阅读说明：本技术 一种生物活性物冻干固体面膜及其制备方法 (Bioactive substance freeze-dried solid mask and preparation method thereof ) 是由 杨桂花 赵进军 赵宇飞 于 2020-05-27 设计创作，主要内容包括：本发明涉及护肤品领域,具体涉及一种生物活性物冻干固体面膜及其制备方法,其中,一种生物活性物冻干固体面膜,由浸有面膜液的面膜布经低温干燥制得；所述面膜液包括A相、B相以及C相；所述A相包括水、甘油、丙二醇、植物提取物、透明质酸钠、传明酸、覆盆子酮葡糖苷、小核菌胶、赤藓醇、尿囊素、增稠剂以及对羟基苯乙酮；所述B相包括油橄榄果油、葡萄籽提取物、霍霍巴籽提取物、甜橙精油、维生素E、碳酸二辛酯以及氢化卵磷脂；所述C相为脂肪间充质干细胞裂解物。本发明的生物活性物固体面膜对皮肤具有美白、保湿、提高皮肤光泽度以及修复痘印、疤痕皮肤的效果。(The invention relates to the field of skin care products, in particular to a freeze-dried solid facial mask with a biological active substance and a preparation method thereof, wherein the freeze-dried solid facial mask with the biological active substance is prepared by drying facial mask cloth soaked with facial mask liquid at low temperature; the facial mask liquid comprises a phase A, a phase B and a phase C; the phase A comprises water, glycerol, propylene glycol, plant extract, sodium hyaluronate, tranexamic acid, raspberry ketone glucoside, sclerotium gum, erythritol, allantoin, thickener and p-hydroxyacetophenone; the phase B comprises olive fruit oil, grape seed extract, jojoba seed extract, sweet orange essential oil, vitamin E, dioctyl carbonate and hydrogenated lecithin; the phase C is adipose mesenchymal stem cell lysate. The bioactive substance solid facial mask disclosed by the invention has the effects of whitening, moisturizing, improving the skin glossiness and repairing acne marks and scar skin.)

一种生物活性物冻干固体面膜及其制备方法

技术领域

本发明涉及护肤品技术领域，更具体的说，它涉及一种生物活性物冻干固体面膜及其制备方法。

背景技术

面膜是护肤品的一个类别，是美容保养品的一种载体，敷在脸上用于美容功能例如补水保湿、美白、抗衰老、平衡油脂等。面膜的形式主要有泥膏型、撕拉型、冻胶型以及湿纸巾型；泥膏型面膜常见的有海藻面膜、矿泥面膜等，撕拉型面膜常见的是黑头粉刺专用鼻贴，冻胶型面膜主要为睡眠面膜，湿纸巾型面膜一般是单片包装的浸润着美容液的面膜纸。近年来，随着人们对护肤有多样化的需求，也出现了不同于传统的面膜的新型面膜，其中冻干面膜则是一种新型面膜。

现有技术中，申请公布号为CN108836923A的专利申请文件，公开了一种生物因子附着休眠面膜生产方法，包括休眠冻干粉面膜纸和面膜原液；所述休眠冻干粉面膜纸的制备方法：将水、甘油、分子玻尿酸、小分子玻尿酸、白芨提取物、烟酰胺、透明质酸、糖基海藻糖、茶树提取液、维生素A醛、甘草甜素、麦芽糖醇于-40℃以下低温速冻成固体块状，将块状固体于真空干燥机中冻干，完成后粉碎，粉碎后涂覆于面膜纸上，将面膜纸封装；所述面膜原液的制备方法：将水、甘油、甘油聚甲基丙烯酸酯、丙二醇、烟酰胺、蚕丝胶蛋白、芦荟提取物、黄原胶、香精、维生素B3、维生素B1、维生素B2、尿囊素加入搅拌罐中，保持45～60℃的恒温条件搅拌3小时；将搅拌混合物导入离心过滤机离心过滤，上清液通过声膜分离器分离，得到小于30KD的小分子物质，经巴斯德灭菌法进行灭菌，得到面膜原液。使用时，采用原液与带冻干粉的面膜纸混合，使得面膜纸润湿后敷于面部即可。

除了传统的美容成分外，近年来市场上出现了添加有生物因子的美容产品，主要包括表皮细胞生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)、角化细胞生长因子(KGF)；利用生物因子自身的活性，可以促进皮肤老化细胞的清除以及细胞的修复，从而改善皮肤状态；然而生物因子虽然具有很好的活性，但是其常温保存时间短，细胞因子失效快，导致其实际效果并不高；因此，研发更加高效、可以促进皮肤美容、保湿以及修复受损肌肤的护肤产品也是护肤品领域一直以来研究的热点。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的第一个目的在于提供一种生物活性物冻干固体面膜，其对皮肤具有美白、保湿、提高皮肤光泽度以及修复痘印疤痕皮肤的优点。

本发明的第二个目的在于提供一种生物活性物冻干固体面膜的制备方法，其通过冻干技术，将面膜液封锁于面膜布中，具有可以保持生物因子的活性的优点。

为实现上述第一个目的，本发明提供了如下技术方案：一种生物活性物冻干固体面膜，由浸有面膜液的面膜布经低温干燥制得；

所述面膜液包括A相、B相以及C相；

以重量份数计，所述A相包括水60-70份、甘油5-10份、丙二醇3-5份、植物提取物2-3份、透明质酸钠0.2-0.4份、传明酸0.06-0.08份、覆盆子酮葡糖苷0.5-1份、小核菌胶0.3-0.5份、赤藓醇0.3-0.4份、尿囊素0.1-0.2份、增稠剂0.5-0.7份以及对羟基苯乙酮0.2-0.3份；

所述B相包括油橄榄果油0.2-0.4份、葡萄籽提取物0.2-0.4份、霍霍巴籽提取物0.2-0.4份、甜橙精油0.1-0.2份、维生素E0.1-0.2份、碳酸二辛酯0.4-0.6份以及氢化卵磷脂0.1-0.2份；所述C相为脂肪间充质干细胞裂解物2-3份。

通过采用上述技术方案，本发明以脂肪间充质干细胞裂解物作为生物因子，通过美白组分覆盆子酮葡糖苷、传明酸、植物提取物与保湿组分甘油、丙二醇、透明质酸钠、小核菌胶、赤藓醇、尿囊素的配合，可以对皮肤起到补水、保湿、美白的作用，并通过润肤油脂油橄榄果油、葡萄籽提取物、霍霍巴籽提取物、甜橙精油、维生素E可以进一步对皮肤进行锁水，通过各原料间的配合，不仅对皮肤具有保湿、补水、美白的作用，而且还对疤痕、痘印皮肤具有很好的修复作用，可以促进组织生长、提高细胞新陈代谢、软化角质层蛋白，降低皱纹生长，在夜晚使用时，除了可以对皮肤进行密集修复保养，而且添加的甜橙精油还可以缓解压力，具有舒缓安神的作用；经过夜间对皮肤的修复后，可以调节皮肤的水油平衡，在次日上妆时不易出现卡粉、妆容不贴服的现象。

脂肪间充质干细胞裂解物由脂肪间充质干细胞经过细胞复苏、传代培养后、细胞裂解后制得，其中含有生物因子对晒后受损细胞、疤痕、痘印皮肤具有很好的修复作用，可以促进表皮细胞的生长以及加速老化细胞的代谢死亡，从而避免因真皮细胞修复而产生的痘印、疤痕。通过美白组分可以抑制皮肤黑色素的形成，促进皮肤新陈代谢，加速黑色素排除，淡化黑色痘印以及凹洞性痘印。

透明质酸钠具有很好的保湿、促进组织修复与再生的作用，并且其具有很强的润滑感以及成膜性，可以对皮肤起到保护作用；覆盆子酮葡糖苷又称树莓苷，其与传明酸、维生素E复配具有很好的抑制黑色素的作用，具有美白、亮肤、抗老化的作用；油橄榄果油、葡萄籽提取物、霍霍巴籽提取物、甜橙精油、维生素E、碳酸二辛酯以及氢化卵磷脂作为油相，具有很好的延展性以及渗透性，一方面可以渗透入皮肤细胞中，调节皮肤的水油平衡，提高其对皮肤的滋润性，另一方面可以对经过补水保湿后的皮肤的表层形成一层锁水防护膜，提高皮肤的柔软弹性感。

进一步地，所述脂肪间充质干细胞裂解物采用如下方法制备：

A、溶液配制：向基础培养基中加入血清替代物，制成含有4％血清替代物的培养基，标记为溶液C；向30mL生理盐水中加入20mL、0.25％胰酶混匀，标记为溶液D；

B、细胞复苏：取脂肪组织来源种子间充质干细胞，加入基础培养液，震荡后经离心弃去上清液，收取细胞沉淀，向细胞沉淀中加入溶液C，混合后，得到细胞悬液，将细胞悬液接种于培养瓶中，放置在二氧化碳培养箱中培养；

C、传代培养：细胞复苏后，当细胞汇合度达到80％时，加入溶液D后，使细胞消化单细胞；再加入溶液C，终止消化；将细胞悬液离心后弃去上清液，收取细胞沉淀；向细胞沉淀中加入基础培养基，重悬细胞沉淀，加入溶液C，得到细胞悬液，调整细胞密度为1×10⁶个/mL，将其加入接种于新的培养瓶中，放置在二氧化碳培养箱中培养；

D、收取细胞裂解物：传代培养后，当细胞汇合度达到80％时，加入溶液D，使细胞消化单细胞；再加入溶液C，终止消化；将细胞悬液离心后弃去上清液，收取细胞沉淀；向细胞沉淀中加入生理盐水，重悬细胞沉淀，加入生理盐水，得到细胞悬液；将细胞悬液置于-80℃的温度下，冷冻30min；重复两次；然后将其离心后，取上清液得到细胞裂解液；将细胞裂解液经脂质包埋、除菌、冷冻干燥后，得到脂肪间充质干细胞裂解物。

通过采用上述技术方案，间充质干细胞是一组源于基质的异质细胞群，脂肪间充质干细胞来源广泛，其中含有大量的活性成分，例如干细胞生长因子、成纤维细胞生长因子、内皮细胞生长因子、表皮细胞生长因子、胶原蛋白、透明质酸等，可以促进表皮角质细胞生长，修复受损细胞，提高细胞的新陈代谢；采用脂肪组织来源种子间充质干细胞经过细胞复苏、传代培养、细胞裂解后后得到细胞裂解液，将细胞裂解液经过脂质包埋、除菌、冷冻干燥后，可以提高细胞裂解物中的生长因子的活性保存期，在真空无菌的环境下使得细胞裂解液中的水分升华，对生物组织和细胞结构和特征的损伤较小，使其快速进入休眠状态，从而有效地延长其生物活性，提高冻干固体面膜的使用效果。

进一步地，所述植物提取物由重量比为4:(1-2):(2-3):(1-3):(0.6-1.5)的积雪草提取物、黑茶镳子果提取物、仙桃仙人掌茎提取物、香橼果提取物以及糖槭提取物混合而成。

通过采用上述技术方案，积雪草提取物具有美白补水、消炎抗痘、促进皮肤修复，可以紧致表皮与真皮连接部分，能软化皮肤、缓解皮肤松弛现象，提高皮肤弹性；黑茶镳子果提取物英文名称是RIBES NIGRUM(BLACK CURRANT)FRUIT EXTRACT，具有美白祛斑、收敛皮肤的作用；仙桃仙人掌茎提取物，英文名称是OPUNTIA FICUS-INDICA STEM EXTRACT，可以抑制雄性激素的分泌，对雄性激素偏高引起的粉刺有防治效果，并且可以促进皮肤生长因子的生成，具有很好的抗衰效果；糖槭提取物，英文名称是ACER SACCHARUM(SUGARMAPLE)EXTRACT，糖槭提取物具有很好的抗氧化、抗炎作用；香橼果提取物英文名称为Citrus Medica Limonum(Lemon)Fruit Extract具有很好的抗菌消炎作用。通过积雪草提取物、黑茶镳子果提取物、仙桃仙人掌茎提取物、香橼果提取物以及糖槭提取物复合而成的植物提取物对皮肤具有很好的舒缓、消炎以及收敛的作用，可以缓解皮肤发炎而引起的血管扩张，有利于淡化红色痘印以及凹洞性痘印；并且植物提取物成分安全、天然，将其与脂肪间充质干细胞以及传明酸、覆盆子酮葡糖苷、小核菌胶的配合，有利于修复痘印、疤痕等受损皮肤，提高皮肤光泽度。

进一步地，所述增稠剂为卡波姆。

通过采用上述技术方案，卡波姆作为一种亲水性增稠剂，与本发明的其他组分具有很好的相容性，有利于提高体系的稳定性。

为实现上述第二个目的，本发明提供了如下技术方案：

一种生物活性物冻干固体面膜的制备方法，包括如下步骤：

S1、将面膜布平铺浸入面膜液中，浸润10-20min；

S2、将浸润面膜液后的面膜布取出，真空冷冻干燥后，得到生物活性物冻干固体面膜。

进一步地，S1的面膜液采用如下方法制备：按照比例，取A相原料，升温至80-85℃，保温搅拌20-30min，得到A相预混物；

取B相原料，升温至80-85℃，保温搅拌20-30min，得到B相预混物；

将B相预混物加入A相预混物中，在80-85℃的温度下，保温搅拌10-15min，然后降温至40-45℃，加入C相原料，保温搅拌20-30min，均质后得到面膜液。

通过采用上述技术方案，将A相原料、B相原料分别混合后，再混合可以提高原料混合的均匀性，有利于提高体系的稳定性。

进一步地，搅拌速度为300-500r/min。

进一步地，均质速度为10000-15000r/min，均质时间为1-3min。

通过采用上述技术方案，将原料经过均质处理后，使得体系中的分散无微粒化、均匀后，提高体系的稳定性。

进一步地，S2的真空冷冻干燥是指：将浸润面膜液的面膜布取出，置于真空冷冻干燥机中，将真空冷冻干燥机调至-40～-45℃，预冻10～16h；以3～5℃的速度将真空冷冻干燥机降温至-20～-25℃，保温1～2h；然后抽真空，在真空度在20～25Pa的条件下保持2～3h；以1～1.2℃的温度升温至20～25℃，保温2～3h，在真空度为10～15Pa的条件下保持3～4h即可。

通过采用上述技术方案，在真空无菌的环境下使得细胞裂解液中的水分升华，对生物组织和细胞结构和特征的损伤较小，使其快速进入休眠状态，从而有效地延长其生物活性，提高冻干固体面膜的使用效果。

综上所述，本发明相比于现有技术具有以下有益效果：

本发明以脂肪间充质干细胞裂解物作为生物因子，通过美白组分覆盆子酮葡糖苷、传明酸、植物提取物与保湿组分甘油、丙二醇、透明质酸钠、小核菌胶、赤藓醇、尿囊素的配合，可以对皮肤起到补水、保湿、美白的作用，并通过润肤油脂油橄榄果油、葡萄籽提取物、霍霍巴籽提取物、甜橙精油、维生素E可以进一步对皮肤进行锁水，通过各原料间的配合，不仅对皮肤具有保湿、补水、美白的作用，而且还对疤痕、痘印皮肤具有很好的修复作用，可以促进组织生长、提高细胞新陈代谢、软化角质层蛋白，降低皱纹生长，在夜晚使用时，除了可以对皮肤进行密集修复保养，而且添加的甜橙精油还可以缓解压力，具有舒缓安神的作用；经过夜间对皮肤的修复后，可以调节皮肤的水油平衡，在次日上妆时不易出现卡粉、妆容不贴服的现象。

具体实施方式

以下对本发明作进一步详细说明。

脂肪间充质干细胞裂解物的制备例

脂肪间充质干细胞裂解物的制备例1：A、溶液配制：向DMEM/F12基础培养基中加入血清替代物，制成含有4％血清替代物的培养基，标记为溶液C；向30mL生理盐水中加入20mL、0.25％胰酶混匀，标记为溶液D。

B、细胞复苏：

b1、向15mL离心管中加入10mL、DMEM/F12基础培养基，预热到37℃后，静置备用；

b2、将盛有人脂肪组织来源种子间充质干细胞的冻存管从液氮罐中取出后，快速放入37℃水浴锅中，冻存管管盖朝上直立放置且管盖高于水面，迅速摇动冻存管，使冻存管中的冻存液快速融化；

b3、将b2的冻存液(种子间充质干细胞)融化后，旋开管盖，用5mL移液管吸取种子间充质干细胞至b1离心管中；

b4、用5mL移液管向b3转空的冻存管中加入1mL基础培养基，轻轻震荡冲洗管壁，将冲洗液倒入b1同一离心管中，拧紧管盖，颠倒混匀；

b5、将b4中装有种子间充质干细胞的离心管置于离心机中，300g离心5min；

b6、用移液管吸弃上清液，旋紧管盖，轻轻震散细胞沉淀；

b7、旋开管盖，向b6的离心管中加入基础培养基，定容至10mL，旋紧管盖，颠倒混匀；

b8、将b7中的离心管放入离心机，300g离心5min；

b9、用移液管吸弃b8离心管的上清液，旋紧管盖，轻轻震散细胞沉淀；

b10、旋开管盖，向b9离心管中加入5mL溶液C，旋紧管盖，颠倒混匀，得到细胞悬液；用5mL移液管吸取0.5mL细胞悬液进行细胞计数；

b11、用25mL移液管吸取溶液C，按照28mL/瓶量加入T-175培养瓶中；

b12、用5mL移液管吸取b10细胞悬液，接种至b11 T-175培养瓶中，细胞接种量为1.2×10⁶/T-175，将T-175培养瓶置于二氧化碳培养箱中培养72h，温度为37℃，二氧化碳体积比浓度为5％；

C、传代培养：

c1、细胞复苏后，当细胞汇合度达到80％时，将b12的T-175培养瓶从二氧化碳培养箱中取出；

c2、将T-175培养瓶转移至生物安全柜，平稳叠放，旋开瓶盖，用25mL移液管将培养瓶中的上清液移到无菌血清瓶；

c3、检样制备：用5mL移液管从无菌血清瓶中吸取培养上清液4mL，加入5mL离心管中，贴上标签，制成检样，送至质检部待检；

c4、用10mL移液管吸取生理盐水，加入T-175培养瓶，10mL/瓶，晃动瓶身，润洗瓶底，吸弃洗液；

c5、用25mL移液管吸取溶液D，按照5mL/瓶量沿T-175培养瓶非细胞面内壁加入，迅速晃动瓶身，充分浸润细胞面后，平放瓶身；

c6、显微镜下观察细胞变圆，竖立瓶身，用25mL移液管吸取溶液C，按照5mL/瓶量沿T-175培养瓶细胞面内壁加入，晃动瓶身，均匀浸润细胞面，终止消化；

c7、用25mL移液管将T-175培养瓶中的细胞悬液吸出汇集至50mL离心管；

c8、旋紧c7的离心管管盖，放入离心机，300g离心5min；

c9、取出离心管，倒弃上清液，震散细胞沉淀；

c10、向c9离心管中倒入基础培养基，定容至50ml，拧紧管盖，颠倒混匀；

c11、将c10离心管放入离心机，300g离心5min；

c12、取出c11离心管，倒弃上清液，震散细胞沉淀；

c13、并管：取c12离心管，用25mL移液管加入20mL基础培养基，晃动管身，重悬细胞沉淀后，转移至另一离心管，重复转移，直至将所有细胞并入1个50mL离心管中；

c14、洗管：向c13转空的离心管中加入基础培养基，轻轻震荡冲洗管壁，将冲洗液汇集至c13离心管中；

c15、向c13离心管中加入5mL溶液C，拧紧管盖，颠倒混匀；

c16、旋开管盖，用1mL移液管从c15离心管中取出0.5mL细胞悬液进行细胞计数；

c17、向c14离心管中加入溶液C，调整细胞密度为1×10⁶个/mL；

c18、用25mL移液管吸取溶液C，按照28mL/瓶量加入新的T-175培养瓶中，平稳叠放待用；

c19、用5mL移液管吸取c17离心管中的细胞悬液，按照1.5mL/瓶量接种至c18的T-175培养瓶中(1.5×10⁶个/瓶)；

c20、拧紧瓶盖，晃动均匀，将T-175培养瓶放入二氧化碳培养箱中培养72小时。

D、收取细胞裂解物：

d1、细胞传代培养72小时，当细胞汇合度达到80％时，将T-175培养瓶从二氧化碳培养箱中取出；

d2、将T-175培养瓶转移至生物安全柜，平稳叠放，旋开瓶盖，用25mL移液管将培养瓶中的上清液移到无菌血清瓶；

d3、用10mL移液管吸取生理盐水，加入T-175培养瓶，10mL/瓶，晃动瓶身，润洗瓶底，吸弃洗液；

d4、用25mL移液管吸取溶液D，按照5mL/瓶量沿T-175培养瓶非细胞面内壁加入，迅速晃动瓶身，充分浸润细胞面后，平放瓶身；

d5、显微镜下观察细胞变圆，竖立瓶身，用25mL移液管吸取溶液C，按照5mL/瓶量沿T-175培养瓶细胞面内壁加入，晃动瓶身，均匀浸润细胞面，终止消化；

d6、用25mL移液管将T-175培养瓶中的细胞悬液吸出汇集至50mL离心管；

d7、旋紧d6的离心管管盖，放入离心机，300g离心5min；

d8、取出离心管，倒弃上清液，震散细胞沉淀；

d9、向d8离心管中倒入生理盐水，定容至50ml，拧紧管盖，颠倒混匀；

d10、将d9离心管放入离心机，300g离心5min；

d11、取出离心管，倒弃上清液，震散细胞沉淀；

d12、并管：取d11离心管，用25mL移液管加入20mL生理盐水，晃动管身，重悬细胞沉淀后，转移至另一离心管，重复转移，直至将所有细胞并入1个50mL离心管；

d13、洗管：向d12转空的离心管中加入基础培养基，轻轻震荡冲洗管壁，将冲洗液汇集至d12离心管中；

d14、向d12离心管中加入生理盐水，定容到50mL，拧紧管盖，颠倒混匀；

d15、将d14的50mL离心管放入-80℃冰箱，冷冻30min，完全冷冻后取出室温融化；

d16、将d15重复操作两次；

d17、将d16离心管放入离心机，300g离心5min，取上清液即为细胞裂解液；

d18、取2kg细胞裂解液、0.8kgβ-环糊精以及0.2kg海藻糖，加入10L、pH为7.2的0.2mol/L的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液中，以500r/min的速度搅拌2h，得到预处理液；

取0.57kg卵磷脂、0.4kg维生素E以及0.03kg甘露醇，加入1L无水乙醇中，以500r/min的速度搅拌30min，得到包埋液；

将包埋液在1h滴加到预处理液中，滴加完毕后，搅拌1h，然后在温度为30℃、真空度为0.1MPa的条件下，旋转蒸发10min，以去除无水以及磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液，然后用0.22μm的无菌过滤器过滤除菌后，得到包埋细胞裂解物；

d19、将包埋细胞裂解液置于真空冷冻干燥机中，在4℃的温度下保持30min，然后以5℃的速度将真空冷冻干燥机降温至-10℃，保温1h；以5℃的速度将真空冷冻干燥机降温至-20～℃，保温1h；以5℃的速度将真空冷冻干燥机降温至-35℃，保温2h；然后抽真空至真空度为20Pa，以5℃的温度升温至-25℃，保温5h；以5℃的温度升温至-5℃，保温1h；以1℃的温度升温至255℃，保温2h，在真空度为10Pa的条件下保持3h，得到脂肪间充质干细胞裂解物。

脂肪间充质干细胞裂解物的制备例2：本制备例与脂肪间充质干细胞裂解物的制备例1的不同之处在于，不包含步骤d18，在d17得到细胞裂解液后直接将其进行真空冷冻干燥，得到脂肪间充质干细胞裂解物。

脂肪间充质干细胞裂解物的制备例3：本制备例与脂肪间充质干细胞裂解物的制备例1的不同之处在于步骤d18，细胞裂解液中未添加β-环糊精以及海藻糖。

实施例

以下实施例中的脂肪间充质干细胞裂解物选自脂肪间充质干细胞裂解物的制备例1制备而得。

实施例1：一种生物活性物冻干固体面膜采用如下方法制备而得：

S1、取水60kg、甘油5kg、丙二醇3kg、植物提取物2kg、透明质酸钠0.2kg、传明酸0.06kg、覆盆子酮葡糖苷0.5kg、小核菌胶0.3kg、赤藓醇0.3kg、尿囊素0.1kg、卡波姆0.5kg以及对羟基苯乙酮0.2kg，升温至80℃，保温搅拌20min，得到A相预混物；其中，植物提取物由重量比为4:1:1:1:0.6的积雪草提取物、黑茶镳子果提取物、仙桃仙人掌茎提取物、香橼果提取物以及糖槭提取物混合而成；

取油橄榄果油0.2kg、葡萄籽提取物0.2kg、霍霍巴籽提取物0.2kg、甜橙精油0.1kg、维生素E0.1kg、碳酸二辛酯0.4kg以及氢化卵磷脂0.1kg，升温至80℃，保温搅拌20min，得到B相预混物；

将B相预混物加入A相预混物中，在80℃的温度下，以300r/min的速度保温搅拌10min，然后降温至40℃，加入2kg脂肪间充质干细胞裂解物，以300r/min的速度保温搅拌20min，在10000r/min的速度下，均质1min后得到面膜液；

S2、将蚕丝面膜布平铺浸入面膜液中，浸润10min；

S3、将浸润面膜液后的面膜布取出，置于真空冷冻干燥机中，将真空冷冻干燥机调至-40℃，预冻10h；以3℃的速度将真空冷冻干燥机降温至-20℃，保温1h；然后抽真空，在真空度在20Pa的条件下保持2h；以1℃的温度升温至20℃，保温2h，在真空度为10Pa的条件下保持3h即可，经杀菌、包装后得到生物活性物冻干固体面膜。

实施例2：一种生物活性物冻干固体面膜采用如下方法制备而得：

S1、取水65kg、甘油7.5kg、丙二醇4kg、植物提取物2.5kg、透明质酸钠0.3kg、传明酸0.07kg、覆盆子酮葡糖苷0.75kg、小核菌胶0.4kg、赤藓醇0.35kg、尿囊素0.15kg、卡波姆0.6kg以及对羟基苯乙酮0.25kg，升温至82.5℃，保温搅拌25min，得到A相预混物；其中，植物提取物由重量比为4:1:1:1:0.6的积雪草提取物、黑茶镳子果提取物、仙桃仙人掌茎提取物、香橼果提取物以及糖槭提取物混合而成；

取油橄榄果油0.3kg、葡萄籽提取物0.3kg、霍霍巴籽提取物0.3kg、甜橙精油0.15kg、维生素E0.15kg、碳酸二辛酯0.5kg以及氢化卵磷脂0.15kg，升温至82.5℃，保温搅拌25min，得到B相预混物；

将B相预混物加入A相预混物中，在82.5℃的温度下，以400r/min的速度保温搅拌12.5min，然后降温至42.5℃，加入2.5kg脂肪间充质干细胞裂解物，以400r/min的速度保温搅拌25min，在12500r/min的速度下，均质2min后得到面膜液；

S2、将蚕丝面膜布平铺浸入面膜液中，浸润15min；

S3、将浸润面膜液后的面膜布取出，置于真空冷冻干燥机中，将真空冷冻干燥机调至-42.5℃，预冻13h；以4℃的速度将真空冷冻干燥机降温至-22.5℃，保温1.5h；然后抽真空，在真空度在22.5Pa的条件下保持2.5h；以1.1℃的温度升温至22.5℃，保温2.5h，在真空度为12.5Pa的条件下保持3.5h即可，经杀菌、包装后得到生物活性物冻干固体面膜。

实施例3：一种生物活性物冻干固体面膜采用如下方法制备而得：

S1、取水70kg、甘油10kg、丙二醇5kg、植物提取物3kg、透明质酸钠0.4kg、传明酸0.08kg、覆盆子酮葡糖苷1kg、小核菌胶0.5kg、赤藓醇0.4kg、尿囊素0.2kg、卡波姆0.7kg以及对羟基苯乙酮0.3kg，升温至85℃，保温搅拌30min，得到A相预混物；其中，植物提取物由重量比为4:1:1:1:0.6的积雪草提取物、黑茶镳子果提取物、仙桃仙人掌茎提取物、香橼果提取物以及糖槭提取物混合而成；

取油橄榄果油0.4kg、葡萄籽提取物0.4kg、霍霍巴籽提取物0.4kg、甜橙精油0.2kg、维生素E0.2kg、碳酸二辛酯0.6kg以及氢化卵磷脂0.2kg，升温至85℃，保温搅拌30min，得到B相预混物；

将B相预混物加入A相预混物中，在85℃的温度下，以500r/min的速度保温搅拌15min，然后降温至45℃，加入3kg脂肪间充质干细胞裂解物，以500r/min的速度保温搅拌30min，在15000r/min的速度下，均质3min后得到面膜液；

S2、将蚕丝面膜布平铺浸入面膜液中，浸润20min；

S3、将浸润面膜液后的面膜布取出，置于真空冷冻干燥机中，将真空冷冻干燥机调至-45℃，预冻16h；以5℃的速度将真空冷冻干燥机降温至-25℃，保温2h；然后抽真空，在真空度在25Pa的条件下保持3h；以1.2℃的温度升温至25℃，保温3h，在真空度为15Pa的条件下保持4h即可，经杀菌、包装后得到生物活性物冻干固体面膜。

实施例4：本实施例与实施例1的不同之处在于，植物提取物由重量比为4:1.5:2.5:2:1的积雪草提取物、黑茶镳子果提取物、仙桃仙人掌茎提取物、香橼果提取物以及糖槭提取物混合而成。

实施例5：本实施例与实施例1的不同之处在于，植物提取物由重量比为4:2:3:3:1.5的积雪草提取物、黑茶镳子果提取物、仙桃仙人掌茎提取物、香橼果提取物以及糖槭提取物混合而成。

对比例

对比例1采用申请公布号为CN108938534A的专利申请文件，一种生物因子附着休眠冻干面膜生产工艺，采用如下方法制备：将牛奶、当归、维生素E、珍珠粉、白芷、海藻、绿豆、白芍、茯苓、薏苡仁、淮山、生牡蛎、甘草、甘油、桑白皮、烟酰胺、茶树提取液、维生素A醛于-40℃以下低温速冻成固体块状，将块状固体于真空干燥机中冻干，完成后粉碎，粉碎后涂覆于面膜纸上，将面膜纸封装；休眠冻干粉面膜纸中，牛奶占5％、当归占8％、维生素E占2％、珍珠粉占15％、白芷占12％、海藻占8％、绿豆占3％、白芍占2％、茯苓占8％、薏苡仁占6％、淮山占6％、生牡蛎占9％、甘草占3％、甘油占2％、桑白皮占6％、烟酰胺占2％、茶树提取液占2％、维生素A醛占1％。

面膜原液的制备方法：将牛奶、薏苡仁、甘油、珍珠粉、白芍、茯苓、柠檬提取液、荔枝提取液、黄瓜提取液、木瓜、蜂蜜、蚕丝胶蛋白、芦荟提取物、黄原胶、维生素B3、维生素B1、维生素B2加入搅拌罐中，保持45～60℃的恒温条件搅拌3小时；将搅拌混合物导入离心过滤机离心过滤，上清液通过声膜分离器分离，得到小于30KD的小分子物质，经巴斯德灭菌法进行灭菌，得到面膜原液。

该申请文件的生物因子附着休眠冻干面膜的使用方法：使用时，将面膜原液与休眠冻干粉面膜纸混合，静置10分钟，待混合均匀即可使用。

对比例2采用申请公布号为CN110960456A的专利申请文件，一种舒敏保湿冻干面膜及其制备方法的实施例1的配方和实施例5的制备方法，一种舒敏保湿冻干面膜，以总质量100份计，添加芍药根提取物1.2份、马齿苋花/叶/茎提取物2.0份、金黄洋甘菊提取物4.3份、黄芩提取物0.08份、透明质酸钠1.0份、银耳多糖0.5份、尿囊素0.8份、聚谷氨酸钠0.3份、纤连蛋白2.3份、胶原1.6份、鼠李糖2.1份、去离子水加至100份。

一种舒敏保湿冻干面膜的制备方法，具体步骤如下：

1、按质量比称芍药根提取物、马齿苋花/叶/茎提取物、金黄洋甘菊提取物、黄芩提取物、透明质酸钠、银耳多糖、尿囊素、聚谷氨酸钠、纤连蛋白、胶原、鼠李糖和无菌去离子水于反应釜中，以15～25r/min速度搅拌分散均匀，并加热升温至40～45℃，搅拌确保所有物料充分分散溶胀均匀，形成精华状液体，无菌环境下存放备用；

2、将精华状液体送检，送检合格即可过滤出料，无菌环境下存放备用；

3、选用无珠光膜膜布，进行臭氧灭菌备用；

4、优选的，选用30片膜布在托盘中平铺叠加，相应的加入300毫升2所述料体进行浸润；

5、将放有浸润好的膜布的托盘装入冻干机，在-50℃下预冻，冷冻干燥58个小时，即可取出，无菌环境下装袋封口。

该申请文件的舒敏保湿冻干面膜的使用方法：使用时，将冻干面膜用25mL无菌去离子水与膜袋中充分浸润均匀，即可使用。

对比例3：本对比例与实施例1的不同之处在于，原料中未添加植物提取物。

对比例4：本对比例与实施例1的不同之处在于，原料中未添加覆盆子酮葡糖苷以及小核菌胶，植物提取物中未添加黑茶镳子果提取物以及仙桃仙人掌茎提取物。

对比例5：本对比例与实施例1的不同之处在于，脂肪间充质干细胞裂解物选自脂肪间充质干细胞裂解物的制备例2制备而得。

对比例6：本对比例与实施例1的不同之处在于，脂肪间充质干细胞裂解物选自脂肪间充质干细胞裂解物的制备例3制备而得。

性能测试

根据QB/T2872-2017《面膜》的要求，对实施例1-5中的面膜的感官、理化以及卫生指标进行测试，将测试结果示于表1。

表1实施例1-5中面膜的感官、理化以及卫生测试表

根据表1数据可知，本发明制备的面膜符合国家执行标准QB/T2872-2017《面膜》中感官指标、理化指标以及卫生指标的要求。

分别采用实施例1-5以及对比例1-4的方法制备面膜，实施例1-5与对比例1-4的面膜在制备一周后使用，使用方法为：使用时，取实施例的制备的冻干固体面膜用25mL无菌去离子水于膜袋中充分浸润均匀，即可使用；将浸润后的膜布敷于面部，15分钟揭下，按摩面部至面膜液完全被吸收，不需要再清洁面部。评价方法为：以实施例1-5以及对比例1-4制备的面膜为试样，每个试样分给20名年龄在20-35岁的女性志愿者使用，志愿者每天除了使用化妆水外，还要使用相同的仅具有保湿成分的乳液，测试周期为21天，每2天敷一次面膜，在测试前以及测试后的每周用皮肤测试仪对志愿者的皮肤进行检测，每次测试时间相同，测试项目为志愿者皮肤水分含量、皮肤油脂分泌量、皮肤光泽度、细纹、皮肤粗糙度、皮肤美白度，将测试结果的平均值置于表2。

表2实施例1-5以及对比例1-4的面膜性能测试表

根据表2数据可知，相较于传统的面膜，使用本发明制备的面膜后，可以明显提高皮肤的含水量，降低皮肤油脂分泌量，可以很好的调节皮肤水油平衡；并且长期使用可以明显提高皮肤的光泽度以及美白度，具有很好的提亮效果，并且还可以降低皮肤细纹以及粗糙度，有利于提高皮肤的细腻感。

对比例3的原料中未添加植物提取物；相较于实施例1，使用对比例3的面膜后，对皮肤的保湿、补水效果略低，皮肤光泽度的提亮效果略低，说明植物提取物的加入可以提高面膜对皮肤的补水、保湿以及提亮效果。

对比例4的原料中未添加覆盆子酮葡糖苷以及小核菌胶，植物提取物中未添加黑茶镳子果提取物以及仙桃仙人掌茎提取物；相较于实施例1，使用对比例4的面膜后，对皮肤的保湿、补水效果明显降低，皮肤的光泽度的提亮效果、美白度以及粗糙度明显降低，说明覆盆子酮葡糖苷、小核菌胶、黑茶镳子果提取物以及仙桃仙人掌茎提取物的加入可以明显提高面膜对皮肤的补水、保湿、提亮、美白效果。

分别采用实施例1以及对比例5-6的方法制备面膜，实施例1与对比例5-6的面膜制备后，将其置于温度为15℃、湿度为65％的恒温箱中保存6个月，以模拟其在阴凉干燥处保存的条件，测试其保存一定时间后的痘印修复效果。

痘印修复效果评价：选择20-35岁的皮肤上有痘印的女性志愿者，根据其痘印类型将其分为三组：黑色痘印组、红色痘印组、凹洞性痘印组，每组30人，每组分为三小组，分别食用实施例1、对比例4、对比例5的面膜；志愿者每天除了使用化妆水外，还要使用相同的仅具有保湿成分的乳液，测试周期为21天，每2天敷一次面膜，观察皮肤上的痘印状态，对其进行评分，评分标准如下：痘印无明显变化0-3分；痘印有轻微变淡4-7分；痘印明显变淡8-10分，将测试结果的平均值置于表3。

表3实施例1、对比例4-5面膜性能测试表

痘印修复效果，分	实施例1	对比例5	对比例6
				黑色痘印，分	9.2	7.8	8.9
红色痘印，分	9.0	8.1	8.8
				凹洞性痘印，分	8.6	7.3	8.2

对比例5的脂肪间充质干细胞裂解物选择脂肪间充质干细胞裂解物的制备例2制备而得，该制备例的脂肪间充质干细胞裂解物制备时未经过脂质包埋处理，对比例6的脂肪间充质干细胞裂解物选择脂肪间充质干细胞裂解物的制备例3制备而得，该制备例的脂肪间充质干细胞裂解物制备时，脂质包埋工艺的原料中未添加β-环糊精以及海藻糖。根据表3数据可知，在制备脂肪间充质干细胞裂解物时，将其经过本发明的脂质包埋处理后，可以明显延长其生物活性，在面膜保存的过程中，面膜中的有效成分仍然具有较高的活性，对痘印皮肤具有很好的修复效果。

本具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。