阅读说明：本技术 一种防治暗黑鳃金龟成虫的牛粪源引诱剂 (Cow dung-source attractant for preventing and treating Holotrichia parallela imagoes ) 是由 李克斌 尹娇 伊诺森 李晓峰 张帅 梅向东 于 2020-01-07 设计创作，主要内容包括：本发明公开了有害生物的生物防治技术领域的一种防治暗黑鳃金龟成虫的牛粪源引诱剂。所述引诱剂为丁酸(Butyric acid),溶剂为石蜡油,溶质质量分数为10%。本发明提供的防治暗黑鳃金龟成虫的牛粪源引诱剂对暗黑鳃金龟的防治效果好,不会使暗黑鳃金龟产生抗性；制备简单,制作成本低,对人畜无害,环境友好,对于综合治理暗黑鳃金龟具有重要意义。(The invention discloses a cow dung attractant for controlling Holotrichia parallela imagoes in the technical field of biological control of pests. The attractant is Butyric acid (Butyric acid), the solvent is paraffin oil, and the mass fraction of the solute is 10%. The cow dung-source attractant for preventing and treating the Holotrichia parallela imago has good prevention and treatment effects on Holotrichia parallela, and can not cause the Holotrichia parallela to generate resistance; the preparation method is simple, the preparation cost is low, the method is harmless to human and livestock, the environment is friendly, and the method has important significance for comprehensively treating the Holotrichia parallela.)

一种防治暗黑鳃金龟成虫的牛粪源引诱剂

技术领域

本发明属于有害生物的生物防治技术领域，具体涉及一种防治暗黑鳃金龟成虫的牛粪源引诱剂。

背景技术

暗黑鳃金龟1年发生1代，幼虫共3龄，其中3龄历期最长、食量最大，为害期几乎贯穿作物的整个生长季，加之在土壤中潜伏为害，极大的增加了防治难度，是世界公认的难以防治的地下害虫。由于暗黑鳃金龟幼虫在地下隐蔽为害，应采取“地下与地上防治”相结合、“幼虫与成虫防治”相结合的原则进行综合防控，而且成虫期防治往往能达到事半功倍的效果。

暗黑鳃金龟成虫不仅对寄主植物有产卵偏好性，对未充分腐熟的有机肥和腐败的有机物有着更强烈的趋向性，并喜欢在其中产卵；施用未充分腐熟的有机肥往往导致蛴螬的严重发生，而充分腐熟的有机肥对金龟子的引诱性大大降低。另有研究表明，牛粪浸提液对于金龟子的引诱效果显著强于蓖麻叶浸提液和化学引诱剂，这表明腐败有机物对于金龟子成虫的引诱效果可能比寄主植物挥发物更强。故研究牛粪源挥发物引诱暗黑鳃金龟成虫对于生态防治暗黑鳃金龟具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提出一种防治暗黑鳃金龟成虫的牛粪源引诱剂，以提高综合治理暗黑鳃金龟的效果。

本发明通过GC-MS试验得到牛粪挥发物中的主要成分，通过昆虫触角电位试验测定暗黑鳃金龟对各牛粪挥发物成分的电生理活性，将电生理活性较强的挥发物在大田进行引诱效果试验。

所述的引诱剂有效成分为丁酸(Butyric acid)。

优选地，所述丁酸质量分数为10％。

所述防治暗黑鳃金龟成虫的牛粪源引诱剂的制备方法，将丁酸(Butyric acid)以石蜡油为溶剂稀释为质量分数为10％的丁酸溶液。

所述防治暗黑鳃金龟成虫的牛粪源引诱剂的应用，用于暗黑鳃金龟成虫的引诱。

与现有技术相比，本发明具有如下优异效果：本发明提供的防治暗黑鳃金龟成虫的牛粪源引诱剂对暗黑鳃金龟的防治效果好，不会使暗黑鳃金龟产生抗性；制备简单，制作成本低，对人畜无害，环境友好，对于综合治理暗黑鳃金龟具有重要意义。

附图说明

图1指暗黑鳃金龟雌雄试虫对28种挥发物的触角电位反应。

图2中，(A)指暗黑鳃金龟成虫对不同浓度丁酸(Butyric acid)溶液的触角电位反应；(B)指未腐熟牛粪关键挥发物的气象色谱峰。

图3指丁酸(Butyric acid)及对照的大田诱捕结果。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明作详细描述，但本发明的实施不仅限于此。

实施例1牛粪提取物组分的GC-MS分析

对未腐熟及腐熟的牛粪均进行分析。气相色谱仪：岛津GCMS-QP2010SE型；色谱柱：RTx-5MS(30m×0.25mm i.d.,SGE)型毛细管柱。升温程序：起始温度50℃，保持3min；以20℃/min上升到190℃，保持3min；以5℃/min上升到280℃，保持5min。

未腐熟、腐熟牛粪GC-MS结果分别如表1、表2所示。

表1

表2

可看出，在未腐熟牛粪中共得到12种组分，在腐熟的牛粪中共得到11种组分。

实施例2暗黑鳃金龟对不同化合物单体的触角电位反应

将实施例1中部分牛粪挥发物及在他人研究成果中被证明对金龟甲有引诱作用的植物挥发物单体共计28种进行昆虫触角电位反应试验。以石蜡油为溶剂，将28种挥发物单体均稀释为0.1％浓度的待测溶液。挑选在塑料盆中很活跃的暗黑鳃金龟成虫，放置在滤纸上，在解剖镜下，用手术刀快速的切下触角基部，将离体的触角基部与充满导电液(内含750mg/ml NaCl，35mg/ml KCl，29mg/ml CaCl2·2H₂O的水溶液)的参比电极相连，触角顶端套入记录电极。电极内通入银-氯化银丝并连接信号放大器，信号通过探针监测放大器连接，用EAG2000软件记录和分析数据。HPLC级石蜡油为空白对照。用移液枪取20μL的样品加到剪好的滤纸条上，待滤纸条上溶剂挥发干后(约20s)，将滤纸条放入巴斯德管中。用EAG2000软件记录暗黑鳃金龟触角对各样品的电生理反应值。每次刺激时间为0.2s，刺激间隔为30s，湿润空气的流速为500mL/min。按随机方式测试样品，每个样品测试8根触角，在每根触角上重复测定3次，每根触角测10个样品。

结果如图1所示。

可看出，经Dunnett分析方法分别比较各化合物反应值与对照反应值的差异表明，雄性试虫对丁酸(Butyric acid)的反应值极显著高于对照(p<0.001)；而其它挥发物如甲醇(Methanol)、草蒿脑(Estragole)、蒈烯(carene)、芳樟醇(linalool)、吲哚(indole)、对异丙基甲苯(p-cymene)、樟烯(camphene)、壬醛(nonanal)的反应值与对照相比只有显著性差异(p<0.05)。对于雌性试虫，仅丁酸(Butyric acid)、吲哚(indole)及樟烯(camphene)显著高于对照。故丁酸(Butyric acid)对暗黑鳃金龟雌雄试虫均具有极显著的引诱活性。

实施例3暗黑鳃金龟对不同浓度丁酸溶液的触角电位反应

以石蜡油为溶剂，将丁酸(Butyric acid)分别稀释至质量分数为10％、1％、0.1％、0.01％、0.001％的溶液，将各梯度溶液进行昆虫触角电位试验，方法如实施例2。

结果如图2所示。

可看出，暗黑鳃金龟对各浓度的丁酸(Butyric acid)溶液均有电生理活性，而且浓度越大，电生理活性越强。

实施例4牛粪源引诱剂对暗黑鳃金龟成虫的大田诱捕效果

根据中国河南省新乡市以往暗黑鳃金龟发生规律，本研究在暗黑鳃金龟发生早高峰期开始进行。共两个处理，分别为质量分数为10％的丁酸(Butyric acid)溶液和CK(空诱芯)。每个处理20次重复，即20个绿色半满水的水盆诱捕器，共40个诱捕器。将诱捕器随机排列，每个诱捕器高1.5m，诱捕器间距离为10m，水盆中的水加入适量洗洁精。每个绿色天然橡胶塞分别加入1mL丁酸(Butyric acid)溶液或保持空诱芯状态，然后将橡胶塞水平固定在水盆诱捕器漂浮在水面上的小型装置上。诱捕期为2019年7月7日至2019年8月6日。实验地点为河南省新乡市花生和玉米均处于幼苗期的大田。根据暗黑鳃金龟隔日出土的习性，每两天一次以诱捕器为单位对诱捕到的昆虫进行计数。

测试结果如图3所示。

可看出，丁酸(Butyric acid)对暗黑鳃金龟成虫的诱捕量均显著多于对照(p<0.05)。在第1-7次的调查中，为暗黑鳃金龟发生高峰期，成虫较活跃，丁酸(Butyric acid)诱捕到的虫量较大，最高一次共诱捕到293头暗黑鳃金龟成虫。而后大田虫量减少，活跃度下降，丁酸诱捕到的试虫减少。图中的蓝色圆圈表明该次统计为降雨时的结果，表明，降雨严重影响丁酸(Butyric acid)的引诱效果。成虫在20:10开始出现，在快速将寄主寻找完成后便开始进食和交配。交配时长为1h至1h 30min。在未降雨的情况下，暗黑鳃金龟交配频繁。之后，以树叶为食，直到22:00。一系列结果表明，丁酸(Butyric acid)溶液对暗黑鳃金龟成虫具有强烈的引诱作用，可作为一种新型的引诱剂用于暗黑鳃金龟的防控。