阅读说明：本技术 一种通过冷冻保存部分卵巢组织来延缓女性更年期的方法 (Method for delaying female menopause by freezing and preserving part of ovarian tissue ) 是由 鲁赫利亚达·尼科莱 茹孜古丽·阿布都外力 于 2020-05-29 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种通过冷冻保存部分卵巢组织来延缓女性更年期的方法,包括以下步骤：S1、通过腹腔镜手术取得在40-45岁的绝经前女性中部分卵巢的皮质和髓质层；S2、无菌条件下处置,以氙气装罐,将装罐的卵巢皮质和髓质层放入液氮内保存、冷冻；S3、当女性进入绝经期时,按标准阶段性取出冷冻保存的卵巢皮质和髓质层；S4、将取出的卵巢皮质和髓质层,在室温下解冻后,立即在无菌条件下机械压碎以形成细碎的悬浮液；S5、在围绝经期与绝经期采用激素疗法一起每2-4个月皮下植入一次；本发明通过以2-4个月的间隔皮下植入的卵巢移植组织使移植物连续起作用以产生足够的激素,移植技术和更年期激素疗法相结合达到最佳效果,通过这些特征的组合可以使女性在绝经期维持长期的卵巢功能,从而延长其预期寿命。(The invention discloses a method for delaying female menopause by cryopreservation of partial ovarian tissues, which comprises the following steps: s1, obtaining cortex and medulla layer of partial ovary in 40-45 year old premenopausal women through laparoscope operation; s2, treating under aseptic condition, canning with xenon, and storing and freezing the canned ovarian cortex and medulla layer in liquid nitrogen; s3, when the female enters the menopause, taking out the ovary cortex and medulla layer preserved by freezing according to standard stage; s4, mechanically crushing the removed ovarian cortex and medulla layer under aseptic conditions immediately after thawing at room temperature to form a finely divided suspension; s5, subcutaneously implanting the implant once every 2-4 months in peri-menopause and menopause by hormone therapy; the present invention enables the graft to continuously act by the ovary transplantation tissue implanted subcutaneously at intervals of 2-4 months to generate sufficient hormone, and the best effect is achieved by combining the transplantation technology and the climacteric hormone therapy, and the combination of the characteristics can enable the female to maintain the long-term ovary function in the menopause period, thereby prolonging the life expectancy thereof.)

一种通过冷冻保存部分卵巢组织来延缓女性更年期的方法

技术领域

本发明属于医学领域，尤其涉及妇科，内分泌学，老年医学领域，具体涉及一种通过冷冻保存部分卵巢组织来延缓女性更年期的方法。

背景技术

卵巢，解剖名。位于女性盆腔内，为成对的实质性器官。其主要功能是产生和排出卵细胞，分泌性激素，以促进女性性征的发育并维持之。

围绝经期综合征又称更年期综合征(MPS)，指妇女绝经前后出现性激素波动或减少所致的一系列以自主神经系统功能紊乱为主，伴有神经心理症状的一组症候群。绝经可分为自然绝经和人工绝经两种。自然绝经指卵巢内卵泡用尽，或剩余的卵泡对促性腺激素丧失了反应，卵泡不再发育和分泌雌激素，不能刺激子宫内膜生长，导致绝经。人工绝经是指手术切除双侧卵巢或用其他方法停止卵巢功能，如放射治疗和化疗等。单独切除子宫而保留一侧或双侧卵巢者，不作为人工绝经。

随着社会的飞速发展，人们越来越重视对于身体的养护，其中，对于女性人群而言，随着年龄的增长，女性更年期的到来，深刻影响着女性的正常生活，严重者即被称为更年期综合征，如今，对于女性更年期的延缓方法有多种，有的采用药物延缓，比如中国公开授权发明一种治疗女性更年期综合症及延缓衰老的药物组合物(公开号：CN200710302041.6)，以中药补肾为主，用于女性更年期，其特征是具有“药食同源”、“防治同步”纯中药复方、对提高女性更年期健康质量、改善女性更年期症候群、骨质疏松、提高免疫功能、抗衰老、改善心血管功能方面均具明显的作用，然而，由于每个人的身体状况不同，有的人群会对其中一种药物产生排斥反应，对本人更年期延缓的效果不佳，同时，还有的人群对药物治疗进行排斥，因此该发明局限性较大，还有的女性更年期患者进行卵巢组织的自体移植方法，来延缓更年期，然而此种方法采用她人卵巢却会引起道德以及法律的问题，为此，提出一种通过冷冻保存部分卵巢组织来延缓女性更年期的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种通过冷冻保存部分卵巢组织来延缓女性更年期的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

一种通过冷冻保存部分卵巢组织来延缓女性更年期的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、通过腹腔镜手术取得在40-45岁的绝经前女性中部分卵巢的皮质和髓质层；

S2、无菌条件下处置，以氙气装罐，将装罐的卵巢皮质和髓质层放入液氮内保存、冷冻；

S3、当女性进入绝经期时，按标准阶段性取出冷冻保存的卵巢皮质和髓质层；

S4、将取出的卵巢皮质和髓质层，在室温下解冻后，立即在无菌条件下机械压碎以形成细碎的悬浮液；

S5、在围绝经期与绝经期采用激素疗法一起每2-4个月皮下植入一次。

优选的：在S1中，取出女性部分卵巢的皮质和髓质层时，确定待取出部分卵巢组织女性的身体状况，确定待切除女性正常的月经周期不受干扰，抗苗勒管激素的水平不低于1.5-0.8ng/ml，卵泡刺激素的水平不高于25mU/l，同时，确定当前待取出卵巢组织女性处于未绝经期间，切除卵巢碎片时应平等去除皮质和髓质层，优选为楔形切除。

优选的：在S2中，在无菌条件下处置，以氙气装罐，将装罐的卵巢皮质和髓质层放入液氮内冷冻时，包括以下步骤：

S21、在无菌条件下，将其立即切成条状或条带状中的任意一种：整个卵巢长度为8-10mm，截面不超过2x2mm；

S22、将这些条状物质以1.5个标准大气压的压力放入充满氙气的密封胶囊中，并以每分钟1度的速率逐渐冷却至0摄氏度；

S23、在零温度下暴露60-62分钟后，继续以每分钟1度的速率冷却至-20摄氏度；

S24、冷却至-20摄氏度后立即将胶囊转移到液氮中，在其中被储存无限的时间。

优选的：装罐的卵巢皮质和髓质层的冷冻时间不少于三年，保存装罐的卵巢皮质和髓质层时，对保存时间进行记录。

优选的：在S4中，将取出的卵巢皮质和髓质层制备为细悬浮液时，包括以下步骤：

在室温下解冻后，当一个或多个胶囊被打开时，立即在无菌条件下将卵巢组织机械粉碎，直到获得细碎片，可将其通过具有2mm内腔直径的注射器针头按压，单次植入的组织体积为3-4立方毫米。

优选的：取出的部分卵巢皮质和髓质层为每侧卵巢皮质和髓质层的25-30％。

优选的：当取出部分卵巢组织的女性进入围绝经期时，开始绝经激素治疗，并与含雌二醇的制剂一起服用，将由解冻的含有髓质和皮质物质的卵巢碎片制成的小碎片悬浮液定期给予取出部分卵巢组织的女性皮下植入。

优选的：取出部分卵巢组织的女性小碎片悬浮液的皮下植入间隔时间为2-4个月，并配合更年期激素药物替代疗法。

本发明的技术效果和优点：本发明提出的一种通过冷冻保存部分卵巢组织来延缓女性更年期的方法，与现有技术相比，具有以下优点：

一、在本发明的方法中，进行卵巢组织的自体移植，这排除了接受移植者发生排斥反应的可能性，并且还排除了与组织和器官同种异体移植有关的许多道德和法律问题，同时，由于卵巢移植为从自身移植出去的，使得本发明方法不具备局限性，只需要每个女性在进入绝经期前采用本发明方法即可；

二、在绝经前取得和保存自体移植物可以保存仍然活跃的卵巢组织，可以确保在保存过程中尤其是髓质层负责抑制细胞凋亡和组织存活；

三、采用以氙气装罐液氮保存卵巢组织的冷冻保存允许在无限时间后重新植入("return")；

四、通过将卵巢移植物存储在单独的胶囊中，可以逐渐解冻碎片以进行移植；移植时不需要解冻整个体积的组织。

五、本发明通过以2-4个月的间隔皮下植入的卵巢移植组织使移植物连续起作用以产生足够的激素，移植技术和更年期激素疗法相结合达到最佳效果，通过这些特征的组合可以使女性在绝经期维持长期的卵巢功能，从而延长其预期寿命。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例一

本发明提供了一种通过冷冻保存部分卵巢组织来延缓女性更年期的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、通过腹腔镜手术取得在40岁的绝经前女性中部分卵巢的皮质和髓质层；

S2、无菌条件下处置，以氙气装罐，将装罐的卵巢皮质和髓质层放入液氮内保存、冷冻；

S3、当女性进入绝经期时，按标准阶段性取出冷冻保存的卵巢皮质和髓质层；

S4、将取出的卵巢皮质和髓质层，在室温下解冻后，立即在无菌条件下机械压碎以形成细碎的悬浮液；

S5、在围绝经期与绝经期采用激素疗法一起每2个月皮下植入一次。

本实施例中，具体的：在S1中，取出女性部分卵巢的皮质和髓质层时，确定待取出部分卵巢组织女性的身体状况，确定待切除女性正常的月经周期不受干扰，抗苗勒管激素的水平不低于1.5ng/ml，卵泡刺激素的水平为25mU/l，同时，确定当前待取出卵巢组织女性处于未绝经期间，切除卵巢碎片时应平等去除皮质和髓质层，优选为楔形切除。

本实施例中，具体的：在S2中，将装罐的卵巢皮质和髓质层放入液氮内冷冻时，包括以下步骤：

S21、在无菌条件下，将其立即切成条状或条带状中的任意一种：整个卵巢长度为8mm，截面为1.8x1.8mm；

S22、将这些条状物质以1.5个标准大气压的压力放入充满氙气的密封胶囊中，并以每分钟1度的速率逐渐冷却至0摄氏度；

S23、在零温度下暴露60分钟后，继续以每分钟1度的速率冷却至-20摄氏度；

S24、冷却至-20摄氏度后立即将胶囊转移到液氮中，在其中被储存无限的时间。

本实施例中，具体的：装罐的卵巢皮质和髓质层的冷冻时间不少于三年，保存装罐的卵巢皮质和髓质层时，对保存时间进行记录；可以确保冷冻时间达到三年以上。

本实施例中，具体的：取出的部分卵巢皮质和髓质层为每侧卵巢皮质和髓质层的25％。

本实施例中，具体的：当取出部分卵巢组织的女性进入围绝经期时，开始绝经激素治疗，并与含雌二醇的制剂一起服用，将由解冻的含有髓质和皮质物质的卵巢碎片制成的小碎片悬浮液定期给予取出部分卵巢组织的女性皮下植入；由于髓质物质功能性片段的存在会增加外源性雌二醇衍生物的生物利用度，所以和更年期激素疗法相结合可以达到最佳效果。

本实施例中，具体的：取出部分卵巢组织的女性小碎片悬浮液的皮下植入间隔时间为60天，并配合更年期激素药物替代疗法。

通过采用上述技术方案，

实施例二

本发明还提供了一种通过冷冻保存部分卵巢组织来延缓女性更年期的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、通过手术取得在42岁的绝经前女性中部分卵巢的皮质和髓质层；

S2、无菌条件下处置，以氙气装罐，将装罐的卵巢皮质和髓质层放入液氮内保存、冷冻；

S3、当女性进入绝经期时，按标准阶段性取出冷冻保存的卵巢皮质和髓质层；

S4、将取出的卵巢皮质和髓质层，在室温下解冻后，立即在无菌条件下机械压碎以形成细碎的悬浮液；

S5、在围绝经期与绝经期采用激素疗法一起每3个月皮下植入一次。

本实施例中，具体的：在S1中，取出女性部分卵巢的皮质和髓质层时，确定待取出部分卵巢组织女性的身体状况，确定待切除女性正常的月经周期不受干扰，抗苗勒管激素的水平不低于1.2ng/ml，卵泡刺激素的水平为24mU/l，同时，确定当前待取出卵巢组织女性处于未绝经期间，切除卵巢碎片时应平等去除皮质和髓质层，优选为楔形切除。

本实施例中，具体的：在S2中，将装罐的卵巢皮质和髓质层放入液氮内冷冻时，包括以下步骤：

S21、在无菌条件下，将其立即切成条状或条带状中的任意一种：整个卵巢长度为9mm，截面为1.9x1.9mm；

S22、将这些条状物质以1.5个标准大气压的压力放入充满氙气的密封胶囊中，并以每分钟1度的速率逐渐冷却至0摄氏度；

S23、在零温度下暴露61分钟后，继续以每分钟1度的速率冷却至-20摄氏度；

S24、冷却至-20摄氏度后立即将胶囊转移到液氮中，在其中被储存无限的时间。

本实施例中，具体的：装罐的卵巢皮质和髓质层的冷冻时间为四年，保存装罐的卵巢皮质和髓质层时，对保存时间进行记录。

本实施例中，具体的：取出的部分卵巢皮质和髓质层为每侧卵巢皮质和髓质层的27％。

本实施例中，具体的：取出部分卵巢组织的女性小碎片悬浮液的皮下植入间隔时间为90天，并配合更年期激素药物替代疗法。

实施例三

本发明提供了一种通过冷冻保存部分卵巢组织来延缓女性更年期的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、通过手术取得在45岁的绝经前女性中部分卵巢的皮质和髓质层；

S2、无菌条件下处置，以氙气装罐，将装罐的卵巢皮质和髓质层放入液氮内保存、冷冻；

S3、当女性进入绝经期时，按标准阶段性取出冷冻保存的卵巢皮质和髓质层；

S4、将取出的卵巢皮质和髓质层，在室温下解冻后，立即在无菌条件下机械压碎以形成细碎的悬浮液；

S5、在围绝经期与绝经期采用激素疗法一起每4个月皮下植入一次。

本实施例中，具体的：在S1中，取出女性部分卵巢的皮质和髓质层时，确定待取出部分卵巢组织女性的身体状况，确定待切除女性正常的月经周期不受干扰，抗苗勒管激素的水平不低于0.8ng/ml，卵泡刺激素的水平为25mU/l，同时，确定当前待取出卵巢组织女性处于未绝经期间，切除卵巢碎片时应平等去除皮质和髓质层，优选为楔形切除。

本实施例中，具体的：在S2中，将装罐的卵巢皮质和髓质层放入液氮内冷冻时，包括以下步骤：

S21、在无菌条件下，将其立即切成条状或条带状中的任意一种：整个卵巢长度为10mm，截面为2x2mm；

S22、将这些条状物质以1.5个标准大气压的压力放入充满氙气的密封胶囊中，并以每分钟1度的速率逐渐冷却至0摄氏度；

S23、在零温度下暴露62分钟后，继续以每分钟1度的速率冷却至-20摄氏度；

S24、冷却至-20摄氏度后立即将胶囊转移到液氮中，在其中被储存无限的时间。

本实施例中，具体的：装罐的卵巢皮质和髓质层的冷冻时间为五年，保存装罐的卵巢皮质和髓质层时，对保存时间进行记录。

本实施例中，具体的：取出的部分卵巢皮质和髓质层为每侧卵巢皮质和髓质层的30％。

本实施例中，具体的：取出部分卵巢组织的女性小碎片悬浮液的皮下植入间隔时间为120天，并配合更年期激素药物替代疗法。

工作原理：在本发明的方法中，进行卵巢组织的自体移植。这排除了接受移植者发生排斥反应的可能性，并且还排除了与组织和器官同种异体移植有关的许多道德和法律问题，在绝经前取得和保存自体移植物可以保存仍然活跃的卵巢组织，制备和保存皮质层和髓质层组织复合物的原因是：在保存过程中尤其是髓质层负责抑制细胞凋亡和组织存活。与髓-皮质层的复合物相比，仅皮质层冷冻保存的特征在于较差的移植物存活，卵巢组织的冷冻保存允许在无限时间后重新植入("return")，因为液氮中移植物的保存期限为数十年。在取卵巢组织与返还之间，时间间隔应不少于三年，因为返还时间是在绝经期开始时(1年没有月经)进行的，并且该方法中必须在出现性激素标志物围绝经期样改变之前进行采取卵巢组织(AMH降低，FSH和LH增长)。最佳做法是开始分阶段移植时间在绝经期开始时并和更年期激素替代治疗一起开始。将卵巢移植物存储在单独的胶囊中，可以逐渐解冻碎片以进行移植；移植时不需要解冻整个体积的组织。

为了将碎片解冻后进行移植(返回)，将其机械压碎以形成细碎的悬浮液，然后通过粗厚针将其皮下植入。这种返回方法无需进行剖腹手术或其他腹腔内干预，操作很简单且不需要全身麻醉；极为重要的是移植组织的返回频率，众所周知，冷冻保存，解冻和移植后的卵巢移植组织在体内的维持作用有限，通常，它限制在2-6个月，因此，以2-4个月的间隔皮下植入的卵巢移植组织使移植物连续起作用以产生足够的激素；移植技术和更年期激素疗法相结合是最佳的，因为髓质物质功能性片段的存在会增加外源性雌二醇衍生物的生物利用度，本方法这些特征的组合可以使女性在绝经期维持长期的卵巢功能，从而延长其预期寿命。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施案例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。