阅读说明：本技术 水果的幼果粗萃取方法 (Method for coarse extraction of young fruits of fruits ) 是由 陈永童 于 2018-08-07 设计创作，主要内容包括：本发明提供一种水果的幼果粗萃取方法,所述方法藉水果的幼果如：莲雾幼果或者是芒果幼果经打碎后加入特定的水解剂,以一定比例混合水解萃取粗萃液,藉所述粗萃液能够应用于医学、医药、农、渔、畜牧等领域,提供抑制活化的酪胺酸酶活性,达到增强免疫力及防止黑色素过量生成的最佳效果。(The invention provides a method for roughly extracting young fruits of fruits, which comprises the following steps: the young fruits of wax apple or mango are smashed and added with a specific hydrolytic agent, and the mixture is mixed with a certain proportion to hydrolyze and extract a crude extract, so that the crude extract can be applied to the fields of medicine, agriculture, fishery, livestock husbandry and the like, and can provide the best effects of inhibiting the activity of activated tyrosinase, enhancing the immunity and preventing the excessive generation of melanin.)

水果的幼果粗萃取方法

技术领域

本发明涉及水果萃取物，特别是指一种水果的幼果粗萃取的方法。

背景技术

近几年来，营养学家和一般大众都注意到食物不只是能量和营养元素的来源，在这些食物中所含的一些微量元素被认为具有促进人体健康的特性，这些元素可以预防或减缓慢性疾病的发生，例如循环系统的疾病或某些癌症的发生。最令大家注意的是水果和蔬菜所含的植物化合物(phytochemical)在预防因氧化逆境(oxidative stress)引起的疾病上所扮演的角色与功能。许多流行病学的研究也都指出，增加膳食中蔬菜与水果的摄取量可以有效的降低心血管疾病、癌症、慢性疾病和其它老化疾病的发生。

生物体中种种的内在因素(如遗传、压力、疾病等)以及环境中存在的外在因素(如紫外线照射、药物、不当使用化妆品等)皆有可能会活化酪胺酸酶，进而造成皮肤细胞内黑色素(Melanin)的产生，当黑色素产生的量过多就会沉淀，最后造成肤色转变成深褐色或黑色。虽然黑色素的生成对于肌肤而言是一种保护机制，但若长期暴露在上述恶劣的环境中，则可能造成过度的黑色素沉淀(Hyperpigmentation)甚至是黑色素瘤(Melanoma)的发生。由此可知，若要减少黑色素生成，须从抑制酪胺酸酶活性方面着手。本申请发明人在经过不断地苦思与反复试验后，终于有本发明的产生。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种水果的幼果粗萃取方法，通过水果的幼果如：莲雾幼果、芒果幼果通过特定的水解剂以一定比例混合水解萃取，能够应用于医学、医药、农、渔、畜牧等领域，藉以抑制活化的酪胺酸酶活性，达到增强免疫力及防止黑色素过量生成的效果。

为了实现以上目的，本发明提供一种水果的幼果粗萃取方法，包含：将水果幼果打碎并加入水解剂以恒温震荡器震荡进行水解，得到水果幼果粗萃液；其中，所述水果幼果系选自莲雾或芒果的其中之一。

较佳地，所述水解剂可选自菠萝酵素、枯草杆菌蛋白酶及酒精的任一者。

较佳地，所述水解剂与打碎的所述水果幼果的重量比例为1:1000。

较佳地，所述水果幼果打碎前须以清水洗净，并通过果汁机将所述水果幼果打碎。

较佳地，所述恒温震荡器震荡的时间为5小时。

根据实施例，可以获得一项或多项益处。

有关本发明的其它功效及实施例的详细内容，配合图式说明如下。

附图说明

为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。

图1是本发明水果的幼果粗萃取方法的流程图；

图2是本发明自由基清除试验中莲雾样品的自由基清除率对浓度作图；

图3是本发明自由基清除试验中爱文芒果样品的自由基清除率对浓度作图；

图4是本发明自由基清除试验中维生素C的自由基清除率对浓度作图；

图5是本发明总多醣体含量测试实验中葡萄糖浓度对吸收度作图。

具体实施方式

在下文的实施方式中所述的位置关系，包括：上，下，左和右，若无特别指明，皆是以图式中组件绘示的方向为基准。

为水果的幼果粗萃取方法，包含有以下步骤：a.取水果幼果以清水洗净并通过果汁机将其打碎；b.加入水解剂并以恒温震荡器震荡进行水解，得到水果幼果粗萃液。所述水果幼果粗萃液可抑制活化的酪胺酸酶活性，达到增强免疫力及防止黑色素过量生成的效果，其能够应用于医学、医药、农、渔、畜牧等领域。

本发明的一较佳实施例，所述水果幼果选自莲雾(学名:Syzygium samarangense)或芒果(拉丁学名:Mangifera indica L.)的其中之一，所述水解剂与打碎的水果幼果的重量比例为1:1000。所述水解剂可选自菠萝酵素(Bromelain)、枯草杆菌蛋白酶(Subtilisin)及酒精(Ethanol)的任一者。水解时，所述恒温震荡器震荡时间以5小时为佳。

抗氧化能力的评估

须说明的是，由于食物中的脂质在自行氧化的过程中会产生自由基而造成脂质的酸败，常见的抗氧化物通过提供氢(hydrogen donor)来清除脂质过氧化物自由基(peroxylradical)，因此本试验中使用DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)自由基来评估抗氧化物的供氢能力。DPPH自由基的甲醇(methanol)溶液在517nm下有较强的吸收值，而被抗氧化物提供氢还原时其吸光值会降低，利用此特性便可推测出吸光值越低代表所述抗氧化物清除自由基能力越强。水果幼果抗氧化能力的评估方法步骤包含如下：

(1)自由基清除试验样品前处理：

将前述通过水果的幼果粗萃取方法所取得的水果幼果粗萃液进行果肉分离，取得水果幼果澄清液，并将所述水果幼果澄清液于-30℃环境进行冷冻干燥4-10小时后，得到水果幼果粉末样品。

秤取冷冻干燥后的莲雾粗萃的粉末样品及爱文芒果粗萃的粉末样品，纪录质量。粗萃取前的莲雾及爱文芒果的幼果分别秤得为102.64g及812.80g；冷冻干燥后的莲雾及爱文芒果粗萃的粉末样品分别秤得为3.63％及33.82％。依据下方等式1计算莲雾及爱文芒果的萃取率，分别为3.54％及4.16％(如表1)。

萃取率＝W₂/W₁*100 (等式1)

其中，W₁为萃取前样品重；W₂为冷冻干燥后样品重。

	样品重	冷冻干燥后(g)	萃取率(％)
				莲雾	102.64	3.63	3.54％
爱文芒果	812.80	33.82	4.16％

表1.粗萃取样品萃取率

将粗萃取样品以适量二次水回溶，溶解后加入与二次水量相当的乙醇。加入乙醇后，会有醣类析出，将溶液混合均匀。将溶液以离心机离心分离(8000rpm，10分钟)，取上层液旋转浓缩，以除去大部分乙醇。将除去乙醇的样品，冷冻干燥。将干燥后的样品秤重并纪录。依据等式1，计算其萃取率。

	样品重	冷冻干燥后(g)	萃取率(％)
				莲雾	3.69	2.81	76.15％
爱文芒果	9.38	7.71	82.20％

表2.水果幼果粗萃的粉末样品除去醣类后的重量及萃取率

(2)DPPH自由基清除试验：

1.秤取约0.20g粗萃取上述冷冻干燥样品。精确纪录质量，以二次水溶解，倒入500.00mL定量瓶，再加入二次水稀释至500.00mL。

2.配置50mL 0.1mM DPPH甲醇溶液。

3.检量线：分别配置30μg/mL、40μg/mL、50μg/mL、60μg/mL、70μg/mL及80μg/mL浓度的维生素C(Vitamin C)水溶液，不同浓度各取1mL与1mL DPPH甲醇溶液(共2mL)混合，静置一个半小时(隔绝光线)，使其反应。

4.取样品以二次水配置成五个不同的浓度后，各取1mL样品与1mL DPPH甲醇溶液(共2mL)混合，静置一个半小时(隔绝光线)。

5.以分光亮度计测各溶液在517nm的吸收值(以甲醇与二次水等比例混合的溶液作为空白试剂，还要无萃取物的DPPH甲醇溶液在波长517nm下的吸收值Ab)。DPPH自由基清除率(scavenging effect,％)的等式为

DPPH自由基清除＝(1-A/Ab)*100％ (等式2)

其中，A为萃取物与DPPH反应后在波长517nm的吸收值；Ab为DPPH甲醇溶液在波长517nm的吸收值(测试结果陈列于下方表3至表5)。

请参阅图2所示为自由基清除试验中莲雾样品的自由基清除率对浓度作图(配合表3)。可通过图中线性方程式计算莲雾样品的IC₅₀(除去50％DPPH自由基时的所述样品浓度)。即，50＝1.3577x+0.721，则x＝36.30μg/mL。所述莲雾样品的IC₅₀为36.30μg/mL。

浓度(μg/mL)	吸收值	清除率(％)
			18.23	0.4736	25.45
24.31	0.4224	33.51
			30.38	0.3657	42.44
36.46	0.3176	50.00
			42.53	0.2640	58.44

表3.莲雾样品自由基清除试验清除率

请参阅图3所示为自由基清除试验中爱文芒果样品的自由基清除率对浓度作图(配合表4)。同样地，可通过图中线性方程式计算爱文芒果样品的IC₅₀。即，50＝0.0405x+27.981，则x＝543.68μg/mL。所述爱文芒果样品的IC₅₀为543.68μg/mL。

浓度(μg/mL)	吸收值	清除率(％)
			132.29	0.4736	32.96
264.58	0.4224	39.40
			396.88	0.3657	44.07
529.17	0.3176	48.84
			661.46	0.2640	55.04

表4.爱文芒果样品自由基清除试验清除率

对照于前述莲雾样品与爱文芒果样品，请参阅图4，为维生素C的自由基清除率对浓度作图(配合表5)。可通过图中线性方程式计算维生素C的IC₅₀(除去50％DPPH自由基时的维生素C浓度)。即，50＝8.6443x+0.4757，则x＝5.73μg/mL。所述维生素C的IC₅₀为5.73μg/mL。

表5.维生素C自由基清除试验清除率

实验结果：

经比对得知，在DPPH自由基清除试验中，IC₅₀(除去50％DPPH自由基时的样品浓度)的大小为：维生素C<莲雾样品<芒果样品，虽芒果样品的抗氧化能力比起维生素C的抗氧化能力较弱(相差近100倍)，但莲雾样品的抗氧化能力与维生素C的抗氧化能力差距甚小(相差仅约7倍)，因此，除了前述能够增强免疫力及防止黑色素过量生成外，本发明水果的幼果粗萃取方法所提供水果中莲雾的幼果所提供人体需要的抗氧化能力效果最佳。

水果幼果总醣含量的测试

水果幼果总醣含量的测试方法步骤包含如下：

(1)水果幼果的多醣体萃取：

将前述通过水果的幼果粗萃取方法所取得的水果幼果粗萃液进行果肉分离，取得水果幼果澄清液，并将所述水果幼果澄清液于-30℃环境进行冷冻干燥4-10小时后，得到水果幼果粉末样品。

秤取1g冷冻干燥后的莲雾粗萃的粉末样品及爱文芒果粗萃的粉末样品，以10％三氯乙酸(10％TCA)水溶液溶解并置于4℃的冰箱1小时，再以离心机离心分离蛋白质，取上层清液透析(Spectra/por Membrane MWCO:3,500)。接着将透析后液体冷冻干燥后得到多醣体，将得到的多醣体秤重并纪录于表6。

	样品重	多醣体重(g)	萃取率(％)
				莲雾	3.69	2.81	76.15％
爱文芒果	9.38	7.71	82.20％

表6.多醣体萃取率

(2)总多醣体含量测试：

1.配置5％苯酚水溶液20mL。

2.检量线：配置葡萄糖标准溶液，浓度约0.0015g/mL，再分别取1、0.8、0.6、0.4、0.2mL分别稀释成总量1mL的溶液，此为浓度介于0.0003-0.0015g/mL的标准检量线。待测试样溶液为取适量试样粉末溶于去离子水中，浓度低于0.0015g/mL。

3.取1mL 5％苯酚水溶液于后壁试管中，分别加入1mL葡萄糖标准液(0.0003-0.0015g/mL)或样品液，混合均匀后，再快速冲入5mL浓硫酸，并使用试管震荡器混合均匀，静置冷却至室温。

4.约等候30分钟，以酚光亮度计于490nm波长测其吸光值(如表7)，经由标准曲线回归(图5参照)，计算出总醣含量(如表8)。

葡萄糖浓度(g/mL)	吸收值
		0.0003	0.4069
0.0006	0.7278
		0.0009	1.0566
0.0012	1.3406
		0.0015	1.6303

表7.葡萄糖溶液检量线的吸收值

表8.样品总多醣含量

实验结果：

由上可知，通过苯酚硫酸法(Phenol-sulfuric acid assay)的测定，样品的总醣含量的大小为莲雾样品>爱文芒果样品>维生素C。因此，本发明水果的幼果粗萃取方法所提供水果中莲雾的幼果的含醣量最为充分。

以上所述的实施例及/或实施方式，仅是用以说明实现本发明技术的较佳实施例及/或实施方式，并非对本发明技术的实施方式作任何形式上的限制，任何本领域技术人员，在不脱离本发明内容所公开的技术手段的范围，当可作些许的更动或修饰为其它等效的实施例，但仍应视为与本发明实质相同的技术或实施例。