阅读说明：本技术 一种治疗急性肝炎的赤芍多酚类药物制剂及其制备方法 (Red peony root polyphenol pharmaceutical preparation for treating acute hepatitis and preparation method thereof ) 是由 张建军 李伟 王淳 于 2020-03-21 设计创作，主要内容包括：本发明公开一种治疗急性肝炎的药物制剂,所述药物含有赤芍总酚,本发明所述赤芍总酚可使大鼠血浆中的炎性因子表达下降,赤芍及其总酚类成分可以通过减少炎症因子的释放而减轻急性肝炎的炎症反应和损伤；本发明所述赤芍总酚可用于急性肝炎。(The invention discloses a pharmaceutical preparation for treating acute hepatitis, which contains red paeony root total phenols, the red paeony root total phenols can reduce the expression of inflammatory factors in rat plasma, and red paeony root and total phenol components thereof can reduce the inflammatory reaction and the injury of the acute hepatitis by reducing the release of the inflammatory factors; the total phenols of red peony root of the present invention can be used for acute hepatitis.)

一种治疗急性肝炎的赤芍多酚类药物制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种药物及其制备方法，特别涉及一种治疗急性肝炎的赤芍多酚 类药物制剂及其制备方法。

背景技术

在现代临床应用中，赤芍多以复方的形式与白芍、生地、牡丹皮、大黄、枳 实、香附、丹参、川芎等药形成药对，以发挥清热凉血、散瘀止痛、清泻肝火的 功效，临床上多用于治疗心脑血管疾病、肝胆疾病及炎症反应性疾病。赤芍主要 含有单萜苷类、酚类、多糖类等化学成分。单萜类化合物是指分子中含有两个分 子异戊二烯单位的萜烯及其衍生物，目前学者对赤芍药性功效物质基础的研究主 要集中于以含量较高的芍药苷为代表的赤芍单萜苷类成分；酚类化合物是指芳香 烃中苯环上的氢原子被羟基取代的化合物，而对赤芍酚类等其他成分的研究较少， 因而对其药效物质基础的研究还不够全面，作用机理不够明确。大孔吸附树脂可 吸附赤芍单萜苷类和酚类，而聚酰胺树脂仅对酚类吸附，本研究利用赤芍两类主 要化学成分对两种吸附树脂的吸附性能差异，采用色谱法进行成分拆分。

发明内容

本发明目的在于提供一种治疗急性肝炎的赤芍多酚类药物制剂及其制备方法，本发明目的是通过如下技术方案实现的：

一种治疗急性肝炎的药物制剂，所述药物含有赤芍总酚。

本发明药物制剂由如下方法制成：

赤芍总酚制备：取赤芍饮片，经煎煮提取制成水提液，按赤芍量0.5-20重量倍 通过聚酰胺树脂柱，用聚酰胺量2-10倍水洗涤，收集水洗液备用(含赤芍单萜苷 类和多糖类成分)；再用聚酰胺量1-20倍30-95％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；减 压浓缩至每mL相当于含生药2g，即得赤芍总多酚提取物；

本发明药物制剂优选如下方法制成：

赤芍总酚制备：取赤芍饮片，经煎煮提取制成水提液，按赤芍量5、10或15 重量倍通过聚酰胺树脂柱，用聚酰胺量4或8倍水洗涤，收集水洗液备用；再用 聚酰胺量1、10或15倍40％、60％或95％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；减压浓缩 至每mL相当于含生药2g，即得赤芍总多酚提取物；

本发明药物用常规方法制成药学上可接受的剂型，包括口服剂型和注射剂型； 所述口服剂型为胶囊剂，口服液体制剂，丸剂。

本发明药物制剂在制备治疗急性肝炎的药物中的应用。

附图说明

图1：赤芍水提物、赤芍总酚、赤芍总单萜样品HPLC色谱图；

A：赤芍水提物；B：赤芍总酚；C：赤芍总单萜；1：没食子酸；2：氧化芍药苷； 3：儿茶素；4：芍药内脂苷；5：没食子酸乙酯；6：芍药苷；7：苯甲酸芍药苷。

具体实施方式

下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。

实验例1：

1 材料

1.1 动物

雄性SD大鼠5只，体重(200±20)g，购买自斯贝福(北京)实验动物科技 有限公司，饲养于北京中医药大学SPF级动物房。实验期间大鼠自由饮水、摄食， 动物房室温为20-22℃，相对湿度60％-70％，12h灯照、黑暗模拟昼夜交替。

1.2 药物及制备

细菌脂多糖(LPS，购自北京百诺威生物科技有限公司)，用生理盐水配制成 80mg/L；角叉菜胶(Ca，购自北京百诺威生物科技有限公司)，用生理盐水配成 10g/L，均放于4℃保存备用。

赤芍水提物制备：取赤芍饮片，加水浸泡，煎煮提取，提取液趁热过滤，合 并，减压浓缩至每1mL含生药约2g，即得赤芍水提物，4℃冷藏，备用。

赤芍总酚制备：取赤芍饮片，按上述方法经煎煮提取制成水提液，通过聚酰 胺树脂柱，再用水洗涤聚酰胺柱，收集水洗液备用，再用乙醇洗脱，收集乙醇洗 脱液，减压浓缩至每1mL相当于含生药2g，即得赤芍总多酚提取物，4℃冷藏， 备用。

赤芍总单萜制备：取上述收集的聚酰胺树脂柱水洗液，通过D101型大孔树脂 柱，用水洗涤大孔树脂，弃去水洗液；再用乙醇洗脱大孔树脂，收集乙醇洗脱液， 减压每1mL相当于含生药2g，即得赤芍总单萜提取物，4℃冷藏，备用。

1.3 试剂盒及仪器

谷丙转氨酶(ALT)试剂盒(批号：20191110)、谷草转氨酶(AST)试剂盒 (批号：20191110)、白介素-1β(IL-1β)试剂盒(批号：20191012)、白介素-6(IL-6) 试剂盒(批号：20191012)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)试剂盒(批号：20191012)、 干扰素-γ(IFN-γ)试剂盒(批号：20191012)以上试剂盒均购自北京华英生物技 术研究所。

半自动血凝分析仪(型号：普朗PUN-208A)，半自动生化仪(厂家：北京松 上技术有限公司，型号：A6)，酶标分析仪(无锡华卫德朗仪器仪器有限公司，型 号：华卫德朗DR-200BS)，聚酰胺树脂和D101大孔树脂(上海华镇科技有限公司， 30-60目)，Agilent 1100型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)

2 方法

2.1 色谱条件

以赤芍中没食子酸、氧化芍药苷、儿茶素、芍药内脂苷、没食子酸乙酯、芍 药苷、苯甲酰芍药苷7种主要成分的色谱分离度为指标，建立可以区分赤芍水提 取物、赤芍总单萜、赤芍总多酚的色谱条件，色谱柱为DIKMA C18柱(4.6mm×150 mm，5μm)；流动相组成为乙腈(A)-0.05％冰醋酸水溶液(B)，梯度洗脱，洗脱条件： 0→6min，97％(B)；6→7min，97％→91％(B)；7→45min，91％(B)；45→50min， 91％→70％(B)；50→69min，70％(B)；流速1mL/min，柱温25℃，检测波长 为235nm，进样量10μL。

2.2 分组和给药

动物适应性喂养3d后将大鼠随机分为5组，分别为空白组、模型组、赤芍水 提物组(20g/kg)、赤芍总单萜组(20g/kg)、赤芍总酚组(20g/kg)，每组10只。 每天上午按10mL/kg体重给每组动物进行预防给药，连续7d，根据体重适当调整 灌胃量，正常组和模型组每天灌胃去离子水。

2.3 造模

实验第8d上午8点，除空白组外，其余各组按2.5mg/kg腹腔注射LPS，空 白组注射等量的生理盐水。制备急性肝炎动物模型。

2.4 取材及指标检测

造模后6h，用10％水合氯醛麻醉大鼠，从腹主动脉取血，置于别于EDTA抗 凝管存放。

采用ELISA法，按照试剂盒操作说明测定血浆中ALT、AST、IL-1β、IL-6、 TNF-α、IFN-γ。

2.5 统计方法

实验数据用均数±标准差表示，采用SPSS Statistics 20.0进行统计分析，数据进行正态分布及方差齐性检验。数据呈正态分布，组间数据比较用单因素方 差分析(One-way ANOVA)分析，两两比较方差齐时采用LSD进行统计分析；方 差不齐采用Dunnett’s T3进行统计分析。各统计结果以P<0.05为差异有统计学意 义。

3 结果

3.1 药物指纹图谱

按照“2.1”项下色谱条件，取赤芍水提物、赤芍总单萜、赤芍总酚样品进行HPLC 分析，建立HPLC色谱图，结果表明，赤芍总单萜、赤芍总酚样品中成分差异明 显，制备的两种提取物成分互不交叉，见图1。

3.2 各组大鼠血浆中ALT、AST水平的比较

与空白组比较，模型组大鼠血浆中ALT和AST含量显著升高(P<0.01，P<0.001)； 与模型组比较，清营汤组、赤芍水提物组和赤芍总酚组ALT和AST含量均下降，差 异显著(P<0.05，P<0.01，P<0.001)。见表1。

表1各组大鼠血浆中ALT、AST水平的比较n＝10)

注：与空白组比较^##P<0.01，^###P<0.001；与模型组比较^*P<0.05，^**P<0.01，^***P<0.01。

3.3 各组大鼠血浆PGE2的比较

与空白组比较，模型组大鼠血浆PGE2含量升高(P<0.001)；与模型组比较， 赤芍水提物组、赤芍总酚组及赤芍单萜组PGE2含量均下降(P<0.01，P<0.001， P<0.001)。见表2

表2各组大鼠血浆PGE2的比较n＝10)

注：与空白组比较^###P<0.001；与模型组比较^**P<0.01，^***P<0.01。

3.4 各组大鼠血浆中炎症指标的比较

与空白组比较，模型组大鼠血浆TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-6含量均升高 (P<0.001)；与模型组比较，赤芍水提物组、赤芍总酚组TNF-α、IFN-γ、IL-1β、 IL-6含量均下降(P<0.05，P<0.01，P<0.001)；赤芍总单萜组IFN-γ、IL-1β、IL-6 含量均下降(P<0.01，P<0.001)，而TNF-α含量无明显变化。见表3。

表3各组大鼠血浆中炎症指标的比较n＝10)

注：与空白组比较^###P<0.01；与模型组比较^*P<0.05，^**P<0.01，^***P<0.001。

实验结果显示，腹腔注射LPS后大鼠血浆中PGE2、TNF-α、IL-β、IL-6和IFN-γ 的含量均显著升高，预防性给药赤芍水提物、赤芍总单萜和赤芍总酚的大鼠血浆 中这些炎性因子的表达则下降，表明赤芍及其总单萜、总酚类成分可以通过减少 炎症因子的释放而减轻急性肝炎的炎症反应和损伤。此外急性肝炎发生时会导致 肝脏损伤，从而使肝功能发生异常，ALT和AST是评价肝功能是否正常的金指标， 当肝功能发生异常时ALT和AST的生成会增多。实验结果显示，大鼠腹腔注射 LPS后血浆中AST和ALT的含量均显著升高，而预防性给药了的各给药组的ALT 和AST的含量则明显下降，表明赤芍、赤芍总单萜和赤芍总酚都具有保肝作用。

实验例2：

1.1-1.2 同实验例1

1.3 试剂盒及仪器

前列腺素E2(PGE2)试剂盒(批号：20181110)、环磷酸腺苷(cAMP)试剂 盒(批号：20181110)、白介素-1β(IL-1β)试剂盒(批号：20181012)、白介素-6 (IL-6)试剂盒(批号：20181012)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)试剂盒(批号：20181012)、 干扰素-γ(IFN-γ)试剂盒(批号：20181012)、血管内皮素(ET-1)试剂盒(批号： 20181216)、一氧化氮(NO)试剂盒(批号：20181216)、血栓素B2(TXB2)试 剂盒(批号：20181216)、6酮前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)试剂盒(批号：20181216)， 以上试剂盒均购自北京华英生物技术研究所。

半自动血凝分析仪(型号：普朗PUN-208A)，半自动生化仪(厂家：北京松 上技术有限公司，型号：A6)，酶标分析仪(无锡华卫德朗仪器仪器有限公司，型 号：华卫德朗DR-200BS)，聚酰胺树脂和D101大孔树脂(上海华镇科技有限公司， 30-60目)，Agilent 1100型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)。

2 方法

2.1 色谱条件

以赤芍中没食子酸、氧化芍药苷、儿茶素、芍药内脂苷、没食子酸乙酯、芍 药苷、苯甲酰芍药苷7种主要成分的色谱分离度为指标，建立可以区分赤芍水提 取物、赤芍总单萜、赤芍总多酚的色谱条件，色谱柱为DIKMA C18柱(4.6mm×150 mm，5μm)；流动相组成为乙腈(A)-0.05％冰醋酸水溶液(B)，梯度洗脱，洗脱条件： 0→6min，97％(B)；6→7min，97％→91％(B)；7→45min，91％(B)；45→50min， 91％→70％(B)；50→69min，70％(B)；流速1mL/min，柱温25℃，检测波长 为235nm，进样量10μL。

2.2 分组和给药

动物适应性喂养3d后将大鼠随机分为6组，分别为空白组、模型组、清营汤 组(20g/kg)、赤芍水提物组(20g/kg)、赤芍总单萜组(20g/kg)、赤芍总酚组(20 g/kg)，每组12只。每天上午按10mL/kg体重给每组动物进行预防给药，连续8d， 根据体重适当调整灌胃量，正常组和模型组每天灌胃去离子水。

2.3 造模

给药第7d上午8点，除空白组外，按25mg/kg的剂量给大鼠腹腔注射角叉 菜胶。24h后，除空白组外，按80μg/kg的剂量给大鼠尾静脉注射内毒素，制备 热毒血瘀证动物模型。空白组注射等量的生理盐水，注射完内毒素后即可作为实 验的0h。

2.4 取材及指标检测

造模后1h，用10％水合氯醛麻醉大鼠，从腹主动脉取血，分别于含枸橼酸钠 和EDTA抗凝管存放。

采用ELISA法，按照试剂盒操作说明测定血清中PGE2、cAMP、IL-1β、IL-6、 TNF-α、IFN-γ、ET-1、NO、TXB2、6-keto-PGF1α。采用发色底物法测定凝血酶时 间(TT)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)和纤维蛋白原(FIB) 值。

2.5 统计方法

实验数据用均数±标准差表示，采用SPSS Statistics 20.0进行统计分析，数据进行正态分布及方差齐性检验。数据呈正态分布，组间数据比较用单因素方 差分析(One-way ANOVA)分析，两两比较方差齐时采用LSD进行统计分析；方 差不齐采用Dunnett’s T3进行统计分析。各统计结果以P<0.05为差异有统计学意 义。

3.2 各组大鼠血浆中PGE₂、cAMP水平的比较

与空白组比较，模型组大鼠PGE2和cAMP含量显著升高(P<0.01)；与模型组 比较，清营汤组、赤芍水提物组和赤芍总酚组使PGE2和cAMP含量均下降(P<0.01)， 赤芍总单萜组cAMP含量下降(P<0.01)，与单萜组比较，赤芍总酚降低PGE2作用 明显(P<0.01)。见表4。

表4各组大鼠血浆中PGE2、cAMP水平的比较n＝12)

注：与空白组比较^##P<0.01；与模型组比较^**P<0.01；与赤芍总单萜组比较 ^△△P<0.01。

3.3 各组大鼠血浆中炎症指标的比较

与空白组比较，模型组大鼠血清TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-6含量均升高(P<0.01)；与模型组比较，赤芍水提物组、赤芍总酚组TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-6含量均下 降(P<0.05，P<0.01)；赤芍总单萜组IFN-γ、IL-1β、IL-6含量均下降(P<0.05， P<0.01)，而TNF-α含量无明显变化。见表5。

表5各组大鼠血浆中炎症指标的比较(ng/L；n＝12)

注：与空白组比较^##P<0.01；与模型组比较^*P<0.05，^**P<0.01；与赤芍总单萜 组比较^△△P<0.01。

3.4 各组大鼠凝血四项的比较

与空白组比较，模型组大鼠TT、PT、和APTT减少(P<0.01)，FIB含量明显升 高(P<0.05)；与模型组比较，赤芍水提物和赤芍总单萜组TT、PT、和APTT延长 (P<0.01)，赤芍总单萜组FIB含量明显降低(P<0.01)，赤芍总酚组的TT、PT、FIB 和APTT无明显变化(P>0.05)。见表6。

表6各组大鼠凝血四项的比较n＝12)

注：与空白组比较^#P<0.05^##P<0.01；与模型组比较^**P<0.01；与赤芍总单萜组 比较^△△P<0.01。

3.5 各组大鼠血浆中ET-1、NO、NO/ET-1的比较

与空白组比较，模型组大鼠NO含量下降(P<0.01)，ET-1含量升高(P<0.01)， NO/ET-1的比值明显下降(P<0.001)；与模型组比较，赤芍水提物组、赤芍总单萜 组和赤芍总酚组NO含量均升高(P<0.05，P<0.01)，ET-1含量下降(P<0.01)，NO/ET-1 的比值明显升高(P<0.05，P<0.01)。见表7。

表7各组大鼠血浆中ET-1、NO、ET-1/NO的比较n＝12)

注：与空白组比较^##P<0.01；与模型组比较^*P<0.05^**P<0.01；与赤芍总单萜组 比较^△P<0.05。

3.6 各组大鼠血浆中TXB₂、6-keto-PGF1α、TXB2/6-keto-PGF1α的比较

与空白组比较，模型组大鼠TXB2含量升高，TXB2/6-keto-PGF1α比值增大 (P<0.05，P<0.01)；与模型组比较，清营汤组、赤芍水提物组、赤芍总单萜组和 赤芍总酚组TXB2含量均下降(P<0.01)，赤芍水提物组、赤芍总单萜组及赤芍总 酚TXB2/6-keto-PGF1α比值下降(P<0.01)。见表8。

表8各组大鼠血浆中TXB2、6-keto-PGF1α、TXB2/6-keto-PGF1α的比较 n＝12)

注：与空白组比较^#P<0.05^##P<0.01；与模型组比较^**P<0.01；与赤芍总单萜组 比较^△P<0.05^△△P<0.01。

实验结果显示，赤芍总酚和赤芍总单萜均能通过升高NO含量，降低ET-1含 量，从而维持NO和ET-1的动态平衡，防止瘀血的形成，赤芍总单萜还可降低TXB2 含量，升高NO、6-keto-PGF1α含量，维持它们的平衡达到散瘀作用，通过将赤芍 总酚与赤芍总单萜进行对比发现赤芍总酚对ET-1、6-keto-PGF1α及 TXB2/6-keto-PGF1α的作用不及赤芍总单萜，表明赤芍总单萜散瘀作用优于赤芍总 酚。

本发明通过对赤芍总酚类成分和赤芍单萜类成分进行分离，对赤芍单萜类成 分和赤芍总酚类成分在治疗急性肝炎方面的研究，以对赤芍作用的物质基础进行 完善。

脂多糖(LPS)来源于革兰氏阴性细菌的外膜，可剌激体内巨噬细胞细胞合成 和释放多种炎症介质，是最常见的致炎因子，因此高浓度的细菌内毒素LPS常用 来诱导急性肝炎模型。腹腔注射高浓度LPS后机体因受到炎症因子的刺激而激活 体内的中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和单核一吞噬细胞系统，从而造成多种炎症介 质前列腺素(PGE2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-β)、白介素-6(IL-6)、 干扰素-γ(IFN-γ)等的释放，増加血管通透性，促使炎症细胞趋化，从而诱导急 性炎症的发生[12]。PGE2是二十碳不饱和脂肪酸，是前列腺素的一种，作为重要 的炎症介质可扩张血管，増加器官血流量等，当机体受到外周细胞因子的刺激时 可诱导前列腺素合酶(mPGES-1)及环氧合酶(COX-2)的表达，从而使PGE2的 合成增多。TNF-α是炎症反应过程中出现最早的炎性介质，能激活中性粒细胞和淋巴细胞，增加血管内皮细胞通透性，促使其他细胞因子的合成和释放，IL-6参 与机体的免疫应答，促使炎性反应发生，IL-1β广泛参与了人体组织破坏多种病理 损伤过程。赤芍总苷的制备多采用大孔树脂技术，根据其分离原理可知通过该技 术制备的赤芍总苷中会含有赤芍总酚类极性较大的成分。本发明采用聚酰胺树脂 联合大孔树脂的方法，首先通过聚酰胺树脂柱分离赤芍总酚，然后再通过大孔树 脂柱分离赤芍总单萜，首次将赤芍总酚从赤芍总单萜中分离出来，并对制备的赤 芍总酚和赤芍总单萜的指纹图谱进行分析，发现赤芍总酚中以儿茶素、没食子酸 的色谱峰为主；赤芍总单萜中以芍药苷色谱峰为主，表明赤芍总酚和赤芍总单萜 化学成分互不交叉。赤芍总单萜及赤芍总酚作为赤芍的重要化学成分，其动物实 验表明赤芍总单萜和赤芍总酚类成分都可以通过减少炎症介质的释放而达到减轻 急性肝炎炎症反应的作用，且均可以降低ALT和AST的含量，具有保肝作用。

中医学认为热毒血瘀证乃温热病邪灼伤人体津血，血受熏灼则凝结淤塞，在 其形成过程中，温热邪毒深入营血是首要因素，营阴耗损、络损津伤是病理，热 毒炽盛、热瘀交结、正虚外脱是发展趋势。研究发现热毒血瘀证在病理、病机及 治疗方面与现代医学的炎症、发热及瘀血存在着密切关系，临床上许多炎性疾病 及其并发症均具有热毒血瘀证表现，如风湿热，病毒性肝炎，过敏性紫癜，系统 性红斑狼疮等，机体发生炎症反应后会刺激发热中枢引起体温升高，通过影响血 液内各种成分和凝血机制的变化引起微循环障碍和血液流变学异常。中医理论将 内毒素归属于热邪、毒邪，用内毒素制备热毒血瘀证动物模型能很好的模拟中医 有关外邪入侵、热入营血、热盛为毒、炼血成瘀的疾病演变过程，符合中医的热 毒血瘀证形成理论，此外还为热毒血瘀证提供血液流变学、炎症因子等客观生物医学指标的变化。角叉菜胶常用于造成动物炎症模型，可与内毒素联合应用，制 备热毒血瘀证模型。

机体注射内毒素与角叉菜胶后可通过激活血液中的中性粒细胞、嗜酸性粒细 胞和单核一吞噬细胞系统，使其产生并释放IL-1β、TNF-α、IFN-γ、IL-6等炎性细 胞因子，一方面这些细胞因子作为内源性致热源可通过血脑屏障处特异的转运体 转运、终板细胞器及迷走神经等多种途径将发热信号传递至体温调节中枢。另一 方面外周细胞因子含量的升高可诱导前列腺素合酶(mPGES-1)及环氧合酶 (COX-2)的表达，进而促进中枢性发热正调节介质PGE2和cAMP的合成增多， 引起体温升高。实验结果显示，赤芍水提物、赤芍总单萜和赤芍总酚均能使PGE2、 cAMP、IL-1β、TNF-α、IFN-γ和IL-6值显著下降，赤芍总酚降低PGE2、IL-1β、 TNF-α的程度比赤芍总单帖强，提示赤芍总单萜和赤芍总酚均可通过减少炎性因 子的释放，进而降低中枢性发热介质的产生和释放达到清热作用，但赤芍总酚优 于赤芍总单帖。

此外机体所释放的IL-1β、TNF-α等炎性细胞因子又可诱导组织因子的表达， 启动外源性凝血途径；血管内皮细胞受损，内皮下胶原的暴露启动内源性凝血途 径。凝血四项可反映机体抗凝和促凝的能力，实验结果显示赤芍水提物和赤芍总 单萜能够显著延长TT、PT和APTT时间，降低FIB含量，表明二者可通过激活 相应的凝血因子改善大鼠瘀血状态，而赤芍总酚则无明显作用。NO、ET-1、TXB2 及6-keto-PGF1α是与血管内皮细胞损伤和血小板活化密切相关的活性物质，ET-1 具有强烈的收缩血管作用；NO能够扩张血管、改善微循环等；TXB2能够收缩血 管、促进血小板聚集；6-keto-PGF1α能够舒张血管、抑制血小板聚集，两者平衡 的破坏也会导致血栓的形成。

赤芍总苷的制备多采用大孔树脂技术，根据其分离原理可知通过该技术制备 的赤芍总苷中会含有赤芍总酚类极性较大的成分。本发明采用聚酰胺树脂联合大 孔树脂的方法，首先通过聚酰胺树脂柱分离赤芍总酚，然后再通过大孔树脂柱分 离赤芍总单萜，首次将赤芍总酚从赤芍总单萜中分离出来，并对制备的赤芍总酚 和赤芍总单萜的指纹图谱进行分析，发现赤芍总酚中以儿茶素、没食子酸的色谱 峰为主；赤芍总单萜中以芍药苷色谱峰为主，表明赤芍总酚和赤芍总单萜化学成 分互不交叉。赤芍总单萜及赤芍总酚作为赤芍的重要化学成分，动物实验表明二 者可通过减少炎性因子及中枢性发热正调节介质的生成及释放发挥抗炎、解热作 用，从而达到清热凉血的功效；赤芍总酚、赤芍总单萜都可通过维持NO和ET-1 平衡改善瘀血状态；但是，赤芍总单萜还可通过激活相应的凝血因子，维持TXB₂和6-keto-PGF1a含量的动态平衡缓解大鼠的瘀血状态。通过对二者进行对比，基 于清热凉血功效，赤芍总酚对中枢性发热正调节介质PGE2及IL-1β、TNF-α等炎 性介质的作用优于赤芍总单萜；基于散瘀功效，赤芍总单萜对凝血四项TT、PT、 APTT、FIB及ET-1、6-keto-PGF1α、TXB2/6-keto-PGF1α等影响血管内皮细胞功 能和血小板活化相关指标的作用优于赤芍总酚。故我们推测，赤芍总酚是赤芍清 热凉血主要活性成分，赤芍总单萜是其散瘀主要活性成分，赤芍总酚和赤芍总单 萜共同体现了赤芍清热凉血散瘀的功效。

实施例1：

赤芍水提物制备：取赤芍饮片1.8kg，加水浸泡1h，煎煮提取2次，每次1h， 加水量分别为12倍、10倍。提取液用滤布趁热过滤，合并，减压浓缩至900mL， 每1mL含生药约2g，即得赤芍水提物，4℃冷藏，备用。

赤芍总酚制备：取赤芍饮片1.8kg，按上述方法经煎煮提取制成水提液36L， 通过聚酰胺树脂柱，再用15L水洗涤，收集水洗液备用，再用15L 95％乙醇洗脱， 收集乙醇洗脱液，减压浓缩至900mL，每1mL相当于含生药2g，即得赤芍总多 酚提取物，4℃冷藏，备用。

赤芍总单萜制备：取上述收集的聚酰胺树脂柱流出水液，通过D101型大孔树 脂柱，用2L水洗涤大孔树脂，收集流出液备用；再用6L 95％乙醇，洗脱大孔树 脂，收集乙醇洗脱液，减压浓缩至900mL，每1mL相当于含生药2g，即得赤芍 总单萜提取物，4℃冷藏，备用；按照常规方法制备成口服液。

实施例2：

赤芍水提物制备：取赤芍饮片1.8kg，加水浸泡2h，煎煮提取2次，每次2h， 加水量分别为10倍、8倍。提取液用滤布趁热过滤，合并，减压浓缩至900mL， 每1mL含生药约2g，即得赤芍水提物，4℃冷藏，备用。

赤芍总酚制备：取赤芍饮片，按上述方法经煎煮提取制成水提液32L，通过 聚酰胺树脂柱，再用8L水洗涤，收集水洗液备用；再用10L 80％乙醇洗脱，收 集乙醇洗脱液；减压浓缩至每mL相当于含生药2g，即得赤芍总多酚提取物；

赤芍总单萜制备：取上述收集的聚酰胺树脂柱水洗液，通过D101型大孔树脂 柱，用10L水洗涤大孔树脂，弃去水洗液；再用大孔树脂量5 80％乙醇，洗脱大 孔树脂，收集乙醇洗脱液，减压浓缩至每mL相当于含生药2g，即得赤芍总单萜 提取物；按照常规方法制备成注射液。

实施例3：

赤芍水提物制备：取赤芍饮片1.8kg，加水浸泡2h，煎煮提取2次，每次0.5 h，加水量分别为10倍、10倍。提取液用滤布趁热过滤，合并，减压浓缩至900mL， 每1mL含生药约2g，即得赤芍水提物，4℃冷藏，备用。

赤芍总酚制备：取赤芍饮片1.8kg，按上述方法经煎煮提取制成水提液32L， 通过聚酰胺树脂柱，再用10L水洗涤，收集水液备用，再用15L 95％乙醇洗脱， 收集乙醇洗脱液，减压浓缩至900mL，每1mL相当于含生药2g，即得赤芍总多 酚提取物，4℃冷藏，备用。

赤芍总单萜制备：取上述收集的聚酰胺树脂柱流出水液，通过D101型大孔树 脂柱，用2L水洗涤大孔树脂，收集流出液备用；再用6L 70％乙醇，洗脱大孔树 脂，收集乙醇洗脱液，减压浓缩至900mL，每1mL相当于含生药2g，即得赤芍 总单萜提取物，4℃冷藏，备用；按照常规方法制备成胶囊剂。

实施例4：

赤芍水提物制备：取赤芍饮片1.8kg，加水浸泡0.5h，煎煮提取3次，每次1 h，加水量分别为8倍、6倍、6倍。提取液用滤布趁热过滤，合并，减压浓缩至 900mL，每1mL含生药约2g，即得赤芍水提物，4℃冷藏，备用。

赤芍总酚制备：取赤芍饮片1.8kg，按上述方法经煎煮提取制成水提液32L， 通过聚酰胺树脂柱，再用8L水洗涤，弃去水液，再用8L 90％乙醇洗脱，收集乙 醇洗脱液，减压浓缩至900mL，每1mL相当于含生药2g，即得赤芍总多酚提取 物，4℃冷藏，备用。

赤芍总单萜制备：取上述收集的聚酰胺树脂柱流出水液，通过D101型大孔树 脂柱，用4L水洗涤大孔树脂，收集流出液备用；再用6L 70％乙醇，洗脱大孔树 脂，收集乙醇洗脱液，减压浓缩至900mL，每1mL相当于含生药2g，即得赤芍 总单萜提取物，4℃冷藏，备用；按照常规方法制备成颗粒剂。