阅读说明：本技术 一种基于复合纳米材料的动物源性食品中克伦特罗的快速检测方法 (method for rapidly detecting clenbuterol in animal-derived food based on composite nano material ) 是由 程劼 苏晓鸥 王石 王培龙 王瑞国 于 2019-10-28 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种基于复合纳米材料的动物源性食品中克伦特罗的快速检测方法。首先制备二次深度氧化石墨烯负载纳米金ro-GO/AuNPs作为SERS基底；对待检测样品进行净化处理,获得待测溶液；向所述待测溶液加入ro-GO/AuNPs复合基底,并对其进行拉曼光谱扫描,采集光谱数据；针对采集的光谱数据,以△v＝1265,1474,1602cm<Sup>-1</Sup>处拉曼吸收作为克伦特罗的定性特征峰,并通过△v＝1474cm<Sup>-1</Sup>处拉曼吸收强度进行定量计算。上述方法具有快速、高灵敏、重复性好的特点,大大提高了检测效率。(The invention discloses a rapid detection method of clenbuterol in animal-derived foods based on composite nano materials, which comprises the steps of firstly preparing secondary deep graphene oxide loaded nano gold ro-GO/AuNPs as an SERS substrate, purifying a sample to be detected to obtain a solution to be detected, adding the ro-GO/AuNPs composite substrate into the solution to be detected, performing Raman spectrum scanning on the solution to be detected, acquiring spectral data, and regarding the acquired spectral data, adopting △ v 1265, 1474 and 1602cm ‑1 Raman absorption as the qualitative characteristic peak of clenbuterol and passing △ v-1474 cm ‑1 And (4) performing quantitative calculation on the Raman absorption intensity. The method has the characteristics of high speed, high sensitivity and good repeatability, and greatly improves the detection efficiency.)

一种基于复合纳米材料的动物源性食品中克伦特罗的快速检 测方法

技术领域

本发明涉及表面增强拉曼光谱应用技术领域，尤其涉及一种基于复合纳米材料的动物源性食品中克伦特罗的快速检测方法。

背景技术

作为一种常见的β-受体激动剂，克伦特罗(Clenbuterol，CL)因为对动物具有一定的促生长、提高瘦肉率的作用，被称为典型的“瘦肉精”类化合物。农业主管部门将它作为违禁药物禁止在养殖环节中使用。活体动物尿液常作为监管对象，通过分析其中原型浓度来监测是否使用瘦肉精。同时，动物组织也常常作为监管的靶组织。常用的动物组织中CL的分析方法为液相色谱-串联质谱法，该方法准确、灵敏、可靠，适合用于实验室的确证分析，但昂贵的仪器设备与复杂的样品前处理步骤使其不适合用于现场快速筛查。基于抗原-抗体特异性识别的试剂盒、试纸卡是目前现行的现场快速筛查手段，此类方法快速、高效、便捷，但由于“抗体”容易受环境因素的干扰，检测结果出现“假阳性”的现象时有发生。

表面增强拉曼光谱(Surface Enhanced Raman Spectroscopy，SERS)技术作为一种快速分析手段，近年来颇受关注，在基于物理“热点”增强和电荷转移化学增强的协同作用下，化合物的拉曼吸收位移得到增强，可实现痕量分析。增强基底的构筑以及高效的样品净化，是实现实际样品中目标化合物快速高灵敏SERS分析的关键。对克伦特罗的SERS分析有一些研究报道，但分析的目标基质基本都是尿液。为了提高分析的灵敏度和选择性，大多文献报道是基于CL抗体的特异性识别实现对目标CL分子的富集，但CL抗体的制备需要一个较为繁琐的过程。然而，对动物组织中CL的SERS分析未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于复合纳米材料的动物源性食品中克伦特罗的快速检测方法，该方法具有快速、高灵敏、重复性好的特点，检测灵敏度可达1ng·g^-1，检测时间少于10min/样。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种基于复合纳米材料的动物源性食品中克伦特罗的检测方法，所述方法包括：

步骤1、首先制备二次深度氧化石墨烯负载纳米金ro-GO/AuNPs作为表面增强拉曼光谱SERS增强的复合基底；

步骤2、对待检测的动物源性食品中克伦特罗CL样品进行前处理，获得待测溶液；

步骤3、向所述待测溶液加入ro-GO/AuNPs复合基底，并对其进行拉曼扫描，采集相应范围的光谱数据；

步骤4、针对采集的光谱数据，以△v＝1265，1474，1602cm^-1处拉曼吸收作为克伦特罗的特征定性峰，并通过△v＝1474cm^-1处拉曼吸收强度进行定量计算，实现对克伦特罗的检测。

由上述本发明提供的技术方案可以看出，上述方法具有快速、高灵敏、重复性好的特点，其检测灵敏度可达1ng·g^-1，检测时间少于10min/样。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域的普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他附图。

图1为本发明实施例提供的基于复合纳米材料的动物源性食品中克伦特罗的检测方法流程示意图；

图2为本发明实施例所提供的克伦特罗特征定性峰的示意图；

图3为本发明实施例所提供的克伦特罗定量曲线图。

具体实施方式

下面结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明的保护范围。

下面将结合附图对本发明实施例作进一步地详细描述，如图1所示为本发明实施例提供的基于复合纳米材料的动物源性食品中克伦特罗的检测方法流程示意图，所述方法主要包括：

步骤1、首先制备二次深度氧化石墨烯负载纳米金ro-GO/AuNPs(twice-oxidizedgraphene oxide/gold nanoparticles)作为表面增强拉曼光谱SERS增强的复合基底；

在该步骤中，制备过程具体为：

首先将8mL的氧化石墨烯GO溶液、50mL的去离子水、5.6mL的氧化剂混合加热制成过度溶液；

取其中部分溶液再加入5mL的氧化剂，继续加热搅拌制成二次深度氧化石墨烯ro-GO溶液；

然后再加入柠檬酸水溶液，1mL的氯金酸，继续加热搅拌制得二次深度氧化石墨烯负载纳米金ro-GO/AuNPs。

所得到的ro-GO/AuNPs可以保存于4℃中备用。

由上述制备过程可知：通过对氧化石墨烯GO的两次深度氧化，可以提高GO对AuNPs的负载浓度，从而提高该ro-GO/AuNPs作为复合基底的SERS活性以及稳定性。

步骤2、对待检测的动物源性食品中克伦特罗CL样品进行前处理，获得待测溶液；

在该步骤中，具体过程为：

首先向5.0g粉碎处理过的待检测样品中加入10mL二氯甲烷和5.0g无水硫酸钠进行第一次提取；

将提取出的溶剂转移至离心管中，加入8mL硝酸水溶液，振荡提取、离心，移取部分上层溶液；

再加入20μL NaOH水溶液和800μL二氯甲烷进行第二次反向萃取，振荡、离心；

然后在下层溶液中加入800μL硝酸溶液进行第三次萃取，振荡、离心，所获得的上层溶液即为待测溶液。

步骤3、向所述待测溶液加入ro-GO/AuNPs复合基底，并对其进行拉曼扫描，采集相应范围的光谱数据；

在该步骤中，具体过程为：

先向10μL待测溶液中加入600μL ro-GO/AuNPs复合基底，80uL硝酸，振荡60s；

然后对其进行拉曼扫描，具体参数为：光谱扫描时间10s、扫描次数2、平滑参数1，扫描功率100mw，采集1000-2000cm^-1范围内的光谱数据。

步骤4、针对采集的光谱数据，以△v＝1265，1474，1602cm^-1处拉曼吸收作为克伦特罗的特征定性峰，并通过△v＝1474cm^-1处拉曼吸收强度进行定量计算，实现对克伦特罗的检测。

如图2所示为本发明实施例所提供的克伦特罗特征定性峰的示意图，图2中以△v＝1265，1474，1602cm^-1处拉曼吸收作为克伦特罗的特征定性峰。

如图3所示为本发明实施例所提供的克伦特罗定量曲线图，图3中以△v＝1474cm^-1处的拉曼吸收峰为克伦特罗定量峰进行定量计算。

通过上述设定，就可以使检测灵敏度达1ng·g^-1，在1-100ng·g^-1范围内实现定量计算。

值得注意的是，本发明实施例中未作详细描述的内容属于本领域专业技术人员公知的现有技术。

综上所述，本发明实施例所提供的检测方法能大大提高复合SERS基底的稳定性(至240天)，具有快速、高灵敏、重复性好的优点，其检测灵敏度可以达到1ng·g^-1，检测时间少于10min/样，大大提高了检测效率，实现了对动物源性食品中CL的快速筛查。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求书的保护范围为准。