一种基于留置针的仿生型拉曼基底及其制备和应用
阅读说明：本技术 一种基于留置针的仿生型拉曼基底及其制备和应用 (Bionic Raman substrate based on indwelling needle and preparation and application thereof ) 是由 牟忠德 韩晶晶 狄文忆 高瀚 刘宝喜 于 2020-04-29 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种基于留置针的仿生型拉曼基底,该基底包括留置针软管和附着层,附着层包括聚多巴胺膜和单层二氧化硅纳米粒子,在单层二氧化硅纳米粒子表面吸附有特异性肿瘤标记物探针,并用牛血清白蛋白分子封闭纳米粒子表面多余位点。其制备方法包括1)盐酸多巴胺在留置针软管表面形成聚多巴胺膜；2)聚多巴胺膜表面吸附单层二氧化硅纳米粒子；3)肿瘤标记物探针吸附到二氧化硅纳米粒子表面,并用牛血清白蛋白分子封闭纳米粒子表面多余位点。该基于留置针的仿生型拉曼基底可以应用于患者血液中肿瘤标记物的检测,安全性好,不会给患者带来负担,能够反映长时间内血液中特定肿瘤标记物的平均水平。(The invention provides a bionic Raman substrate based on an indwelling needle, which comprises an indwelling needle hose and an attachment layer, wherein the attachment layer comprises a polydopamine film and single-layer silicon dioxide nano particles, a specific tumor marker probe is adsorbed on the surfaces of the single-layer silicon dioxide nano particles, and bovine serum albumin molecules are used for sealing redundant sites on the surfaces of the nano particles. The preparation method comprises 1) forming a polydopamine film on the surface of the indwelling needle hose by dopamine hydrochloride; 2) adsorbing a single-layer silicon dioxide nano particle on the surface of the polydopamine film; 3) adsorbing the tumor marker probe on the surface of the silica nanoparticle, and sealing redundant sites on the surface of the nanoparticle by using bovine serum albumin molecules. The bionic Raman substrate based on the indwelling needle can be applied to detection of tumor markers in blood of a patient, is good in safety, does not bring burden to the patient, and can reflect the average level of specific tumor markers in the blood for a long time.)
技术领域
本发明涉及一种基于留置针的仿生型拉曼基底及其制备和应用，属于生物医学研究 和临床检测诊断技术领域。
背景技术
恶性肿瘤仅次于心脑血管疾病，成为致死率最高的疾病之一，严重威胁人类健康。据最 近发表在CA:A Cancer Journal for Clinicians上的一篇文章“CancerStatistics,2020” 显示，美国癌症死亡率从1991年到2017年下降29％，2016年到2017年下降2.2％，出现最 大年度降幅。该研究指出推广癌症早期筛查以及新型疗法对降低死亡率意义重大。
近几年来，肿瘤标记物因为在癌症演变过程中出现时间早、容易反复获取以及方便检测 等优点，成为癌症早发现早预防的重要参考物，针对肿瘤标记物的早期检测可大大提高生存 率与降低死亡率。肿瘤的发生、增殖是一个逐渐演变的过程，肿瘤标记物(TumorMarker) 指的是在肿瘤发生的过程中由肿瘤细胞直接合成、分泌或其他组织自身产生的与肿瘤密切相 关的一类活性物质，主要由癌基因表达生成的抗原蛋白质、核酸、激素、酶以及其他一些活 性物质。目前针对肿瘤标记物已发展出多种检测手段，如放射免疫检测法、酶联免疫法分析 法(ELISA)、荧光免疫分析法、化学发光免疫分析法(CLIA)、质谱分析法、标记扩增深度 测序(TAM-Seq)、磁珠乳液扩增(BEAMing)等等。然而临床采用的分子层面的血清学检查 技术不能反映患者血液中肿瘤标记物的长期平均含量。另外，像放射免疫检测有潜在的放射 危害，ELISA及CLIA等分析方法需要二次标记，步骤繁琐，质谱需要的设备较为昂贵等。因 此，实现肿瘤出现早期低浓度肿瘤标记物的快速、高灵敏检测，提高恶性肿瘤早期临床诊断 水平非常重要，也仍然是一项挑战。
发明内容
技术问题：本发明的目的是提供一种基于留置针的仿生型拉曼基底及其制备和应用， 该技术能够确保检测阵列牢牢的吸附在留置针软管上，不受使用过程中的影响。留置针 使用过程中能精准捕获且富集血液中肿瘤标记物，最终实现快速高效检测。
技术方案：为实现上述目标，本发明提供了一种基于留置针的仿生型拉曼基底，该基 底包括留置针软管和留置针软管外表面附着层，附着层包括聚多巴胺膜和单层二氧化硅 纳米粒子，其中聚多巴胺膜吸附在留置针软管的外表面，单层二氧化硅纳米粒子吸附在聚多巴胺膜上，在单层二氧化硅纳米粒子表面吸附有特异性肿瘤标记物探针，并用牛血 清白蛋白分子封闭纳米粒子表面多余位点。
其中：
所述的留置针软管是指用于输液、输药，并且能在患者体内留置1小时以上的所有不同规格、不同类型的留置针的留置针套管或透明导管部分。
所述的聚多巴胺膜呈现黑色，贴附在留置针的导管上，厚度为30～200nm，含有丰富的伯胺、仲胺以及儿茶酚化学基团。
所述的单层二氧化硅纳米粒子中，二氧化硅纳米粒子为实心二氧化硅纳米粒子或介 孔二氧化硅纳米粒子，纳米粒子的直径为50～200nm。
所述的特异性肿瘤标记物探针为能够特异性识别癌基因表达的一种或多种抗原蛋 白质、核酸、激素或酶的抗体或RNA探针。
本发明还提供了一种上述基于留置针的仿生型拉曼基底的制备方法，该方法包括以 下步骤：
1)在弱碱性溶液中加入盐酸多巴胺溶液，之后将留置针软管浸泡其中，旋转软管，盐酸多巴胺氧化自聚合在软管表面形成一层聚多巴胺膜；
2)将表面接枝有氨基或巯基的二氧化硅纳米粒子分散在弱碱性溶液中，制成质量分数为5～15％的二氧化硅纳米粒子胶体溶液，之后将步骤1)得到的表面有聚多巴胺膜 的留置针软管浸泡在胶体溶液中，旋转软管，在聚多巴胺膜表面形成牢固的单层二氧化 硅纳米粒子；
3)将表面吸附有单层二氧化硅纳米粒子的留置针软管置于特异性肿瘤标记物探针 溶液中，在单层二氧化硅纳米粒子表面吸附肿瘤标记物探针分子，最后再封闭纳米粒子表面多余位点，得到所述的基于留置针的仿生型拉曼基底。
其中：
步骤1)和步骤2)中所述的弱碱性溶液是由氨水或氢氧化钠或Tris(三(羟甲基)氨基甲烷)配置而成的pH值为8.0～9.0的水溶液；步骤1)和步骤2)中所述的旋转 软管是指在常温常压条件下顺时针或逆时针旋转软管，转速为10～50转/分钟，时长为1～24小时。
步骤1)所述的在弱碱性溶液中加入盐酸多巴胺溶液中，盐酸多巴胺溶液的浓度为2～20mg/ml，弱碱性溶液与盐酸多巴胺溶液的体积比为0.5:1～2:1。
步骤2)所述的所述的表面接枝有氨基或巯基的二氧化硅纳米粒子中，二氧化硅纳米粒子表面通过化学偶联法接枝氨基或巯基。
步骤2)所述的在聚多巴胺膜表面形成牢固的单层二氧化硅纳米粒子中，其原理是聚多巴胺的儿茶酚基团与氨基或巯基在弱碱性条件下发生麦克加成反应和/或席夫碱反应，通过化学耦合在聚多巴胺膜表面吸附单层二氧化硅纳米粒子。
步骤3)所述的在单层二氧化硅纳米粒子表面吸附肿瘤标记物探针分子，最后再封闭纳米粒子表面多余位点，是指通过化学偶联方法将肿瘤标记物探针分子与二氧化硅纳米粒子偶联，之后经磷酸盐缓冲液清洗后用牛血清白蛋白封闭多余位点，具体过程如下：将吸附有单层二氧化硅纳米粒子的留置针软管在旋转状态下浸泡在3～5wt％的戊二醛水溶液中2～5h，然后经磷酸盐吐温20缓冲液冲洗多次以去除多余戊二醛；然后将留置针 软管浸泡在50～200μg/ml肿瘤标志物探针磷酸盐缓冲液中，2～4℃条件下过夜；最后 将留置针软管浸泡在0.8～1wt％的牛血清白蛋白溶液中封阻，再用磷酸盐缓冲液去除多 余的牛血清白蛋白分子，得到所述的基于留置针的仿生型拉曼基底，并置于温度为2～6℃ 的磷酸盐缓冲液中备用。
所述的通过化学偶联方法将肿瘤标记物探针分子与二氧化硅纳米粒子偶联中，化学 偶联方法是氨基与醛基的缩合反应。
本发明还提供了一种上述基于留置针的仿生型拉曼基底的应用方法，该拉曼基底应 用于患者血液中肿瘤标记物的检测，具体操作如下：将吸附有肿瘤标记物探针的留置针软管经常规穿刺操作，留置于患者血管中，探针会不断捕获患者血液中的目标肿瘤标记物；留置1～7天后，将留置针软管取出，经磷酸盐缓冲液冲洗、粒径为20～30nm的 银纳米粒子溶胶中银染5min～6h、磷酸盐缓冲液再次冲洗后进行拉曼检测捕获肿瘤标 记物拉曼信号，即可判定患者血液中的肿瘤标记物种类与含量。
有益效果：本发明是以聚多巴胺以及二氧化硅纳米粒子制备基于留置针的仿生型拉 曼基底，用来检测血液中的肿瘤标记物，与现有技术相比，本发明具有以下优势：
1、由于使用了仿生的聚多巴胺材料，生物相容性好，且可以让制备的拉曼基底紧紧吸附在留置针软管表面，不会因为穿刺或血液冲刷而掉落，保证了使用时的患者安全；
2、软管表面吸附单层二氧化硅纳米粒子，进一步提高生物相容性，还能隔绝聚多巴胺对肿瘤标记物拉曼信号的干扰；二氧化硅纳米粒子在留置针软管周期性排布，有增 强肿瘤标记物的拉曼信号的效果，信号重复性也较好提高了检测信号的重复性；
3、在留置针软管表面制备的拉曼基底，不影响留置针的正常使用，不给患者带来额外负担，比抽血检测更能准确反映长时间下患者血液中肿瘤标记物的平均含量。
附图说明
图1为本发明提供的基于留置针的仿生型拉曼基底的整体示意图；
图2是图1中的穿刺针部分沿AA直线的截面图；
图3为基于留置针的仿生型拉曼基底的电子显微镜图，其中A是留置针软管，B为单层二氧化硅纳米粒子；
图中：1为留置针软管、2为留置针软管内部的钢针、3为附着层，3a为聚多巴胺 膜，3b为单层二氧化硅纳米粒子。
具体实施方式
本发明提供了一种基于留置针的仿生型拉曼基底及其制备和应用，该种留置针安全 性好，不会给患者带来负担，能够反映长时间内血液中特定肿瘤标记物的平均水平。以下结合实施例和附图对本发明作进一步的描述，但本发明不局限于下述实施例。
实施例1
一种基于留置针的仿生型拉曼基底，该基底包括留置针软管1(留置针型号为24GY&Z，0.7mm×19mm)和留置针软管1外表面附着层3，附着层3包括一层厚度为30nm 的黑色聚多巴胺膜3a和粒径为50nm的实心单层二氧化硅纳米粒子3b，其中聚多巴胺 膜3a吸附在留置针软管1的外表面，其含有丰富的伯胺、仲胺以及儿茶酚化学基团， 单层二氧化硅纳米粒子3b吸附在聚多巴胺膜3a上，在单层二氧化硅纳米粒子3b表面 偶联吸附甲胎蛋白(AFP，原发性肝癌或生殖胚胎性肿瘤标记物)抗体，并用牛血清白 蛋白分子封闭纳米粒子表面多余位点。
其制备方法如下：
1)取用一种留置针作为制备衬底，型号为24G Y&Z，0.7mm×19mm；
2)在留置针软管1表面聚合形成聚多巴胺膜3a：将浓度为2mg/ml的盐酸多巴胺 与pH值为8.0的氨水溶液按体积比1:1混合；然后将留置针软管1浸泡在混合溶液中， 在常温常压条件下顺时针旋转软管(转速为10转/分钟，反应时间为1小时)，反应结 束后使用超纯水多次冲洗软管以去除未反应的盐酸多巴胺，在留置针软管1外表面吸附 有一层厚度为30nm的黑色聚多巴胺膜3a；
3)吸附单层二氧化硅纳米粒子3b：将表面接枝氨基的直径为50nm的实心二氧化硅纳米粒子粉末分散在pH值为9.0的氢氧化钠溶液中，形成质量分数为5％二氧化硅纳 米粒子胶体溶液，然后将表面具有聚多巴胺膜3a的留置针软管1浸泡在该胶体溶液中， 在常温常压条件下顺时针旋转软管(转速为50转/分钟，反应时间为24小时)，待反应 结束后使用超纯水多次冲洗软管以去除多余的二氧化硅纳米粒子，得到吸附有单层二氧 化硅纳米粒子3b的留置针软管1；
4)偶联甲胎蛋白抗体：将吸附有单层二氧化硅纳米粒子3b的留置针软管1在旋转状态下浸泡在3wt％的戊二醛水溶液中2h，然后经磷酸盐吐温20缓冲液冲洗多次以去 除多余戊二醛；然后将软管浸泡在50μg/ml甲胎蛋白抗体磷酸盐缓冲液中，2℃条件下 过夜；最后将软管浸泡在0.8wt％的牛血清白蛋白溶液中封阻多余位点，再用磷酸盐缓冲 液去除多余的牛血清白蛋白分子；得到偶联甲胎蛋白抗体的留置针软管1，然后置于温 度为6℃的磷酸盐缓冲液中备用。
一种基于留置针的仿生型拉曼基底的应用，该拉曼基底应用于捕获血液中的甲胎蛋 白以及鉴定其含量，具体操作如下：将拉曼基底经消毒、穿刺操作，留置于患者静脉血管中，患者正常使用该留置针输液、输药等，留置时间1天，然后从患者体内取出的留 置针软管1，用磷酸盐缓冲液冲洗三次，浸泡在新鲜制备的直径为20nm的银纳米粒子 溶胶中5min，用磷酸盐缓冲液冲洗留置针软管1三次以去除多余的银纳米粒子，然后 置于拉曼光谱仪下检测甲胎蛋白信号强度，与标准溶液曲线对比推算得到甲胎蛋白在血 液中的浓度。
实施例2
一种基于留置针的仿生型拉曼基底，该基底包括留置针软管1(留置针型号为22GY&Z，0.9mm×25mm)和留置针软管1外表面附着层3，附着层3包括一层厚度为80nm 的黑色聚多巴胺膜3a和粒径为200nm的单层介孔二氧化硅纳米粒子3b，其中聚多巴胺 膜3a吸附在留置针软管1的外表面，其含有丰富的伯胺、仲胺以及儿茶酚化学基团， 单层二氧化硅纳米粒子3b吸附在聚多巴胺膜3a上，在单层二氧化硅纳米粒子3b表面 偶联吸附前列腺特异抗原抗体，并用牛血清白蛋白分子封闭纳米粒子表面多余位点。
其制备方法如下：
1)取用一种留置针作为制备衬底，型号为22G Y&Z，0.9mm×25mm；
2)在留置针软管1表面聚合形成聚多巴胺膜3a：将浓度为20mg/ml的盐酸多巴胺与pH值为9.0的氨水溶液按体积比0.5:1混合；然后将留置针软管1浸泡在混合溶液 中，在常温常压条件下逆时针旋转软管(转速为50转/分钟，反应时间为24小时)，反 应结束后使用超纯水多次冲洗软管以去除未反应的盐酸多巴胺，在留置针软管外表面吸 附有一层厚度为80nm的黑色聚多巴胺膜3a，
3)吸附单层二氧化硅纳米粒子3b：将表面接枝氨基的粒径为200nm的介孔二氧化硅纳米粒子粉末分散在pH值为8.5的Tris溶液中，形成质量分数为15％二氧化硅纳米 粒子胶体溶液，然后将表面具有聚多巴胺膜3a的留置针软管1浸泡在该胶体溶液中， 在常温常压条件下逆时针旋转软管(转速为50转/分钟，反应时间为24小时)，待反应 结束后使用超纯水多次冲洗软管以去除多余的二氧化硅纳米粒子，得到吸附有单层二氧 化硅纳米粒子3b的留置针软管1；
4)偶联前列腺特异抗原抗体：将吸附有单层二氧化硅纳米粒子3b的留置针软管1在旋转状态下浸泡在5wt％的戊二醛水溶液中5h，然后经磷酸盐吐温20缓冲液冲洗多 次以去除多余戊二醛；然后将软管浸泡在200μg/ml的前列腺特异抗原抗体磷酸盐缓冲 液中，4℃条件下过夜；最后将软管浸泡在1wt％的牛血清白蛋白溶液中封阻多余位点， 再用磷酸盐缓冲液去除多余的牛血清白蛋白分子；得到偶联前列腺特异抗原抗体的留置 针软管1，然后置于温度为6℃的磷酸盐缓冲液中备用。
一种基于留置针的仿生型拉曼基底的应用，该拉曼基底应用于捕获血液中的前列腺 特异抗原(PSA，前列腺癌肿瘤标记物)以及鉴定其含量，具体操作如下：将拉曼基底 经消毒、穿刺操作，留置于患者静脉血管中，患者正常使用该留置针输液、输药等，留 置时间7天，然后从患者体内取出的留置针软管1，用磷酸盐缓冲液冲洗三次，浸泡在 新鲜制备的直径为30nm的银纳米粒子溶胶中6h，用磷酸盐缓冲液冲洗留置针软管三次 以去除多余的银纳米粒子，然后置于拉曼光谱仪下检测前列腺癌特异抗原信号强度，与 标准溶液曲线对比推算得到前列腺癌特异抗原在血液中的浓度。
实施例3
一种基于留置针的仿生型拉曼基底，该基底包括留置针软管1(留置针型号为20GY&Z，1.1mm×29mm)和留置针软管1外表面附着层3，附着层3包括一层厚度为150nm 的黑色聚多巴胺膜3a和粒径100nm的单层实心二氧化硅纳米粒子3b，其中聚多巴胺膜3a吸附在留置针软管1的外表面，其含有丰富的伯胺、仲胺以及儿茶酚化学基团，单层 二氧化硅纳米粒子3b吸附在聚多巴胺膜3a上，在单层二氧化硅纳米粒子3b表面偶联 吸附KRAS突变基因肽核酸探针分子，并用牛血清白蛋白分子封闭纳米粒子表面多余位 点。
其制备方法如下：
1)取用一种留置针作为制备衬底，型号为20G Y&Z，1.1mm×29mm；
2)在留置针软管1表面聚合形成聚多巴胺膜3a：将浓度为10mg/ml的盐酸多巴胺与pH值为8.5的Tris溶液按体积比1.5:1混合；然后将留置针软管1浸泡在混合溶液 中，在常温常压条件下逆时针旋转软管(转速为25转/分钟，反应时间为12小时)，反 应结束后使用超纯水多次冲洗软管以去除未反应的盐酸多巴胺，在留置针软管外表面吸 附有一层厚度为150nm的黑色聚多巴胺膜3a；
3)吸附单层二氧化硅纳米粒子3b：将表面接枝巯基的粒径为100nm的实心二氧化硅纳米粒子粉末分散在pH值为9的Tris溶液中，形成质量分数为9％二氧化硅纳米粒子 胶体溶液，然后将表面具有聚多巴胺膜3a的留置针软管1浸泡在该胶体溶液中，在常 温常压条件下逆时针旋转软管(转速为25转/分钟，反应时间为12小时)，待反应结束 后使用超纯水多次冲洗软管以去除多余的二氧化硅纳米粒子，得到吸附有单层二氧化硅 纳米粒子3b的留置针软管1；
4)偶联KRAS突变基因肽核酸探针分子：将吸附有单层二氧化硅纳米粒子3a的留置针软管1在旋转状态下浸泡在4wt％的戊二醛水溶液中3h，然后经磷酸盐吐温20缓 冲液冲洗多次以去除多余戊二醛；然后将软管浸泡在100μg/ml的KRAS突变基因肽核 酸探针磷酸盐缓冲液中，3℃条件下过夜；最后将软管浸泡在0.9wt％的牛血清白蛋白溶 液中封阻多余位点，再用磷酸盐缓冲液去除多余的牛血清白蛋白分子；得到偶联KRAS 突变基因肽核酸探针分子的留置针软管1，然后置于温度为4℃的磷酸盐缓冲液中备用。
一种基于留置针的仿生型拉曼基底的应用，该拉曼基底应用于捕获血液中的KRAS突变基因(肺癌肿瘤标记物，一种血液中的循环肿瘤DNA)以及鉴定其含量，具体操作 如下：将拉曼基底经消毒、穿刺操作，留置于患者静脉血管中，患者正常使用该留置针 输液、输药等，留置时间3天，然后从患者体内取出的留置针软管，用磷酸盐缓冲液冲 洗三次，浸泡在新鲜制备的直径为25nm的银纳米粒子溶胶中3h，用磷酸盐缓冲液冲洗 留置针软管1三次以去除多余的银纳米粒子，然后置于拉曼光谱仪下检测KRAS突变基 因信号强度，与标准溶液曲线对比推算得到KRAS突变基因在血液中的浓度。
实施例4
一种基于留置针的仿生型拉曼基底，该基底包括留置针软管1(留置针型号为18GY&Z，1.3mm×29mm)和留置针软管1外表面附着层3，附着层3包括一层厚度为200nm 的黑色聚多巴胺膜3a和粒径为150nm的单层介孔二氧化硅纳米粒子3b，其中聚多巴胺 膜3a吸附在留置针软管1的外表面，其含有丰富的伯胺、仲胺以及儿茶酚化学基团， 单层二氧化硅纳米粒子3b吸附在聚多巴胺膜3a上，在单层二氧化硅纳米粒子3b表面 偶联吸附PIK3CA突变基因肽核酸探针分子，并用牛血清白蛋白分子封闭纳米粒子表面 多余位点。
其制备方法如下：
1)取用一种留置针作为制备衬底，型号为18G Y&Z，1.3mm×29mm；
2)在留置针软管1表面聚合形成聚多巴胺膜3a：将浓度为15mg/ml的盐酸多巴胺与pH值为8.5的氨水溶液按体积比2:1混合；然后将留置针软管1浸泡在混合溶液中， 在常温常压条件下顺时针旋转软管(转速为35转/分钟，反应时间为6小时)，反应结 束后使用超纯水多次冲洗软管以去除未反应的盐酸多巴胺，在留置针软管1外表面吸附 有一层厚度为200nm的黑色聚多巴胺膜3a；
3)吸附单层二氧化硅纳米粒子3b：将表面接枝巯基的粒径为150nm的介孔二氧化硅纳米粒子粉末分散在pH值为8.5的氢氧化钠溶液中，形成质量分数为12％二氧化硅纳 米粒子胶体溶液，然后将表面具有聚多巴胺膜的留置针软管1浸泡在该胶体溶液中，在 常温常压条件下顺时针旋转软管(转速为35转/分钟，反应时间为6小时)，待反应结 束后使用超纯水多次冲洗软管以去除多余的二氧化硅纳米粒子，得到吸附有单层二氧化 硅纳米粒子3a的留置针软管1；
4)偶联PIK3CA突变基因的肽核酸探针分子：将吸附有单层二氧化硅纳米粒子3b的留置针软管1在旋转状态下浸泡在3.5wt％的戊二醛水溶液中4h，然后经磷酸盐吐温 20缓冲液冲洗多次以去除多余戊二醛；然后将软管浸泡在150μg/ml的PIK3CA突变基 因肽核酸探针磷酸盐缓冲液中，4℃条件下过夜；最后将软管浸泡在1wt％的牛血清白蛋 白溶液中封阻多余位点，再用磷酸盐缓冲液去除多余的牛血清白蛋白分子；得到偶联 PIK3CA突变基因的肽核酸探针分子的留置针软管1，然后置于温度为5℃的磷酸盐缓冲 液中备用。
一种基于留置针的仿生型拉曼基底的应用，该拉曼基底应用于捕获血液中的PIK3CA 突变基因(乳腺癌肿瘤标记物，一种血液中的循环肿瘤DNA)以及鉴定其含量，具体操 作如下：将拉曼基底经消毒、穿刺操作，留置于患者静脉血管中，患者正常使用该留置针输液、输药等，留置时间5天，然后从患者体内取出的留置针软管1，用磷酸盐缓冲 液冲洗三次，浸泡在新鲜制备的直径为20nm的银纳米粒子溶胶中5h，用磷酸盐缓冲液 冲洗留置针软管三次以去除多余的银纳米粒子，然后置于拉曼光谱仪下检测PIK3CA突 变基因信号强度，与标准溶液曲线对比推算得到PIK3CA突变基因在血液中的浓度。