阅读说明：本技术 抗结核分枝杆菌的二芳基喹啉衍生物 (Diaryl quinoline derivatives against mycobacterium tuberculosis ) 是由 赵学清 黄明翔 孟春 陈新朝 成佳威 王航 郑治尧 廖伟科 李梦娜 林燕琴 陈忠 于 2019-12-05 设计创作，主要内容包括：本发明公开了通式I所示的取代二芳基喹啉衍生物,及其与药用酸或碱加成的盐。本发明的化合物可用于治疗分枝结核杆菌疾病,特别是病原性分枝杆菌,例如结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、鸟分枝杆菌、海分枝杆菌引起的疾病。本发明化合物的定义如下：R<Sup>1</Sup>是含环丙基及环丙基衍生物的、3-羟基丙烯或丙炔-1-基的苯基及萘基时；R<Sup>2</Sup>是Br；R<Sup>1</Sup>是苯基及取代苯基、萘-1-基时,R<Sup>2</Sup>是含环丙基及环丙基衍生物的、3-羟基丙烯或丙炔-1-基等；<Image he="132" wi="222" file="100004_DEST_PATH_IMAGE002.GIF" imgContent="drawing" imgFormat="GIF" orientation="portrait" inline="no"></Image>。(The invention discloses a substituted diaryl quinoline derivative shown in a general formula I and a salt thereof added with medicinal acid or alkali. The compounds of the invention are useful for the treatment of mycobacterial diseases, particularly diseases caused by pathogenic mycobacteria, such as mycobacterium tuberculosis, mycobacterium bovis, mycobacterium avium, mycobacterium marinum. The compounds of the invention are defined as follows: r 1 When the compound is a 3-hydroxy propylene or propyn-1-yl phenyl or naphthyl group containing cyclopropyl and cyclopropyl derivatives; r 2 Is Br; r 1 When it is phenyl, substituted phenyl, or naphthalen-1-yl, R 2 3-hydroxy propylene or propyn-1-yl containing cyclopropyl and cyclopropyl derivatives; 。)

抗结核分枝杆菌的二芳基喹啉衍生物

技术领域

本发明属于药物化学领域，具体涉及抗结核分枝杆菌的二芳基喹啉衍生物。

背景技术

据WHO最新估计：全球范围内有150万人患有耐多药结核病，其中中国约占三分之一（World Health Organization. Global tuberculosis report 2016.）。耐多药结核病（multi-drug-resistant tuberculosis，MDR-TB）是一种由细菌引起的，对异烟肼和利福平耐药，以及任何氟喹诺酮类药和任何二线抗结核注射药物（阿米卡星、卡那霉素或卷曲霉素）都有抗药性的结核病。治疗这些形式的结核病，标准的6个月一线抗结核药物不起作用，并可能需要长达两年或更长的治疗时间，而这些药物药效小、毒性大，而耐多药结核病药物的成本为普通结核病药物的数十至百倍。全球范围内，接受治疗的病人当中，治愈率约50%。调查发现对MDR-TB疗法失败的病人3年内100%死亡，临床迫切需要更好疗效的药物。

2012年12月美国FDA加速批准了强生公司（Johnson & Johnson）用于治疗耐药性结核病的药物富马酸贝达喹啉。贝达喹啉是一种抗生素，通过靶向ATP合成酶来杀死结核分枝杆菌（M.tb），ATP合成酶对于能量的生成至关重要。该药成为近40年来首个具有全新作用机制的TB药物，同时也是有史以来首个明确用于MDR-TB的TB药物（Andries K, et al.Science , 2005, 307: 223-227）。

但是贝达喹啉具有许多不良反应，其肝毒性、QT 时间延长、潜在的严重的心律失常和细胞磷脂蓄积。贝达喹啉的长半衰期意味着这些不良反应将持续至停药后。最让人担心的是贝达喹啉组的死亡率要高于安慰剂组。一项随机对照研究中贝达喹啉的死亡率为13%，而安慰剂组仅为 2%。因此虽然贝达喹啉对耐药结核分枝杆菌具有很强的杀灭能力，但由于其具有的毒副作用，限制了它的使用。

Amy S. T. Tong团队报道了（Amy S. T. Tong，et al. Medicinal Chemistry Letters 2017, 8 (10), 1019-1024.）, 在贝达喹啉的喹啉环6-位引入环丙基后，其抑菌活性MIC与贝达喹啉相当；当以苯环取代萘环后，在苯环的3-位引入一系列基团，如CN、Cl、Me、F、OMe等，其中还有少部分化合物的抑菌活性比贝达喹啉强。但是，所有这些化合物，根据其结构特征分析，它们都难以被代谢，其代谢半衰期仍然很长，推测其副作用也未能大幅降低。

药物分子中神奇的“环丙基片段”

由于环丙基结构的特殊性，它已成为药物设计中引入最频繁的基团之一（Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 2003, 13: 4007-4010；Journal of Medicinal Chemistry, 2016, 59: 8712-8756.），在已上市的药物、或在研药物中，几乎所有领域的药物分子结构中都广泛存在环丙基。在药物分子结构中引入环丙基的作用：

（1）环丙基的碳碳单键具有双键的性质，环丙基的碳氢键键长更短，键能更强，因此在体内代谢是更加稳定；

（2）虽然环丙基是烷基，却能使分子获得更高的水溶性；

（3）环丙基环的引入还对药物产生多种其他的性质变化，包括增强药效、提高受体亚基选择性、提高生物利用度、改善半衰期、增加微粒体稳定性、增加血脑屏障透过率、适应目标蛋白质的结合位点等。

已知在贝达喹啉喹啉环的6-位上引入环丙基后，其抑菌活性MIC与贝达喹啉相当；鉴于环丙基在药物分子设计中的广泛应用，我们拟在贝达喹啉喹啉环的

6-位、萘环的4-位、苯环取代萘环后苯的3-位及4-位引入环丙基或含环丙基的酯、酰胺等易代谢基团。本发明的目的是提供这些新的二芳基喹啉衍生物，所述的这些化合物可能具有抑制分枝杆菌生长的性质，并可能用于治疗分枝杆菌所产生的疾病。

发明内容

本发明涉及通式Ⅰ所示的新二芳基喹啉衍生物：

及其与药用酸和碱加成的盐，其中：

R²是Br时，R¹是(3-环丙基)苯-1-基、(4-环丙基)苯-1-基、(4-环丙基)萘-1-基、3-(2-环丙基乙炔-1-基)苯-1-基、3-(3-羟基丙炔-1-基）苯-1-基、3-(3-羟基丙烯-1-基）苯-1-基、3-(2-乙氧羰基环丙-1-基)苯-1-基、3-(2-N,N-二甲胺基羰基环丙-1-基)苯-1-基等含环丙基的芳烃；

R¹是2-氟苯基、3-氟苯基、3-甲氧苯基、3-腈基苯、苯基、萘-1-基等芳烃时，R²是 (2-环丙基)乙炔-1-基、(3-羟基)丙炔-1-基、(3-羟基)丙烯-1-基、(2-乙氧羰基)环丙-1-基、(2-N,N-二甲基胺羰基)环丙-1-基、(2-乙氧羰基环丙-1-基)乙炔-1-基、(2-N,N-二甲基胺羰基环丙-1-基) 乙炔-1-基等环丙基衍生物。

通式I的构型为（1R,2S），或为其外消旋体。

本发明中这些新二芳基喹啉衍生物，已显示具有强的抑制分枝杆菌作用，其可用于治疗分枝杆菌所产生的疾病。

一般制备

本发明的化合物可通过本领域技术人员，如关键步骤可参照专利CN1325475C中的制备方法，一般可按照以下的已知连续步骤而制得。

按照下列步骤：1）首先制备（2-N,N-二甲胺基乙基）芳酮衍生物（通式III）；2）制备关键的二芳基喹啉外消旋体（通式 (1R,2S)-V和(1S,2R)-V））或其手性中间体((1S,2R)-V)；3）制备环丙基及其衍生物的锌试剂（通式VII）；4）将环丙基及其衍生物的锌试剂、炔试剂与卤代中间体经Negeshi或Sonagashira偶联反应得到目标化合物（通式I），或进一步延伸目标产物化合物（通式I）。

1）（2-N,N-二甲胺基乙基）芳酮衍生物（通式III）的制备

通式II和III中R³是3-碘苯-1-基、4-碘苯-1-基、4-碘萘-1-基等含碘芳烃，或2-氟苯基、3-氟苯基、3-甲氧苯基、苯基、萘-1-基等芳烃；

芳基乙酮衍生物（通式II）与多聚甲醛、盐酸二甲胺进行Mannich反应，得到碘代芳基酮衍生物盐酸盐，再碱化游离得到通式III系列化合物。

2）关键卤代的二芳基喹啉外消旋体（通式(1R,2S)-V和(1S,2R)-V）或其手性中间体（通式(1R,2S)-V）的制备

通式(1R,2S)-V和（1S,2R）-V）、通式(1R,2S)-V中

X = Br时，R³是3-碘苯-1-基、4-碘苯-1-基、4-碘萘-1-基等含碘芳烃；

或X = I时，R³是2-氟苯基、3-氟苯基、3-甲氧苯基、3-腈基苯、苯基、萘-1-基等芳烃；

X 为环丙基乙炔等时，经分离或经拆分可直接得到的是目标产物（通式I）

上述所合成的卤代产物含具有两个手性中心的两对外消旋体化合物，通过本领域已知的方法，如柱层析或结晶的方法可以得到（1S,2R）和（1R,2S）这对外消旋体（通式(1R,2S)-V和(1S,2R)-V），这对外消旋体中，可采用本领域已知的拆分方法，如：手性制备柱色谱、与手性酸分子成盐再碱游离的化学拆分法，将其分开，得到强活性的手性 (1R,2S)-V单旋体。在本案中，有些是经过(S)-联萘酚磷酸酯，而有些则采用(R)-联萘酚磷酸酯拆分，拆分所得的单旋体的绝对构型经X-单晶衍射仪确证。

3）环丙基及其衍生物的锌试剂（通式VII）的制备

环丙基的锌试剂可由环丙基溴先制备成格氏试剂，再加溴化锌制得[专利CN201410753335.0]。

环丙基甲酸乙酯的锌试剂可参照相关文献 [V. A. Vu et al, Angew. Chem. Int. Ed. 2002, 41:351-352; Vu, V. A et al. Angew. Chem. 2002, 114:361]的方法制备：

在-55℃下，2,2-二碘代环丙基甲酸乙酯与异丙基格式试剂定量交换反应后，加酸处理可消掉一碘原子，得到trans-外消旋体和cis-外消旋体的两对外消旋体，而文献中仅得到一对trans-外消旋体。这两对单碘（通式VI中：X = I，R⁴ = COOC₂H₅）的trans-体和cis-体分别在-30℃下，再与异丙基格氏试剂交换，然后加入无水溴化锌的四氢呋喃溶液，可分别得到环丙基酯的锌试剂（通式VII）。

4）经Negeshi或Sonagashira偶联反应得到目标产物（通式I），或进一步延伸目标产物（通式I）

目标产物通式I中：

R² = Br时，

R¹ = (3-环丙基)苯-1-基、(4-环丙基)苯-1-基、(4-环丙基)萘-1-基、3-(2-环丙基乙炔-1-基)苯-1-基、3-(3-羟基丙炔-1-基）苯-1-基、3-(3-羟基丙烯-1-基）苯-1-基、3-(2-乙氧羰基环丙-1-基)苯-1-基、3-(2-N,N-二甲胺基羰基环丙-1-基)苯-1-基含环丙基的芳烃。

目标产物通式I中：

R²是(2-环丙基)乙炔-1-基、(3-羟基)丙炔-1-基、(3-羟基)丙烯-1-基、(2-乙氧羰基)环丙-1-基、(2-N,N-二甲基胺羰基)环丙-1-基、(2-乙氧羰基环丙-1-基)乙炔-1-基、(2-N,N-二甲基胺羰基环丙-1-基) 乙炔-1-基等环丙基衍生物时，

R¹是2-氟苯基、3-氟苯基、3-甲氧苯基、3-腈基苯、苯基、萘-1-基等芳烃；

目标产物I的立体构型：（1R,2S）或其外消旋体

采用锌试剂进行Negeshi偶联时，碘衍生物的效果好；

室温下，在化合物通式(1R,2S)-V的四氢呋喃溶液，加入环丙基衍生物的锌试剂（通式VII），在Pd(PPh₃)₄ 或 Pd(dba)₂Cl₂的催化下，得到上述目标产物，收率在60%-80%。

制备含有双键、三键的化合物，通式(1S,2R)-V中X = Br时，可与环丙基乙炔、或丙炔醇直接进行Sonagashira偶联，反应收率良好以上，然后再将其还原（Red-Al, -40 °C）得到双键化合物。

具体实施方式

：

以下通过实施例对本发明做进一步详细说明，但不应就此理解为本发明上述主题范围内仅限于以下实施例。在不脱离本发明上述技术前提下，根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的相应替换或变更的修改，均包括在本发明的范围内。

关键卤代的二芳基喹啉手性中间体（通式(1R,2S)-V）的制备

(1R,2S)-1-(6-溴-2-甲氧喹啉-3-基)-4-(N,N-二甲基胺基)-2-(4-碘苯基)-1-苯丁-2-醇((1R,2S)-V_a)的制备

在反应瓶内加入1-（4-碘苯基）-1-乙酮9.84g（40.0mmol）、盐酸二甲胺4.24g（51.7mmol）、多聚甲醛1.32g（43.6mmol）95%乙醇15.0ml、浓盐酸0.15ml，将该混合物加热到95℃，搅拌反应5小时, 6 M的氢氧化钠溶液调pH至弱碱性，用乙酸乙酯25ml×2萃取，干燥，硅胶柱层析（洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯2/1）, 浓缩，得到3-(N,N-二甲基氨基)-1-(4-碘苯基)丙-1-酮（III_a）淡黄色油状物8.16g，收率67.0%。

参照III_a 的制备方法，制得III_b-III_g。

在-75℃、N₂保护下，加入LDA 2.0M（11.0mmol）, 无水THF 3.0ml，在该温度下搅拌20分钟，缓慢滴加溶于THF 6.0ml的3-苄基-6-溴-2-甲氧基喹啉 3.57g（10.9mmol）溶液，搅拌反应2.5小时，缓慢滴加溶于THF 5.0ml的III_a 3.15g（10.4mmol）溶液，搅拌反应2.5小时，加入饱和氯化铵溶液5.0ml淬灭反应，加入乙酸乙酯15ml×2萃取，干燥，硅胶柱层析（洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯5/1）,收集(1R,2S)-V_a和(1S,2R)-V_a的外消旋体2.12g（收率31.5%）。

取上述该组分850mg在S-联萘酚磷酸酯492mg （1.41mmol）的丙酮溶液中加热回 1小时, 冷却析晶, 过滤干燥得白色固体，(1R,2S)-V_a的S-联萘酚磷酸酯盐368mg（收率55.0%）。

取上述该固体加入至甲苯5ml和10% K₂CO₃溶液3.0ml 混合物中， 加热解离，乙酸乙酯萃取，浓缩、干燥得到化合物(1R,2S)-V_a238mg（收率99.5%）, 白色固体。

(1R,2S)-1-(6-溴-2-甲氧喹啉-3-基)-4-(N,N-二甲基胺基)-2-(3-碘苯基)-1-苯丁-2-醇（(1R,2S)-V_b）的制备

在反应瓶内加入1-（3-碘苯基）-1-乙酮9.84g（40.0mmol）、盐酸二甲胺4.24g（51.7mmol）、多聚甲醛1.32g（43. 6mmol）95%乙醇15.0ml、浓盐酸0.15ml，将该混合物加热到95℃，搅拌反应5小时, 6M的氢氧化钠溶液调pH至弱碱性，用乙酸乙酯25ml×2萃取，干燥，硅胶柱层析（洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯2/1）, 浓缩，得到3-(N,N-二甲基氨基)-1-(3-碘苯基)丙-1-酮（III_b）,淡黄色油状物13.2g，收率97.2%。

在-75℃、N₂保护下，加入LDA 2.0M（41.0mmol），THF 10.0ml，在该温度下搅拌20分钟，缓慢滴加溶有3-苄基-6-溴-2-甲氧基喹啉12.7g（38.9 mmol）的THF溶液19.0ml，搅拌反应2.5小时，缓慢滴加溶有III_b 11.8g （38.9mmol）的THF 5.0ml溶液，搅拌反应2.5小时，加入饱和氯化铵溶液5.0ml淬灭反应，加入乙酸乙酯25ml×2萃取，干燥，硅胶柱层析（洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯5/1），收集得到(1R,2S)-V_b和(1S,2R)-V_b 的外消旋体8.47g（收率34.6%），白色固体。

取上述该组分6.95g在含S-联萘酚磷酸酯4.01g（11.5mmol）的丙酮溶液中加热回流1小时，冷却析晶，过滤干燥得白色固体，(1R,2S)-V_b的S-联萘酚磷酸酯盐 5.36g（收率97.8%）。

将上述固体加入至甲苯25ml与和10% K₂CO₃溶液15ml的混合物中，加热解离，乙酸乙酯萃取，浓缩、干燥得到化合物(1R,2S)-V_b3.27g（收率94.0%）, 白色固体。

(1R,2S)-1-(6-溴-2-甲氧喹啉-3-基)-4-(N,N-二甲基胺基)-2-(4-碘苯基)-1-苯丁-2-醇((1R,2S)-V_c)的制备

该化合物的外消旋体参照文献（Amy S.T.Tong，et al. J. Med. Chem.2016. 59.8712-8756）制备，所得到的该外消旋体5.51g（9.08mmol）在R-(-)-联萘酚磷酸酯3.47g（9.90mmol）的丙酮溶液中加热回流1小时，冷却析晶，过滤干燥得(1R,2S)-V_c 的R-(-)-联萘酚磷酸酯盐3.25g，微黄色固体（收率74.9%）。

取上述固体，加入至甲苯15ml与10% K₂CO₃溶液9ml的混合物中，加热解离，乙酸乙酯萃取，浓缩、干燥得到化合物(1R,2S)-V_c 2.01g（收率99.1%）, 淡黄色粉末。

3-苄基-6-(环丙基乙炔基)-2-甲氧基喹啉的制备

取3-苄基-6-溴-2-甲氧基喹啉15 g（45.8 mmol）、Pd(PPh₃)₄1.5 g（3% eq）、碘化亚铜428 mg（5% eq），通N₂。加入DMF 30 ml、三乙胺0.5 ml，加热至85℃，反应24小时，加水300ml，乙酸乙酯20 ml×2提取分离，有机相用无水硫酸钠干燥，柱层析分离得11.9 g淡黄色粉末，收率83%。

实施例1

外消旋体(1R,2S)-I_a和(1S,2R)-I_a的制备

在-75℃、N₂保护下，加入LDA 2.0M（8.4mmol）, 无水THF 2.0ml，在该温度下搅拌20分钟，缓慢滴加溶有2-甲氧基-3-苄基-6-溴喹啉2.62g（8.0mmol）的THF 溶液6.0ml，搅拌反应2.5小时，缓慢滴加溶有1-(4-环丙基萘-1-基)-3-(二甲胺)丙-1-酮 (III_c) 1.65g（5.45mmol）的THF溶液4.0ml，搅拌反应2.5小时，加入饱和氯化铵溶液5.0ml淬灭反应，加入乙酸乙酯15ml×2萃取，干燥，硅胶柱层析（洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯5/1）, 收集得到外消旋体(1R,2S)-I_a和(1S,2R)-I_a 1.13g（收率31.2%），淡黄色粉末。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃)δ 8.86 (s, 1H), 8.63 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 8.52 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.95 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.66 –7.58 (m, 2H), 7.55 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.12 (dd, J = 13.2, 5.5Hz, 3H), 6.89 – 6.84 (m, 3H), 5.89 (s, 1H), 4.21 (s, 3H), 2.51 (d, J = 11.9Hz, 1H), 2.25 (tq, J = 10.9, 5.4 Hz, 1H), 2.11 – 1.99 (m, 2H), 1.96 (s, 6H),1.90 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 1.03 – 0.98 (m, 2H), 0.73 – 0.66 (m, 2H).

实施例2

外消旋体(1R,2S)-I_b和(1S,2R)-I_b的制备

在-75℃、N₂保护下，加入LDA 2.0M（7.0mmol），THF 3.0ml，在该温度下搅拌20分钟，缓慢滴加溶有3-苄基-6-(环丙基乙炔基)-2-甲氧基喹啉 2.0g （7.0mmol）的甲苯溶液10.0ml，搅拌反应2.5小时，缓慢滴加溶有1-(2-氟苯-1-基)-3-(二甲胺)丙-1-酮 (III_d)3.5g（17.9mmol）的THF溶液5.0ml，搅拌反应2.5小时，加入饱和氯化铵溶液5.0ml淬灭反应，加入乙酸乙酯25ml×2萃取，干燥，硅胶柱层析（洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯5/1），收集得到外消旋体(1R,2S)-I_b和(1S,2R)-I_b 共470mg（收率13.9%）。

实施例3

(1R,2S)-1-(6-(环丙基乙炔基)-2-甲氧喹啉-3-基)-4-(二甲基氨基)-2-(3-氟苯基)-1-苯丁-2-醇（化合物I_c）的制备

在-75℃、N₂保护下，加入LDA 2.0M（10.6mmol），THF 3.0ml，在该温度下搅拌20分钟，缓慢滴加溶于甲苯15.0ml的3-苄基-6-(环丙基乙炔基)-2-甲氧喹啉 2.78g（10.0mmol）溶液，搅拌反应2.5小时，缓慢滴加溶有3-(二甲基氨基)-1-(3-氟苯基)丙-1-酮 (III_e) 2.0g（10.3mmol）的THF溶液5.0ml，搅拌反应2.5小时，加入饱和氯化铵溶液5.0ml淬灭反应，加入乙酸乙酯25ml×2萃取，干燥，硅胶柱层析（洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯5/1），得外消旋体(1R,2S)-I_c 和(1S,2R)-I_c黄色粉末共1.43g（收率29.9%）。

上述该组分在含R-(-)-联萘酚磷酸酯1.4g（3.5mmol）的丙酮溶液中加热回流1小时，冷却析晶，过滤干燥得(1R,2S)-I_c的R-(-)-联萘酚磷酸酯盐480 mg（收率36.8%），白色固体。

取上述该固体加入至甲苯15ml与10% K₂CO₃溶液5ml的混合物中，加热解离，乙酸乙酯萃取，浓缩、干燥得到化合物(1R,2S)-I_c 230mg（收率32.1%）, 白色固体。

实施例4

(1R,2S)-1-(6-(环丙基乙炔基)-2-甲氧喹啉-3-基)-4-(二甲基氨基)-2-苯基-1-苯丁-2-醇（化合物I_d）的制备

在-75℃、N₂保护下，加入LDA 2.0M（10.6mmol），THF 3.0ml，在该温度下搅拌20分钟，缓慢滴加溶于3-苄基-6-(环丙基乙炔基)-2-甲氧喹啉2.87g（10.0mmol）的甲苯溶液15.0ml，搅拌反应2.5小时，缓慢滴加溶有的3-(二甲基氨基)-1-苯基丙-1-酮 (III_f) 2.0g（10.4mmol）的THF溶液5.0ml，搅拌反应2.5小时，加入饱和氯化铵溶液5.0ml淬灭反应，加入乙酸乙酯25ml×2萃取，干燥，硅胶柱层析（洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯5/1），收集外消旋体0.85g（收率35.6%）。

该组份在含S-(-)-联萘酚磷酸酯1.0g（2.03mmol）的丙酮溶液中加热回流1小时，冷却析晶，过滤干燥得(1R,2S)-I_d 的S-(-)-联萘酚磷酸酯盐250mg（收率14.3%）。

将上述该盐加入至甲苯15ml与10% K₂CO₃溶液5ml的混合物中，加热解离，乙酸乙酯萃取，浓缩、干燥得到化合物(1R,2S)-I_d 120mg（收率97.5%）, 白色固体。¹H NMR (400 MHz,CDCl₃) δ 8.95 (s, 1H), 7.85 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 7.75 – 7.69 (m, 1H), 7.56(dt, J = 8.8, 2.9 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.26 (t, J = 7.7 Hz,4H), 7.14 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 7.03 – 6.96 (m, 3H), 4.93 (s, 1H), 4.12 (s,3H), 2.28 (t, J = 12.0 Hz, 1H), 2.23 – 2.13 (m, 1H), 2.08 – 2.03 (m, 7H),1.83 – 1.75 (m, 1H), 0.94 – 0.86 (m, 4H). ¹³C NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 161.26(s), 146.91 (s), 144.29 (s), 140.57 (s), 138.38 (s), 131.87 (s), 130.99 (s),130.23 (s), 127.84 (s), 127.66 (s), 127.21 (s), 126.60 (s), 126.17 (s),125.98 (s), 125.64 (s), 125.36 (s), 119.13 (s), 93.18 (s), 81.89 (s), 75.94(s), 56.08 (s), 53.94 (s), 52.42 (s), 44.81 (s), 34.91 (s), 8.67 (s).

实施例5

外消旋体(1R,2S)-I_e和(1S,2R)-I_e的制备

在-75℃、N₂保护下，加入LDA 2.0M（10.6mmol），THF 3.0ml，在该温度下搅拌20分钟，缓慢滴加溶有3-苄基-6-(环丙基乙炔基)-2-甲氧基喹啉2.78g（10.0mmol）的甲苯溶液15.0ml，搅拌反应2.5小时，缓慢滴加溶有的1-(3-甲氧基苯-1-基)-3-(二甲胺)丙-1-酮(III_g) 2.07g（10.5mmol）的THF溶液5.0ml，搅拌反应2.5小时，加入饱和氯化铵溶液5.0ml淬灭反应，加入乙酸乙酯25ml×2萃取，干燥，硅胶柱层析（洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯5/1），收集外消旋体(1R,2S)-I_e和(1S,2R)-I_e 的外消旋体410mg（收率8.5%），淡黄色粉末。

实施例6

(1R,2S)-1-(6-溴-2-甲氧喹啉-3-基)-4-(二甲基胺基)-2-(4-环丙基苯基)-1-苯丁-2-醇（I_f）的制备

在反应瓶内加入Pd(PPh₃)₄ 30mg、(1R,2S)-V_a 207mg（0.328mmol），通N₂，加入THF3.0ml, 滴加环丙基溴化锌溶液，室温搅拌反应24小时，加入饱和氯化铵10ml，加水10ml，乙酸乙酯20ml×2萃取，无水硫酸钠干燥，短硅胶柱过滤，经中压制备液相：C18柱（5μm/30mm×250mm），流动相：水/乙腈-40/60，流速：15.0ml/min，波长：254nm。浓缩，得化合物I_f156mg（收率87.2%）, 淡黄色粉末。

实施例7

化合物I_g的制备

在反应瓶内加入Pd(PPh₃)₄ 30mg、(1R,2S)-V_b 200mg（0.328mmol），通N₂，加入THF3.0ml, 滴加环丙基溴化锌溶液，室温搅拌反应24小时，加入饱和氯化铵10ml，加水10ml，乙酸乙酯20ml×2萃取，无水硫酸钠干燥，短硅胶柱过滤，经中压制备液相：C18柱（5μm/30mm×250mm），流动相：水/乙腈-40/60，流速：15.0ml/min，波长：254nm。浓缩，得化合物I_g146mg（收率81.9%）, 淡黄色粉末。

¹H NMR (400MHz, CDCl₃)：δ 8.86 (s, 1H), 7.90 (d, J = 2.1Hz, 1H), 7.67(d, J = 8.9Hz, 1H), 7.61 (dd, J = 8.8, 2.2Hz, 1H), 7.21 (t, J = 1.7Hz, 1H),7.20-7.16 (m, 2H), 7.11 (t, J = 7.6Hz, 1H), 7.07 (s, 1H), 7.02-6.92 (m, 3H),6.85 (d, J = 7.4Hz, 1H), 4.87 (s, 1H), 4.09 (s, 3H), 2.29 (d, J = 11.7Hz,1H), 2.12 (d, J = 12.6Hz, 1H), 2.05 (s, 7H, ArCH), 1.87-1.75 (m, 2H), 0.88(ddd, J = 8.2, 4.7, 2.7Hz, 2H), 0.65-0.57 (m, 1H), 0.56-0.48 (m, 1H).

实施例8

化合物I_h的制备

在反应瓶内加入Pd(PPh₃)₄ 58mg、 CuI 20mg、化合物(1R,2S)-V_b 100mg （0.164mmol），通N₂，加入THF 5.0ml, 加入TEA 0.2ml、环丙基乙炔100mg（2.0mmol），室温搅拌反应24小时，加入饱和氯化铵10ml，加水10ml，乙酸乙酯20ml×2萃取，无水硫酸钠干燥，短硅胶柱过滤，经中压制备液相：C18柱（5μm/30mm×250mm）, 流动相：水/乙腈-40/60，流速：15.0ml/min，波长：254nm。得I_h 61mg（收率65.4%），淡黄色粉末。

¹H NMR (400MHz, CDCl₃) : δ 8.89 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.67 (dd, J =23.1, 8.6Hz, 2H), 7.48 (s, 1H), 7.37 (d, J = 7.1Hz, 1H), 7.27 (d, J = 12.0Hz,2H), 7.20 – 7.09 (m, 2H), 7.05-6.94 (m, 3H), 4.89 (s, 1H), 4.13 (s, 3H), 2.26(t, J = 12.5Hz, 1H), 2.14 (d, J = 13.9Hz, 1H), 2.05 (s, 7H, CH₂), 1.78 (d, J= 14.1Hz, 1H), 1.49 (s, 1H), 0.94-0.81 (m, 4H).

实施例9

化合物I_i的制备

在反应瓶内加入Pd(PPh₃)₄ 58mg、CuI 20mg、化合物(1R,2S)-V_c 600mg（1.0mmol），通N₂，加入THF 5.0ml,加入TEA 0.5ml、环丙基乙炔132mg （2.0mmol），室温搅拌反应24小时，加入饱和氯化铵10ml，加水10ml，乙酸乙酯20ml×2萃取，无水硫酸钠干燥，短硅胶柱过滤，经中压制备液相分离，得I_i283mg（收率51.9%），淡黄色粉末。液相方法: C18柱（5μm /30mm×250mm）,流动相：水/乙腈-40/60，流速：15.0ml/min，波长：254nm。¹H NMR (400MHz,CDCl₃): δ 8.70 (s, 1H), 8.53 (d, J = 8.6Hz, 1H), 7.85 (d, J = 7.2Hz, 1H),7.78 (d, J = 9.4Hz, 2H), 7.65 (d, J = 8.5Hz, 1H), 7.54 (dd, J = 12.9, 8.0Hz,2H), 7.47 (d, J = 8.5Hz, 1H), 7.40 (t, J = 7.3Hz, 1H), 7.22 (t, J = 7.7Hz,2H), 7.16 (s, 1H), 7.08 (d, J = 3.3Hz, 2H), 6.83-6.75 (m, 3H), 5.79 (s, 1H),4.10 (d, J = 31.2Hz, 3H), 2.82-2.57 (m, 1H), 2.34 (s, 1H), 2.10-1.97 (m, 7H,NCH₂), 1.80 (dd, J = 17.9, 11.7Hz, 1H), 1.40 (ddd, J = 13.1, 8.1, 5.2Hz, 1H),0.84-0.69 (m, 4H).

¹³C NMR：¹³C NMR (101MHz, CDCl₃) δ 176.57, 161.15, 144.33, 140.46, 140.39,140.33, 139.53, 134.54, 132.01, 131.10, 129.90, 129.70, 128.27, 127.42,127.23, 126.59, 126.39, 125.87, 125.53, 125.30, 125.10, 124.59, 124.43,119.32, 93.24, 80.48, 75.80, 54.95, 54.13, 49.92, 43.60, 33.96, 21.93, 8.65.

H RMS(ESI): m/z (%): 541.2865 (100)，542.2886 (49.5).

实施例10

化合物I_j和I_k的制备

在反应瓶内加入Pd(dba)₂ 35mg、tfp 20mg、化合物 (1R,2S)-V_b200mg（0.328mmol），通N₂，加入THF 2.0ml, 滴加cis-环丙基溴化锌 (cis-VII) 溶液, 室温搅拌反应24小时，加入饱和氯化铵10ml，加水10ml，乙酸乙酯20ml×2萃取，无水硫酸钠干燥，短硅胶柱过滤，经中压制备液相：大赛璐手性IC柱（5μm /20mm×250mm）, 流动相：正己烷/乙酸乙酯-95/5，流速：5.0ml/min，波长：254nm。浓缩，得组份1（RT = 23.9min）: 45mg（收率22.2%）、组份2 （RT= 26.1min）: 43mg（收率21.2%），淡黄色粉末。

实施例11

化合物I_l和I_m的制备

在反应瓶内加入Pd(dba)₂ 35mg、tfp 20mg、化合物 (1R,2S)-V_b200mg（0.328mmol），通N₂，加入THF 2.0ml, 滴加trans-环丙基溴化锌溶液（trans-VII），室温搅拌反应24小时，加入饱和氯化铵10ml，加水10ml，乙酸乙酯20ml×2萃取，无水硫酸钠干燥，短硅胶柱过滤，经中压制备液相: 大赛璐手性IC柱（5μm/20mm×250mm）, 流动相：正己烷/乙酸乙酯-95/5，流速：5.0ml/min，波长：254nm。浓缩，得组份1（RT = 20.6min）：54mg（收率26.6%）、组份2 （RT= 23.7min）：50mg（收率24.7%），淡黄色粉末。

组份1:¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.90 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 7.93 (d, J =2.2 Hz, 1H), 7.73 – 7.68 (m, 1H), 7.27 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 7.24 – 7.15 (m,3H), 7.15 – 7.09 (m, 1H), 7.05 – 6.97 (m, 3H), 6.89 (dd, J = 14.3, 7.5 Hz,1H), 4.85 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 4.24 – 4.16 (m, 2H), 4.13 – 4.09 (m, 3H), 2.48(ddd, J = 9.6, 6.9, 3.7 Hz, 1H), 2.37 – 2.24 (m, 1H), 2.15 (dd, J = 19.8, 7.5Hz, 1H), 2.07 (t, J = 3.8 Hz, 7H), 1.86 – 1.77 (m, 2H), 1.69 (d, J = 4.5 Hz,1H), 1.59 – 1.50 (m, 1H), 1.34 (dt, J = 6.3, 3.6 Hz, 3H).

组份2：¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.89 (s, 1H), 7.93 (d, J = 2.1 Hz, 1H),7.70 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.64 (dd, J = 8.9, 2.2 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 5.3Hz, 1H), 7.23 – 7.18 (m, 3H), 7.18 – 7.12 (m, 2H), 7.00 (ddd, J = 7.9, 6.4,4.6 Hz, 3H), 6.87 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.85 (s, 1H), 4.23 – 4.16 (m, 2H),4.12 (s, 3H), 2.52 – 2.45 (m, 1H), 2.31 (t, J = 11.6 Hz, 1H), 2.14 (dd, J =20.9, 9.0 Hz, 2H), 2.06 (d, J = 7.6 Hz, 8H), 1.86 – 1.77 (m, 2H), 1.57 – 1.50(m, 1H), 1.36 – 1.30 (m, 3H).

实施例12

化合物I_n和I_o的制备

在反应瓶内加入Pd(dba)₂ 35mg、tfp 20mg、化合物(1R,2S)-V_c 200mg（0.328mmol），通N₂，加入THF 2.0ml, 滴加cis-环丙基溴化锌（cis-VII）溶液。室温搅拌反应24小时，加入饱和氯化铵10ml，加水10ml，乙酸乙酯20ml×2萃取，无水硫酸钠干燥，短硅胶柱过滤，经中压制备液相：大赛璐手性IC柱（5μm /20mm×250mm），流动相：正己烷/乙酸乙酯-92/8，流速：5.0ml/min，波长：254nm，

组份1 (RT = 14.7min): 71mg（收率35.1%），淡黄色粉末；

组份2 (RT = 16.5min): 69mmg（收率34.1%），淡黄色粉末。

组份1:¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.89 (s, 1H), 8.67 (d, J = 8.8 Hz,1H), 7.96 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.90 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 8.6 Hz,1H), 7.73 (s, 1H), 7.68 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.64 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.55 –7.47 (m, 2H), 7.34 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.18 (dd, J = 6.4, 2.7 Hz, 2H), 6.93– 6.87 (m, 3H), 5.92 (s, 1H), 4.24 (s, 3H), 3.92 – 3.80 (m, 2H), 2.74 (dd, J= 16.8, 8.5 Hz, 1H), 2.57 (d, J = 14.3 Hz, 1H), 2.17 (ddd, J = 9.1, 7.8, 5.6Hz, 2H), 2.09 – 1.91 (m, 8H), 1.86 (dt, J = 7.4, 5.4 Hz, 1H), 1.43 (ddd, J =12.2, 6.9, 3.6 Hz, 1H), 1.37 – 1.24 (m, 3H).

组份2:¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.88 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 8.64 (d, J =8.7 Hz, 1H), 7.92 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.87 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.74 (d, J =8.5 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.65 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.61 (t, J = 7.5 Hz,1H), 7.53 – 7.45 (m, 2H), 7.31 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.19 – 7.11 (m, 2H), 6.88(dd, J = 6.7, 2.8 Hz, 3H), 5.90 (s, 1H), 4.20 (s, 3H), 3.90 – 3.75 (m, 2H),2.72 (dd, J = 16.9, 8.5 Hz, 1H), 2.52 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 2.20 – 2.09 (m,2H), 2.07 – 1.87 (m, 8H), 1.84 (dt, J = 7.4, 5.4 Hz, 1H), 1.45 – 1.37 (m,1H), 1.34 – 1.19 (m, 3H).

实施例13

化合物I_p和I_q的制备

在反应瓶内加入Pd(dba)₂Cl₂ 35mg、tfp 20mg、化合物V_c 200mg（0.328mmol），通N₂，加入THF 2.0ml, 滴加trans-环丙基溴化锌溶液（trans-VII）），室温搅拌反应24小时，加入饱和氯化铵10ml，加水10ml，乙酸乙酯20ml×2萃取，无水硫酸钠干燥，短硅胶柱过滤，经中压制备液相：大赛璐手性IC柱（5μm /20mm×250mm）, 流动相：正己烷/乙酸乙酯-95/5，流速：5.0ml/min，波长：254nm。得组份1（RT = 22.6min）: 75mg（37.1%）、组份2（RT = 25.5min）:67mg（33.1%），淡黄色粉末。¹H NMR (400MHz, CDCl₃) : δ 8.92 (s, 1H), 8.68 (d, J =8.8Hz, 1H), 7.98 (d, J = 7.2Hz, 1H) , 7.91 (d, J = 7.9Hz, 1H), 7.81 (d, J =8.6Hz, 1H), 7.69 (d, J = 8.0Hz, 1H), 7.65 (t, J = 7.6Hz, 1H), 7.60 (d, J =1.8Hz, 1H), 7.52 (t, J = 7.4Hz, 1H), 7.39-7.30 (m, 2H), 7.21 (dd, J = 6.4,2.8Hz, 2H), 6.96 – 6.90 (m, 3H), 5.95 (s, 1H), 4.33-4.15 (m, 5H), 2.73 (ddd,J = 9.3, 6.5, 4.2Hz, 1H), 2.58 (d, J = 14.4Hz, 1H), 2.21-2.11 (m, 1H), 2.10-1.91 (m, 9H), 1.75-1.67 (m, 1H), 1.47 (ddd, J = 8.5, 6.5, 4.7Hz, 1H), 1.38-1.29 (m, 3H).

实施例14

化合物I_r的制备

在反应瓶内加入Pd(PPh₃)₄ 91.2mg、CuI 31mg、V_b 1.0g（1.58mmol），通N₂，加入无水THF6.0ml, 加入TEA 0.5ml、丙炔醇177mg（3.16mmol），室温搅拌反应24小时，加入饱和氯化铵10ml，加水10ml，乙酸乙酯20ml×2萃取，无水硫酸钠干燥， 硅胶柱层析（洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯1/1）, 浓缩得化合物I_r 751mg（收率84.4%），淡黄色粉末。

实施例15

化合物I_s的制备

在长颈瓶内加入I_r 380mg（0.681mmol），通N₂，置于-40℃，滴加70%红铝甲苯溶液0.5ml（1.50mmol），在该温度下反应3小时，室温至-5℃反应2小时，加入饱和氯化铵1.0ml淬灭反应，加水5.0ml，乙酸乙酯15ml×2萃取，无水硫酸钠干燥，硅胶柱层析（洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯/乙醇1/1/0.02），浓缩得化合物I_s 232mg（收率61.1%），淡黄色粉末。

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.87 (s, 1H), 7.94 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.70(d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.64 (dd, J = 8.9, 2.2 Hz, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.35 (dd,J = 8.5, 1.8 Hz, 1H), 7.28 – 7.25 (m, 2H), 7.23 – 7.17 (m, 2H), 7.05 – 6.93(m, 3H), 6.61 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 6.34 (dt, J = 15.9, 5.7 Hz, 1H), 4.94 (s,1H), 4.34 (dd, J = 5.8, 1.4 Hz, 2H), 4.13 (d, J = 3.5 Hz, 3H), 2.34 (td, J =12.3, 2.8 Hz, 1H), 2.17 – 2.09 (m, 1H), 2.09 – 2.01 (m, 8H), 1.83 (dt, J =14.2, 2.9 Hz, 1H).

实施例16

化合物Ⅰ_t的制备

在反应瓶内加入Pd(PPh₃)₄ 519mg、CuI 176mg、(1R,2S)-V_c 9.0g（15.0mmol），通N₂，加入THF 40.0ml, 加入TEA 20.0ml、丙炔醇4.2g （75.0mmol），室温搅拌反应24小时，加入饱和氯化铵10ml，加水10ml，乙酸乙酯20ml×2萃取，无水硫酸钠干燥，硅胶柱层析（洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯1/1）, 收集产品，浓缩得化合物I_t6.15g（收率77.3%）。淡黄色粉末。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.96 (s, 1H), 8.61 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.93(d, J = 1.4 Hz, 1H), 7.88 (dd, J = 12.8, 7.7 Hz, 2H), 7.78 (d, J = 8.6 Hz,1H), 7.70 – 7.64 (m, 2H), 7.63 – 7.57 (m, 2H), 7.55 – 7.42 (m, 2H), 7.30 (t,J = 7.7 Hz, 1H), 7.12 (dd, J = 5.8, 3.1 Hz, 2H), 7.12 (dd, J = 5.8, 3.1 Hz,2H), 6.91 – 6.83 (m, 3H), 5.89 (s, 1H), 4.54 (s, 2H), 4.21 (s, 3H), 2.52 (d,J = 14.5 Hz, 1H), 2.14 (dd, J = 20.2, 7.5 Hz, 1H), 2.03 (d, J = 12.7 Hz, 1H),1.97 (s, 6H), 1.92 (d, J = 12.7 Hz, 1H).

实施例17

化合物I_x的制备

在长颈瓶内加入I_t1.0g（1.89mmol），通N₂，置于-40℃，滴加70%红铝甲苯溶液1.5ml（4.5mmol），在该温度下反应3小时，室温至-5℃反应2小时，加入饱和氯化铵10ml淬灭反应，加水5.0ml，乙酸乙酯25ml×2萃取，无水硫酸钠干燥，硅胶柱层析（洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯/乙醇1/1/0.02）, 收集产品，浓缩得化合物I_t 609mg（收率61.0%）。淡黄色粉末。

实施例18

化合物I_y和I_z的制备

在反应瓶内加入盐酸二甲胺113mg（1.36mmol），通N₂，加热，加入THF 10ml，滴加异丙基格式试剂 2M/L（2.7mmol），室温搅拌3小时，滴加环丙基酯的THF溶液（0.34mmol），冰水浴反应21小时，加入饱和氯化铵5.0ml淬灭反应，乙酸乙酯15ml×3萃取，无水硫酸钠干燥，短硅胶柱过滤，经中压制备液相：大赛璐手性IC柱（5μm /20mm×250mm），流动相：正己烷/乙酸乙酯-90/10，流速：5.0ml/min，波长：254nm。得组分1: 16mg（收率8.0%）、组分2: 14mg（收率7.0%），淡黄色粉末。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

依据上述方法制得了下列化合物：

表1

药理实施例

测试化合物抗耻垢分枝杆菌的体外活性测试方法

向平板无菌96孔塑料微量滴定板中添加180 ul补充有0.25%BSA的无菌去离子水，然后，以100 ul的体积将化合物的储备液加到第二列的一系列孔中，以评估化合物对细菌生长的影响。在微量滴定板中，从第2列到第12列直接进行系列5倍稀释。每三次稀释之后更换吸移管尖端以减小吸移化合物的误差，在每个微量滴定板中均包含有具有和不具有接种物的对照样本。将约250 CFU/孔的细菌接种物以100 ul的体积加入到除第12列的A至H孔中，将相同体积的不具有接种物的肉汤培养基加到第12列的A至H孔中，将培养物在湿润的气氛下于37℃培养36小时，测A600（或肉眼判断清澈不浑浊的最低样品浓度为MIC）。

结果统计：

统计抑制率大于90%者为MIC值范围

化合物抗耻垢分枝杆菌测试结果:

测试化合物抗结核分枝杆菌的体外活性测试方法

测试仪器：美国BD BACATE MGIT 960

测试原理：仪器容量为960孔，平均分布于三个相对独立的培养箱，每个培养箱可垂直放置320个荧光显示剂的MGIT培养管，每个培养管位置有一个探测器。通过连续检测接种标本的培养管所显示的荧光强度变化来判断是否有分枝杆菌生长。若有分枝杆菌生长，管中营养成分和氧气将不断地被消耗，管底部的荧光显示剂随管内氧气浓度的变化发生反应，荧光指示剂将在特定光源的激动下释放荧光。荧光强度记忆探测器将每隔60分钟自动、连续测定培养管内的荧光强度从而判断管内分枝杆菌生长情况。仪器药物敏感试验的方法为比例法，耐药性建立在对多数药品耐药的1%水平上。

测试菌株：M37RV（由中国疾病预防控制中心提供），保存于-20℃。

实验方法：培养管分别标记GC（空白对照管）、1、2、3、4，每管中分别加入0.8ml营养添加剂和抑菌剂。除GC管，其余每管分别加入0.1ml对应的已稀释4个梯度的新衍生物。菌株在仪器报阳性1-2天，菌液混匀后分别加0.5ml于四个已加衍生物的培养管内，做对照管的菌液需作1:100稀释后取0.5ml加入对照培养管内；菌株在仪器报阳性3-5天，菌液混匀后先作1：5（1ml阳性菌液+4ml生理盐水）然后分别加0.5ml于四个已加衍生物的培养管内，作对照管的菌液需作1:100稀释后取0.5ml加入对照培养管内。放入BACTEC 960 全自动分枝杆菌培养仪孵育检测。

结果判读：当对照管的GU达到400（需要4-13天）时，系统也会对MGIT培养管进行检测。S＝敏感：药物管中的GU值低于100；R＝耐药：药物管中的GU值大于、等于100。化合物抗结核分枝杆菌测试结果: