阅读说明：本技术 一种软糖中胭脂红酸的提取纯化方法 (Method for extracting and purifying carminic acid in soft sweets ) 是由 杨祖伟 苏杜威 陈绮梦 魏鲜娥 李珍 黄进丽 吴小翠 苏昭伦 叶少文 于 2019-11-15 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种软糖中胭脂红酸的提取纯化方法,包括：(1)将样品加入水,在70～80℃条件下加热,使样品溶解,依次加入饱和硫酸钠溶液和稀酸溶液,混匀,得到样品溶液；(2)将样品溶液离心,离心液加入到装有聚酰胺的层析柱中；(3)用洗涤液洗脱层析柱,再用水洗脱层析柱至洗脱液呈中性,弃去洗脱液；(4)再用解析液分多次洗脱层析柱,收集洗脱液,加入磷酸溶液,即得。本发明针对软糖类产品,将胭脂红酸在酸性环境下用聚酰胺粉吸附除杂,用解析液洗脱后,可将糖类等复杂基质与胭脂红酸有效分离,得到纯度高的胭脂红酸提取液,解决了软糖中胭脂红酸含量较低导致的检测不准确的问题,从而实现软糖中胭脂红酸含量的准确检测。(The invention discloses a method for extracting and purifying carminic acid in soft sweets, which comprises the following steps: (1) adding water into a sample, heating at 70-80 ℃ to dissolve the sample, sequentially adding a saturated sodium sulfate solution and a dilute acid solution, and uniformly mixing to obtain a sample solution; (2) centrifuging the sample solution, and adding the centrifugate into a chromatographic column filled with polyamide; (3) eluting the chromatographic column with a washing solution, eluting the chromatographic column with water until the eluent is neutral, and discarding the eluent; (4) eluting the chromatographic column with resolving liquid for multiple times, collecting eluate, and adding phosphoric acid solution. Aiming at the soft sugar products, the carminic acid is adsorbed by polyamide powder to remove impurities in an acidic environment, and after the adsorption and the elution are carried out by using the analytic liquid, the complex matrixes such as the sugar and the like can be effectively separated from the carminic acid to obtain the carminic acid extracting solution with high purity, so that the problem of inaccurate detection caused by low content of the carminic acid in the soft sweets is solved, and the accurate detection of the content of the carminic acid in the soft sweets is realized.)

一种软糖中胭脂红酸的提取纯化方法

技术领域

本发明属于保健品、食品技术领域，具体涉及一种软糖中胭脂红酸的提取纯化方法。

背景技术

胭脂虫红是从胭脂虫体内提取的一种天然色素，调呈粉红至紫红，它是一种蒽醌类天然色素，与其他天然色素不同，其理化性质非常稳定，被视作最安全的天然色素，可用作酒、水果浆、冷饮等饮料、糖果、糕点以及肉类、香肠等的着色剂。《GB 2760-2014 食品安全国家标准食品添加剂使用标准》对胭脂虫红的添加量做了规定，其添加量需要以胭脂红酸计。

目前已报道的胭脂红酸的检测方法主要有分光光度法、薄层色谱法及高效液相色谱法等。分光光度法在检测过程中，所求的是单一波长下总的吸光度，不能排除有非胭脂红酸在此波长也有吸收，影响测定结果的准确性，且分析测定也较费时。而高效液相色谱法容易受到食品中复杂基质的干扰，应用受限。目前的高效液相色谱法仅对样品作简单处理，实际检测中面对糖类等复杂基质的样品无法有效分离胭脂红酸，难于定性，且容易堵塞色谱柱，导致色谱柱寿命大大降低。同时，软糖类样品中胭脂红酸的含量非常低，若仅简单处理，则无法有效检出胭脂红酸，难以起到控制的目的。

发明内容

为了克服上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种软糖中胭脂红酸的提取纯化方法，该方法可将糖类等复杂基质与胭脂红酸有效分离，提高了胭脂红酸含量检测的准确性。

本发明是通过以下技术方案实现：

一种软糖中胭脂红酸的提取纯化方法，包括如下步骤：

（1）将软糖样品加入水，在70～80℃条件下加热，使样品溶解，依次加入饱和硫酸钠溶液和稀酸溶液，混匀，得到样品溶液；所述稀酸为柠檬酸或甲酸；

（2）将样品溶液离心，离心液加入到装有聚酰胺的层析柱中；

（3）用洗涤液洗脱层析柱，再用水洗脱层析柱至洗脱液呈中性，均弃去洗脱液；所述洗涤液为含有体积比为（0~4）：（1~3）：（18~30）的饱和硫酸钠溶液、柠檬酸溶液和水的混合水溶液；

（4）再用解析液分多次洗脱层析柱，收集洗脱液，加入磷酸溶液，即得胭脂红酸提取液；所述解析液为含有体积比为（0.8~1.2）：（8~12）：（36.8~41.2）的氨水、乙醇和水的混合水溶液。

作为优选，步骤（1）中，以g/ml计，所述软糖样品、水、饱和硫酸钠溶液和稀酸溶液的比例为（0.1~5）g：（8~30）ml：（0~4）ml：（0.4~3）ml。

作为优选，步骤（1）和步骤（2）中，所述柠檬酸的质量浓度为0.8%~1.2%。

作为优选，步骤（2）中，所述离心的转速为6000~8000r/min，离心时间为3~5min。

作为优选，步骤（1）中，依次加入饱和硫酸钠溶液和稀酸溶液这两种溶剂后，需要保证样品溶液不产生凝固和凝胶状物质，离心后，离心液澄清且流动性良好，能顺利通过装有聚酰胺粉的层析柱（流速＞0.5滴/S）；若无法达到要求，步骤（2）中，则需要将样品溶液先经无水乙醇溶解后，再离心，得到离心液和残渣，离心液加入到装有聚酰胺的层析柱中进行洗脱。

进一步优选地，所述残渣用体积浓度为60~70%乙醇洗涤1-2次，合并离心液和乙醇洗涤液，于60~80℃条件下减压浓缩，得到浓缩液，用柠檬酸溶液将浓缩液转移到装有聚酰胺的层析柱中进行洗脱。

作为优选，步骤（2）中，所述聚酰胺的粒径为100-200目，层析柱规格为10mm×250mm，带旋塞，聚酰胺粉末用少量1%柠檬酸溶液分散，转移至层析柱中。

作为优选，步骤（4）中，所述磷酸溶液的体积浓度为3%~4%。

本发明与现有技术相比，具有如下有益效果：

本发明针对软糖类产品，提供了一种软糖中胭脂红酸的提取纯化方法，将胭脂红酸在酸性环境下用聚酰胺粉吸附除杂，用解析液洗脱后，可将糖类等复杂基质与胭脂红酸有效分离，得到纯度高的胭脂红酸提取液，解决了软糖中胭脂红酸含量较低导致的检测不准确的问题，从而实现软糖中胭脂红酸含量的准确检测。

具体实施方式

下面通过具体实施方式来进一步说明本发明，以下实施例为本发明具体的实施方式，但本发明的实施方式并不受下述实施例的限制。

本发明的原料均来源于市购。

实施例1：针叶樱桃维C软糖中胭脂红酸的提取纯化

（1）将针叶樱桃维C软糖样品3g加入水20mL，在70℃条件下水浴加热，使样品溶解，依次加入4mL饱和硫酸钠溶液和2mL 1%柠檬酸溶液，混匀，得到样品溶液；

（2）将样品溶液8000r/min离心5min，离心液加入到装有聚酰胺的层析柱中（称取聚酰胺粉0.5g，用少量1%柠檬酸溶液分散，转移至层析柱中），用10ml洗涤液洗脱层析柱，再用水洗脱层析柱至洗脱液呈中性，均弃去洗脱液；所述洗涤液为饱和硫酸钠溶液4mL和1%柠檬酸溶液1mL，加水至25mL的混合水溶液；

（3）再用9mL解析液分多次洗脱层析柱，收集洗脱液，加入0.5mL 3%的磷酸溶液，即得胭脂红酸提取液；所述解析液为1mL氨水和10mL乙醇，加水至50mL的混合水溶液。

实施例2：针叶樱桃维C软糖中胭脂红酸的提取纯化

（1）将针叶樱桃维C软糖样品3g加入水10mL，在70℃条件下水浴加热，使样品溶解，依次加入1mL饱和硫酸钠溶液和0.5mL 1%甲酸溶液，混匀，得到样品溶液；

（2）将样品溶液加无水乙醇至50mL，迅速混匀，8000r/min离心5min，得到离心液和残渣；残渣用体积浓度为70%乙醇洗涤2次，每次5 mL，合并离心液和乙醇洗涤液，于60~80℃条件下减压浓缩至约5mL，得到浓缩液；用15mL1%柠檬酸溶液分次将浓缩液转移至装有聚酰胺的层析柱（称取聚酰胺粉0.5g，用少量1%柠檬酸溶液分散，转移至层析柱中）中，先用1%柠檬酸溶液洗脱至流出液无色，再用水洗至流出液呈中性，均弃去洗脱液；

（3）再用9mL解析液分多次洗脱层析柱，收集洗脱液，加入0.4mL 3%的磷酸溶液，即得胭脂红酸提取液；所述解析液为1.2mL氨水和8mL乙醇，加水至50mL的混合水溶液。

对比例1：（参照CN201510545167.0方法）

取针叶樱桃维C软糖样品3g，加水10mL，在70℃条件下水浴加热，使样品溶解，加水定容，微孔滤膜过滤，待测。

对比例2：

取针叶樱桃维C软糖样品3g，加入30 mL乙醇/氨水/水（7：2：1）混合液，超声提取30min，第二次加入20 mL混合液超声提取30min，合并提取液，水浴蒸干，用pH=9.0的氨水溶液定容，过滤，待测。

将实施例1-2和对比例1-2制备得到的供试液采用高效液相色谱测定，其中，色谱条件为：色谱柱：LC Column C18色谱柱（250 mm ×4.6mm，4µm）；流动相：流动相A：取磷酸二氢钾6.80g，加1000mL水溶解，用磷酸调pH至3.0；流动相B：乙腈，流速：1.0mL/min，柱温：35℃，波长：494nm；按下表1梯度洗脱，检测结果表2所示：

表1 梯度洗脱表

时间（min）	流动相A（%）	流动相B（%）
			0	95	5
25	75	25
			25.01	95	5
30	95	5

表2 检测结果

	理论含量	检测含量
			实施例1	2.6mg/kg	2.7mg/kg
实施例2	2.6mg/kg	2.5mg/kg
			对比例1	2.6mg/kg	无法检测
对比例2	2.6mg/kg	未检出

由上表2结果可以看出，对比例1样品无法过膜，会严重堵塞色谱柱，无法检测；对比例2软糖无法溶于乙醇/氨水/水（7：2：1）混合液中，胭脂红酸无法提取出来，故未检出；本发明将胭脂红酸在酸性环境下用聚酰胺粉吸附除杂，用解析液洗脱后，可将糖类等复杂基质与胭脂红酸有效分离，检测到的胭脂红酸更接近理论值，显示本发明方法可实现软糖中胭脂红酸含量的准确检测。