阅读说明：本技术 基于人工养殖中国鲎的可持续采血方法 (Sustainable blood sampling method based on artificial culture of Tachypleus tridentatus ) 是由 贾久满 廖永岩 李伟峰 李健 张艳秋 方怀义 吴卓林 于 2020-05-25 设计创作，主要内容包括：一种基于人工养殖中国鲎的可持续采血方法,包括养殖管理-采血监管；养殖场地包括人工养殖池和治疗恢复池；人工养殖池修建于海域附近,按人工养殖池面积的10%在人工养殖池的附近配备治疗恢复池；每次进行采血作业以后,指标低的中国鲎放入治疗恢复池,暂停采血作业,恢复后可以继续采血并放入人工养殖池中。这种采血方法基于人工养殖的中国鲎,改变传统的野生采血方式,采用人工养殖条件下的中国鲎,通过养殖管理和采血监管为一体的管理体系,实现可持续采血,能够有效保护中国鲎资源、确保鲎试剂产业健康发展；人工养殖条件下可持续采血,即定期对鲎进行采血,确保鲎的成活率,提高鲎的利用率,实现可持续多次采血,减少中国鲎的捕获量。(A sustainable blood sampling method based on artificial cultivation of Tachypleus tridentatus comprises cultivation management-blood sampling supervision; the culture site comprises an artificial culture pond and a treatment recovery pond; the artificial culture pond is built near the sea area, and a treatment recovery pond is arranged near the artificial culture pond according to 10% of the area of the artificial culture pond; after each blood sampling operation, the Tachypleus tridentatus with low index is put into a treatment recovery pool, the blood sampling operation is suspended, and the blood can be continuously sampled after recovery and put into an artificial culture pool. The blood sampling method is based on artificially cultured Tachypleus tridentatus, changes the traditional wild blood sampling mode, adopts Tachypleus tridentatus under artificial culture conditions, realizes sustainable blood sampling through a management system integrating culture management and blood sampling supervision, and can effectively protect Tachypleus tridentatus resources and ensure the healthy development of Tachypleus tridentatus reagent industry; the blood can be continuously collected under the artificial culture condition, namely, the blood is collected from the horseshoe crab periodically, the survival rate of the horseshoe crab is ensured, the utilization rate of the horseshoe crab is improved, the blood can be continuously collected for many times, and the capture amount of the horseshoe crab in China is reduced.)

基于人工养殖中国鲎的可持续采血方法

技术领域

本发明涉及中国鲎的采血方法，具体地说是一种基于人工养殖中国鲎的可持续采血方法。

背景技术

北部湾是中国鲎最重要的栖息地，也是世界上仅存的拥有中国鲎数量最大的地区。世界上只有中国鲎和美洲鲎可以生产鲎试剂，所以按来源鲎试剂可分为两种，一种是中国鲎试剂(Tachypleus Amebocyte Lysate，缩写为 TAL)，原材料为中国鲎血液；另一种是美洲鲎试剂( Limulus Amebocyte Lysate，缩写为 LAL)，原材料为美洲鲎血液。中国鲎是世界上体形最大、最适合生产鲎试剂的鲎。中国鲎体长可达60 cm，体重3 kg-5 kg鲎由三部分组成：头胸甲略呈马蹄形（故名马蹄蟹），腹部呈六角形两侧具棘刺，尾部是一根长的尾剑。中国鲎是广西、广东、福建重点保护动物，禁止任何单位或个人非法捕杀、收购、加工携带。2019年3月，中国鲎被列入世界自然保护联盟（IUCN）红色名录——濒危（EN）。

由于中国鲎是生产鲎试剂重要的海洋药用生物资源，北部湾海域中国鲎资源已几近枯竭，其保护不仅是物种保护的需要，更是产业经济健康发展的需要。鲎试剂广泛应用于医药、卫生、食品的内毒素检测，需求量不断增加，对中国鲎的保护提出更大的挑战。

由于中国对鲎试剂的刚性需求，中国鲎作为国家重要战略生物资源，其种群亟待抢救、复育和保护。以年产量150万支的鲎试剂公司为例，每年需要5000对成年鲎提供血源。保守估计，中国每年对鲎试剂的需求达1000万支以上，至少每年需要3万对成年的中国鲎才能保障鲎试剂的正常供应，目前，还没有能够在市场上推广使用的鲎试剂替代品。然而，作为原材料的中国鲎数量却急剧减少，远不能满足市场对中国鲎血液的需求。

目前，采集鲎血比较常规的方式主要是人们趁着鲎靠近海岸交配时将其捕获，采集1/5-1/3的血量，每只鲎大约采100ml血液，采完血的鲎在当天带到距被捕地大约120km的地方放生，防止短时间内再次被捕采血。研究显示适量采血不会影响鲎的生活和生殖能力，但需要足够的时间才能使被采血鲎恢复健康。传统的采血方法主要存在以下问题：①采血材料准备不齐全、不规范，导致血液被污染，造成资源的浪费；②采血前没有对中国鲎进行健康检查，对不适合采血的中国鲎进行采血，导致被采血后的中国鲎后期恢复慢，甚至死亡；③采血时间间隔过短，导致被采血后的中国鲎后期恢复慢，甚至死亡；④没有依据雌鲎、雄鲎的体重定采血量，采血量太少，导致资源的浪费，采血量太大，导致中国鲎后期恢复慢，甚至死亡；⑤采血后处理操作不规范，导致中国鲎针孔处感染、后期恢复慢，甚至死亡。采血不规范、放生保护措施不到位、过度取血，甚至直接把鲎血抽干，这些杀鸡取卵式的采血方法对中国鲎种群恢复造成了巨大威胁。

发明内容

本发明是针对背景技术中提及的对中国鲎血液进行采取额传统方式所存在的诸多缺陷，提供一种基于人工养殖条件下的中国鲎实现可持续性采血的方法，该方法对中国鲎进行养殖管理和采血监管融为一体的管理体系，确保鲎的成活率，提高鲎的利用率，实现可持续多次采血，减少中国鲎的捕获量。

为实现上述发明目的，本发明所采用的技术方案是：一种基于人工养殖中国鲎的可持续采血方法，所述的可持续采血方法包括养殖管理-采血监管；

所述的养殖管理包括养殖场地设计和养殖环境管理

养殖场地包括人工养殖池和治疗恢复池；人工养殖池修建于海域附近，按人工养殖池面积的10%在人工养殖池的附近配备治疗恢复池；

养殖环境管理包括：

（1）养殖密度：不大于1只/m²；

（2）盐度：15‰～30‰；

（3）溶氧量：4 mg/L以上；

（4）投喂：每天投喂1次，投饵量为中国鲎体重的2%～3%；

（5）饲料：采用海杂鱼、贝类等冰鲜饵料或人工配合饲料；

所述采血监管包括采血前准备、健康检查及采血后监管：

采血前准备

采血针、采血瓶经250 ℃加热30 min以上除热原，采血瓶内放入拟采血量等体积的抗凝剂，备用；

健康检查

根据中国鲎的活动状态判断其健康情况，并检查心门处针孔愈合状态；

采血后监管

每次进行采血作业以后，取少量血样检测血细胞数量等指标，血细胞数量低于20×10³个/ml的中国鲎放入治疗恢复池，暂停采血作业，直至血细胞数量恢复到30×10³个/ml以上，可以继续采血并放入人工养殖池中。

所述人工养殖池建设于水质良好的海域附近，池内水泥等硬质底部上铺设海沙，粒径0.2 mm-2.5 mm，厚度8 cm-10 cm，池内水深1.5 m-2.0 m。

治疗恢复池采用水泥池，在底部铺设海沙，粒径0.2 mm-2.5 mm，厚度8 cm-10 cm，面积应小于30m²，水深1-1.2m。

采血过程如下，

把中国鲎从人工养殖池中捕捞后用清洁的海水清洗干净，然后放入无菌室工作台架上固定；

用碘伏消毒液对其背侧胸腹连接处的心门位置消毒，再用75%的酒精擦去碘伏；

用采血针刺入中国鲎的心门内，让鲎血流入采血瓶；

采血完成后，拨出针头，用创口贴封闭针孔，放回池塘中。

每间隔一段时间采血一次，采血间隔时间不少于2个月。

每次最大采血量根据采血时期按照以下指标完成，

3月-11月，雌鲎的采血量为40 mL/kg，雄鲎的采血量为50 mL/kg；12月-翌年2月，雌鲎的采血量为30 mL/kg，雄鲎的采血量为40 mL/kg。

所述抗凝剂为茶碱和NaCl溶液的混合液。用茶碱（浓度≥98%）和NaCl溶液混合配制成抗凝剂，抗凝剂盐度25‰、茶碱浓度0.5mol/L。

与现有技术相比，本发明所公开的这种采血方法基于人工养殖的中国鲎，改变传统的野生采血方式，采用人工养殖条件下的中国鲎，通过养殖管理和采血监管为一体的管理体系，实现可持续采血，能够有效保护中国鲎资源、确保鲎试剂产业健康发展；人工养殖条件下可持续采血，即定期对鲎进行采血，确保鲎的成活率，提高鲎的利用率，实现可持续多次采血，减少中国鲎的捕获量。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步说明。

本发明是针对人工养殖的中国鲎实施可持续性采血，包括养殖管理-采血监管。

养殖管理包括养殖场地设计和养殖环境管理；采血监管包括采血前准备、健康检查及采血后监管。

1 、养殖场地设计

1.1人工养殖池

在水质良好的海域附近建设用于养殖中国鲎的池塘，水泥池等硬质底部铺设海沙，粒径0.2 mm-2.5 mm，厚度8 cm-10 cm，水深1.5 m-2.0 m。健康的、可用于采血作业的中国鲎养殖在人工养殖池中。

1.2治疗恢复池

按人工养殖池面积的10%配备治疗恢复池，治疗恢复池采用水泥池，在底部铺设海沙，粒径0.2 mm-2.5 mm，厚度8 cm-10 cm，为了便于观察中国鲎的活动情况，面积应小于30m²，水深1-1.2m左右。健康检查不合格的中国鲎养殖在治疗恢复池中。

2 、养殖环境及管理要求

2.1 养殖密度：不大于1只/m²；

2.2盐度：15‰-30‰；

2.3溶氧量：4 mg/L以上；

2.4投喂：每天投喂1次，投饵量为中国鲎体重的2%-3%；

2.5饲料：采用海杂鱼、贝类等冰鲜饵料或人工配合饲料。

3、采血监管

3.1采血前准备

采血针、采血瓶经250 ℃加热30 min以上除热原，采血瓶内放入拟采血量等体积的抗凝剂，备用。

抗凝剂：用茶碱（≥98%）和NaCl溶液配制盐度25‰、茶碱浓度0.5mol/L的混合溶液作为抗凝剂。

3.2健康检查

3.2.1根据中国鲎的活动状态判断其健康情况，并检查心门处针孔愈合状态。健康情况良好、针孔愈合无感染的中国鲎可进行称重并按计划进行采血。健康情况达不到采血要求的，进行相应的治疗处理后，放入治疗恢复池中直至达到健康状态。

3.2.2 每次进行采血作业以后，取少量血样检测血细胞数量等指标，血细胞数量低于20×10³个/ml的中国鲎放入治疗恢复池，暂停采血作业，直至血细胞数量恢复到30×10³个/ml以上，可以继续采血并放入人工养殖池中。

3.3采血过程

把中国鲎从池塘中捕捞后用清洁的海水清洗干净，然后放入无菌室工作台架上固定，用碘伏消毒液对其背侧胸腹连接处的心门位置消毒，再用75%的酒精擦去碘伏。用采血针刺入中国鲎的心门内，让鲎血流入采血瓶；采血完成后，拨出针头，用创口贴封闭针孔，放回池塘中。

3.4采血间隔时间：每间隔一段时间采血一次，相邻采血间隔时间不少于2个月。

3.5每次最大采血量根据采血时期不同而有所区别，具体采血量数据如下：

3月～11月，雌鲎的采血量为40 mL/kg，雄鲎的采血量为50 mL/kg；12月～翌年2月，雌鲎的采血量为30 mL/kg，雄鲎的采血量为40 mL/kg。

本发明所公开的这种采血方式改变传统的采血方式，采用人工养殖条件下可持续采血是保护中国鲎资源、确保鲎试剂产业健康发展的最佳方法。本发明所公开的这种基于人工养殖条件下可持续采血的方法，就是把在自然海域捕获的中国鲎驯养在池塘中，然后定期对鲎进行采血，确保鲎的成活率，提高鲎的利用率，实现可持续多次采血，减少中国鲎的捕获量。鲎的寿命通常可以达到60岁，如果实现可持续采血，估计一只鲎的采血量至少要达到传统采血方式的20～30倍。这样，在当前的鲎试剂生产规模下，可以确保中国鲎的种群数量不再减少，再结合增殖放流与人工养殖等保育措施，在十几年以后，中国鲎的种群数量也许还可以得到有效的恢复。因此，人工养殖条件下可持续性采血方法对中国鲎的保护与利用具有重要的意义，在保护中国鲎资源的同时确保鲎试剂产业健康发展。