阅读说明：本技术 一种促进北美冬青组培苗生根方法 (Method for promoting rooting of ilex verticillata tissue culture seedlings ) 是由 陈庆生 张敏 周鹏 黄婧 宋倩云 于 2019-10-07 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种北美冬青组培微插穗直接生根方法,其主要是解决现北美冬青组培苗生根存在培养程序多、成活率低、周期长等的技术问题。包括以下步骤：(1)瓶苗选择；(2)炼苗；(3)组培苗瓶外扦插；(4)扦插后管理。本发明建立了有效的北美冬青组培苗瓶外生根技术,优化了其组培快繁体系。该技术无需经过组培瓶内生根程序,生根和驯化同时进行,25~30d幼苗基部长出大量根系。2个月后得到健壮的生根苗。与传统瓶内生根相比,育苗周期缩短1个月以上,生根率大于93%,移栽成活率大于95%,能够降低生产成本40%左右,节省组培空间50%以上,对于北美冬青组培集约化生产具有重要意义。(The invention relates to a method for directly rooting tissue culture micro cuttings of ilex verticillata, which mainly solves the technical problems of multiple culture procedures, low survival rate, long period and the like existing in the rooting of tissue culture seedlings of ilex verticillata. The method comprises the following steps: (1) selecting bottle seedlings; (2) hardening seedlings; (3) cuttage is carried out outside a tissue culture seedling bottle; (4) and (5) managing after cuttage. The invention establishes an effective ilex verticillata tissue culture seedling ex-vitro rooting technology and optimizes a tissue culture and rapid propagation system thereof. The technology does not need a rooting procedure in a tissue culture bottle, rooting and domestication are carried out simultaneously, and a large number of root systems grow on the base of the seedling within 25-30 d. After 2 months, robust rooted seedlings are obtained. Compared with the traditional bottle rooting, the seedling culture period is shortened by more than 1 month, the rooting rate is more than 93%, the transplanting survival rate is more than 95%, the production cost can be reduced by about 40%, the tissue culture space is saved by more than 50%, and the method has important significance for tissue culture intensive production of the ilex verticillata.)

一种促进北美冬青组培苗生根方法

技术领域

本发明涉及北美冬青的育苗方法，具体地说是涉及北美冬青组培苗快速瓶外生根的方法。

背景技术

北美冬青（Ilex verticillata）为冬青科冬青属植物，冬季落叶后，枝头上红果更显喜庆艳丽，是著名的切枝树种，市场名为“红豆”。红豆的上市时间约为每年的11月底到元旦前后，非常能衬托在元旦、圣诞节、元宵节、情人节等节日气氛，在我国的市场认可度非常高。目前国内北美冬青切枝生产尚处于初步阶段，每年我国均需大量进口。

国内外学者已在北美冬青种质资源收集和优良品种选育方面开展了大量研究工作，而扦插和组织培养是良种繁育最主要的方式。课题组前期研究发现，北美冬青属于难生根树种，生根慢且扦插繁殖成苗率低于50%，无法在短期内获得大量无性系苗木。因此，组织培养已成为北美冬青良种快繁的重要手段，其中，试管苗生根是组织快繁的必经过程。目前，北美冬青试管苗生根仍采用传统的瓶内生根，存在生产成本高、育苗周期长（在瓶内生根和移栽共需60 d）、移栽成活率低（组培瓶内生根苗根系弱少且活力弱，移栽成活率低于70%）等问题。，因此，如何提高组培苗生根移栽效率成为北美冬青规模化繁育的重要研究方向。

发明内容

发明目的：本发明提供了一种北美冬青组培微插穗直接生根的方法，将组培与扦插繁殖相结合，相比瓶内生根，该技术不仅可以减少一次无菌操作的步骤，简化组培程序，提高培养空间，还能降低生产成本，提高生根效率，为北美冬青优良品种规模化快繁提供技术支撑；同时，相比普通扦插，因组培微插穗经过组培幼化后分生能力增强，可有效地提高插穗的生根能力。

技术方案：为实现上述目的，本发明采用了以下的技术方案，一种促进北美冬青组培苗生根的方法，包括以下步骤：

（1）瓶苗选择：选择长势良好的北美冬青组培苗，高度在8-10 cm左右，枝条健壮，进行炼苗驯化；

（2）炼苗：先将北美冬青组培苗放置炼苗室，炼苗室以散射光为主，光照强度为3000-4000 Lux，温度控制在15-25°C，培养5-7天后，打开瓶盖，在炼苗室继续培养2-3天；

（3）组培苗瓶外扦插：将幼苗从瓶内取出，洗净粘在植株基部的培养基，按单株剪下，摘除底部发黄破损叶片；每株剪成3-4 cm带芽茎段，扦插前蘸取生根水，扦插深度以1-1.5公分，其中扦插的基质选用泥炭；扦插过程中不时的喷洒水分，以保障幼苗不枯萎；

（4）扦插后管理：扦插完毕后浇透水，控制在80%左右，在幼苗上方用保鲜膜支一小棚，培养1-2周后撤棚，每隔三天浇一次水，每两周喷一次叶面肥，每月喷一次杀菌剂。25~ 30 d幼苗基部长出大量根系。2个月后得到健壮的北美冬青苗，并移栽至营养钵内进行种植。

作为优选，步骤（3）中生根水采用ABT生根粉1 号，浓度为800-1000 ppm，蘸取时间为5秒，浸泡组培苗基部1~2 cm。每升生根剂溶液的配制方法：将800-1000 mg ABT生根粉用少量乙醇溶解，用清水定容至1 L；

作为优选，步骤（3）中扦插容器选用塑料育苗盘，基质占育苗盘3/4体积。

作为优选，步骤（3）中的泥炭用800倍多菌灵处理消毒；800倍的多菌灵为：取浓度50%的多菌灵1 g用800 mL的水稀释所得。

作为优选，步骤（4）培养温度控制在20~25℃，湿度保持85%以上，光强为1500~2000Lux，光照时间为16h/d。

作为优选，步骤（4）中叶面肥为花朵朵和班博尔两种不同的交替使用，杀菌剂为0.1 % 的多菌灵和百菌清混合药剂。

本发明采用组培微插穗直接生根技术来进行生根试验，将组培与扦插繁殖相结合，该技术不仅可以减少一次无菌操作的步骤，简化组培程序，提高培养空间，还能降低生产成本，提高生根效率，相比瓶内生根，该技术不仅可以减少一次无菌操作的步骤，简化组培程序，提高培养空间，还能降低生产成本，从而提高生根效率；同时，相比普通扦插，因组培微插穗经过组培幼化后分生能力增强，可有效地提高插穗的生根能力，能够显著提高组培苗生根率，且由于根系发达移栽后成活率也明显提高，从而解决组培工厂化育苗生根的难题。

本发明专利结合多年的研究和生产经验，总结了北美冬青组培苗瓶外生根技术，与瓶内生根相比，该技术是瓶内快速繁殖与扦插技术相结合的繁殖方法，继代增殖苗经过处理后，通过在有菌和自养环境中直接进行移栽生根，有效地将试管苗生根和驯化结合起来，能够简化组培程序，降低生产成本40%以上，节省组培空间50%以上，缩短组培育苗周期1个月以上，从而提高生根效率；同时，相比普通扦插，因组培微插穗经过组培幼化后分生能力增强，可有效地提高插穗的生根能力，能够显著提高组培苗生根率和移栽后成活率，对北美冬青组培快繁体系的优化具有重要技术意义。

有益效果：本发明相对于现有技术而言具有以下优势：

本发明为北美冬青组培苗快速瓶外生根提供了一种可参照的技术和方法，具有以下优点：

1、本发明与常规的组织培养方法相比，省去了瓶内生根环节，育苗周期缩短1个月以上，操作简便，实用性强；

2、本发明中生根和驯化同时进行，生根率大于98%，根系发达，幼苗生长健壮，移栽成活率大于95%，成苗一致性好；

3、本发明中的瓶外生根技术能够降低生产成本40%左右，节省组培空间50%以上，对于北美冬青组培产业化水平提升具有重要意义。

具体实施方式

下面将结合具体实例，详细说明本发明的具体实施方式：

实施例1：一种北美冬青组培微插穗直接生根的方法，该方法按如下步骤进行：

（1）瓶苗选择：选择长势良好的北美冬青组培苗，高度在8-10 cm左右，枝条健壮，进行炼苗驯化；

（2）炼苗：先将北美冬青组培苗放置炼苗室，炼苗室以散射光为主，光照强度为4000Lux，温度控制在15°C，培养5天后，打开瓶盖，在炼苗室继续培养2天；

（3）组培苗瓶外扦插：将幼苗从瓶内取出，洗净粘在植株基部的培养基，按单株剪下，摘除底部发黄破损叶片；每株剪成3-4 cm带芽茎段，扦插前蘸取生根水，生根水采用ABT生根粉1 号，浓度为800 ppm，蘸取时间为5秒，扦插深度以1-1.5公分，其中扦插的基质选用泥炭；扦插过程中不时的喷洒水分，以保障幼苗不枯萎；

（4）扦插后管理：扦插完毕后浇透水，控制在80%左右，在幼苗上方用保鲜膜支一小棚，培养1-2周后撤棚，每隔三天浇一次水，每两周喷一次叶面肥，每月喷一次杀菌剂。25~ 30 d幼苗基部长出大量根系。一个月后统计发现，生根率达93.5％，平均根数16.9条，最长根长4.55 m，株高3.05 cm，鲜重0.225 g。2个月后得到健壮的北美冬青苗，并移栽至营养钵内进行种植，移栽成活率95.5%。

实施例2：一种北美冬青组培微插穗直接生根的方法，该方法按如下步骤进行：

（1）配制生根剂：

每升生根剂溶液的配制方法如下：将500 mg ABT生根粉1 号用少量乙醇溶解， 用清水定容至1 L；

（2）移栽基质准备：将泥炭装入塑料育苗盘育中，浇透水备用；基质每立方用20 g 50%多菌灵可湿性粉剂进行消毒杀菌；

（3）瓶苗选择：选择长势良好的北美冬青组培苗，高度在8-10 cm左右，枝条健壮，进行炼苗驯化；

（4）炼苗：先将北美冬青组培苗放置炼苗室，炼苗室以散射光为主，光照强度为3000Lux，温度控制在25°C，培养7天后，打开瓶盖，在炼苗室继续培养3天；

（5）组培苗瓶外扦插：将幼苗从瓶内取出，洗净粘在植株基部的培养基，按单株剪下，摘除底部发黄破损叶片；每株剪成3-4 cm带芽茎段，扦插前蘸取生根水，扦插深度以1-1.5公分；扦插过程中不时的喷洒水分，以保障幼苗不枯萎；

（6）扦插后管理：扦插完毕后浇透水，控制在80%左右，在幼苗上方用保鲜膜支一小棚，培养1-2周后撤棚，每隔三天浇一次水，每两周喷一次叶面肥，每月喷一次杀菌剂。25~ 30 d幼苗基部长出大量根系。一个月后统计发现，生根率达94.0％，平均根数19.0条，最长根长4.42 m，株高3.24 cm，鲜重0.272 g。2个月后得到健壮的北美冬青苗，并移栽至营养钵内进行种植，移栽成活率94.7%。

实施例3：一种北美冬青组培微插穗直接生根的方法，该方法按如下步骤进行：

（1）瓶苗选择：选择长势良好的北美冬青组培苗，高度在8-10 cm左右，枝条健壮，进行炼苗驯化；

（2）炼苗：先将北美冬青组培苗放置炼苗室，炼苗室以散射光为主，光照强度为3500Lux，温度控制在20°C，培养6天后，打开瓶盖，在炼苗室继续培养2天；

（3）组培苗瓶外扦插：将幼苗从瓶内取出，洗净粘在植株基部的培养基，按单株剪下，摘除底部发黄破损叶片；每株剪成3-4 cm带芽茎段，扦插前蘸取生根水，生根水采用ABT生根粉1 号，浓度为900 ppm，蘸取时间为5秒，扦插深度以1-1.5公分，其中扦插的基质选用泥炭；扦插过程中不时的喷洒水分，以保障幼苗不枯萎；

（4）扦插后管理：扦插完毕后浇透水，控制在80%左右，在幼苗上方用保鲜膜支一小棚，培养1-2周后撤棚，每隔三天浇一次水，每两周喷一次叶面肥，每月喷一次杀菌剂。25~ 30 d幼苗基部长出大量根系。一个月后统计发现，生根率达95.7％，平均根数18.2条，最长根长4.62 m，株高3.11 cm，鲜重0.229 g。2个月后得到健壮的北美冬青苗，并移栽至营养钵内进行种植，移栽成活率96.6%。

以上以较佳实例公开了本发明，然其并非用以限制本发明，凡采用等同替换或等效变换方式获得的技术方案，均落在本发明的保护范围之内。