一种用于治疗脱发的米诺地尔-对羟基苯甲酸盐晶型及其制备方法
阅读说明：本技术 一种用于治疗脱发的米诺地尔-对羟基苯甲酸盐晶型及其制备方法 (Minoxidil-p-hydroxybenzoate crystal form for treating alopecia and preparation method thereof ) 是由 米佳钰 孙治夏 张遨 冯梦娇 任冬菊 孙玉培 张琪 彭元昌 贾冯瑞 罗亚男 刘文 于 2021-08-03 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种用于治疗脱发的米诺地尔-对羟基苯甲酸盐晶型及其制备方法。米诺地尔-对羟基苯甲酸盐晶型由2个米诺地尔阳离子、2个对羟基苯甲酸阴离子、1个米诺地尔分子和2个水分子通过离子键和氢键相互作用结合生成；晶体结构属于单斜晶系,空间群为C2/c,其轴长a=17.547～18.547Å,b=11.336～12.336Å,c=21.554～22.554Å,轴角α=γ=90°,β=101.477～102.477°。动物模型证实本发明制备的米诺地尔新晶型的治疗效果优于原药。(The invention relates to a minoxidil-p-hydroxybenzoate crystal form for treating alopecia and a preparation method thereof. The minoxidil-p-hydroxybenzoate crystal form is generated by combining 2 minoxidil cations, 2 p-hydroxybenzoic acid anions, 1 minoxidil molecule and 2 water molecules through ionic bonds and hydrogen bond interaction; the crystal structure belongs to a monoclinic system and the space group is C2/c Axial length of a =17.547~18.547Å， b =11.336~12.336Å， c =21.554~ 22.554A, axial angle α = γ =90°， β =101.477~102.477 deg. Animal models prove that the treatment effect of the novel minoxidil crystal form prepared by the invention is superior to that of a raw drug.)
技术领域
本发明属于药物晶型技术领域，具体涉及一种用于治疗脱发的米诺地尔-对羟基苯甲酸盐晶型及其制备方法。
背景技术
近年来，研究者利用非共价相互作用间的协同机制改变药物的超分子结构，取得了丰硕的研究成果，为药物晶体工程提供了创新原动力。目前，通过调控非共价相互作用获得的药物固体形态包括多晶型物、药物盐、药物共晶、水合物或溶剂化物以及无定型物。药物成盐伴随着质子转移，使分子表面静电势发生改变，进而影响药物分子的空间排列，对药物的理化性质和生物学性质产生影响。通过非共价相互作用研究超分子结构改变对药物晶型的影响，是超分子化学在药学领域的新应用，促进了超分子化学和药学的交叉融合。通过超分子改造研发毒性低、疗效佳、安全性好、成本低的晶型药物，可以为实现“健康中国”战略提供有力支撑。
米诺地尔是中国药典收载的抗高血压药物，米诺地尔不仅可以治疗高血压，也是目前治疗脱发的一线药物。研究表明，米诺地尔可以改善局部血液循环，刺激毛囊细胞增殖分化，从而起到促进毛发生长的作用，但外用米诺地尔也会导致皮肤红肿、刺痛等不良反应。为提高米诺地尔外用制剂的治疗效果，减小副作用，本发明采用药物成盐技术对米诺地尔进行晶型改造，通过动物实验验证制备的米诺地尔晶型药物的治疗效果，为发展新型米诺地尔外用制剂奠定基础。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于治疗脱发的米诺地尔-对羟基苯甲酸盐晶型及其制备方法。
本发明以米诺地尔作为药物活性成分，其化学名是6-(1-哌啶基)-2,4-嘧啶二胺-3-氧化物，结构式如a所示，选用对羟基苯甲酸作为成盐试剂，结构式如b所示。
本发明所述的米诺地尔新晶型具有如下特征。
米诺地尔-对羟基苯甲酸盐晶型的基本结构单元由2个米诺地尔阳离子、2个对羟基苯甲酸阴离子、1个米诺地尔分子和2个水分子通过离子键和氢键相互作用结合生成；米诺地尔-对羟基苯甲酸盐晶型的晶体结构属于单斜晶系，空间群为C2/c，其轴长a = 17.547~18.547 Å，b = 11.336~12.336 Å，c = 21.554~22.554 Å，轴角α = γ = 90°，β =101.477~102.477°；在X-射线粉末衍射图样中，米诺地尔-对羟基苯甲酸盐晶型在衍射角2θ= 8.124°，9.388°，10.217°，14.873°，17.947°，19.983°，20.918°，22.626°，23.269°处有主要峰（相对强度大于50%），在衍射角2θ = 11.487°，14.188°，17.000°，17.285°，20.627°，24.969°，25.730°，26.693°，28.609°处有次要峰（相对强度介于50%和30%之间），其中2θ值的误差范围为±0.20°。
本发明所述的米诺地尔-对羟基苯甲酸盐晶型的制备方法为加热-室温挥发结晶法，其步骤如下。
(1) 摩尔比为1:1的米诺地尔和对羟基苯甲酸溶解于一定量的溶剂，所用溶剂为水、甲醇、乙醇、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺、乙酸乙酯、二氯甲烷中的一种或几种的混合溶剂，反应体系中米诺地尔的最终浓度为5~25 mg/mL。
(2) 反应液在加热条件下搅拌反应0.5~3小时，反应温度为30~70 °C，反应后用中速滤纸过滤反应液。
(3) 滤液室温静置8~24小时，有白色块状晶体析出，即为米诺地尔-对羟基苯甲酸盐晶型。
本发明所述的米诺地尔-对羟基苯甲酸盐晶型的制备方法还可以采用溶剂辅助研磨法，其步骤如下。
(1) 摩尔比为1:1的米诺地尔和对羟基苯甲酸置于直径为10 cm的玛瑙研钵内，研磨成200目的粉末。
(2) 用微量移液器移入一定量的溶剂，均匀研磨0.5~2小时，所用溶剂为甲醇、乙醇、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺中的一种或几种的混合溶剂，溶剂的用量与粉末的体积比为0.1~0.2 µL/mg。
(3) 收集粉末，冷冻干燥12小时，得到白色固体粉末即为米诺地尔-对羟基苯甲酸盐晶型。
本发明制备的米诺地尔-对羟基苯甲酸盐晶型优于米诺地尔原药的治疗效果，具有治疗脱发的潜力。
本发明中检测药物晶型结构的仪器如下。
1. 单晶结构测定采用Bruker APEX II型X-射线单晶衍射仪进行。
2. X-射线粉末衍射采用的仪器型号为Bruker D8 Advance。
附图说明
图1是米诺地尔-对羟基苯甲酸盐晶型的结构图。
图2是米诺地尔-对羟基苯甲酸盐晶型的粉末X-射线衍射图及和单晶衍射模拟出的衍射图的比较。
图3是米诺地尔原药以及米诺地尔-对羟基苯甲酸盐晶型对小鼠背部毛发生长促进作用的效果图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此。
实施例1。
(1) 称取1255.5 mg的米诺地尔溶解在40 mL的乙醇中，称取828.7 mg的对羟基苯甲酸溶解在60 mL的蒸馏水中，将两种溶液混合后置于200 mL的圆底烧瓶中，安装回流装置。
(2) 在70 °C的水浴中搅拌反应1小时，固体完全溶解。
(3) 反应液用中速滤纸过滤，滤液置于200 mL烧杯中，用保鲜膜覆盖烧杯口，用10mL注射器扎7个小口，静置结晶。白色块状晶体约24小时后析出，为米诺地尔-对羟基苯甲酸盐晶型。
实施例2。
(1) 称取544.1 mg的米诺地尔和359.1 mg的对羟基苯甲酸混合置于200 mL圆底烧瓶中，加入20 mL的二氯甲烷、40 mL的乙醇、40 mL的乙酸乙酯和5 mL的N,N-二甲基甲酰胺，安装回流装置。
(2) 在30 °C的水浴中搅拌反应0.5小时，固体完全溶解。
(3) 反应液用中速滤纸过滤，滤液置于200 mL烧杯中，用保鲜膜覆盖烧杯口，用10mL注射器扎3个小口，静置结晶。白色块状晶体约12小时后析出，为米诺地尔-对羟基苯甲酸盐晶型。
实施例3。
(1) 称取1150.9 mg的米诺地尔溶解在40 mL的甲醇中，称取759.7 mg的对羟基苯甲酸溶解在60 mL的蒸馏水中，将两种溶液混合后置于200 mL的圆底烧瓶中，安装回流装置。
(2) 在70 °C的水浴中搅拌反应1小时，固体完全溶解。
(3) 反应液用中速滤纸过滤，滤液置于200 mL烧杯中，用保鲜膜覆盖烧杯口，用10mL注射器扎7个小口，静置结晶。白色块状晶体约24小时后析出，为米诺地尔-对羟基苯甲酸盐晶型。
实施例4。
(1) 称取2500.0 mg的米诺地尔和1650.2 mg的对羟基苯甲酸混合置于200 mL的圆底烧瓶中，加入30 mL的二氯甲烷、60 mL的甲醇和10 mL的乙腈，安装回流装置。
(2) 在45°C的水浴中搅拌反应3小时，固体完全溶解。
(3) 反应液用中速滤纸过滤，滤液置于200 mL烧杯中，用保鲜膜覆盖烧杯口，用10mL注射器扎5个小口，静置结晶。白色块状晶体约8小时后析出，为米诺地尔-对羟基苯甲酸盐晶型。
实施例5。
(1) 称取1234.6 mg的米诺地尔和814.9 mg的对羟基苯甲酸置于直径为10 cm的玛瑙研钵内，研磨成200目的粉末。
(2) 用微量移液器移入400 µL的乙醇，均匀研磨2小时。
(3) 收集粉末，冷冻干燥12小时，得到白色固体粉末即为米诺地尔-对羟基苯甲酸盐晶型。
实施例6。
(1) 称取540.0 mg的米诺地尔和356.4 mg的对羟基苯甲酸置于直径为10 cm的玛瑙研钵内，研磨成200目的粉末。
(2) 用微量移液器移入100 µL的甲醇，均匀研磨0.5小时。
(3) 收集粉末，冷冻干燥12小时，得到白色固体粉末即为米诺地尔-对羟基苯甲酸盐晶型。
实施例7。
(1) 称取837.0 mg的米诺地尔和552.5 mg的对羟基苯甲酸置于直径为10 cm的玛瑙研钵内，研磨成200目的粉末。
(2) 用微量移液器移入200 µL的乙腈，均匀研磨1.5小时。
(3) 收集粉末，冷冻干燥12小时，得到白色固体粉末即为米诺地尔-对羟基苯甲酸盐晶型。
实施例8。
(1) 称取535.7 mg的米诺地尔和353.6 mg的对羟基苯甲酸置于直径为10 cm的玛瑙研钵内，研磨成200目的粉末。
(2) 用微量移液器移入100 µL的N,N-二甲基甲酰胺，均匀研磨1小时。
(3) 收集粉末，冷冻干燥12小时，得到白色固体粉末即为米诺地尔-对羟基苯甲酸盐晶型。
效果实施例1。
对实施例1到例4得到的米诺地尔-对羟基苯甲酸盐晶型进行X-射线单晶衍射表征，测试在德国Bruker公司的APEX II型X-射线单晶衍射仪上，采用经石墨单色器单色化的Mo射线进行。结构采用SHELXT-2013程序由直接法解出，精修采用SHELXL-2018程序以全矩阵最小二乘法进行。氢原子坐标由计算得到，C-H = 0.93 Å (芳香环)和0.97 Å (亚甲基)，N-H = 0.86 Å，O-H = 0.82 Å (羟基和羧基)和0.85 Å (水分子)，采用骑式构象精修，热参数U iso(H) = 1.5 U eq(氧原子)或1.2 U eq(其他载原子)。米诺地尔-对羟基苯甲酸盐晶型的晶体学参数如表所示，晶体结构如图1所示。
效果实施例2。
对实施例5到例8制备的米诺地尔-对羟基苯甲酸盐晶型进行粉末X-射线衍射表征，测试条件：Cu-Kα靶(λ = 1.54056 Å)，管电压35 kV，管电流30 mA，扫描速度0.2°/s，结果如图2所示。
效果实施例3。
选取雄性和雌性C57BL/6鼠各3只，用乙醚麻醉，对其背部剃毛后用蜡脱毛。分别配制浓度为8 mmol/L的米诺地尔原药和米诺地尔-对羟基苯甲酸盐晶型的生理盐水溶液。将小鼠分为3组（每组雄雌各1只），一组为2只空白对照小鼠、一组为2只阴性对照小鼠、一组为2只实验组小鼠，分别为涂抹生理盐水、浓度为8 mmol/L的米诺地尔生理盐水溶液和浓度为8 mmol/L的米诺地尔-对羟基苯甲酸盐晶型生理盐水溶液，每日涂抹2次，持续2周。每日拍照记录小鼠背部毛发生长情况，代表性结果如图3所示。从结果可知，米诺地尔-对羟基苯甲酸盐晶型处理组的背部皮肤毛发比生理盐水处理组和米诺地尔处理组的毛发长得更多更密，说明制备的米诺地尔-对羟基苯甲酸盐晶型促进小鼠毛发生长效果优于米诺地尔原药，表明制备的米诺地尔盐晶型具有比米诺地尔原药更好的治疗效果。与现有的米诺地尔制剂相比，以米诺地尔-对羟基苯甲酸盐晶型为有效成分制备的制剂可以在较低浓度起到治疗效果，通过降低制剂中米诺地尔的浓度减少刺激性有机溶剂的使用，解决现有米诺地尔刺激皮肤的不良反应。