阅读说明：本技术 自动聚焦方法、血细胞分析仪及计算机可读存储介质 (Automatic focusing method, blood cell analyzer, and computer-readable storage medium ) 是由 郑陆一 胡双 刘蕾 蔡韬 于 2019-11-11 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种自动聚焦方法、血细胞分析仪及计算机可读存储介质,方法包括：启动后复位；向下移动载物台第一预设幅度,根据移动前后图像清晰度,确定下一次方向；以确定方向移动载物台第一预设幅度,根据移动前后图像清晰度、移动方向和预设局部极值阈值,确定下一次方向；以确定方向移动载物台第二预设幅度,根据移动前后图像清晰度、预设局部极值阈值确定是否采用第三预设幅度；若否,继续以第二预设幅度移动载物台；若是,以与最后一次第二预设幅度移动方向的相反方向采用第三预设幅度移动预设次数,根据每次移动后图像和最后一次第二预设幅度移动后图像,获取聚焦图像。本发明解决了爬坡法搜索焦平面不容易找到真正的焦平面的问题。(The invention discloses an automatic focusing method, a blood cell analyzer and a computer readable storage medium, wherein the method comprises the following steps: resetting after starting; downwards moving the objective table by a first preset amplitude, and determining the next direction according to the image definition before and after movement; moving the objective table in a determined direction by a first preset amplitude, and determining the next direction according to the image definition before and after movement, the movement direction and a preset local extreme value threshold; moving the objective table in a determined direction by a second preset amplitude, and determining whether a third preset amplitude is adopted according to the definition of images before and after movement and a preset local extremum threshold; if not, continuing to move the objective table by a second preset amplitude; if so, adopting a third preset amplitude to move for a preset number of times in a direction opposite to the moving direction of the last second preset amplitude, and acquiring a focused image according to the image after each movement and the image after the last second preset amplitude movement. The method solves the problem that the real focal plane is not easy to find when the focal plane is searched by a climbing method.)

自动聚焦方法、血细胞分析仪及计算机可读存储介质

技术领域

本发明涉及血细胞分析仪领域，尤其涉及一种自动聚焦方法、血细胞分析仪及计算机可读存储介质。

背景技术

在显微镜调焦的过程中，当前主要采用爬坡方法来搜索焦平面。但由于样品板表面上不平整以及噪音的因素，使用传统的爬坡法来搜索焦平面，容易陷入局部极值的陷阱中，从而不容易找到真正的焦平面。

发明内容

本发明的主要目的在于提出一种自动聚焦方法、血细胞分析仪及计算机可读存储介质，旨在解决现有技术中采用爬坡方法来搜索焦平面却不容易找到真正的焦平面的问题。

为实现上述目的，本发明提供一种自动聚焦方法，包括步骤：

根据用户输入的启动指令启动复位，并按照第一预设幅度执行向下移动载物台的第一移动操作；

获取第一移动操作前后图像的清晰度，以确定以第一预设幅度执行的第二移动操作的移动方向，并根据确定的移动方向执行第二移动操作，以获取第二移动操作前后图像的清晰度；

根据第二移动操作前后图像的清晰度、第二移动操作的移动方向和预设局部极值阈值，确定以第二预设幅度执行的第三移动操作的移动方向，并按照该移动方向执行第三移动操作，以根据第三移动操作前后图像的清晰度、预设局部极值阈值确定是否将移动操作的幅度更改为小于第二预设幅度的第三预设幅度；

若否，则根据第三移动操作前后图像的清晰度、预设局部极值阈值和包括该第三移动操作并与该第三移动操作的移动方向相同的累计连续移动次数，确定下一次第三移动操作的移动方向，并返回执行按照该移动方向执行第三移动操作的步骤；

若是，则以第三预设幅度以及最后一次第三移动操作的相反移动方向连续执行第四移动操作第一预设次数，并比较每次按照第三预设幅度执行的第四移动操作后的图像和最后一次第三移动操作后的图像，以获取聚焦后的图像。

可选地，所述获取第一移动操作前后图像的清晰度，以确定以第一预设幅度执行的第二移动操作的移动方向的步骤包括：

判断第一移动操作后图像的清晰度是否大于第一移动操作前图像的清晰度；

若是，则确定第二移动操作的移动方向为向下；

若否，则确定第二移动操作的移动方向为向上。

可选地，所述根据第二移动操作前后图像的清晰度、第二移动操作的移动方向和预设局部极值阈值，确定以第二预设幅度执行的第三移动操作的移动方向的步骤包括：

根据第二移动操作前后图像的清晰度，通过预设公式获得第二移动操作后图像的局部极值；

判断第二移动操作后图像的局部极值是否小于负预设局部极值阈值；

若是，则确定第三移动操作的移动方向与第二移动操作的移动方向相反；

若否，则确定第三移动操作的移动方向与第二移动操作的移动方向相同。

可选地，所述根据第三移动操作前后图像的清晰度、预设局部极值阈值确定是否将移动操作的幅度更改为小于第二预设幅度的第三预设幅度的步骤包括：

根据第三移动操作前后图像的清晰度，通过预设公式获得第三移动操作后图像的局部极值；

判断第三移动操作后图像的局部极值是否小于负预设局部极值阈值；

若是，则确定将移动操作的幅度更改为第三预设幅度；

若否，则确定不将移动操作的幅度更改为第三预设幅度。

可选地，所述根据第三移动操作前后图像的清晰度、预设局部极值阈值和包括该第三移动操作并与该第三移动操作的移动方向相同的累计连续移动次数，确定下一次第三移动操作的移动方向的步骤包括：

判断第三移动操作后图像的局部极值是否大于预设局部极值阈值；

若是，则确定下一次第三移动操作的移动方向与本次第三移动操作的移动方向相同；

若否，则判断累计连续移动次数是否达到第二预设次数；

若累计连续移动次数达到第二预设次数，则确定下一次第三移动操作的移动方向与本次第三移动操作的移动方向相反；

若累计连续移动次数未达到第二预设次数，则确定下一次第三移动操作的移动方向与本次第三移动操作的移动方向相同。

可选地，所述预设公式为：

en＝(pn-pn-1)/min(pn,pn-1)中，其中e_n为移动操作后图像的局部极值，p_n为移动操作后图像的清晰度，p_n-1为移动操作前图像的清晰度。

可选地，所述以第三预设幅度以及最后一次第三移动操作的相反移动方向连续执行第四移动操作第一预设次数，并比较每次按照第三预设幅度执行的第四移动操作后的图像和最后一次第三移动操作后的图像，以获取聚焦后的图像的步骤包括：

将最后一次第三移动操作后的图像作为候选图像；

以第三预设幅度以及最后一次第三移动操作的相反移动方向执行一次第四移动操作，并判断本次第四移动操作后的图像清晰度是否大于等于候选图像清晰度；

若本次第四移动操作后的图像清晰度小于候选图像清晰度，则判断按照第三预设幅度执行的第四移动操作累积次数是否达到第一预设次数；

若按照第三预设幅度执行的第四移动操作的累积次数未达到第一预设次数，则返回执行以第三预设幅度以及最后一次第三移动操作的相反移动方向执行一次第四移动操作的步骤；

若按照第三预设幅度执行的第四移动操作的累积次数达到第一预设次数，则将候选图像作为聚焦后的图像；

若本次第四移动操作后的图像清晰度大于等于候选图像清晰度，则将候选图像更改为本次第四移动操作后的图像，并执行步骤：判断按照第三预设幅度执行的第四移动操作累积次数是否达到第一预设次数。

可选地，所述比较每次按照第三预设幅度执行的第四移动操作后的图像和最后一次第三移动操作后的图像，以获取聚焦后的图像的步骤包括：

从最后一次第三移动操作后的图像和各次按照第三预设幅度执行的第四移动操作后的图像中选择清晰度最大的图像作为聚焦后的图像。

为实现上述目的，本发明还提供一种血细胞分析仪，所述血细胞分析仪包括存储器、处理器和存储在所述存储器上并可在所述处理器上运行的计算机程序，所述计算机程序被所述处理器执行时实现如上所述的自动聚焦方法的步骤。

为实现上述目的，本发明还提供一种计算机可读存储介质，所述计算机可读存储介质上存储有计算机程序，所述计算机程序被处理器执行时实现如上所述的自动聚焦方法的步骤。

本发明提出的一种自动聚焦方法、血细胞分析仪及计算机可读存储介质，通过根据用户输入的启动指令启动复位，并执行向下移动载物台的第一次第一预设幅度的移动操作；获取第一次第一预设幅度的移动操作前后图像的清晰度，以确定第二次第一预设幅度移动操作的移动方向，并根据确定的移动方向执行第二次第一预设幅度的移动操作，以获取第二次第一预设幅度的移动操作前后图像的清晰度；根据第二次第一预设幅度的移动操作前后图像的清晰度、第二次第一预设幅度移动操作的移动方向和预设局部极值阈值，确定第二预设幅度的移动操作的移动方向；根据确定的移动方向执行第二预设幅度的移动操作，以根据第二预设幅度的移动操作前后图像的清晰度、预设局部极值阈值确定是否将移动操作的幅度更改为小于第二预设幅度的第三预设幅度；若否，则根据第二预设幅度的移动操作前后图像的清晰度、预设局部极值阈值和包括该移动操作并与该移动操作的移动方向相同的累计连续移动次数，确定下一次第二预设幅度的移动操作的移动方向，并返回执行根据确定的移动方向执行第二预设幅度的移动操作，以根据第二预设幅度的移动操作前后图像的清晰度、预设局部极值阈值确定是否将移动操作的幅度更改为小于第二预设幅度的第三预设幅度；若是，则以最后一次第二预设幅度的移动操作的相反移动方向连续执行第三预设幅度的移动操作第一预设次数，并比较每次执行第三预设幅度的移动操作后的图像和最后一次第二预设幅度的移动操作后的图像，以获取聚焦后的图像。由于样品板表面上不平整以及噪音的因素，导致存在多个假焦平面，在假焦平面中图像的局部极值和真正焦平面中图像的局部极值是不同的，从而本方案中血细胞分析仪采用第二预设幅度移动载物台过程中，通过每次移动前后图像的清晰度和预设局部极值阈值，将载物台移动到真正的焦平面中，并在后续通过采用第三预设幅度连续移动载物台，在真正焦平面中寻找极值。从而避免使用传统的爬坡法过程中只比较移动前后的图像清晰度来搜索焦平面，容易陷入局部极值的陷阱中，不容易找到真正的焦平面。

附图说明

图1是本发明实施例方案涉及的硬件运行环境的结构示意图；

图2为本发明自动聚焦方法第一实施例的流程示意图；

图3为本发明自动聚焦方法第二实施例中步骤S30中所述根据第二移动操作前后图像的清晰度、第二移动操作的移动方向和预设局部极值阈值，确定以第二预设幅度执行的第三移动操作的移动方向的步骤的细化流程示意图；

图4为本发明自动聚焦方法第三实施例中步骤S30中所述根据第三移动操作前后图像的清晰度、预设局部极值阈值确定是否将移动操作的幅度更改为小于第二预设幅度的第三预设幅度的步骤的细化流程示意图；

图5为本发明自动聚焦方法第四实施例中步骤S40的细化流程示意图；

图6为本发明自动聚焦方法第五实施例中步骤S50的细化流程示意图。

本发明目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。

具体实施方式

应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

请参照图1，图1为本发明各个实施例中所提供的血细胞分析仪的硬件结构示意图。所述血细胞分析仪包括通信模块10、存储器20及处理器30等部件。本领域技术人员可以理解，图1中所示出的血细胞分析仪还可以包括比图示更多或更少的部件，或者组合某些部件，或者不同的部件布置。其中，所述处理器30分别与所述存储器20和所述通信模块10连接，所述存储器20上存储有计算机程序，所述计算机程序同时被处理器30执行。

通信模块10，可通过网络与外部设备连接。通信模块10可以接收外部设备发出的数据，还可发送数据、指令及信息至所述外部设备，所述外部设备可以是平板电脑、笔记本电脑和台式电脑等电子设备。

存储器20，可用于存储软件程序以及各种数据。存储器20可主要包括存储程序区和存储数据区，其中，存储程序区可存储操作系统、至少一个功能所需的应用程序(获取图像的清晰度)等；存储数据区可存储根据血细胞分析仪的使用所创建的数据或信息等。此外，存储器20可以包括高速随机存取存储器，还可以包括非易失性存储器，例如至少一个磁盘存储器件、闪存器件、或其他易失性固态存储器件。

处理器30，是血细胞分析仪的控制中心，利用各种接口和线路连接整个血细胞分析仪的各个部分，通过运行或执行存储在存储器20内的软件程序和/或模块，以及调用存储在存储器20内的数据，执行血细胞分析仪的各种功能和处理数据，从而对血细胞分析仪进行整体监控。处理器30可包括一个或多个处理单元；优选的，处理器30可集成应用处理器和调制解调处理器，其中，应用处理器主要处理操作系统、用户界面和应用程序等，调制解调处理器主要处理无线通信。可以理解的是，上述调制解调处理器也可以不集成到处理器30中。

尽管图1未示出，但上述血细胞分析仪还可以包括电路控制模块，电路控制模块用于与市电连接，实现电源控制，保证其他部件的正常工作。

本领域技术人员可以理解，图1中示出的血细胞分析仪结构并不构成对血细胞分析仪的限定，可以包括比图示更多或更少的部件，或者组合某些部件，或者不同的部件布置。

根据上述硬件结构，提出本发明方法各个实施例。

参照图2，在本发明自动聚焦方法的第一实施例中，所述自动聚焦方法包括步骤：

步骤S10，根据用户输入的启动指令启动复位，并按照第一预设幅度执行向下移动载物台的第一移动操作；

步骤S20，获取第一移动操作前后图像的清晰度，以确定以第一预设幅度执行的第二移动操作的移动方向，并根据确定的移动方向执行第二移动操作，以获取第二移动操作前后图像的清晰度；

在本方案中，图像清晰度的评价函数可以采用基于梯度函数中任一种，例如Tenengrad函数、能量梯度函数、Brenner函数或方程函数等。

用户将样品放置在载物台，并设置好放大倍数后，用户输入启动自动聚焦指令，接收到用户输入的启动自动聚焦指令后，会首先将载物台复位到预设位置，获取处于复位状态下观察到的样品图像，然后按照第一预设幅度执行向下移动载物台的第一移动操作，即自动将载物台向下移动第一预设幅度。然后可以获取移动后观察到的样品图像，结合移动前观察到的样品图像的清晰度即复位状态下观察到的样品图像的清晰度和移动后观察到的样品图像的清晰度，确定以第一预设幅度执行第二移动操作的移动方向，当确定第二移动操作的方向后，根据确定的移动方向，移动载物台第一预设幅度，最终获取第二移动操作前后观测到的样品图像的清晰度。其中如若确定的移动方向为向上，则自动向上移动载物台第一预设幅度，若确定的移动方向为向下，则自动向下移动载物台第一预设幅度。

其中确定以第一预设幅度执行第二移动操作的移动方向具体过程为：

步骤S21，判断第一移动操作后图像的清晰度是否大于第一移动操作前图像的清晰度；若是，则执行步骤S22，若否，则执行步骤S23；

步骤S22，确定第二移动操作的移动方向为向下；

步骤S23，确定第二移动操作的移动方向为向上。

通过比较第一移动操作后观察到的样品图像清晰度是否大于第一移动操作前观察到的样品图像(即复位状态下观察到的样品图像)的清晰度即复位状态下观察到的样品图像的清晰度，若大于，说明第一移动操作对应的向下移动的方向可能是正确的，则确定第二移动操作的移动方向继续为向下移动；若不大于，则说明第一移动操作对应的往下调整的方向可能是错误的，则确定第二移动操作的移动方向改为向上移动。

步骤S30，根据第二移动操作前后图像的清晰度、第二移动操作的移动方向和预设局部极值阈值，确定以第二预设幅度执行的第三移动操作的移动方向，并按照该移动方向执行第三移动操作，以根据第三移动操作前后图像的清晰度、预设局部极值阈值确定是否将移动操作的幅度更改为小于第二预设幅度的第三预设幅度；若否，则执行步骤S40；若是，则执行步骤S50；

血细胞分析仪根据第二移动操作后观察到的样品图像的清晰度、第二移动操作前观察到的样品图像(即第一移动操作后观察到的样品图像)的清晰度、第二移动操作的移动方向和预设局部极值阈值，确定以第二预设幅度执行的第三移动操作的移动方向。

当确定以第二预设幅度执行的第三移动操作的移动方向后，血细胞分析仪会根据确定的移动方向执行第三移动操作，即按照确定的移动方向自动移动载物台第二预设幅度，然后根据本次第三移动操作前观测到的样品图像的清晰度和本次第三移动操作后观测到的样品图像清晰度、预设局部极值阈值确定是否将移动操作的移动幅度更改为小于第二预设幅度的第三预设幅度，若确定不将移动幅度更改为第三预设幅度，即确定继续采用第二预设幅度执行第三移动操作移动载物台，则执行步骤S40；若确定将移动幅度更改为第三预设幅度，即接下来采用第三预设幅度执行第四移动操作移动载物台，则执行步骤S50。

需要说明的是，第一预设幅度可以大于也可以等于还可以小于第二预设幅度，但一般优选第二预设幅度大于等于第一预设幅度。

步骤S40，根据第三移动操作前后图像的清晰度、预设局部极值阈值和包括该第三移动操作并与该第三移动操作的移动方向相同的累计连续移动次数，确定下一次第三移动操作的移动方向，并返回执行按照该移动方向执行第三移动操作的步骤；

当血细胞分析仪确定不将移动幅度更改为第三预设幅度，即确定继续采用第二预设幅度移动载物台后，会根据该第三移动操作前后观测到的样品图像的清晰度、预设局部极值阈值以及包括该第三移动操作并与该第三移动操作的移动方向相同的累计连续移动次数(包括该第三移动操作并与该第三移动操作的移动方向相同的累计连续移动次数为4次，则说明从该第三移动操作往前推的第4次的移动对应的第三移动操作的移动方向与该第三移动操作的移动方向相反或者从该第三移动操作往前推的第4次移动对应的移动操作为第二移动操作)，确定下一次第三移动操作的移动方向，并返回继续按照该移动方向执行第三移动操作的步骤。

步骤S50，以第三预设幅度以及最后一次第三移动操作的相反移动方向连续执行第四移动操作第一预设次数，并比较每次按照第三预设幅度执行的第四移动操作后的图像和最后一次第三移动操作后的图像，以获取聚焦后的图像。

当血细胞分析仪确定将移动幅度更改为第三预设幅度，即确定后续将采用第三预设幅度移动载物台后，采用与最后一次第三移动操作的相反移动方向并且以第三预设幅度连续执行第四移动操作第一预设次数，即按照最后一次第三移动操作的相反移动方向连续移动载物台第三预设度，其连续移动次数为第一预设次数，并获取每次按照第三预设幅度执行的第四移动操作后观察到的样品图像，然后比较每次按照第三预设幅度执行的第四移动操作后观察到的样品图像和最后一次第三移动操作后的图像，获得聚焦后的图像。

需要说明的是，在确定将移动幅度更改为小于第二预设幅度的第三预设幅度后，可以不执行步骤S50来获得聚焦后的图像，可以通过以下步骤获得聚焦后图像，具体过程为：通过在确定将移动幅度从第二预设幅度更改为第三预设幅度后，以第三预设幅度以及最后一次第三移动操作的相反移动方向连续执行第四移动操作第一预设次数，在每次移动载物台第三预设幅度后，除了获取每次移动后观察到的样品图像，还获取每次移动后载物台的位置，并根据比较每次按照第三预设幅度执行的第四移动操作后的图像和最后一次第三移动操作后的图像，确定清晰度最大的图像，并将载物台移动到获取到的清晰度最大的图像时的位置w₀，并在以该位置为中心的上下一个第三预设幅度范围内，即(w₀-d₃，w₀+d₃)范围内采用爬山法获得聚焦后图像，其中d₃为第三预设幅度。在(w₀-d₃，w₀+d₃)范围内采用爬山法获得聚焦后图像的具体过程为：首先，以位置w₀为初始位置，并获取位置w₀观测到样品图像的清晰度F(w₀)，然后选择向上或向下为移动方向，以第四预设幅度d₄移动载物台(d₄≤d₃/2)，到达位置w1＝w₀-d₄(移动方向向上)或w₀+d₄(移动方向向下)，并获取本次移动后观测到样品图像的清晰度F(w₁)，判断F(w₁)是否大于F(w₀)，若F(w₁)大于F(w₀)，则保持方向不变继续以第四预设幅度移动载物台，直至F(w_n-1)大于F(w_n)，则反向移动，并将移动幅度更改未反向前移动过程中移动幅度的一半或更小，移动过程和之前移动过程一样，如此反复移动，直至移动前观测到样品图像的清晰度F(w_i)和移动后观测到样品图像的清晰度F(w_i+1)间的差值绝对值小于等于预设阈值，此时，确定位置w_i+1为聚焦位置，将该位置所观察到的样品图像为聚焦图像。通过该过程中，可以更加精确的寻找到聚焦位置。

本实例通过根据用户输入的启动指令启动复位，并按照第一预设幅度执行向下移动载物台的第一移动操作；获取第一移动操作前后图像的清晰度，以确定以第一预设幅度执行的第二移动操作的移动方向，并根据确定的移动方向执行第二移动操作，以获取第二移动操作前后图像的清晰度；根据第二移动操作前后图像的清晰度、第二移动操作的移动方向和预设局部极值阈值，确定以第二预设幅度执行的第三移动操作的移动方向，并按照该移动方向执行第三移动操作，以根据第三移动操作前后图像的清晰度、预设局部极值阈值确定是否将移动操作的幅度更改为小于第二预设幅度的第三预设幅度；若否，则根据第三移动操作前后图像的清晰度、预设局部极值阈值和包括该第三移动操作并与该第三移动操作的移动方向相同的累计连续移动次数，确定下一次第三移动操作的移动方向，并返回执行按照该移动方向执行第三移动操作的步骤；若是，则以第三预设幅度以及最后一次第三移动操作的相反移动方向连续执行第四移动操作第一预设次数，并比较每次按照第三预设幅度执行的第四移动操作后的图像和最后一次第三移动操作后的图像，以获取聚焦后的图像。由于样品板表面上不平整以及噪音的因素，导致存在多个假焦平面，在假焦平面中图像的局部极值和真正焦平面中图像的局部极值是不同的，从而本方案中血细胞分析仪采用第二预设幅度移动载物台过程中，通过每次移动前后图像的清晰度和预设局部极值阈值，将载物台移动到真正的焦平面中，并在后续通过采用第三预设幅度连续移动载物台，在真正焦平面中寻找极值。从而避免使用传统的爬坡法过程中只比较移动前后的图像清晰度来搜索焦平面，容易陷入局部极值的陷阱中，不容易找到真正的焦平面。

进一步地，参照图3，根据本申请自动聚焦方法的第一实施例提出本申请自动聚焦方法的第二实施例，在本实施例中，在步骤S30中所述根据第二移动操作前后图像的清晰度、第二移动操作的移动方向和预设局部极值阈值，确定以第二预设幅度执行的第三移动操作的移动方向的步骤包括：

步骤S31，根据第二移动操作前后图像的清晰度，通过预设公式获得第二移动操作后图像的局部极值；

步骤S32，判断第二移动操作后图像的局部极值是否小于负预设局部极值阈值；若是，则执行步骤S33；若否，则执行步骤S34；

步骤S33，确定第三移动操作的移动方向与第二移动操作的移动方向相反；

步骤S34，确定第三移动操作的移动方向与第二移动操作的移动方向相同。

在本实例中，血细胞分析仪在获取第二移动操作前后观察到的样品图像后，会将第二操作移动前观察到的样品图像的清晰度和第二移动操作后观察到的样品图像的清晰度输入至预设公式en＝(pn-pn-1)/min(pn,pn-1)中，从而获得第二移动操作后观察到的样品图像的局部极值，其中e_n为移动操作后图像的局部极值，p_n为移动操作后图像的清晰度，p_n-1为移动操作前图像的清晰度。

血细胞分析仪获取到第二移动操作后观察到的样品图像的局部极值后，会判断第二移动操作后观察到的样品图像的局部极值是否小于负的预设局部极值阈值，若确定第二移动操作后观察到的样品图像的局部极值小于负的预设局部极值阈值，则血细胞分析仪确定下一次的第三移动操作的移动方向与第二移动操作的移动方向相反，例如第二移动操作的移动方向为向上，则下一次的第三移动操作的移动方向为向下；若确定第二移动操作后观察到的样品图像的局部极值不小于负的预设局部极值阈值，则血细胞分析仪确定下一次的第三移动操作的移动方向与第二移动操作的移动方向相同，例如第二移动操作的移动方向为向上，则下一次的第三移动操作的移动方向仍为向上。

本实例通过最后一次采用第一预设幅度移动载物台前后的清晰度和局部极值阈值，确定进入通过采用第二预设幅度移动载物台搜索真正焦平面过程时初始的移动方向。

进一步地，参照图4，根据本申请自动聚焦方法的第一实施例提出本申请自动聚焦方法的第三实施例，在本实施例中，在步骤S30中所述根据第三移动操作前后图像的清晰度、预设局部极值阈值确定是否将移动操作的幅度更改为小于第二预设幅度的第三预设幅度的步骤包括：

步骤S35，根据第三移动操作前后图像的清晰度，通过预设公式获得第三移动操作后图像的局部极值；

步骤S36，判断第三移动操作后图像的局部极值是否小于负预设局部极值阈值；若是，则执行步骤S37；若否，则执行步骤S38；

步骤S37，确定将移动操作的幅度更改为第三预设幅度；

步骤S38，确定不将移动操作的幅度更改为第三预设幅度。

在本实例中，血细胞分析仪在获取本次第三移动操作前后观察到的样品图像，将第三移动操作前观察到的样品图像的清晰度和第三移动操作后观察到的样品图像的清晰度输入至预设公式en＝(pn-pn-1)/min(pn,pn-1)中，从而获得本次第三移动操作后观察到的样品图像的局部极值，其中e_n为移动操作后图像的局部极值，p_n为移动操作后图像的清晰度，p_n-1为移动操作前图像的清晰度。

血细胞分析仪获取到本次第三移动操作后观察到的样品图像局部极值后，会判断本次第三移动操作后观察到的样品图像的局部极值是否小于负的预设局部极值阈值，当确定本次第三移动操作后观察到的样品图像的局部极值小于负的预设局部极值阈值，则血细胞分析仪确定将移动幅度由第二预设幅度更改为小于第二预设幅度的第三预设幅度，即进入小幅度移动模式；当确定本次第三移动操作后观察到的样品图像的局部极值不小于负的预设局部极值阈值，则血细胞分析仪继续采用第二预设幅度进行移动载物台，即继续采用大幅度移动模式。

本实例提供了一种通过采用大幅度移动模式移动载物台后，比较移动后观测到样品图像的实际局部极值和预设局部极值阈值大小，来判断是否找到真正的焦平面策略，从而避免使用传统的爬坡法过程中只比较移动前后的图像清晰度来搜索焦平面，容易陷入局部极值的陷阱中，不容易找到真正的焦平面。

进一步地，参照图5，根据本申请自动聚焦方法的第一实施例提出本申请自动聚焦方法的第四实施例，在本实施例中，步骤S40包括：

步骤S41，判断第三移动操作后图像的局部极值是否大于预设局部极值阈值；若是，则执行步骤S42；若否，则执行步骤S43；

步骤S42，确定下一次第三移动操作的移动方向与本次第三移动操作的移动方向相同；

步骤S43，判断累计连续移动次数是否达到第二预设次数；若是，则执行步骤S44；若否，则执行步骤S45；

步骤S44，确定下一次第三移动操作的移动方向与本次第三移动操作的移动方向相反；

步骤S45，确定下一次第三移动操作的移动方向与本次第三移动操作的移动方向相同。

在本实例中，血细胞分析仪获取到本次第三移动操作后观察到的样品图像局部极值后，会判断本次第三移动操作后观察到的样品图像的局部极值是否大于预设局部极值阈值，当确定本次第三移动操作后观察到的样品图像的局部极值大于预设局部极值阈值，则血细胞分析仪确定下一次第三移动操作的移动方向与本次第三移动操作的移动方向相同，例如本次第三移动操作的移动方向为向上，则下一次第三移动操作的移动方向仍为向上；当确定本次第三移动操作后观察到的样品图像的局部极值不大于预设局部极值阈值，则继续判断包括该第三移动操作并与该第三移动操作的移动方向相同的累计连续移动次数是否达到第二预设次数，当达到预设第二预设次数，则血细胞分析仪确定下一次第三移动操作的移动方向与本次第三移动操作的移动方向相反，例如本次第三移动参照的移动方向为向上，则下一次第三移动操作的移动方向为向下；当未达到预设第二预设次数，则血细胞分析仪确定下一次第三移动操作的移动方向与本次第三移动操作的移动方向相同，例如本次第三移动操作的移动方向为向上，则下一次第三移动操作的移动方向仍为向上。

本实例提供了一种在采用第二预设幅度移动载物台寻找真正焦平面过程中，每次移动后观察到的样品图像的局部极值没有满足真正焦平面要求的局部极值范围时，根据移动后样品图像的局部极值和与当前移动方向相同的连续移动次数，制定下一步的移动策略。

进一步地，参照图6，根据本申请自动聚焦方法的第一实施例提出本申请自动聚焦方法的第五实施例，在本实施例中，步骤S50包括：

步骤S51，将最后一次第三移动操作后的图像作为候选图像；

步骤S52，以第三预设幅度以及最后一次第三移动操作的相反移动方向执行一次第四移动操作，并判断本次第四移动操作后的图像清晰度是否大于等于候选图像清晰度；若否，则执行步骤S53；若是，则执行步骤S54；

步骤S53，判断按照第三预设幅度执行的第四移动操作累积次数是否达到第一预设次数；若否，返回执行步骤S52；若是，则执行步骤S55；

步骤S54，将候选图像更改为本次第四移动操作后的图像，并返回执行步骤S53；

步骤S55，将候选图像作为聚焦后的图像。

在本实例中，血细胞分析仪将最后一次第三移动操作即最后一次采用第二预设幅移动载物台观察到的样品图像作为候选图像，然后采用与最后一次第三移动操作的相反移动方向移动一次载物台第三预设幅度后，判断本次第四移动操作后观察到的样品图像是否大于等于候选图像清晰度，若本次第四移动操作后观察到的样品图像不大于等于候选图像清晰度，则判断按照第三预设幅度执行的第四移动操作累积次数是否达到第一预设次数，当血细胞分析仪按照第三预设幅度执行的第四移动操作累积次数未达到第一预设次数时，则继续返回执行以第三预设幅度以及最后一次第三移动操作的相反移动方向执行一次第四移动操作的步骤，当血细胞分析仪按照第三预设幅度执行的第四移动操作累积次数达到第一预设次数时，将候选图像作为聚焦后的图像；若本次第四移动操作后观察到的样品图像大于等于候选图像清晰度，则将候选图像更改为本次第四移动操作后的观察到的样品图像，并返回执行判断按照第三预设幅度执行的第四移动操作累积次数是否达到第一预设次数的步骤。

例如第一预设次数为3次，血细胞分析仪首先将最后一次采用第二预设幅度移动载物台后观察到的样品图像P0作为候选图像，然后第一次采用第三预设幅度移动载物台后，获得此时观察到的样品图像P1，将样品图像P1的清晰度与样品图像P0的清晰度进行比较，若大于，则将候选图像更改为P1，并判断采用第三预设幅度累积移动次数是否达到3次，若不大于，则候选图像仍为P0，并直接判断采用第三预设幅度累积移动次数是否达到3次。由于此时采用第三预设幅度累积移动次数为1，未达到3次，则继续采用第三预设幅度进行第二次移动载物台，并获得移动后观察到的样品图像为P2，继续判断样品图像P2的清晰度是否大于候选图像的清晰度，若P2清晰度大于候选图像清晰度，则将候选图像更改为P2，若不大于，则不更改候选图像。继续判断采用第三预设幅度累积移动次数是否达到3次。由于此时采用第三预设幅度累积移动次数为2，未达到3次，则继续采用第三预设幅度进行第三次移动载物台，并获得移动后观察到的样品图像为P3，继续判断样品图像P3的清晰度是否大于候选图像的清晰度大小，若P3清晰度大于候选图像清晰度，则将候选图像更改为P3，若不大于，则不更改候选图像，由于此时采用第三预设幅度累积移动次数为3，已达到3次，则将候选图像作为聚焦后图像。

由于样品板表面上不平整以及噪音的因素，除了导致多个假焦平面，还会导致在焦平面中存在多个假的极值，本实例通过采用第三预设幅度在焦平面中进行多次移动，比较每次移动前后的图像的清晰度大小，从而找寻到焦平面中真正的极值位置，即真正的聚焦位置。

进一步地，根据本申请自动聚焦方法的第一实施例提出本申请自动聚焦方法的第六实施例，在本实施例中，在步骤S50中所述比较每次按照第三预设幅度执行的第四移动操作后的图像和最后一次第三移动操作后的图像，以获取聚焦后的图像的步骤包括：

步骤S56，从最后一次第三移动操作后的图像和各次按照第三预设幅度执行的第四移动操作后的图像中选择清晰度最大的图像作为聚焦后的图像。

在本实例中，当血细胞分析仪采用第三预设幅度连续执行第四移动操作第一预设次数后，从最后一次第三移动操作后的观察到的样品图像和各次按照第三预设幅度执行的第四移动操作后的观察到的样品图像中选择清晰度最大的图像作为聚焦后的图像。例如第一预设次数为3次，最后一次采用第二预设幅度移动载物台后观察到的样品图像P0，第一次以第三预设幅度移动后的图像为P1，第二次以第三预设幅度移动后的图像为P2，第三次以第三预设幅度移动后的图像为P3，其中图像P2清晰度最大，选择清晰度最大P2的图像作为聚焦后的图像。

由于样品板表面上不平整以及噪音的因素，除了导致多个假焦平面，还会导致在焦平面中存在多个假的极值，本实例通过采用第三预设幅度在焦平面中进行多次移动，并将每次移动后的图像的清晰度一起进行比较，从而找寻到焦平面中真正的极值位置，即真正的聚焦位置，并且相比前一实施例为获得真正聚焦位置采用在每次移动后都比较移动前后的图像清晰度的过程，本实例过程更加简单。

本发明还提出一种计算机可读存储介质，其上存储有计算机程序。所述计算机可读存储介质可以是图1的血细胞分析仪中的存储器20，也可以是如ROM(Read-Only Memory，只读存储器)/RAM(Random Access Memory，随机存取存储器)、磁碟、光盘中的至少一种，所述计算机可读存储介质包括若干信息用以使得血细胞分析仪执行本发明各个实施例所述的方法。

需要说明的是，在本文中，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者系统不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者系统所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括该要素的过程、方法、物品或者系统中还存在另外的相同要素。

上述本发明实施例序号仅仅为了描述，不代表实施例的优劣。

通过以上的实施方式的描述，本领域的技术人员可以清楚地了解到上述实施例方法可借助软件加必需的通用硬件平台的方式来实现，当然也可以通过硬件，但很多情况下前者是更佳的实施方式。

以上仅为本发明的优选实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。