阅读说明：本技术 一种聚左旋乳酸微粒、可注射软组织填充剂的制备方法 (Preparation method of polylactic acid microparticles and injectable soft tissue filler ) 是由 薛姚 栾婧 于 2019-12-27 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种聚左旋乳酸微粒的制备方法以及可注射软组织填充剂的制备方法。聚左旋乳酸微粒的制备方法包括：步骤一、将聚左旋乳酸溶解在良溶剂中,获得聚左旋乳酸溶液；步骤二、将所述聚左旋乳酸溶液加入反应釜中,在搅拌的条件下施加反溶剂,以从反应溶液中析出聚左旋乳酸微粒；步骤三、过滤悬浮有聚左旋乳酸微粒的所述反应溶液,并提纯干燥以获得聚左旋乳酸微粒。本发明通过无皂良溶剂-反溶剂沉淀法制备出聚左旋乳酸微粒,在微粒的制备过程中不需要加入任何乳化剂和分散剂,工艺过程操作简单,生产成本低廉,生产效率高,适合于工业放大生产。(The invention provides a preparation method of poly-L-lactic acid particles and a preparation method of injectable soft tissue filler. The preparation method of the poly-L-lactic acid particles comprises the following steps: dissolving poly-L-lactic acid in a good solvent to obtain a poly-L-lactic acid solution; adding the poly-L-lactic acid solution into a reaction kettle, and applying an anti-solvent under the stirring condition to separate out poly-L-lactic acid particles from the reaction solution; and step three, filtering the reaction solution in which the poly-L-lactic acid particles are suspended, and purifying and drying to obtain the poly-L-lactic acid particles. The invention prepares the poly-L-lactic acid particles by a soap-free good solvent-anti-solvent precipitation method, does not need to add any emulsifier and dispersant in the preparation process of the particles, has simple technological process operation, low production cost and high production efficiency, and is suitable for industrial scale-up production.)

一种聚左旋乳酸微粒、可注射软组织填充剂的制备方法

技术领域

本发明涉及医药技术领域，尤其涉及一种聚左旋乳酸微粒的制备方法以及可注射软组织填充剂的制备方法。

背景技术

随着医疗美容行业的发展，注射填充材料越来越受到广泛关注，通过注射填充材料可以实现提眉、饱满太阳穴、丰颊、改善法令纹、嘴角皮肤皱折、饱满下颚、紧致下巴轮廓线条等美容功效。目前，美容行业最常使用的注射填充材料透明质酸钠(玻尿酸)虽然具有较好的填充效果，但是由于透明质酸的降解速度较快，导致患者通常每6个月左右就需要进行重复注射，并且，对于较为严重的面部凹陷及较深的皱纹，注射透明质酸的填充效果并不显著。

近年来，由于聚左旋乳酸优良的生物相容性和生物可降解性而被广泛应用于生物医药、组织工程及美容医疗领域。在组织工程领域，作为组织修复材料，聚左旋乳酸具有高度的组织相融性，并可在生物组织内部缓慢降解为乳酸和二氧化碳，并被人体完全代谢掉，无任何残留。在美容医疗领域，聚左旋乳酸作为填充材料能有效填充肌肤凹陷，刺激肌肤内部的胶原蛋白和纤维细胞增生，抚平肌肤皱纹，实现肌肤轮廓的重塑。同时，聚左旋乳酸在机体组织内部的存留周期一般为两年左右，克服了传统透明质酸填充材料体内降解迅速、存留时间短的缺点。

聚左旋乳酸在作为医疗美容填充材料使用时，通常需要将其制备成尺寸在微米级的微粒或微球，进而通过注射器将其注入到皮肤的深层组织，实现填充美容的功效。现有技术中制备聚乳酸微球的方法有多种，如通过超声乳化的方法制备聚乳酸微球，通过超临界反溶剂法制备聚乳酸微球，以多孔膜为乳化膜制备聚乳酸微球等。上述方法虽然可以制备出聚乳酸微球，但是本身也具有其应用的局限性，例如制备工艺过于复杂，成本较高，不利于放大生产，同时，制备过程中通常需要引入大量的乳化剂或分散剂，导致产品提纯难度大，生物相容性差，限制了其在生物医药及美容医疗领域的应用。

发明内容

本发明的一个目的是要解决现有技术中在制备聚左旋乳酸微粒时通常需要引入大量的乳化剂或分散剂，从而导致产品提纯难度大，生物相容性差的技术问题。

本发明的一个进一步的目的要解决现有技术中在制备聚左旋乳酸微粒时工艺过于复杂，成本较高，不利于放大生产的技术问题。

本发明的另一个目的是要获得具有优良的水相易分散性，分散后得到的混悬液均匀细腻、通针性好的可注射软组织填充剂。

特别地，本发明提供了一种聚左旋乳酸微粒的制备方法，包括：

步骤一、将聚左旋乳酸溶解在良溶剂中，获得聚左旋乳酸溶液；

步骤二、将所述聚左旋乳酸溶液加入反应釜中，在搅拌的条件下施加反溶剂，以从反应溶液中析出聚左旋乳酸微粒；

步骤三、过滤悬浮有聚左旋乳酸微粒的所述反应溶液，并提纯干燥以获得聚左旋乳酸微粒。

可选地，在所述步骤二中，所述反溶剂与所述良溶剂的体积比为2:1-10:1。

可选地，在所述步骤二中，施加所述反溶剂的速度为50-200mL/min。

可选地，所述良溶剂为三氯甲烷和二氯甲烷中的一种或两种的混合；

可选地，所述反溶剂为乙醇和甲醇中的一种或两种的混合。

可选地，所述聚左旋乳酸的分子量为3-200KDa。

特别地，本发明还提供了一种可注射软组织填充剂的制备方法，包括如下步骤：

向如前述的制备方法获得的聚左旋乳酸微粒中加入辅料，获得混合物料；

向所述混合物料中加入超纯水，搅拌混合均匀，获得混合溶液；

分装所述混合溶液；

将分装后的所述混合溶液冻干后封装灭菌，获得可注射软组织填充剂。

可选地，所述聚左旋乳酸微粒在所述软组织填充剂中的质量百分含量为30-60％。

可选地，所述辅料为透明质酸钠、羧甲基纤维素钠、胶原蛋白和甘露醇中的一种或多种组合。

可选地，所述将分装后的所述混合物料冻干后封装灭菌的步骤中，灭菌的方法为辐照灭菌，辐照剂量为8-15kGy。

可选地，所述透明质酸钠的分子量为500-1000KDa，所述透明质酸钠在所述可注射软组织填充剂中的质量百分含量为10-40％；

可选地，所述羧甲基纤维素钠的分子量为500-1000KDa，所述羧甲基纤维素钠在所述可注射软组织填充剂中的质量百分含量为10-40％；

可选地，所述胶原蛋白的分子量为200-500KDa，所述胶原蛋白在所述可注射软组织填充剂中的质量百分含量为10-40％；

可选地，所述甘露醇的质量百分含量为10-30％。

根据本发明实施例的方案，通过无皂良溶剂-反溶剂沉淀法制备出聚左旋乳酸微粒，在微粒的制备过程中不需要加入任何乳化剂和分散剂，工艺过程操作简单，生产成本低廉，生产效率高，适合于工业放大生产。

进一步地，通过控制上述方法中的反应条件、原料选择以及溶剂选择等，最终可以制备获得粒径小(粒径为3-80μm)、分布窄以及稳定性好的聚左旋乳酸微粒。

此外，通过上述方法制备获得的可注射软组织填充剂具有优良的水相易分散性，分散后得到的混悬液均匀细腻、通针性好，在作为美容填充材料的使用中具有在局部组织中存留周期长，填充效果突出，可塑性好，可促进周围组织的胶原蛋白和纤维细胞增生，毒副作用少等优点，是一种优良的美容填充材料。

根据下文结合附图对本发明具体实施例的详细描述，本领域技术人员将会更加明了本发明的上述以及其他目的、优点和特征。

附图说明

后文将参照附图以示例性而非限制性的方式详细描述本发明的一些具体实施例。附图中相同的附图标记标示了相同或类似的部件或部分。本领域技术人员应该理解，这些附图未必是按比例绘制的。附图中：

图1示出了根据本发明一个实施例的聚左旋乳酸微粒的制备方法的示意性流程图；

图2示出了根据本发明一个实施例的可注射软组织填充剂的制备方法的示意性流程图；

图3示出了根据本发明实施例的制备方法获得的聚左旋乳酸微粒的扫描电镜图；

图4示出了根据本发明实施例的制备方法获得的聚左旋乳酸微粒的另一扫描电镜图；

图5示出了根据本发明实施例的制备方法获得的聚左旋乳酸微粒的平均空气动力学粒径图；

图6示出了根据本发明实施例的制备方法获得的聚左旋乳酸微粒的扫描电镜图；

图7示出了根据本发明实施例的制备方法获得的聚左旋乳酸微粒的另一扫描电镜图；

图8示出了根据本发明实施例的制备方法获得的聚左旋乳酸微粒的平均空气动力学粒径图；

图9示出了根据本发明实施例的制备方法获得的聚左旋乳酸微粒的平均空气动力学粒径图；

图10示出了根据本发明实施例的可注射软组织填充剂的制备方法获得的可注射软组织填充剂的照片；

图11示出了根据本发明实施例的可注射软组织填充剂溶液的照片；

图12示出了根据本发明实施例的可注射软组织填充剂溶液通过26g针头注射器推注的照片；

图13示出了根据本发明实施例的可注射软组织填充剂溶液注射到大鼠皮下第1天、第7天、第15天和第30天后的注射部位的解剖对比照片；

图14示出了根据本发明实施例的可注射软组织填充剂溶液注射到大鼠皮下第1天、第7天、第15天和第30天后，注射部位组织切片的HE染色照片；

图15示出了根据本发明实施例的可注射软组织填充剂溶液注射到大鼠皮下第1天、第7天、第15天和第30天后，注射部位组织切片的Masson染色照片。

具体实施方式

图1示出了根据本发明一个实施例的聚左旋乳酸微粒的制备方法的示意性流程图。如图1所示，该制备方法包括：

步骤一、将聚左旋乳酸溶解在良溶剂中，获得聚左旋乳酸溶液；

步骤二、将聚左旋乳酸溶液加入反应釜中，在搅拌的条件下施加反溶剂，以从反应溶液中析出聚左旋乳酸微粒；

步骤三、过滤悬浮有聚左旋乳酸微粒的反应溶液，并提纯干燥以获得聚左旋乳酸微粒。

在步骤一中，聚左旋乳酸的分子量可以为3KDa、10KDa、20KDa、50KDa、100KDa、150KDa或200KDa，也可以为3-200KDa中其他任一值。该分子量的聚左旋乳酸可以直接在市面上购买获得，也可以通过现有制备方法制备获得，因此，选择该分子量的聚左旋乳酸作为原料，使得原料来源广泛且便捷。其中，聚左旋乳酸溶液中聚左旋乳酸的浓度可以为0.01g/mL、0.02g/mL、0.03g/mL、0.04g/mL或0.05g/mL，也可以为0.01g/mL-0.05g/mL中的任一其他浓度值。对于一种分子量的聚左旋乳酸原料，低聚左旋乳酸浓度可以有效降低反溶剂沉淀过程中聚左旋乳酸微粒间的团聚现象，因此其制备的聚左旋乳酸微粒平均粒径更小。

其中，良溶剂可以为三氯甲烷或二氯甲烷，也可以为三氯甲烷和二氯甲烷的混合溶剂。该聚左旋乳酸是完全溶解在上述良溶剂中的，选择上述良溶剂为最终能够制备获得符合要求的聚左旋乳酸微粒打好良好的基础。

在步骤二中，反溶剂可以为乙醇或甲醇，也可以为乙醇和甲醇的混合溶剂。反溶剂与步骤一中的良溶剂的体积比为2:1、3:1、5:1、7:1、8:1、9：1或10:1，也可以为2-10:1中任一其他体积比。反溶剂和良溶剂的体积比只有达到在上述范围内才能有效析出聚左旋乳酸微粒，为后续能够提纯出大量的聚左旋乳酸微粒打下基础。

其中，搅拌的条件可以是反应釜带有磁力搅拌或机械搅拌，从而可以实现边搅拌边向反应釜中施加反溶剂。施加反溶剂时可以是利用蠕动泵向反应釜中以一定的速度进行滴加，滴加的速度可以是50mL/min、70mL/min、90mL/min、110mL/min、130mL/min、150mL/min、180mL/min或200mL/min，也可以是50-200mL/min中任一其他速度。在相同磁力搅拌或机械搅拌速度下，低的反溶剂滴加速度可以使溶剂与反溶剂混合时间加长，溶剂与反溶剂混合的更加均匀，降低混合溶液局部区域反溶剂的浓度，进而使溶液中的聚左旋乳酸微粒的沉淀析出过程更加均匀，得到粒径均一、分布窄的聚左旋乳酸微粒。

在步骤三中，将悬浮有聚左旋乳酸微粒的反应溶液倒入不锈钢筛网进行过滤。其中，不锈钢筛网为300目、400目、500目、600目、700目、800目、900目或1000目，也可以是300-1000目中任一其他目。不同目数的不锈钢筛网用于过滤收集不同反应条件下得到的不同粒径的聚左旋乳酸微粒。

其中，提纯的步骤为，将上述过滤得到的聚左旋乳酸微粒反复洗涤以及再次过滤，从而进行提纯。上述洗涤处理时所用的洗涤溶剂为乙醇和正己烷。干燥的步骤中，是将提纯后的聚左旋乳酸微粒在30-50℃下进行真空干燥。最终获得的聚左旋乳酸微粒的平均粒径为3-80μm。最终获得的聚左旋乳酸微粒以粉末形式存在。

根据本发明实施例的方案，通过无皂良溶剂-反溶剂沉淀法制备出聚左旋乳酸微粒，在微粒的制备过程中不需要加入任何乳化剂和分散剂，工艺过程操作简单，生产成本低廉，生产效率高，适合于工业放大生产。即本发明的无皂良溶剂-反溶剂沉淀法的制备过程无需使用任何聚乙烯醇(PVA)、甲基纤维素等乳化剂，使制备聚左旋乳酸微粒的提纯过程简便，无需洗脱乳化剂，进而使得到的聚左旋乳酸微粒原料纯度高，无表面活性剂残留。

本发明的制备过程不需要使用水相，使制备的聚左旋乳酸微粒分离、干燥过程简便。与水相比，无皂良溶剂-反溶剂沉淀法中使用的有机溶剂三氯甲烷、二氯甲烷、乙醇和甲醇的表面张力小，因此，在过筛分离产品过程中，有机溶剂的透过率好，产品分离速度快，分离效率高。

与水相比，无皂良溶剂-反溶剂沉淀法中使用的有机溶剂三氯甲烷、二氯甲烷、乙醇和甲醇的沸点低、易挥发，进而可以大大降低聚左旋乳酸微粒产品的干燥温度和干燥时间，得到溶剂残留低、纯度高的聚左旋乳酸微粒产品。

无皂良溶剂-反溶剂沉淀法的制备过程无需使用水相，降低了聚左旋乳酸微粒产品在制备、提纯和干燥过程中染菌的风险，这是因为水相里更容易滋生细菌，而有机溶剂中细菌无法生长。

进一步地，通过控制上述方法中的反应条件、原料选择以及溶剂选择等，最终可以制备获得粒径小(粒径为3-80μm)、分布窄以及稳定性好的聚左旋乳酸微粒。

图2示出了根据本发明一个实施例的可注射软组织填充剂的制备方法的示意性流程图。如图2所示，该制备方法包括：

S100、向通过前述的制备方法获得的聚左旋乳酸微粒中加入辅料，获得混合物料；

SS200、向混合物料中加入超纯水，搅拌混合均匀，获得混合溶液；

S300、分装混合溶液；

S400、将分装后的混合溶液冻干后封装灭菌，获得可注射软组织填充剂。

在步骤S100中，聚左旋乳酸微粒在软组织填充剂中的质量百分含量可以为30％、40％、50％或60％，也可以为30-60％中任一其他比例。根据临床软组织填充层次的需要，可以通过改变填充剂中聚左旋乳酸微粒的百分含量，制备成不同批号的软组织填充剂，延长填充剂在体内的作用时间及持续效果。

辅料可以为透明质酸钠、羧甲基纤维素钠、胶原蛋白和甘露醇中的一种或多种组合。通过优化上述辅料的配方，有效缩短填充剂冻干粉在临床使用前的复溶时间，提高复溶后填充剂中聚左旋乳酸微粒的分散性和稳定性，得到均匀细腻、通针性好的聚左旋乳酸微粒混悬剂。同时，上述辅料在注射到机体软组织后，其自身也具有一定的滋养软组织细胞及修复组织的功效，将其与聚左旋乳酸配合使用，可以达到更好的软组织填充效果。

辅料选择为透明质酸钠时，透明质酸钠在可注射软组织填充剂中的质量百分含量可以为10％、20％、30％或40％，也可以为10-40％中任一其他比例。透明质酸钠的分子量为500KDa、700KDa、900KDa或1000KDa，也可以为500-1000KDa中任一其他分子量。将透明质酸钠的分子量选择在该范围内，可以直接在市面上购买获得，因此，选择该范围内的分子量的透明质酸钠作为辅料，使得辅料来源广泛且便捷。

辅料选择为羧甲基纤维素钠时，羧甲基纤维素钠在可注射软组织填充剂中的质量百分含量可以为10％、20％、30％或40％，也可以为10-40％中任一其他比例。羧甲基纤维素钠的分子量可以为500KDa、700KDa、900KDa或1000KDa，也可以为500-1000KDa中任一其他分子量。将羧甲基纤维素钠的分子量选择在该范围内，可以直接在市面上购买获得，因此，选择该范围内的分子量的羧甲基纤维素钠作为辅料，使得辅料来源广泛且便捷。

辅料选择为胶原蛋白时，胶原蛋白在可注射软组织填充剂中的质量百分含量可以为10％、20％、30％或40％，也可以为10-40％中任一其他比例。胶原蛋白的分子量为200KDa、300KDa、400KDa或500KDa，也可以为200-500KDa中任一其他分子量。将胶原蛋白的分子量选择在该范围内，可以直接在市面上购买获得，因此，选择该范围内的分子量的胶原蛋白作为辅料，使得辅料来源广泛且便捷。

辅料选择为甘露醇时，甘露醇在可注射软组织填充剂中的质量百分含量可以为10％、20％或30％，也可以为10-30％中任一其他比例。将甘露醇的分子量选择在该范围内，可以直接在市面上购买获得，因此，选择该范围内的分子量的甘露醇作为辅料，使得辅料来源广泛且便捷。

在步骤S400中，灭菌的方法为辐照灭菌，辐照剂量可以为8kGy、10kGy、12kGy、14kGy或15kGy，也可以为8-15kGy中任一其他剂量。辐照剂量在8-15kGy范围内可以有效地对聚左旋乳酸软组织填充剂进行灭菌，提高填充剂临床使用的安全性。

根据本发明实施例的方案，通过上述方法制备获得的可注射软组织填充剂具有优良的水相易分散性，分散后得到的混悬液均匀细腻、通针性好，在作为美容填充材料的使用中具有在局部组织中存留周期长，填充效果突出，可塑性好，可促进周围组织的胶原蛋白和纤维细胞增生，毒副作用少等优点，是一种优良的美容填充材料。

以下通过具体的实施例来详细说明：

实施例1、

本发明实施例提供了一种聚左旋乳酸微粒的制备方法，该制备方法包括如下步骤：

1)称取20g分子量为20KDa的聚左旋乳酸，将其溶解于1.2L二氯甲烷溶剂中，配置成0.016g/mL聚乳酸溶液；

2)将聚左旋乳酸溶液加入到带有磁力搅拌的反应釜中，在600rpm的磁力搅拌下通过蠕动泵以100mL/min的速度向反应釜中滴加乙醇反溶剂，滴加乙醇反溶剂的总量为6L，当乙醇的滴加量达到一定体积时，反应釜中即有聚左旋乳酸微粒沉淀析出；

3)将悬浮有聚左旋乳酸微粒的反应溶液倒入100目不锈钢筛网，过滤得到聚左旋乳酸微粒；

4)将过滤得到的聚左旋乳酸微粒通过乙醇洗涤除掉二氯甲烷溶剂；

5)将洗涤后的聚左旋乳酸微粒在45℃进行真空干燥，得到聚左旋乳酸微粒粉体。

图3示出了根据本发明实施例的制备方法获得的聚左旋乳酸微粒的扫描电镜图。图4示出了根据本发明实施例的制备方法获得的聚左旋乳酸微粒的另一扫描电镜图。由图3和图4可知，该聚左旋乳酸微粒为微米级别。

图5示出了根据本发明实施例的制备方法获得的聚左旋乳酸微粒的平均空气动力学粒径图。由图5可知，该聚左旋乳酸微粒粉体的平均空气动力学粒径Dv(90)为16.8μm。通过顶空气相色谱法测得干燥后的聚左旋乳酸的有机溶剂残留，三氯甲烷低于0.0015％，乙醇低于0.2％。

实施例2、

本发明实施例提供了一种聚左旋乳酸微粒的制备方法，该制备方法包括如下步骤：

1)称取50g分子量为70KDa的聚左旋乳酸，将其溶解于1.5L三氯甲烷溶剂中，配置成0.033g/mL聚乳酸溶液；

2)将聚左旋乳酸溶液加入到带有磁力搅拌的反应釜中，在400rpm的磁力搅拌下通过蠕动泵以50mL/min的速度向反应釜中滴加乙醇反溶剂，滴加乙醇反溶剂的总量为3L，当乙醇的滴加量达到一定体积时，反应釜中即有聚左旋乳酸微粒沉淀析出；

3)将悬浮有聚左旋乳酸微粒的反应溶液倒入500目不锈钢筛网，过滤得到聚左旋乳酸微粒；

4)将过滤得到的聚左旋乳酸微粒通过乙醇洗涤除掉三氯甲烷溶剂；

5)将洗涤后的聚左旋乳酸微粒在45℃进行真空干燥，得到聚左旋乳酸微粒粉体。

图6示出了根据本发明实施例的制备方法获得的聚左旋乳酸微粒的扫描电镜图。图7示出了根据本发明实施例的制备方法获得的聚左旋乳酸微粒的另一扫描电镜图。由图6和图7可知，该聚左旋乳酸微粒为微米级别。

图8示出了根据本发明实施例的制备方法获得的聚左旋乳酸微粒的平均空气动力学粒径图。由图8可知，该聚左旋乳酸微粒粉体的平均空气动力学粒径Dv(90)为42.7μm。通过顶空气相色谱法测得干燥后的聚左旋乳酸的有机溶剂残留，三氯甲烷低于0.003％，乙醇低于0.25％。

实施例3、

本发明实施例提供了一种聚左旋乳酸微粒的制备方法，该制备方法包括如下步骤：

1)称取50g分子量为150KDa的聚左旋乳酸，将其溶解于1.5L三氯甲烷溶剂中，配置成0.033g/mL聚乳酸溶液；

2)将聚左旋乳酸溶液加入到带有磁力搅拌的反应釜中，在400rpm的磁力搅拌下通过蠕动泵以50mL/min的速度向反应釜中滴加乙醇反溶剂，滴加乙醇反溶剂的总量为3L，当乙醇的滴加量达到一定体积时，反应釜中即有聚左旋乳酸微粒沉淀析出；

3)将悬浮有聚左旋乳酸微粒的反应溶液倒入300目不锈钢筛网，过滤得到聚左旋乳酸微粒；

4)将过滤得到的聚左旋乳酸微粒通过乙醇洗涤除掉三氯甲烷溶剂；

5)将洗涤后的聚左旋乳酸微粒在45℃进行真空干燥，得到聚左旋乳酸微粒粉体。

图9示出了根据本发明实施例的制备方法获得的聚左旋乳酸微粒的平均空气动力学粒径图。由图9可知，该聚左旋乳酸微粒粉体的平均空气动力学粒径Dv(90)为72μm。通过顶空气相色谱法测得干燥后的聚左旋乳酸的有机溶剂残留，三氯甲烷低于0.003％，乙醇低于0.25％。

实施例4、

本发明实施例提供了一种聚左旋乳酸微粒的制备方法，该制备方法包括如下步骤：

1)称取25g分子量为150KDa的聚左旋乳酸，将其溶解于0.5L三氯甲烷溶剂中，配置成0.05g/mL聚乳酸溶液；

2)将聚左旋乳酸溶液加入到带有磁力搅拌的反应釜中，在1000rpm的磁力搅拌下通过蠕动泵以200mL/min的速度向反应釜中滴加甲醇反溶剂，滴加乙醇反溶剂的总量为5L，当乙醇的滴加量达到一定体积时，反应釜中即有聚左旋乳酸微粒沉淀析出；

3)将悬浮有聚左旋乳酸微粒的反应溶液倒入300目不锈钢筛网，过滤得到聚左旋乳酸微粒；

4)将过滤得到的聚左旋乳酸微粒通过乙醇洗涤除掉三氯甲烷溶剂；

5)将洗涤后的聚左旋乳酸微粒在45℃进行真空干燥，得到聚左旋乳酸微粒粉体。

通过顶空气相色谱法测得干燥后的聚左旋乳酸的有机溶剂残留，三氯甲烷低于0.0045％，乙醇低于0.25％。

实施例5、

本发明实施例提供了一种可注射软组织填充剂的制备方法，该制备方法包括如下步骤：

1)称取分子量为20KDa质量为16g的聚左旋乳酸微粒，分子量为500KDa质量为3.6g的透明质酸钠，以及6g甘露醇，获得混合物料；

2)将混合物料加入到600mL超纯水，磁力搅拌48h，直至透明质酸钠和甘露醇部溶解，聚乳酸微粒分散均匀，从而获得混合溶液。

3)通过移液器准确量取6mL上述混合溶液分装至10mL西林瓶中；

4)将分装后的混合溶液放入冷冻干燥机中冻干，压盖后通过辐照在辐照剂量为15kGy下进行灭菌，得到可注射软组织填充剂。

图10示出了根据本发明实施例的可注射软组织填充剂的制备方法获得的可注射软组织填充剂的照片。

为了验证该可注射软组织填充剂具有优良的水相易分散性，分散后得到的混悬液均匀细腻、通针性好，在作为美容填充材料的使用中具有在局部组织中存留周期长，填充效果突出，可塑性好，可促进周围组织的胶原蛋白和纤维细胞增生，毒副作用少等优点，发明人做了如下验证试验：

将该实施例获得的可注射软组织填充剂通过注射器加入7-10mL注射用水，晃匀后得到可注射软组织填充剂溶液，如图11所示。再将可注射软组织填充剂溶液通过26g针头注射器推注，发现其具有优良的通针性，如图12所示。

将100μL的上述可注射软组织填充剂溶液注射到不同实验大鼠皮下，在第1天、第7天、第15天和第30天分别对大鼠进行处死解剖，观察注射组织部位聚左旋乳酸微粒的降解情况，如图13所示。

进一步，通过组织切片的苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining，HE染色法)和胶原纤维染色(Masson染色)对可注射软组织填充剂的生物安全性和刺激组织胶原增生效果进行了评价。HE染色法证明了大鼠的皮下注射组织及其周边细胞状态良好，注射30天后，组织部位无明显细胞萎缩现象，如图14所示。Masson染色证明了随着时间的延长，注射组织及其周边胶原增生效果显著，组织切片染色呈现深蓝色(由于附图为灰度图，因此无法看出深蓝色，但是实际效果图中，深蓝色是遍布在除图中圆形细胞外的其他区域中)，如图15所示。

实施例6、

本发明实施例提供了一种可注射软组织填充剂的制备方法，该制备方法包括如下步骤：

1)称取分子量为70KDa质量为16g的聚左旋乳酸微粒，分子量为200KDa质量为3.6g的胶原蛋白，以及6g甘露醇，获得混合物料；

2)将混合物料加入到600mL超纯水，磁力搅拌48h，直至胶原蛋白和甘露醇全部溶解，聚乳酸微粒分散均匀，从而获得混合溶液。

3)通过移液器准确量取6mL上述混合溶液分装至10mL西林瓶中；

4)将分装后的混合溶液放入冷冻干燥机中冻干，压盖后通过辐照在辐照剂量为15kGy下进行灭菌，得到可注射软组织填充剂。

实施例7、

本发明实施例提供了一种可注射软组织填充剂的制备方法，该制备方法包括如下步骤：

1)称取分子量为150KDa质量为16g聚左旋乳酸微粒，3.6g分子量为500KDa的羧甲基纤维素钠，以及6g甘露醇，获得混合物料；

2)将混合物料加入到600mL超纯水，磁力搅拌48h，直至羧甲基纤维素钠和甘露醇全部溶解，聚乳酸微粒分散均匀，从而获得混合溶液。

3)通过移液器准确量取6mL上述混合溶液分装至10mL西林瓶中；

4)将分装后的混合溶液放入冷冻干燥机中冻干，压盖后通过辐照在辐照剂量为15kGy下进行灭菌，得到可注射软组织填充剂。

实施例8、

本发明实施例提供了一种可注射软组织填充剂的制备方法，该制备方法包括如下步骤：

1)称取分子量为20KDa质量为16g聚左旋乳酸微粒，分子量为1000KDa质量为4.8g透明质酸钠，以及6g甘露醇，获得混合物料；

2)将混合物料加入到600mL超纯水，磁力搅拌48h，直至透明质酸钠和甘露醇全部溶解，聚乳酸微粒分散均匀，从而获得混合溶液。

3)通过移液器准确量取12mL上述混合溶液分装至20mL西林瓶中；

4)将分装后的混合溶液放入冷冻干燥机中冻干，压盖后通过辐照在辐照剂量为15kGy下进行灭菌，得到可注射软组织填充剂。

至此，本领域技术人员应认识到，虽然本文已详尽示出和描述了本发明的多个示例性实施例，但是，在不脱离本发明精神和范围的情况下，仍可根据本发明公开的内容直接确定或推导出符合本发明原理的许多其他变型或修改。因此，本发明的范围应被理解和认定为覆盖了所有这些其他变型或修改。