阅读说明：本技术 一种荧光素纳米微球洗手液及其制备方法 (Fluorescein nanoparticle hand sanitizer and preparation method thereof ) 是由 江千里 干宁 姚巧睿 陈全凤 江俪川 颜丹虹 李宇轩 黄淇轩 方僖 王正源 张淋 于 2019-11-29 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种荧光素纳米微球洗手液及其制备方法,所述荧光素纳米微球洗手液包括荧光素纳米微球和药学上可接受的载体或助剂,具体包括如下重量百分比的成分：荧光素纳米微球2-10％,富脂剂0.5-3.2％,润肤保湿剂65-90％,黏度调节剂1-4％。本发明所提供的荧光素纳米微球洗手液所采用的荧光素纳米微球的尺寸大小与细菌或病毒的大小一致,可更好地模仿病原体；其所采用的荧光素纳米微球与单一荧光素相比,荧光强度更强,且敏感度更高；所制得的荧光素纳米微球洗手液在特定波长灯源下检测,根据手中荧光亮度分布判断手消毒效果,提供一种可靠的广为医疗行业采纳的效果检测标准。(The invention discloses a fluorescein nanoparticle hand sanitizer and a preparation method thereof, wherein the fluorescein nanoparticle hand sanitizer comprises fluorescein nanoparticles and a pharmaceutically acceptable carrier or auxiliary agent, and specifically comprises the following components in percentage by weight: 2-10% of fluorescein nano-microspheres, 0.5-3.2% of fat-enriching agent, 65-90% of skin moisturizing agent and 1-4% of viscosity regulator. The dimension of the fluorescein nanospheres adopted by the fluorescein nanosphere hand sanitizer provided by the invention is consistent with that of bacteria or viruses, so that pathogens can be better simulated; compared with single fluorescein, the adopted fluorescein nanospheres have stronger fluorescence intensity and higher sensitivity; the prepared fluorescein nanoparticle hand sanitizer is detected under a light source with a specific wavelength, and the hand disinfection effect is judged according to the fluorescence brightness distribution in hands, so that a reliable effect detection standard widely adopted by the medical industry is provided.)

一种荧光素纳米微球洗手液及其制备方法

技术领域

本发明涉及医疗卫生效果检测技术领域，具体涉及一种荧光素纳米微球洗手液及其制备方法。

背景技术

“病从口入”人人皆知，而病从口入的媒介是手。大量资料显示，保持手卫生是有效预防、控制病原体传播，降低医院感染发生率的最基本、最简单且行之有效的手段。

医院感染是医疗卫生领域不可忽视的重要环节，现已成为严重的社会问题。在日常医疗诊治和护理活动的过程中，90％以上的医疗工作由医务人员的手完成。

手的清洗与消毒是防止医院感染的最重要措施之一。据报道，医务人员手上革兰阴性杆菌携带率为20-30％，25-68％普通病房护土手上分离到金黄色葡萄球菌，而烧伤病房或监护病房工作人员可高达80％或更多。在临床护理中，护理人员的双手每分钟可获得16cfu/cm²的细菌；医务人员做一个简单的操作(如把病人从床上扶起来；测量血压或脉搏；接触病人的手；给病人翻身；接触病人的衣服或床单；接触床头柜、床垫、输液泵等)都可以使手上的细菌增加100-1000cfu/cm²的细菌。因为空气中很少传播革兰阴性杆菌，大多数革兰阴性菌引起的医院感染都是通过医务人员手为媒介传给病人，由此导致的医院感染事件屡见不鲜。

研究表明，医务人员每日坚持高质量的洗手消毒可使医院感染发生率降低25-50％；当洗手率从48％上升到60％，医院感染相应从16.9％下降到9.9％，因此，手卫生是减少医院感染最简单最有效、最经济的方法。

除了在医院感染方面具有简单有效的作用外，对于一些特殊人群加强手卫生同样具有特别的意义。医务人员的手上带菌量10⁸cfu/cm²一般不致病，但对免疫功能低下的病人来说10³cfu/cm²甚至更少也可致病。手卫生能预防小儿皮肤感染、眼部感染、肠道寄生虫病、SARS和禽流感等威胁儿童健康的疾病。五岁以下儿童死亡的主要原因是肺炎与腹泻，每年全球有超过350万儿童因为这两种疾病而离开人世，而一次日常的手部清洁就能挽救这些儿童的生命。

手卫生在各种指南和评审标准中均有明显要求：2007年，由WHO咨询专家组、WHO顾问委员会和手卫生项目起草组共同编写的《WHO医疗机构手卫生指南》颁布了最终稿，该“指南”共分5部分，包括有关手卫生科学数据的回顾，推荐条款，结果的评价。自2009年12月1日起，国家***制定颁布了《医务人员手卫生规范》，明确规定了医务人员手卫生的管理与基本要求、手卫生设施、洗手与卫生手消毒、外科手消毒、手卫生效果的监测等。《三级综合医院评审标准》中也明确要求“消毒物品、物体表面、手、空气现场采样检验要达到规定的要求”。同时，各医院也制定了相关的洗手规范，要求医护人员上岗前必须经过一定的洗手技能培训。

同时，不仅仅在医疗行业，手部卫生也关系到许许多多与人们日常生活卫生相关的行业，如婴幼儿产业、餐饮业、食品业、旅游业等。在一次食品从业人员手卫生情况的调查中，食品从业人员洗手后平均细菌总数及大肠菌群阳性数较洗手前有明显降低，大肠菌群阳性人数也显著减少。可见，手卫生可以从源头大大减少食品的安全隐患。

手卫生包括流动水消毒、外科手消毒和卫生手消毒，其中当医务人员在操作之间，或者是在接触两个不同的患者之间，不太方便采用流动水洗手的时候，可以采用卫生手消毒的方法。

传统的检测方法是洗手后进行微生物采样检测，但该法所需时间较长，且繁琐复杂，不宜日常使用。因此，探索一种可靠的效果检测方法和相关标准至关重要。

张志云等公开了一种医护人员洗手技能的测试装置(专利公开号：CN209102605U)，该测试装置包括荧光剂喷射部分(超声波雾化器--朝向测试人员双手喷射荧光剂气雾)和检测部分(暗箱--设有紫外灯和摄像装置)；其使用方法如下：①洗手前，测试者将双手进入荧光剂喷射部分；②在紫外灯的照射下，确认双手沾染荧光并摄片③双手进行一定的规定时间的清洗；④在紫外灯照射下，观察测试者双手是否有蓝光以及蓝光的强度和分布。该种方法可进行多个检测结果的对比，也可以对每个测试者洗手前后的拍摄照片进行对比，以此快速地对测试者清洗双手的技能进行测试，并可以留有电子记录使测试者知道自己清洗后双手往往容易存在污染物的位置。

宫清松等公开了一种洗手检测仪(专利公开号：CN203881683U)，该仪器外壳上部设有一卡槽与电脑相连接，下部左右两边分别设有对称的进手孔，外壳内置有紫外荧光灯、摄像头；其使用方法如下：①双手均匀涂抹胶状荧光标志物；②按照消毒技术洗手规范洗手；③双手通过进手孔置于洗手检测仪内，开启洗手检测仪，在紫外荧光灯的照射下摄像头拍下双手照片并传到电脑；④通过电脑照片上是否显示荧光点判断洗手效果。

德国波恩大学申请公开了一种运输容器和照明的组合装置(专利公开号：DE202006011931U1)，该组合装置包括外部容器和灯座；外部容器包括非反射侧壁(外部运输容器的墙壁是哑光黑色的，以避免光线的不必要反射)，而非反射侧壁具有用于***手的开口，为了避免眼睛受损，外部运输容器顶部的观察孔覆盖有丙烯酸玻璃，灯座具有布置在盖的内侧的光源。本组合装置用于演示和量化减少荧光标记的测试污垢的有效性，特别是洗手，尤其是日托中心及学校等场所的培训。

如何在现场能简单方便且有效地检测洗手效果是本领域技术人员亟需解决的关键技术问题。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明提供了一种荧光素纳米微球洗手液及其制备方法。

为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种荧光素纳米微球洗手液，其特征在于，包括荧光素纳米微球和药学上可接受的载体或助剂。

详细地，荧光素是一种合成有机化合物，在蓝光或紫外线照射下，可发出绿色荧光。

在目前研究领域中，常用的荧光素有异硫氰酸荧光素(fluoresceinisothiocyanate，FITC)、藻红蛋白(P-phycoerythrin，PE)等，主要用于：

1)氧化还原指示剂，可与ATP形成荧光素腺苷复合物，后与荧光素酶结合；在氧化还原过程中，激活荧光素发光，可用于活的物质的检出和微量物质的定量分析；如荧光光度计计量。

2)荧光吸附指示剂。

3)酸碱滴定指示剂；用于滴定氯、溴、碘。

4)防冻液重要的颜料；可使防冻液呈现绿色荧光。

5)其他：化学分析指示剂、生物染色剂、化妆品着色剂等。

与荧光素相比，荧光素纳米微球的尺寸大小与细菌或病毒的大小一致，可更好地模仿病原体；荧光素纳米微球的荧光强度更强，且敏感度更高；荧光素在空气中暴露过久易淬灭，保质期约为1年，而该荧光素纳米微球保质期较长，更为稳定，在生产、存储、运输和应用过程中更为方便。

在上述技术方案中，所述荧光素纳米微球洗手液包括如下重量百分比的成分：

荧光素纳米微球在一定条件下与洗手液配方中的其他原料成分互溶，各成分混合所制备而成的洗手液可在特定波长灯源下检测，根据手中荧光亮度分布判断手消毒效果，提供一种可靠的广为医疗行业采纳的效果检测标准，同时可拓展到食品业、幼儿园、疫区等。

具体地，在上述技术方案中，所述荧光素纳米微球由荧光素和表面包含多个结合位点的纳米微球组成，所述荧光素纳米微球的直径为5nm-1000μm。

详细地，在上述技术方案中，所述荧光素为异硫氰酸荧光素和量子点中的一种。

详细地，在上述技术方案中，所述纳米微球由纳米核和表面包含多个结合位点的外壳构成，所述纳米核为SiO₂或Fe₃O₄@SiO₂，所述外壳包括氨基(-NH₃)和胶体金。

优选地，在上述技术方案中，所述荧光素与纳米微球的质量比为1:8-15。

进一步地，在上述技术方案中，所述荧光素纳米微球洗手液还包括防腐剂和香精,所述防腐剂和香精的重量百分比含量分别为0.1-0.2％和0.1-0.2％。

详细地，在上述技术方案中，所述富脂剂为甘油酸酯、甘油椰油酸酯、肉豆蔻酸异丙酯、甘油椰油基聚乙二醇酯、辛基羟基硬脂酸酯、聚季铵盐-7、甘油和泛醇中的一种或多种。

详细地，在上述技术方案中，所述润肤保湿剂为液体石蜡、甘油、丙二醇、山梨醇、聚乙二醇、丁二醇、木糖醇、乙醇、异丙醇、丙三醇及烷基糖苷中的一种或多种。

详细地，在上述技术方案中，所述黏度调节剂为NaCl、NH₄Cl和KCl中的一种或多种。

详细地，在上述技术方案中，所述防腐剂为苯甲酸钠、石碳酸、DL606、甲基氯异噻唑啉酮、对羟基苯甲酸酯和凯松中的一种或多种。

本发明另一方面还提供了上述荧光素纳米微球洗手液的制备方法，包括：

按比例分别称取荧光素纳米微球、富脂剂、润肤保湿剂、黏度调节剂、防腐剂和香精，备用；将荧光素纳米微球加入到润肤保湿剂中，随后边搅拌边加入富脂剂和黏度调节剂，搅匀后置于研磨机中研磨，最后加入防腐剂和香精，混合均匀即得荧光素纳米微球洗手液。

具体地，在上述技术方案中，所述研磨的时间大于12h。

本申请所提供的荧光素纳米微球洗手液所采用的原理如下：由富脂剂、润肤保湿剂、黏度调节剂、防腐剂及香精等成分组成的液体中溶解荧光素纳米微球，该荧光素纳米微球可在特定波长的光源下显现荧光，其使用方法如下：1)取3-4ml荧光素纳米微球洗手液于手中；2)按照消毒技术洗手规范进行快速手消毒；3)将双手放置在特定波长的光源下照射，根据手中荧光亮度分布判断手的消毒效果，若手部清洗不彻底，荧光素纳米微球将在手上分布不均，手的某些部位分布很少甚至缺如；若荧光素纳米微球在手上均匀分布，则证明快速手消毒操作规范，手消毒彻底；4)使用配套洗手液在流水下清洗双手；5)再次将双手放置在特点波长的光源下照射，若显现残留荧光，则证明洗手操作不规范，洗手未洗净；若观察不到荧光残留，则证明洗手操作规范，洗手已洗净。

本发明的优点：

(1)本发明所提供的荧光素纳米微球洗手液所采用的荧光素纳米微球的尺寸大小为5nm-1000μm与细菌或病毒的大小一致，可更好地模仿病原体；

(2)本发明所提供的荧光素纳米微球洗手液所采用的荧光素纳米微球与单一荧光素相比，荧光强度更强，且敏感度更高；

(3)本发明所提供的荧光素纳米微球洗手液所采用的荧光素纳米微球在一定条件下与含量配方中的其他原料成分互溶，各成分混合所制备而成的洗手液可在特定波长灯源下检测，根据手中荧光亮度分布判断手消毒效果，提供一种可靠的广为医疗行业采纳的效果检测标准，同时可拓展到食品业、幼儿园、疫区等。

附图说明

图1为本发明实施例中荧光素纳米微球洗手液的使用方法示意图；

图2为本发明实施例2所制得的异硫氰酸荧光素纳米微球洗手液与等浓度的对比例1所制得的异硫氰酸荧光素洗手液在特定波长光源照射下的荧光效果对照图；

图3为本发明实施例2所制得的异硫氰酸荧光素纳米微球洗手液与等浓度的对比例1所制得的异硫氰酸荧光素洗手液在在日光下照射1h前后的荧光变化对照图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的保护范围，本发明的保护范围以权利要求书为准。

若未特别指明，本发明实施例中所用的实验试剂和材料等均可市售获得。

若未具体指明，本发明实施例中所用的技术手段均为本领域技术人员所熟知的常规手段。

实施例1异硫氰酸荧光素纳米微球的制备

S1、称取0.1080g异硫氰酸荧光素，加入1.5mL二甲基亚砜(DMSO)溶解，配置成终浓度为10mg/mL的FITC；

S2、15mL Ep管中加入9mL乙腈，100mg SiO₂-NH₂及1mL FITC，超声分散10min(Amplitude＝50％)，置于摇床上震荡过夜；

S3、离心，弃上清；

S4、Ep管加入乙腈，置于摇床上震荡15min，洗涤，离心，弃上清，重复本步骤3-5次；

S5、取最后一次洗涤液，在紫外下照射，无明显荧光则洗涤干净，否则重复上一步操作流程；

S6、在70℃真空干燥箱中干燥1.5h。

实施例2异硫氰酸荧光素纳米微球洗手液的制备

1、配方

2、制备方法

按配比分别称取上述各原料，备用；将荧光素纳米微球加入到润肤保湿剂中，随后边搅拌边加入富脂剂和黏度调节剂，搅匀后置于研磨机中研磨12h，最后加入防腐剂和香精，混合均匀即得荧光素纳米微球洗手液。

对比例1异硫氰酸荧光素洗手液的制备

1、配方

2、制备方法

按配比分别称取上述各原料，备用；将荧光素加入到润肤保湿剂中，随后边搅拌边加入富脂剂、黏度调节剂和pH调节剂，搅匀后置于研磨机中研磨12h，最后加入防腐剂和香精，混合均匀即得荧光素纳米微球洗手液。

具体地，使用本发明实施例所制备的荧光素纳米微球洗手液洗手的方法如图1所示，具体包括：

1)取3-4ml荧光素纳米微球洗手液于手中；

2)按照消毒技术洗手规范进行快速手消毒；

3)将双手放置在特定波长的光源下照射，根据手中荧光亮度分布判断手的消毒效果，若手部清洗不彻底，荧光素纳米微球将在手上分布不均，手的某些部位分布很少甚至缺如；若荧光素纳米微球在手上均匀分布，则证明快速手消毒操作规范，手消毒彻底；

4)使用配套洗手液在流水下清洗双手；

5)再次将双手放置在特点波长的光源下照射，若显现残留荧光，则证明洗手操作不规范，洗手未洗净；若观察不到荧光残留，则证明洗手操作规范，洗手已洗净。

效果对比验证

分别称取一定量实施例2和对比例1所制备的洗手液，稀释对比例1所制备的洗手液使其异硫氰酸荧光素含量与实施例1所制备的洗手液中异硫氰酸荧光素含量相同；取等量实施例2制备的异硫氰酸荧光素纳米微球洗手液及稀释后的对比例1所制备的异硫氰酸荧光素洗手液，在特定波长光源下照射，比较其荧光效果，结果如图2所示，随后，在日光下直接照射1h，观察荧光强度变化，结果如图3所示。

图2(A)为实施例2制备的异硫氰酸荧光素纳米微球洗手液在特定波长光源下照射下荧光效果，图2(B)为稀释后的对比例1所制备的异硫氰酸荧光素洗手液在特定波长光源下照射下荧光效果，对比可知，在异硫氰酸荧光素含量相同的情况下，异硫氰酸荧光素纳米微球洗手液的荧光强度更强。

图3(a)和(b)分别为实施例2制备的异硫氰酸荧光素纳米微球洗手液在日光下直接照射1h前和后所观察到的荧光强度变化结果，图3(c)和(d)分别为稀释后的对比例1所制备的异硫氰酸荧光素洗手液在日光下直接照射1h前和后所观察到的荧光强度变化结果，从图中可以看出，在强光照射1h后，异硫氰酸荧光素纳米微球洗手液荧光依旧可见，且变化不大，而异硫氰酸荧光素洗手液的荧光有所减弱，说明异硫氰酸荧光素纳米微球的荧光淬灭较少，相应地意味着同等条件下保存的半衰期较长。

最后，以上仅为本发明的较佳实施方案，并非用于限定本发明的保护范围。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。