阅读说明：本技术 基于痰瘀互结证的双心疾病动物模型构建方法、饲料组合物 (Method for constructing animal model of bixin disease based on phlegm-blood stasis syndrome and feed composition ) 是由 杨力强 李晓红 孔鹏云 肖华业 龙春莉 高琳 于 2021-07-10 设计创作，主要内容包括：本发明属于医学技术领域,公开了一种基于痰瘀互结证的双心疾病动物模型构建方法、时间及饲料配方。大鼠高脂饲料配方：2％胆固醇,5％猪油,0.2％胆酸钠,蔗糖20％、基础饲料72.8％；大鼠高脂饲料喂养8周；造模第一天开始大鼠每天接受各种未预知的应激,包括禁食24h、禁水24h、冰水游泳、束缚3h、鼠笼摇晃、昼夜颠倒、热烘、潮湿垫料过夜、45℃鼠笼倾斜过夜等9种刺激,同种刺激不连续出现,使动物不能预料刺激的发生；造模第6周开始每日腹部皮下注射盐酸异丙肾上腺素3mg/kg,连续3周。本发明操作性强,动物死亡率低,易于评估的的病证结合、痰瘀互结证的双心疾病动物模型,而且成本低。(The invention belongs to the technical field of medicine, and discloses a method, time and a feed formula for constructing an animal model of a double-heart disease based on phlegm-blood stasis syndrome. Rat high-fat feed formula: 2% of cholesterol, 5% of lard oil, 0.2% of sodium cholate, 20% of cane sugar and 72.8% of basal feed; feeding rats with high-fat feed for 8 weeks; the rats receive various unpredicted stresses every day from the first day of molding, the stresses comprise 9 kinds of stimuli such as fasting for 24 hours, water prohibition for 24 hours, ice water swimming, binding for 3 hours, squirrel cage shaking, day and night reversing, hot baking, overnight moist padding, overnight inclination of the squirrel cage at 45 ℃ and the like, and the same kind of stimuli are not continuous to appear, so that the animals cannot expect the occurrence of the stimuli; on week 6 of molding, 3mg/kg of isoproterenol hydrochloride was injected subcutaneously into the abdomen daily period for 3 consecutive weeks. The invention has strong operability, low animal mortality, easy evaluation of the double heart disease animal model of disease combination and phlegm-blood stasis syndrome and low cost.)

基于痰瘀互结证的双心疾病动物模型构建方法、饲料组合物

技术领域

本发明属于医学技术领域，尤其涉及一种基于痰瘀互结证的双心疾病动物模型构建方法、饲料组合物。

背景技术

冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)简称冠心病。冠心病是当前世界上致死率最高的疾病之一，是目前世界卫生组织(WHO)公认的首位死亡原因^[1]。抑郁症是一种以持续情绪低落为主要症状的精神情志障碍性疾病，具有患病率高、复发率高、自杀率高的特点^[2]。据WHO报告显示，目前全球抑郁症患者已达3.22亿，2005年至2015年间患者数量增加了18.4％^[3]，到2020年，抑郁症将成为发达国家中仅次于心脏病的第二大疾病^[4]。临床实践及研究发现，冠心病与抑郁症两者之间存在某种内在联系，两者互相促进。2014年一项关于国内冠心病合并抑郁症患病率的荟萃分析，纳入27项研究，其中包括23项研究入选5236例住院患者和4项研究入选1353例社区患者，结果显示冠心病合并抑郁症患病率为医院占51％，社区占34.6％～45.8％，其中重度抑郁症占3.1％～11.2％^[5]。国外文献也表明冠心病住院患者合并抑郁症发病率占17％～27％^[6]，或31％～45％，其中重度抑郁症占15％～20％^[7]。研究也证实，抑郁症也是冠心病的独立危险因素，可使冠心病患者预后恶化^[8]，冠心病发病前后抑郁发作或反复性抑郁发作都与心脏病事件发生率密切相关^[9]。冠心病与抑郁症合并发生，形成了新的疾病特点。国内有学者提出“双心疾病”的概念，即心血管与心理精神共病。由于临床上冠心病合并抑郁症具有较高的发生率，因而对冠心病合并抑郁症的临床特点、治疗及其内在机理研究逐渐兴起。冠心病合并抑郁症的共同发病机制，目前尚不十分明确。

为了探索冠心病“双心”异常的共同发病机制及评价药物疗效，动物模型相继应运而生。目前冠心病合并抑郁症动物模型主要采用传统制作冠心病和抑郁症动物模型两者相结合。目前冠心病合并抑郁症大鼠模型的制作通常采用注射异丙肾上腺素或结扎大鼠左冠状动脉前降支造成心肌缺血模型，模拟临床上缺血性冠心病的表现形式，再结合慢性应激制作抑郁模型，模拟临床上抑郁患者的发病特点。但病证结合的冠心病合并抑郁症动物模型没有报道。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：

(1)冠心病动物模型如果通过注射异丙肾上腺素造成心肌缺血，异丙肾上腺素剂量非常关键，过大则容易造成大鼠死亡；

(2)如果是通过结扎大鼠左冠状动脉前降支造成心肌缺血，同样大鼠死亡率很高；

(3)由于当前普遍存在人们过食肥甘厚味，缺乏运动，冠心病病人多兼有高血脂症，目前没有文献报道有高血脂状态心肌缺血大鼠模型。

(4)目前没有报道病证结合的冠心病合并抑郁症复合动物模型。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种基于高脂状态痰瘀互结证的双心疾病动物模型构建方法、饲料组合物。具体涉及一种基于高脂状态“痰瘀互结、肝郁脾虚”的冠心病合并抑郁症的病证结合复合动物模型造模方法。

本发明是这样实现的，一种基于高脂状态痰瘀互结证的双心疾病动物模型构建中的饲料组合物，所述基于高脂状态痰瘀互结证的双心疾病动物模型构建中的饲料组合物按质量比由2％胆固醇、5％猪油、0.2％胆酸钠、蔗糖20％以及基础饲料72.8％组成。

本发明另一目的在于提供一种利用所述饲料组合物的基于高脂状态痰瘀互结证的双心疾病动物模型构建方法，所述基于高脂状态痰瘀互结证的双心疾病动物模型构建方法包括：

(1)大鼠高脂饲料喂养8周，形成高脂状态；

(2)造模第一天开始，大鼠每天接受各种未预知的应激，包括禁食24h、禁水24h、冰水游泳(4℃，5min)、束缚3h、鼠笼摇晃、昼夜颠倒、热烘(45℃，5min)、潮湿垫料过夜、45℃鼠笼倾斜过夜等9种刺激，同种刺激不连续出现，使动物不能预料刺激的发生。造成抑郁模型；

(3)造模第6周开始每日腹部皮下注射盐酸异丙肾上腺素3mg/kg，连续3周。造成心肌缺血模型

结合上述的所有技术方案，本发明所具备的优点及积极效果为：

(1)造模大鼠死亡率低。如果采用通过结扎大鼠左冠状动脉前降支造成心肌缺血则大鼠死亡率高。

(2)腹部皮下注射盐酸异丙肾上腺素剂量是造成心肌缺血模型的关键，我们摸索的剂量是每日腹部皮下注射3mg/kg，大于3mg/kg则容易造成大鼠死亡，小于3mg/kg则心肌缺血效果较差。

(3)基于当前普遍存在人们过食肥甘厚味，缺乏运动，冠心病病人多兼有高血脂症，因此为了更接近临床，同时给予高脂饲料喂养制作高血脂状态，即相当于中医的“痰浊”。我们摸索了连续给予大鼠高脂饲料喂养时间为8周，高血脂状态最稳定。

(4)我们摸索多个高脂饲料配方，以配方为：2％胆固醇、5％猪油、0.2％胆酸钠、蔗糖20％以及基础饲料72.8％的副作用最小，效果最好。

(5)高脂饲料喂养制作高血脂状态，即相当于中医的“痰浊”，腹部皮下注射盐酸异丙肾上腺素剂量是造成心肌缺血，即相当于中医的“瘀”，这种造模方式弥补了目前无病证结合的冠心病合并抑郁症复合动物模型。为揭示冠心病合并抑郁症发病机制和评价中医药的疗效提供实验动物模型。

附图说明

图1是本发明实施例提供的基于高脂状态痰瘀互结证的双心疾病动物模型构建方法流程图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种基于高脂状态痰瘀互结证的双心疾病动物模型构建方法，下面结合附图对本发明作详细的描述。

本发明提供一种基于高脂状态痰瘀互结证的双心疾病动物模型构建中的高脂饲料配方，所述基于高脂状态痰瘀互结证的双心疾病动物模型构建中的高脂饲料配方按质量比由2％胆固醇、5％猪油、0.2％胆酸钠、蔗糖20％以及基础饲料72.8％组成。

如图1所示，本发明提供一种基于高脂状态痰瘀互结证的双心疾病动物模型构建方法，所述基于高脂状态痰瘀互结证的双心疾病动物模型构建方法包括：

S101，大鼠高脂饲料喂养8周；

S102，造模方法：造模第一天开始，大鼠每天接受各种未预知的应激，包括禁食24h、禁水24h、冰水游泳(4℃，5min)、束缚3h、鼠笼摇晃、昼夜颠倒、热烘(45℃，5min)、潮湿垫料过夜、45℃鼠笼倾斜过夜等9种刺激，同种刺激不连续出现，使动物不能预料刺激的发生。造成抑郁模型；

下面结合具体实验过程对本发明技术方案作进一步描述。

材料及药品：

1、大鼠高脂饲料配方：2％胆固醇(试剂)，5％猪油，0.2％胆酸钠(试剂)，蔗糖20％、基础饲料72.8％；

2、盐酸异丙肾上腺素(Isoprotenolhydrochloride，ISO)。

造模方法

1)大鼠高脂饲料喂养8周；

2)造模第一天开始大鼠每天接受各种未预知的应激，包括禁食24h、禁水24h、冰水游泳(4℃，5min)、束缚3h、鼠笼摇晃、昼夜颠倒、热烘(45℃，5min)、潮湿垫料过夜、45℃鼠笼倾斜过夜等9种刺激，同种刺激不连续出现，使动物不能预料刺激的发生；

造模第6周开始每日腹部皮下注射盐酸异丙肾上腺素(Isoprotenolhydrochloride，ISO)3mg/kg，连续3周。

本发明提供的基于高脂状态痰瘀互结证的双心疾病动物模型构建方法业内的普通技术人员还可以采用其他的步骤实施，图1的本发明提供的基于高脂状态痰瘀互结证的双心疾病动物模型构建方法仅仅是一个具体实施例而已。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，都应涵盖在本发明的保护范围之内。