阅读说明：本技术 一种胚芽细胞脱分化培养基质及其制备方法 (Embryonic germ cell dedifferentiation culture medium and preparation method thereof ) 是由 顾霆 于 2019-11-22 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种胚芽细胞脱分化培养基质,所述胚芽细胞脱分化培养基质的配方为：MS、改性琼脂6-8g/L、葡萄糖20-26g/L、2,4-二氯苯氧乙酸0.5-1.1mg/L、果糖0.5-1.1mg/L、营养液0.2-0.7mg/L、改性蒙脱土5-15g/L,pH值为5.6-5.8。本发明胚芽细胞脱分化培养基质在常规的基础上通过对琼脂进行改性,使琼脂被钼酸钠溶液改性后能够增强胞脱分化培养基质的营养基能,同时可提高基质的抗菌环境,营养液的添加使培养基质能够提供多种微量元素,从而提高胚芽细胞分化的程度,中草药发酵剂通过营养剂的形式添加,目的使植物在吸收营养时能够持续的处于灭菌的环境。(The invention discloses a germ cell dedifferentiation culture medium, which comprises the following components in percentage by weight: MS, 6-8g/L of modified agar, 20-26g/L of glucose, 0.5-1.1mg/L of 2, 4-dichlorophenoxyacetic acid, 0.5-1.1mg/L of fructose, 0.2-0.7mg/L of nutrient solution, 5-15g/L of modified montmorillonite, and pH value of 5.6-5.8. According to the germ cell dedifferentiation culture medium, agar is modified by a sodium molybdate solution on a conventional basis, so that the nutrient medium energy of the germ cell dedifferentiation culture medium can be enhanced, the antibacterial environment of the medium can be improved, the culture medium can provide various trace elements by adding a nutrient solution, the differentiation degree of the germ cells is improved, and a Chinese herbal medicine leavening agent is added in the form of a nutrient, so that plants can be continuously in a sterilized environment when absorbing nutrition.)

一种胚芽细胞脱分化培养基质及其制备方法

技术领域

本发明涉及胚芽细胞技术领域，具体涉及一种胚芽细胞脱分化培养基质及其制备方法。

背景技术

大豆是中国重要粮食作物之一，已有五千年栽培历史，古称菽，中国东北为主产区，是一种其种子含有丰富植物蛋白质的作物。大豆最常用来做各种豆制品、榨取豆油、酿造酱油和提取蛋白质。豆渣或磨成粗粉的大豆也常用于禽畜饲料。豆通称黄豆。豆科大豆属一年生草本，高30-90厘米。大豆荚果肥大，稍弯，下垂，黄绿色，密被褐黄色长毛；种子2-5颗，椭圆形、近球形，种皮光滑，有淡绿、黄、褐和黑色等多样。花期6-7月，果期7-9月。

大豆胚芽细胞在脱分化过程中需要用到培养基质，现有的培养基质在胚芽细胞脱分化过程中虽可提供营养物质，但不具备抗菌、灭菌能力，容易影响到的胚芽细胞的脱分化效果。

发明内容

本发明的目的在于提供一种胚芽细胞脱分化培养基质及其制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种胚芽细胞脱分化培养基质，所述胚芽细胞脱分化培养基质的配方为：MS、改性琼脂6-8g/L、葡萄糖20-26g/L、2，4-二氯苯氧乙酸0.5-1.1mg/L、果糖0.5-1.1mg/L、营养液0.2-0.7mg/L、改性蒙脱土5-15g/L，pH值为5.6-5.8。

优选地，所述改性琼脂的制备方法为：将琼脂先采用紫外照射10-20min，然后再与钼酸钠溶液共混10-20min，共混转速为200-280r/min，共混结束，过滤，然后再干燥，即可。

优选地，所述紫外照射的功率为20-100W。

优选地，所述营养液包括以下重量份原料：硫酸镁1.2～1.3份、硫酸钠1.1～1.2份、硫酸锌0.8～1.0份、硫酸铜0.8～0.9份、中草药发酵剂0.2-0.5份。

优选地，所述营养液包括以下重量份原料：硫酸镁1.25份、硫酸钠1.15份、硫酸锌0.9份、硫酸铜0.85份、中草药发酵剂0.35份。

优选地，所述中草药发酵剂的制备方法为将金银花、艾草、蒲公英按照重量比3:2:1加入到煮沸锅中进行煮沸，得到汁液与酵母菌共同送入到发酵罐中进行发酵处理，发酵温度为28-32℃，发酵时间为1-2d，发酵结束，得到中草药发酵剂。

优选地，所述改性蒙脱土的制备方法为将蒙脱土先加入到去离子水中进尘超声分散，然后再干燥，再研磨1-3次，随后再热活化处理，得到改性蒙脱土。

优选地，所述热活化处理的具体步骤为：将蒙脱土以2-5℃/min的速率将温度升至150℃，保温10min，然后继续以1℃/min的速率将温度升至210℃，继续保温20-30min，保温结束，再自然恢复至室温，即可。

本发明还提供了一种制备胚芽细胞脱分化培养基质的方法，包括以下步骤：

步骤一，称取以上重量份原料：

步骤二，将MS、改性琼脂、葡萄糖、2，4-二氯苯氧乙酸、果糖、营养液依次加入到搅拌器中，启动搅拌器先搅拌10-20min，搅拌转速为700-1000r/min，得到基质A；

步骤三，向基质A中加入营养液、改性蒙脱土，继续以100-200r/min的低转速进行搅拌2-5h，搅拌温度为35-45℃，搅拌结束，得到胚芽细胞脱分化培养基质。

与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：

(1)本发明胚芽细胞脱分化培养基质在常规的基础上通过对琼脂进行改性，使琼脂被钼酸钠溶液改性后能够增强胞脱分化培养基质的营养基能，同时可提高基质的抗菌环境，营养液的添加使培养基质能够提供多种微量元素，从而提高胚芽细胞分化的程度，中草药发酵剂通过营养剂的形式添加，目的使植物在吸收营养时能够持续的处于灭菌的环境，从而起到增强抗菌的能力。

(2)蒙脱土分散液本身可以起到抗菌功能，同时经过改性处理后本身具有很强的活性，也可以提高蒙脱土在基质的分散能力，进而提高了抗菌能力。

(3)本发明实施例3的培养基质对胚芽细胞具有很强的抗菌能力，实施例3的胚芽细胞染病率为0.11％，而对比例2则为1.23％，实施例3相对于对比例2降低了1.22％，具有显著的降低效果。

具体实施方式

下面结合具体实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1：

本实施例的一种胚芽细胞脱分化培养基质，所述胚芽细胞脱分化培养基质的配方为：MS、改性琼脂6g/L、葡萄糖20g/L、2，4-二氯苯氧乙酸0.5mg/L、果糖0.5mg/L、营养液0.mg/L、改性蒙脱土5g/L，pH值为5.6。

本实施例的改性琼脂的制备方法为：将琼脂先采用紫外照射10min，然后再与钼酸钠溶液共混10min，共混转速为200r/min，共混结束，过滤，然后再干燥，即可。

本实施例的紫外照射的功率为20W。

本实施例的营养液包括以下重量份原料：硫酸镁1.2份、硫酸钠1.1份、硫酸锌0.8份、硫酸铜0.8份、中草药发酵剂0.2份。

本实施例的中草药发酵剂的制备方法为将金银花、艾草、蒲公英按照重量比3:2:1加入到煮沸锅中进行煮沸，得到汁液与酵母菌共同送入到发酵罐中进行发酵处理，发酵温度为28℃，发酵时间为1d，发酵结束，得到中草药发酵剂。

本实施例的改性蒙脱土的制备方法为将蒙脱土先加入到去离子水中进尘超声分散，然后再干燥，再研磨1次，随后再热活化处理，得到改性蒙脱土。

本实施例的热活化处理的具体步骤为：将蒙脱土以2℃/min的速率将温度升至150℃，保温10min，然后继续以1℃/min的速率将温度升至210℃，继续保温20min，保温结束，再自然恢复至室温，即可。

本实施例的一种制备胚芽细胞脱分化培养基质的方法，包括以下步骤：

步骤一，称取以上重量份原料：

步骤二，将MS、改性琼脂、葡萄糖、2，4-二氯苯氧乙酸、果糖、营养液依次加入到搅拌器中，启动搅拌器先搅拌10-20min，搅拌转速为700r/min，得到基质A；

步骤三，向基质A中加入营养液、改性蒙脱土，继续以100r/min的低转速进行搅拌2h，搅拌温度为35℃，搅拌结束，得到胚芽细胞脱分化培养基质。

实施例2：

本实施例的一种胚芽细胞脱分化培养基质，所述胚芽细胞脱分化培养基质的配方为：MS、改性琼脂8g/L、葡萄糖26g/L、2，4-二氯苯氧乙酸1.1mg/L、果糖1.1mg/L、营养液0.7mg/L、改性蒙脱土15g/L，pH值为5.8。

本实施例的改性琼脂的制备方法为：将琼脂先采用紫外照射20min，然后再与钼酸钠溶液共混20min，共混转速为280r/min，共混结束，过滤，然后再干燥，即可。

本实施例的紫外照射的功率为100W。

本实施例的营养液包括以下重量份原料：硫酸镁1.3份、硫酸钠1.2份、硫酸锌1.0份、硫酸铜0.9份、中草药发酵剂0.5份。

本实施例的中草药发酵剂的制备方法为将金银花、艾草、蒲公英按照重量比3:2:1加入到煮沸锅中进行煮沸，得到汁液与酵母菌共同送入到发酵罐中进行发酵处理，发酵温度为32℃，发酵时间为2d，发酵结束，得到中草药发酵剂。

本实施例的改性蒙脱土的制备方法为将蒙脱土先加入到去离子水中进尘超声分散，然后再干燥，再研磨3次，随后再热活化处理，得到改性蒙脱土。

本实施例的热活化处理的具体步骤为：将蒙脱土以5℃/min的速率将温度升至150℃，保温10min，然后继续以1℃/min的速率将温度升至210℃，继续保温30min，保温结束，再自然恢复至室温，即可。

本实施例的一种制备胚芽细胞脱分化培养基质的方法，包括以下步骤：

步骤一，称取以上重量份原料：

步骤二，将MS、改性琼脂、葡萄糖、2，4-二氯苯氧乙酸、果糖、营养液依次加入到搅拌器中，启动搅拌器先搅拌20min，搅拌转速为1000r/min，得到基质A；

步骤三，向基质A中加入营养液、改性蒙脱土，继续以200r/min的低转速进行搅拌5h，搅拌温度为45℃，搅拌结束，得到胚芽细胞脱分化培养基质。

实施例3：

本实施例的一种胚芽细胞脱分化培养基质，所述胚芽细胞脱分化培养基质的配方为：MS、改性琼脂7g/L、葡萄糖23g/L、2，4-二氯苯氧乙酸0.7mg/L、果糖0.8mg/L、营养液0.35mg/L、改性蒙脱土10g/L，pH值为5.7。

本实施例的改性琼脂的制备方法为：将琼脂先采用紫外照射15min，然后再与钼酸钠溶液共混15min，共混转速为240r/min，共混结束，过滤，然后再干燥，即可。

本实施例的紫外照射的功率为60W。

本实施例的营养液包括以下重量份原料：硫酸镁1.25份、硫酸钠1.15份、硫酸锌0.9份、硫酸铜0.85份、中草药发酵剂0.35份。

本实施例的中草药发酵剂的制备方法为将金银花、艾草、蒲公英按照重量比3:2:1加入到煮沸锅中进行煮沸，得到汁液与酵母菌共同送入到发酵罐中进行发酵处理，发酵温度为30℃，发酵时间为1.5d，发酵结束，得到中草药发酵剂。

本实施例的改性蒙脱土的制备方法为将蒙脱土先加入到去离子水中进尘超声分散，然后再干燥，再研磨2次，随后再热活化处理，得到改性蒙脱土。

本实施例的热活化处理的具体步骤为：将蒙脱土以3.5℃/min的速率将温度升至150℃，保温10min，然后继续以1℃/min的速率将温度升至210℃，继续保温25min，保温结束，再自然恢复至室温，即可。

本实施例的一种制备胚芽细胞脱分化培养基质的方法，包括以下步骤：

步骤一，称取以上重量份原料：

步骤二，将MS、改性琼脂、葡萄糖、2，4-二氯苯氧乙酸、果糖、营养液依次加入到搅拌器中，启动搅拌器先搅拌15min，搅拌转速为850r/min，得到基质A；

步骤三，向基质A中加入营养液、改性蒙脱土，继续以150r/min的低转速进行搅拌3.5h，搅拌温度为40℃，搅拌结束，得到胚芽细胞脱分化培养基质。

对比例1：

与实施例3的材料及制备工艺基本相同，唯有不同的是未加入改性蒙脱土。

对比例2：

与实施例3的材料及制备工艺基本相同，唯有不同的是采用常规的培养基质。

将实施例1-3及对比例1-2的培养基质测试结果如表1所示

组别	染菌率(％)
		实施例1	0.12
实施例2	0.14
		实施例3	0.11
对比例1	0.27
		对比例2	1.23

表1

从表1可知，本发明实施例3的培养基质对胚芽细胞具有很强的抗菌能力，实施例3的胚芽细胞染病率为0.11％，而对比例2则为1.23％，实施例3相对于对比例2降低了1.22％，具有显著的降低效果。

对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。

此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。