阅读说明：本技术 一种山羊羔羊超数***方法 (Superovulation method for goat lambs ) 是由 吴海青 李玉荣 马跃军 于 2019-11-18 设计创作，主要内容包括：一种山羊羔羊超数排卵方法,包括：对选取的4周龄-8周龄的雌性羔羊注射总量为80IU～120IU FSH,且均分四次注射入选取的雌性羔羊体内,其中,任意相邻两次注射间隔12小时；在注射完设定总量的FSH后,间隔12小时后取卵；采用上述方法每只雌性羔羊可提供100枚以上的卵母细胞；获得的大量卵母细胞可制备大量的体外胚胎,结合胚胎移植缩短山羊育种周期,也可用于山羊卵母细胞体外培养、体外受精和胚胎体外发育等机理研究。(A method for superovulation of goat lambs, comprising: injecting 80IU-120IU FSH into the selected female lambs of 4-8 weeks old in total amount, and injecting the FSH into the selected female lambs four times in a uniform way, wherein the interval between any two adjacent injections is 12 hours; after injecting FSH with the set total amount, taking eggs after 12 hours; by adopting the method, more than 100 oocytes can be provided for each female lamb; the obtained large amount of oocytes can be used for preparing a large amount of in-vitro embryos, shortening the breeding period of goats by combining embryo transfer, and can also be used for mechanism researches such as in-vitro culture, in-vitro fertilization and embryo in-vitro development of the goat oocytes.)

一种山羊羔羊超数***方法

技术领域：

本发明涉及畜牧业繁殖技术领域，特别是涉及一种山羊羔羊超数***方法。

背景技术：

山羊繁殖率低是制约绒山羊产业发展的重要因素之一，给山羊育种带来巨大困难。由于山羊为单胎动物，每次***1枚，使用年限为5～7年，平均每只母羊终生产羔4～6只，繁殖相对较慢；山羊育成羊和成年羊超数***技术所得胚胎数量有限，平均8枚有效胚胎，导致优秀母羊得不到充分利用，从而降低了养殖效益，制约了育种进程；此外，由于山羊***获取不像小鼠、大鼠、兔、猪等动物易获得，导致山羊胚胎发育机理研究缓慢。

羔羊超排的原理是根据幼龄母羊(1～2月龄)卵巢对生殖激素特别敏感，卵泡很少有闭锁的特殊生理特点，利用外源***强化卵巢的生理机能，激发大量卵泡在一个发情期中成熟***。自然情况下，胎儿卵巢上的有腔卵泡大约在母羊妊娠期135天时开始出现，出生时数量明显增加，之后继续增加至出生后1月龄～2月周龄达到高峰，以后随着***的来临开始减少。出生后1～2月龄羔羊卵巢上的卵泡发育数量不但不受出生季节和体重影响，而且没有成年羊卵巢上卵泡优势化的现象，因此，对这种羔羊进行超数***是一项高效生产***的新途径。

大量学者研究绵羊羔羊超数***取得较为理想的效果，Kelly等对9周龄的美利奴羔羊采用了类似的超排方法，结果最好的处理组平均每只羔羊得到162.3±23.2枚***。Ledda等(1999)对30日龄～40日龄的羔羊进行激素处理：给羔羊埋栓6天，撤栓前36h一次性分别注射120IU GnRH和400IUPMSG。撤栓24h后采卵，每只羔羊平均得到86.2±7.9枚***。Ptak等给1月龄的羔羊放置孕酮栓8d第5、6、7天每天早晚两次注射2.7mg FSH，第8天撤栓采卵得到约29枚***。但相关山羊羔羊超排研究较少。

山羊羔羊超数***可以充分利用母羊卵巢上的***，最大限度的利用优质母畜的卵子资源；同时，解决了山羊胚胎移植所需胚胎来源匮乏及成本昂贵的问题，很大程度上促进了山羊胚胎生产的商业化应用；羔羊超排结合体外受精技术，使每一代育种时间缩短2年～3年，如以3代为一个育种周期，则最少缩短6年～9年时间，加速了山羊遗传改良进程；另外，利用山羊羔羊超数***技术还可探索山羊卵子发生及卵泡发育的调控机理，并为山羊克隆、转基因技术、胚胎干细胞和卵子库的建立等其他生物前沿技术。

发明内容

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鉴于此，本发明提供一种山羊羔羊超数***方法，以解决上述现有技术存在的问题，为缩短育种时间和丰富山羊卵子资源提供技术支持。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：本发明提供一种山羊羔羊超数***方法，包括以下几个步骤：

选取4周龄～8周龄雌性羔羊；

对所述选取的雌性羔羊每间隔12小时注射20IU～30IU FSH，且连续注射4次；

第四次注射所述FSH后间隔12小时后取卵。

优选的，所述选取的雌性羔羊的年龄为6周龄，且无先天卵巢疾病。

优选的，所述FSH的注射总量为80IU-120IU。

优选的，所述FSH的注射量根据所述选取磁性羔羊体重递减或递增。

本发明采用上述方法每只雌性羔羊可提供100枚以上的***；获得的大量***可制备大量的体外胚胎，结合胚胎移植缩短山羊育种周期，也可用于山羊***体外培养、体外受精和胚胎体外发育等机理研究。

附图说明：

附图1是本发明提供的山羊羔羊超数***FSH处理方法的示意图表。

附图2是本发明提供的山羊羔羊超数***效果图。

附图3是本发明提供的***获取方法示意图。

具体实施方式

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下面将结合本发明内容，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明的目的是提供一种山羊羔羊超数***方法，以解决山羊育种周期长和山羊卵子资源匮乏的问题。

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图以及具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。

一并参阅图1-图3，本发明提供一种山羊羔羊超数***方法，包括以下步骤：

1、超数***山羊羔羊选择

选取体格健壮、无疾病、无先天卵巢功能障碍的4周龄到8周龄的雌性羔羊，最佳6周龄左右；若要做育种用其遗传档案必须齐全。

2、FSH处理方法

选择好的羔羊注射FSH前，尽量用高倍生理盐水稀释，确保FSH用量精确。

对所述选取的雌性羔羊注射总量在80IU-120IU FSH，且将总量的FSH均分四次注射入选取的雌性羔羊体内，其中，任意相邻两次注射间隔12h；

附图1为本发明山羊羔羊超数***FSH处理方法的示意图表，每只羔羊注射FSH的总量为80IU～120IU，连续注射4次，每次注射20IU～30IU，每次间隔12h，股部肌肉注射，缓慢推入。

3、***采集

距第一次注射FSH后48h后，由于羔羊超排后卵巢内存在大量卵泡，卵巢体积会大幅增加，优选利用中线剖腹手术进行***活体采卵；

继续参阅图2-3，先将选取的雌性羔羊全麻处理，麻药剂量按说明书中建议剂量。采卵过程严格无菌操作。利用带18#针头的10ml一次性无菌注射器吸取***，直至***吸尽为止。将含有***、***和***保存液过100μm无菌滤网，用***保存液洗涤3-5遍，显微镜下捡出***供后续工作使用。

经统计，用该方法处理的山羊羔羊100只，两侧卵巢内平均卵泡数量为103±8.3，P＜0.01。由于***采集数量与操作人员的吸卵等操作步骤的熟练度相关，随着吸卵人员的熟练度提升获取的***数量也会提升。

本发明中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本发明的思想，在具体实施方式及应用范围上均会有改变之处。综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。