阅读说明：本技术 一种金莲花口服液制备工艺 (Preparation process of flos Trollii oral liquid ) 是由 胡林水 王成芳 潘燕 雷蔚雯 吴静之 吴明 于 2020-05-18 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种金莲花口服液制备工艺,具体包括以下步骤：(1)酶解；(2)高速离心；(3)絮凝滤过；(4)微滤；(5)减压浓缩；(6)灌装。本发明优化了金莲花口服液制备工艺,采用酶解-高速离心-絮凝滤过-微滤法联合制备生产金莲花口服液,工艺步骤简单,易于操作,相对于传统的水煎煮工艺,耗水量及能耗大大降低,且生产周期大大缩短,在有效保留了药材中的总黄酮等有效成分的同时,还能有效改善产品的澄清度和稳定性,值得推广应用。(The invention discloses a preparation process of a tropaeolum oral liquid, which specifically comprises the following steps: (1) carrying out enzymolysis; (2) centrifuging at a high speed; (3) flocculation filtration; (4) microfiltration; (5) concentrating under reduced pressure; (6) and (6) filling. The preparation process of the tropaeolum oral liquid is optimized, the preparation and production of the tropaeolum oral liquid are carried out by adopting the enzymolysis-high-speed centrifugation-flocculation filtration-microfiltration method, the steps of the process are simple, the operation is easy, compared with the traditional water decoction process, the water consumption and the energy consumption are greatly reduced, the production period is greatly shortened, the active ingredients such as total flavone in medicinal materials are effectively kept, meanwhile, the clarity and the stability of the product can be effectively improved, and the preparation method is worthy of popularization and application.)

一种金莲花口服液制备工艺

技术领域

本发明涉及一种金莲花口服液，尤其是涉及一种金莲花口服液制备工艺。

背景技术

金莲花口服液是一种以金莲花为主要原料制成的中成药饮剂，具有很好的抗菌消炎作用，被广泛应用于热毒内盛引起的上呼吸道感染、扁桃体炎、咽炎等症，用于日常保健或治疗需要。

金莲花口服液通常采用传统的水煎煮工艺制备而成，该工艺保留了药材中的总黄酮等有效成分，但是需要耗费大量的水，导致后续蒸发浓缩时间长，能耗高，同时金莲花药材在多次、长时间传统煎煮过程中，杂质(蛋白质、鞣质等)浸出多，不仅给口服液制剂后续的过滤除杂增加负荷，而且无法有效去除杂质，会产生沉淀，影响产品的外观质量和澄清度。

例如，申请号2009100825569的中国专利公开了一种金莲花口服液的制备方法，其具体公开了：取金莲花原料，加入占药材重量25倍的水溶液，搅拌下使混合物升温至95℃，并继续搅拌40分钟，离心分离出提取液并弃去药渣，药液冰冻浓缩至总药液的10％，离心除药液中的大分子胶团，浓缩药液即金莲花提取物，金莲花提取物按常规方法制成口服液。该制备方法存在以下缺陷：(1)提取温度高达95℃，提取温度高，会影响金莲花总黄酮的稳定性，造成金莲花总黄酮的损失；(2)单纯使用高速离心法对药液进行除杂(高速离心澄清工艺)，但离心法过于简单，多糖、黏液质等成分不易彻底去除，导致产品的澄清度不好，易产生黏壁物和沉降物等二次沉淀，稳定性差，影响产品的外观质量。

发明内容

本发明是为了解决现有技术的金莲花口服液制备方法所存在的上述技术问题，提供了一种工艺步骤简单，易于操作，能降低生产成本，能减少金莲花有效组分的损失，改善产品澄清度与稳定性的金莲花口服液制备工艺。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：一种金莲花口服液制备工艺，包括以下步骤：

(1)酶解：将金莲花粉碎后加水，调整液料pH为4.5～5.0后，加入复合酶，升温至40～50℃酶解，灭酶，得酶解液。本发明中将金莲花粉碎后进行酶解，粉碎能增加金莲花的比表面积，加速金莲花中有效成分的溶出，有利于充分酶解，缩短生产周期；本发明中必须特别限定料液pH为4.5～5.0，主要是出于以下目的考虑：一是pH4.5～5.0为复合酶的最适pH；二是pH为4.5～5.0，金莲花中的主要功效成分总黄酮表现出较好的稳定性；三是pH为4.5～5.0，后续过程中壳聚糖的絮凝效果最好，pH过低，体系中大多数粒子带正电荷，会与带正电荷的壳聚糖产生静电排斥作用，使胶体粒子难以去除，导致体系浑浊，pH过高，体系中负电粒子增多，带正电荷的壳聚糖的电中和作用负荷增加，压缩双电层的作用逐渐减弱，影响絮凝效果；本发明中酶解稳定严格限定在40～50℃，该温度范围为复合酶的适宜酶解温度，且该温度有利于加速金莲花中有效成分的溶出；由于金莲花中总黄酮等有效成分存在于具有坚硬细胞壁的细胞内，传统的水或有机溶剂提取方法效果较差，因此本发明中采用复合酶对金莲花进行酶解，使细胞壁疏松、膨胀、破裂，从而改变细胞壁通透性，使得细胞内的有效成分能快速、充分溶出，以大大缩短提取时间，提高提取效率。

(2)高速离心：将酶解液进行高速离心，取上清液。高速离心为一种物理分离方法，具有操作方便，工时短，生产成本低，有效成分损失少等优点，本发明中采用高速离心对酶解液进行预处理，以快速去除大部分的杂质，从而大大减少后续工序的除杂负荷，有利于缩短生产周期。

(3)絮凝滤过：将上清液加热至40～50℃后，在搅拌状态下缓慢滴加壳聚糖乙酸溶液，搅拌后加入滑石粉搅拌均匀，静置20～30min，滤过，得滤液。高速离心后，上清液中还有少量的多糖、黏液质等成分，因此需对上清液进行进一步的除杂，壳聚糖能有效保留有效成分，且安全性好，成本低，因此本发明中以壳聚糖作为澄清剂对上清液进行絮凝除杂，但是加入壳聚糖进行絮凝时，形成的沉淀物颗粒较小，且松散，在后续的微滤工序中，极易附着在中空纤维滤膜上堵塞中空纤维滤膜，且滤过较为困难，为解决上述问题，本发明中特意加入了滑石粉，滑石粉成本低，能使沉淀物颗粒形成大颗粒沉淀物并使沉淀加速，本发明中的上清液中加入滑石粉数秒钟后就会出现大颗粒沉淀物，且不易起浑，从而便于通过滤过除去。

(4)微滤：将滤液通过中空纤维滤膜进行微滤，收集滤出清液。本发明中采用中空纤维滤膜对滤液进行微滤，处理方便，工时短，处理成本低，处理量大，且中空纤维滤膜再生方便，通过微滤进一步除杂以进一步提高澄清度。

(5)减压浓缩：将滤出清液减压浓缩至相对密度为1.15±0.2(50℃)，静置，滤过，得提取液。

(6)灌装：在提取液中加入辅料后，加纯化水进行稀释，混匀后静置，滤过，灌装，灭菌检漏，即得金莲花口服液。加辅料及纯化水稀释均是本领域在制备金莲花口服液时的常规手段，故不赘述；灭菌可采用高压蒸汽灭菌，具体步骤为：将灌装后的金莲花口服液置于121℃高压蒸汽灭菌锅中灭菌30min后取出。

作为优选，步骤(1)中，金莲花粉碎粒径为10～20目。对金莲花进行粉碎主要是为了增加药物的比表面积来提高生物利用度，加速金莲花中有效成分的浸出，但并不是粉碎的越小越好，粒径太小，细小杂质多，不利于后续杂质的去除，粒径太大，影响酶解效率以及指标成分的溶出，因此本发明中金莲花粉碎的粒径控制在10～20目。

作为优选，步骤(1)中，液料比为(20～25)：1。

作为优选，步骤(1)中，液料中复合酶浓度为0.3～0.5mg/ml，复合酶由以下重量份的酶组成：30～40份纤维素酶，20～30份果胶酶，20～30份半纤维素酶，5～10份枯草杆菌蛋白酶，3～5份淀粉酶；酶解时间为80～100min。金莲花细胞壁中纤维素、果胶、半纤维素含量较高，淀粉、蛋白质含量较少，又因为单一的酶制剂只对细胞壁中某些特定成分起作用，因此本发明中将多种酶制剂进行复合，经筛选后最终确定复合酶由以下重量份的酶组成：30～40份纤维素酶，20～30份果胶酶，20～30份半纤维素酶，5～10份枯草杆菌蛋白酶，3～5份淀粉酶。利用上述各种酶制剂的协同作用，起到迅速分解破坏纤维、果胶等大分子物质作用，尽量使细胞壁完全破碎，从而使细胞内的有效成分快速、充分溶出，还能澄清溶液，有利于缩短生产周期及提高口服液的稳定性；在一定的时间内细胞壁已被完全破坏，继续酶解已失去意义，造成资源浪费，成本增加，所以控制一定的时间是酶解反应的关键因素，本发明中金莲花在酶解100min以后，金莲花细胞破壁过程已基本完成，同时细胞溶出物的增加，抑制了酶解反应，再延长酶解时间，得率增加的幅度很小，意义不大，因此本发明中控制酶解时间在80～100min。

作为优选，步骤(1)中，酶解时向液料中通入高纯氮气或惰性气体进行鼓泡搅拌。本发明在酶解时，想料液中通入高纯氮气或者惰性气体进行鼓泡搅拌，一是可以散热，避免料液中热量堆积造成温度升高，影响酶解过程；二是对料液进行充分搅拌，避免酶解不充分，同时避免料液中的金莲花粘附在容器壁上造成糊壁现象。

作为优选，步骤(2)中，高速离心的转速为10000～20000r/min。

作为优选，步骤(3)中，步骤(3)中，所述壳聚糖乙酸溶液为质量浓度为1％；以上清液体积计，壳聚糖乙酸溶液加入量为300～350mg/L；以上清液质量计，滑石粉加入量为3～5％。壳聚糖乙酸溶液通过将壳聚糖溶于乙酸溶液中得到；壳聚糖的用量过少，不能使颗粒完全脱稳絮凝，壳聚糖用量过多，产生的胶体颗粒被壳聚糖包围，反而会影响絮凝的发生，因此本发明中严格限定壳聚糖乙酸溶液为质量浓度为1％，且以上清液体积计，壳聚糖乙酸溶液加入量为300～350mg/L；滑石粉用量过多，反而会造成药液浑浊和粘稠，不利于滤过，滑石粉用量过少，沉淀效果较差，综合考虑，本发明中滑石粉的加入量控制在3～5％。

作为优选，步骤(3)中，滴加壳聚糖乙酸溶液后，搅拌速度为40～80r/min，搅拌时间为2～4min。本发明中，滴加壳聚糖乙酸溶液后，搅拌速度不宜过快，搅拌时间不宜过长，若搅拌速度过快，时间过长时，形成的相对较大的悬浮颗粒会因受较大的剪切力而破碎成小颗粒，以至于难于沉降，降低絮凝效果；若搅拌速度太慢，时间太短，壳聚糖和胶体颗粒不能充分接触，影响壳聚糖捕集胶体颗粒，且壳聚糖分布不均，不能充分发挥作用,也会影响絮凝作用。因此，本发明中限定搅拌速度为40～80r/min，搅拌时间为2～4min。

作为优选，步骤(4)中，中空纤维滤膜或微滤膜的孔径为0.3～0.5μm。

作为优选，步骤(6)中，所述辅料包括防腐剂、表面活性剂、矫味剂及抗氧剂中的至少一种。防腐剂可为对羟基苯甲酸甲酯、苯甲酸钠、尼泊金乙酯、羟苯乙酯等，表面活性剂可为聚山梨酯80、聚氧乙烯(35)蓖麻油、泊洛沙姆等，矫味剂可为蜂蜜、蔗糖、单糖浆、甜蜜素、环拉酸钠、甜菊甙、木糖醇、麦芽糖醇、蛋白糖及甘草甜素等，抗氧剂可为没食子酸、维生素C、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠等，上述辅料可根据产品的实际需要进行选择。

因此，本发明具有如下有益效果：优化了金莲花口服液制备工艺，采用酶解-高速离心-絮凝滤过-微滤法联合制备生产金莲花口服液，工艺步骤简单，易于操作，相对于传统的水煎煮工艺，耗水量及能耗大大降低，且生产周期大大缩短，在有效保留了药材中的总黄酮等有效成分的同时，还能有效改善产品的澄清度和稳定性，值得推广应用。

具体实施方式

下面具体实施方式对本发明做进一步的描述。

实施例1

(1)酶解：取450g金莲花粉碎至10目后加水，液料比为20：1，调整液料pH为4.5后，加入复合酶，液料中复合酶浓度控制在0.3mg/ml，复合酶由以下重量的酶组成：30g纤维素酶，20g果胶酶，20g半纤维素酶，5g枯草杆菌蛋白酶，3g淀粉酶，升温至40℃酶解80min，酶解时向液料中通入高纯氮气进行鼓泡搅拌，酶解后灭酶，得酶解液。

(2)高速离心：将酶解液进行高速离心，转速为10000r/min，取上清液。

(3)絮凝滤过：将上清液加热至40℃后，在搅拌状态下缓慢滴加壳聚糖乙酸溶液，壳聚糖乙酸溶液为质量浓度为1％；以上清液体积计，壳聚糖乙酸溶液加入量为300mg/L；以40r/min的搅拌速度搅拌2min后加入滑石粉搅拌均匀，以上清液质量计，滑石粉加入量为3％，静置20min，滤过，得滤液。

(4)微滤：将滤液通过孔径为0.3μm的中空纤维滤膜进行微滤，收集滤出清液。

(5)减压浓缩：将滤出清液减压浓缩至相对密度为1.13(50℃)，静置，滤过，得提取液。

(6)灌装：在提取液中加入100g单糖浆、1.8g苯甲酸钠、0.2g羟苯乙酯后，加水至1000ml，混匀后静置，滤过，灌装，每支装10ml，灭菌检漏，即得金莲花口服液。

对比例1

对比例1采用常规的加水煎煮工艺制备，具体步骤为：取450g金莲花，加水煎煮三次，以金莲花质量计，第一次加15倍量水，第二次加10倍量水，第三次加10倍量水，每次煎煮1.5h，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.13(50℃)，静置，滤过，得提取液，在提取液中加入适量单糖浆、1.8g苯甲酸钠、0.2g羟苯乙酯后，加水至1000ml，混匀后静置，滤过，灌装，每支装10ml，灭菌检漏，即得金莲花口服液。

实施例2

(1)酶解：取450g金莲花粉碎至15目后加水，液料比为22：1，调整液料pH为4.8后，加入复合酶，液料中复合酶浓度控制在0.4mg/ml，复合酶由以下重量的酶组成：35g纤维素酶，25g果胶酶，25g半纤维素酶，7g枯草杆菌蛋白酶，4g淀粉酶，升温至45℃酶解90min，酶解时向液料中通入惰性气体(氩气)进行鼓泡搅拌，酶解后灭酶，得酶解液。

(2)高速离心：将酶解液进行高速离心，转速为15000r/min，取上清液。

(3)絮凝滤过：将上清液加热至45℃后，在搅拌状态下缓慢滴加壳聚糖乙酸溶液，壳聚糖乙酸溶液为质量浓度为1％；以上清液体积计，壳聚糖乙酸溶液加入量为320mg/L；以50r/min的搅拌速度搅拌3min后加入滑石粉搅拌均匀，以上清液质量计，滑石粉加入量为4％，静置25min，滤过，得滤液。

(4)微滤：将滤液通过孔径为0.4μm的中空纤维滤膜进行微滤，收集滤出清液。

(5)减压浓缩：将滤出清液减压浓缩至相对密度为1.15(50℃)，静置，滤过，得提取液。

(6)灌装：在提取液中加入100g单糖浆、1.8g苯甲酸钠、0.2g尼泊金乙酯、0.01g焦亚硫酸钠后，加水至1000ml，混匀后静置，滤过，灌装，每支装10ml，灭菌检漏，即得金莲花口服液。

对比例2

对比例2采用常规的加水煎煮工艺制备，具体步骤为：取450g金莲花，加水煎煮三次，以金莲花质量计，第一次加15倍量水，第二次加10倍量水，第三次加10倍量水，每次煎煮1.5h，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.15(50℃)，静置，滤过，得提取液，在提取液中加入适量单糖浆、1.8g苯甲酸钠、0.2g尼泊金乙酯、0.01g焦亚硫酸钠后，加水至1000ml，混匀后静置，滤过，灌装，每支装10ml，灭菌检漏，即得金莲花口服液。

实施例3

(1)酶解：取450g金莲花粉碎至20目后加水，液料比为25：1，调整液料pH为5.0后，加入复合酶，液料中复合酶浓度控制在0.5mg/ml，复合酶由以下重量的酶组成：40g纤维素酶，30g果胶酶，30g半纤维素酶，10g枯草杆菌蛋白酶，5g淀粉酶，升温至50℃酶解100min，酶解时向液料中通入高纯氮气或惰性气体进行鼓泡搅拌，酶解后灭酶，得酶解液。

(2)高速离心：将酶解液进行高速离心，转速为20000r/min，取上清液。

(3)絮凝滤过：将上清液加热至50℃后，在搅拌状态下缓慢滴加壳聚糖乙酸溶液，壳聚糖乙酸溶液为质量浓度为1％；以上清液体积计，壳聚糖乙酸溶液加入量为350mg/L；以80r/min的搅拌速度搅拌4min后加入滑石粉搅拌均匀，以上清液质量计，滑石粉加入量为5％，静置30min，滤过，得滤液。

(4)微滤：将滤液通过孔径为0.5μm的中空纤维滤膜进行微滤，收集滤出清液。

(5)减压浓缩：将滤出清液减压浓缩至相对密度为1.17(50℃)，静置，滤过，得提取液。

(6)灌装：在提取液中加入50g甜蜜素、1.8g苯甲酸钠、0.2g羟苯乙酯、1g聚山梨酯80后，加水至1000ml，混匀后静置，滤过，灌装，每支装10ml，灭菌检漏，即得金莲花口服液。

对比例3

对比例3采用常规的加水煎煮工艺制备，具体步骤为：取450g金莲花，加水煎煮三次，以金莲花质量计，第一次加15倍量水，第二次加10倍量水，第三次加10倍量水，每次煎煮1.5h，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.17(50℃)，静置，滤过，得提取液，在提取液中加入50g甜蜜素、1.8g苯甲酸钠、0.2g羟苯乙酯、1g聚山梨酯80后，加水至1000ml，混匀后静置，滤过，灌装，每支装10ml，灭菌检漏，即得金莲花口服液。

通过本发明制得的金莲花口服液相对密度应不低于1.05(通则0601)。

pH值应为4.0～6.0(通则0631)。

其他应符合合剂项目下有关的各项规定(通则0181)。

(一)按照《中国药典》2015年版一部金莲花口服液含量测定项下的测定方法【高效液相色谱法(通则0512)】，分别测定实施例1～3和对比例1～3得到的金莲花口服液中荭草苷(C₂₁H₂₀O₁₁)，具体方法如下：

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-0.1％磷酸溶液(10：12：78)为流动相；检测波长为349nm。理论板数按荭草苷峰计算应不低于5000。

对照品溶液的制备：取荭草苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含20ug的溶液，即得。

供试品溶液的制备：精密量取本品5ml，置100ml量瓶中，加入甲醇80ml，超声处理(功率400W，频率40kHz)10分钟，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液10ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法精密吸取对照品溶液10μl与供试品溶液5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。每1ml含金莲花以荭草苷(C₂₁H₂₀O₁₁)计，不得少于1.5mg。得到的测定结果如表1所示。

表1实施例1～3和对比例1～3得到的金莲花口服液荭草苷含量测定结果

项目	每1ml金莲花口服液中荭草苷的含量(mg)
		实施例1	2.68
对比例1	2.19
		实施例2	2.66
对比例2	2.13
		实施例3	2.63
对比例4	2.18

从表1可以看出，实施例1～3和对比例1～3得到的金莲花口服液，每1ml中荭草苷的含量均大于1.5mg，符合相关标准。但是实施例1～3得到的金莲花口服液，每1ml中荭草苷的含量均明显高于对比例1～3得到的金莲花口服液，说明通过本发明能有效减少金莲花有效组分的损失，提高提取率。

(二)对实施例1～3和对比例1～3得到的金莲花口服液分别进行澄清度和稳定性考察。

澄清度和稳定性考察的具体方法为：将100ml金莲花口服液装入比浊用玻璃试管(比浊管)中后密封，置于白色背景前，在漫射光下以肉眼可见浑浊、沉淀物、黏壁物为指标进行观察，观察时间持续1年，每隔3个月观察一次，记录观察结果，具体观察结果如表2所示。

表2实施例1～3和对比例1～3得到的金莲花口服液澄清度和稳定性考察结果

从表2可以看出，实施例1～3得到的金莲花口服液澄清度和稳定性明显优于对比例1～3得到的金莲花口服液澄清度和稳定性，放置12个月仍保持澄清，无沉淀和黏壁物产生，而对比例1～3得到的金莲花口服液放置3个月就出现混浊、沉淀和黏壁物，说明通过本发明能有效改善产品澄清度与稳定性。

以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。