1-溴-2,4-二氟苯1a的四氢呋喃溶液，保持反应液微沸。滴毕，室温反应1小时。反应结束后，得到(2,4-二氟苯基)溴化镁1b(12mL,1M/THF,淡黄色液体)，产率：100％。

第二步

2-(1-(叔丁氧羰基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)嘧啶-5-甲酸乙酯

氩气保护下，将2-氯嘧啶-5-甲酸乙酯1c(12.97g,69.51mmol)和4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯1d(27.94g,90.36mmol)、四(三苯基膦)钯(4.0g，3.48mmol)、碳酸铯(67.9g,208.5mmol)溶于360mL乙二醇二甲醚和水(V:V＝5:1)的混合溶剂中，85℃反应4小时。反应结束后，冷却至室温，加入300mL乙酸乙酯和150mL水，收集有机相，水相以乙酸乙酯(150mL)萃取，合并有机相，依次以水(150mL×3)和饱和氯化钠溶液(150mL)洗涤，以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到2-(1-(叔丁氧羰基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)嘧啶-5-甲酸乙酯1e(21.2g,淡黄色固体)，产率：91.5％。

MS m/z(ESI)：278.0[M-55]

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.23(s,2H),7.43(s,1H),4.44(d,J＝7.1Hz,2H),4.23(d,J＝2.5Hz,2H),3.65(t,J＝5.6Hz,2H),2.75(s,2H),1.50(s,9H),1.43(t,J＝7.1Hz,3H).

第三步

2-(1-(叔丁氧羰基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)嘧啶-5-甲酸

将2-(1-(叔丁氧羰基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)嘧啶-5-甲酸乙酯1e(21.2g，63.6mmol)和一水合氢氧化锂(4.0g,95.38mmol)溶于135mL四氢呋喃、甲醇和水(V:V:V＝10:2.5:1)的混合溶剂中，30℃下反应1小时。析出大量固体，过滤，以水(50mL×2)洗涤。将滤饼置于真空干燥箱，50℃下干燥，得到2-(1-(叔丁氧羰基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)嘧啶-5-甲酸1f(17.3g，淡黄色固体)，产率：89.2％。

第四步

4-(5-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)嘧啶-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯

将2-(1-(叔丁氧羰基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)嘧啶-5-甲酸1f(17.3g,56.7mmol)、N,O-二甲基羟胺盐酸盐(8.29g,84.99mmol)和N,N-二异丙基乙胺(38mL,226.64mmol)溶于200mL二氯甲烷中，冰水浴下加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)(33.0g,84.99mmol)，室温下搅拌5分钟后，30℃下反应2小时。反应结束后，加入200mL水，分液，收集有机相，水相以二氯甲烷(100mL)萃取，合并有机相，依次以水(100mL×2)和饱和氯化钠溶液(100mL)洗涤，以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到4-(5-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)嘧啶-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯1g(14.6g，白色固体)，产率：73.9％。

MS m/z(ESI)：292.9[M-55]

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.99(s,2H),7.26(s,1H),4.14(d,J＝2.0Hz,2H),3.57(d,J＝4.9Hz,2H),3.53(s,3H),3.34(s,3H),2.67(s,2H),1.42(s,9H).

第五步

(5-乙酰基嘧啶-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯

氩气保护下，冰浴下，将4-(5-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)嘧啶-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯1g(516g,1480mmol)溶于5L四氢呋喃中，冰水浴下缓慢滴加甲基溴化镁试剂(2.96L,1M/THF)，滴毕，0℃反应1.5小时。反应结束后，将上述反应液倒入5L饱和氯化铵冰水溶液中，边倒边搅拌，然后加入1L乙酸乙酯，搅拌10min，收集有机相，水相以乙酸乙酯(1L)萃取，合并有机层，以饱和氯化钠溶液(3L)洗涤，以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到(5-乙酰基嘧啶-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯1h(395g,淡黄色固体)，产率为88％。

第六步

(R)-4-(5-(1-(2,4-二氟苯基)-1-羟基乙基)嘧啶-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯

氩气保护下，将(5-乙酰基嘧啶-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯1h(2.53g,8.35mmol)和(S)-3,3'-二(3,3-二甲基丁基)-[1,1'-联萘]-2,2'-二醇1i(3.8g,8.35mmol)溶于80mL无水四氢呋喃中，降温至-45℃，滴加(2,4-二氟苯基)溴化镁1b(50mL,1mol/L)，加完后缓慢升至室温，室温下继续反应30min。反应结束后，降温至0℃，加入20mL饱和氯化铵溶液淬灭反应，加入15mL 1N的稀盐酸，以乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，以饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：C体系)纯化，得到(R)-4-(5-(1-(2,4-二氟)-1-羟乙基)-嘧啶-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯1j(3.0g)，产率：86％，95.42％ee。(ee值测定方法：手性柱：ChiralPak AD-H,250×4.6mm I.D.,5μm；柱温：25℃；流速：1.0mL/min；浓度：1.0mg/mL；进样量：1.0μL；流动相：正己烷/异丙醇/二乙胺＝95/10/0.1(V/V/V)；R构型保留时间：14.126min，含量97.711％；S构型保留时间：16.035min，含量2.289％。)

MS m/z(ESI)：418.0[M+1]

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.69(s,2H),7.68(q,J＝8.0Hz,1H),7.18(s,1H),6.92(t,J＝8.0Hz,1H),6.77(t,J＝8.0Hz,1H),4.15(s,2H),3.61(t,J＝8.0Hz,2H),2.69(s,2H),2.00(s,3H),1.48(s,9H).

第七步

方法一：(R)-1-(2,4-二氟苯基)-1-(2-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)嘧啶-5-基)乙醇盐酸盐

将(R)-4-(5-(1-(2,4-二氟)-1-羟乙基)-嘧啶-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯1j(6.0g,14.4mmol)溶于20mL盐酸二氧六环溶液(4M)，室温下反应16小时。反应结束后，过滤析出的固体，得到(R)-1-(2,4-二氟苯基)-1-(2-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)嘧啶-5-基)乙醇盐酸盐1k。

方法二：(R)-1-(2,4-二氟苯基)-1-(2-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)嘧啶-5-基)乙醇三氟乙酸盐

将(R)-4-(5-(1-(2,4-二氟)-1-羟乙基)-嘧啶-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯1j(6.0g,14.4mmol)溶于20mL二氯甲烷中，加入6mL三氟乙酸，室温下搅拌过夜。反应结束后，减压浓缩，将得到的残留物溶解于3mL二氯甲烷中，边搅拌边缓慢滴加异丙醚，析出固体，过滤，得到粗品产物(4.2g,土黄色固体)；将4.2g粗品溶于8mL乙腈中，加热使固体全部溶解，降温至-5～0℃，析出固体过滤，得到(R)-1-(2,4-二氟苯基)-1-(2-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)嘧啶-5-基)乙醇三氟甲酸盐1r(3.13g)，产率：50％，99.48％ee。(ee值测定方法：手性柱：ChiralPak OD-RH,150×4.6mm I.D.,5μm；柱温：25℃；流速：0.4mL/min；浓度：1.0mg/mL；进样量：1.0μL；流动相：乙腈/50mM KPF₆水溶液＝40/60(V/V)；R构型保留时间：5.27min，含量99.74％；S构型保留时间：6.00min，含量0.26％。)

MS m/z(ESI)：317.9[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.89-8.80(m,2H),8.75(s,2H),7.85-7.79(m,1H),7.18-7.09(m,3H),3.86-3.85(m,2H),3.31-3.30(m,2H),2.78-2.77(m,2H),1.91(s,3H).

第八步

(R)-1-(2,4-二氟苯基)-1-(2-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)嘧啶-5-基)乙醇

方法一：将步骤七中的方法一得到的1k溶于20mL甲醇中，滴加饱和碳酸氢钠溶液，调酸碱度至pH＝7～8，以乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并有机相，以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物溶于12mL乙腈中，加热全部溶解，降温至-5～0℃，析出晶体，过滤，得到(R)-1-(2,4-二氟苯基)-1-(2-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)嘧啶-5-基)乙醇1m(3.05g)，产率：67％，99.0％ee。(ee值测定方法：手性柱：ChiralPak OD-RH,150×4.6mm I.D.,5μm；柱温：25℃；流速：0.5mL/min；浓度：1.0mg/mL；进样量：1.0μL；流动相：乙腈/100mM KPF₆水溶液＝40/60(V/V)；R构型保留时间：6.99min，含量99.50％；S构型保留时间：8.02min，含量0.50％)

MS m/z(ESI)：317.9[M+1]

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.67(s,2H),7.73-7.67(m,1H),7.19(s,1H),6.95-6.90(m,1H),6.77-6.71(m,1H),3.57(d,J＝2.4Hz,2H),3.06(t,J＝5.6Hz,2H),2.55-2.54(m,2H),1.99(s,3H).

方法二：以步骤七中方法二得到的1r为原料，按照步骤八方法一的同样操作步骤制备得到(R)-1-(2,4-二氟苯基)-1-(2-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)嘧啶-5-基)乙醇1m。

第九步

(R)-1-(2-(1-(6-溴吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)嘧啶-5-基)-1-(2,4-

二氟苯基)乙-1-醇

将(R)-1-(2,4-二氟苯基)-1-(2-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)嘧啶-5-基)乙醇1m(4.8g,15mmol)、6-溴-4-氯吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪1n(3.5g,15mmol,根据专利US20160031892制得)和N,N-二异丙基乙胺(2.9g,22.5mmol)溶于72mL二氯甲烷中，室温下反应3小时。反应结束后，减压浓缩，加入120mL正庚烷和水(V:V＝3:2)的混合溶剂，室温下搅拌1小时，析出固体，将得到的固体溶于77mL95％乙醇中，加热至50-60℃，当固体全部溶解，降至室温，搅拌2小时，析出固体；在反应体系中滴加38mL水，降温至0-10℃，继续搅拌2小时，过滤，烘干，得到(R)-1-(2-(1-(6-溴吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)嘧啶-5-基)-1-(2,4-二氟苯基)乙-1-醇1p(5.8g)，产率：75％。

MS m/z(ESI)：512.8[M+1]

第十步

(R)-1-(2,4-二氟苯基)-1-(2-(1-(6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-

基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)嘧啶-5-基)乙-1-醇

氩气保护下，将(R)-1-(2-(1-(6-溴吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)嘧啶-5-基)-1-(2,4-二氟苯基)乙-1-醇1p(12.8g,25mmol)、1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1H-吡唑1q(6.3g,30mmol)、碳酸铯(16.3g,50mmol)和[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.44g,0.6mmol)溶于173mL1,4-二氧六环和水(V:V＝3:1)的混合溶剂中，80-90℃下反应4小时。反应结束后，降温至40-50℃，搅拌下加入220mL，再加入260mL乙酸乙酯，室温下继续搅拌10分钟，分去水层，收集有机相，以10％的氯化钠溶液(200mL)洗涤，以无水硫酸钠干燥，用硅藻土过滤，将滤液减压浓缩至50mL，加入100mL正庚烷，室温下搅拌，析出固体，继续搅拌1小时，过滤，将滤饼烘干，得到土黄色固体。将固体溶于160mL的乙酸乙酯中，加入乙二胺四乙酸二钠溶液(0.02mol/L,80mL)，室温下搅拌1小时，分去水层。再加入乙二胺四乙酸二钠溶液(0.02mol/L,80mL)，室温下搅拌1小时，分去水层。用硅藻土过滤，收集有机相，减压浓缩，以160mL乙酸乙酯溶解固体，用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到(R)-1-(2,4-二氟苯基)-1-(2-(1-(6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)嘧啶-5-基)乙-1-醇1(9.5g)，产率：73％，99.54％ee。(ee值测定方法：手性柱：ChiralPak IC,250×4.6mm I.D.,5μm；柱温：25℃；流速：0.5mL/min；浓度：1.0mg/mL；进样量：1.0μL；流动相：异丙醇/甲醇/乙酸乙酯＝40/60/0.1(V/V/V)；R构型保留时间：20.32min，含量99.77％；S构型保留时间：22.59min，含量0.23％。)

MS m/z(ESI)：514.9[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ8.75(s,2H),8.06(s,1H),7.99(s,1H),7.87(d,J＝5.4Hz,1H),7.86-7.75(m,2H),7.28(d,J＝7.6Hz,2H),7.20-7.09(m,2H),6.33(s,1H),4.75(s,2H),4.16(t,J＝5.4Hz,2H),3.86(s,3H),2.83(s,2H),1.92(s,3H).

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。