含有活体微生物的组合物及其制备方法
阅读说明：本技术 含有活体微生物的组合物及其制备方法 (Composition containing living microorganism and method for producing the same ) 是由 清水真 于 2019-02-27 设计创作，主要内容包括：[课题]本发明提供一种含有活体微生物的组合物,其能够得到与施用方法和施用途径无关的迅速、确实的植活效果。[解决手段]含有活体微生物的组合物,其包含下述(I)至(III)：(I)至少一种以上的活体微生物,(II)溶剂,(III)纳米尺寸以下的气泡。([ problem ] to provide kinds of live microorganism-containing compositions which can achieve a quick and reliable effect of growth regardless of the method and route of administration [ means for solving the problem ] live microorganism-containing compositions comprising (I) at least or more kinds of live microorganisms, (II) a solvent, and (III) bubbles having a size of nanometer or less.)
技术领域
本发明涉及包含微小的气泡的含有活体微生物的组合物、及其制备方法等。
背景技术
近年来，存在于活体中的微生物的功能备受瞩目，其中指出了“肠内菌群”的平衡的重要性。
术语“肠内菌群”为相同种类或性质的肠内微生物某种程度集合起来而在肠壁上生活的样子，看起来像是相同种的花簇集起来开放的花园那样，因此而得名的术语。
该“肠内菌群”中的微生物的“种类和种类间的比率”被称为“肠内菌群平衡”，因生物的种类或每个个体而异，特别是像所说的“病皆自肠始”那样，已知在罹患某些疾病的情况下或身体状况不佳的情况下，“肠内菌群平衡”与健康的同种生物(在人的情况下为人)的倾向相比存在不同。
作为“肠内菌群平衡”的改善方法，可列举例如作为代表性的乳酸菌饮料等的摄取等，但仅靠这些难以显著改善。
为此，在2013年时，荷兰的研究组使用“将源自健康个体的肠内菌群本身直接移植到患者的肠内”这样的划时代的方法(肠内菌群移植)(非专利文献1)，其效果广受瞩目，结果在现在不论在日本国内外，都有许多以治疗各种疾病为目的的项目在进行中(非专利文献2)。
所述“肠内菌群移植”具体而言是指“粪便(来源的)微生物移植”，为将粪便利用生理盐水等溶剂进行溶解而得到的包含肠内微生物的组合物移植至其它个体的技术。
然而，可以说在现有的“肠内菌群移植”技术中存在着各种应该改善的方面。
首先，在现有方法中，存在认为经移植的活体微生物为了在活体中以活着的形式定居(以下记载为“植活”)而需要数天的问题。
因此，认为经移植的“肠内菌群”会在该数天期间基本被***掉，形成就结果而言并不留在患者体内的原因之一。
其次，可列举现有使用的施用方法几乎全部采用了大肠内窥镜方式，因此，对患者造成的负担较大的问题。
再次的问题是，报告了作为最大的课题，不论各种尝试，在移植后的活体微生物的定居率(以下记载为“植活率”)也仅留下2～3成，结果是具有在作为最终目标的疾病治疗中也未得到期待程度的效果的大问题。
另一方面，在进行产生直径为数十μm以下的微小的气泡即所谓微泡或低于1μm的纳米气泡等的装置的开发(专利文献1等)，含有这些气泡的溶液已经在医疗、农业、水产养殖业等各种领域中使用。
但如本发明这样的使用包含微小的气泡的溶液(所谓纳米气泡水)，使细菌以活着的状态在活体中植活的技术思想至今尚不存在。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：日本特开2012-582号公报
非专利文献
非专利文献1：Duodenal Infusion of Donor Feces for RecurrentClostridium difficile(Els van Nood，et al，The new England journal of medicine，January 31，2013，vol.368，no.5，P.407-415)
非专利文献2：炎症性肠病中的粪便微生物移植法的过去、现在、未来(ModernMedia，62卷，3号，2016[肠内菌群]，P.69-74)。
发明内容
发明要解决的问题
本发明人通过使活体微生物与微小的气泡共同含有于溶剂中，惊讶地发现，肠内细菌不被阻于包含粘多糖类等的肠壁粘膜等，而在活体中容易地植活，另外，其植活速度、植活率也比以往方法飞跃性地提高，完成了本发明。本发明的目的在于，提供向活体植活效果，其中特别是经过肠道或其它粘膜的活体植活效果优异的“含有活体微生物的组合物”及使用其的“用于调整活体微生物平衡的组合物”等。
用于解决问题的方案
上述目的可通过下述第一发明～第十六发明而实现。
<第一发明>
含有活体微生物的组合物，其包含下述(I)至(III)：
(I)至少一种以上的活体微生物，
(II)溶剂，
(III)纳米尺寸以下的气泡。
<第二发明>
第一发明中记载的组合物，其中，气泡中的气体成分为下述中的一种或两种以上：
(i)大气，
(ii)氢气，
(iii)氮气，
(iv)臭氧，
(v)氧气，
(vi)二氧化碳，
(vii)氩气。
<第三发明>
第一发明或第二发明中记载的组合物，其中，(I)为肠内细菌。
<第四发明>
第一发明至第三发明中任一项所述的组合物，其中，(I)为来自与施用对象相同或不同的1个或2个以上个体的活体微生物。
<第五发明>
用于调整活体微生物平衡的组合物，其包含第一发明至第四发明中任一项所述的组合物。
<第六发明>
第五发明中记载的组合物，其中，活体微生物平衡为肠内菌群平衡。
<第七发明>
第一发明至第六发明中任一项所述的组合物，其施用途径为从口腔、眼睛、耳、鼻、***、尿道、皮肤或***的施用途径。
<第八发明>
第一发明至第七发明中任一项所述的组合物，其用于经粘膜植活。
<第九发明>
第一发明至第八发明中任一项所述的组合物的制备方法，其至少包括下述(1)及(2)的工序：
(1)在(II)的溶剂中产生(III)的气泡的工序，
(2)使(I)分散和/或溶解于(II)中的工序，
其中(I)为至少一种以上的活体微生物，
(II)为溶剂，
(III)为纳米尺寸以下的气泡。
<第十发明>
第九发明中记载的制备方法，其进一步包括下述(3)的工序：
(3)根据施用对象的属性和/或环境，确定(I)中活体微生物的“种类和种类间的比率”，和/或从中收集(I)的1个或2个以上个体的工序。
<第十一发明>
确定第一发明至第八发明中任一项所述的组合物的组成的方法，包括下述工序：
(A)评估要施用的“活体微生物平衡”的类型的工序，
(B)选定能够实现(A)中评估的“活体微生物平衡类型”的来自与施用对象相同或不同的1个或2个以上个体的“活体微生物”的工序。
<第十二发明>
用于第一发明至第八发明中任一项所述的组合物的施用的器具，所述器具为用于将组合物从***施用的器具，具有管状部分。
<第十三发明>
活体导入辅助溶剂，包含下述(II)及(III)：
(II)溶剂，
(III)纳米尺寸以下的气泡。
<第十四发明>
体质和/或身体状况改善剂，包含第一发明至第八发明中任一项所述的组合物。
<第十五发明>
将第一发明至第八发明中任一项所述的组合物导入活体中，进行疾病的预防和/或治疗，或者体质和/或身体状况的改善的方法。
<第十六发明>
使用第十三发明中记载的活体导入辅助溶剂，将目的物导入活体中的方法。
发明的效果
本发明的组合物与常规方法相比，能够以患者负担更少而简便的方法进行给予，并与施用的方法、途径无关地实现更迅速、确实的植活效果。
附图说明
[图1]为测定了本发明中使用的实施例A的“活体导入辅助溶剂(纳米气泡水A)”(测定用的250倍稀释液)中的气泡的大小、数量等的结果。
[图2]示出在施用了实施例2的组合物(来自“供体”的肠内菌群)的情况下，“接受者”(特应性皮炎患者)的肠内菌群变化的图。
[图3]示出在施用了实施例3的组合物(来自“供体”的肠内菌群)的情况下，“接受者”(肺腺癌患者)的肠内菌群变化的图。
[图4]示出在施用了实施例4的组合物(来自“供体”的肠内菌群)的情况下，“接受者”(慢性胰腺炎患者)的肠内菌群变化的图。
[图5]示出在施用了实施例5组合物(来自“供体”的肠内菌群)的情况下，“接受者”(糖尿病II型患者)的肠内菌群变化的图。
[图6]示出在施用了实施例6的组合物(来自“供体”的肠内菌群)的情况下，“接受者”(糖尿病血脂异常患者)的肠内菌群变化的图。
[图7])示出在施用了实施例7的组合物(来自“供体”的肠内菌群的情况下，“接受者”(肠易激综合征患者)的肠内菌群变化的图。
[图8]示出在施用了实施例8的组合物(来自“供体”的肠内菌群)的情况下，“接受者”(溃疡性结肠炎患者)的肠内菌群变化的图。
[图9]示出在施用了实施例9的组合物(来自“供体”的肠内菌群)的情况下，“接受者”(抑郁症患者)的肠内菌群变化的图。
[图10-1]示出将本发明的组合物(来自“供体”的肠内菌群)施用于“接受者”(贾第鞭毛虫感染患者)的顺序的图。
[图10-2]示出在施用了本发明的组合物(来自“供体”的肠内菌群)的情况下，“接受者”(贾第鞭毛虫感染患者)的肠内菌群变化的图。
[图11-1]示出将本发明的组合物(来自“供体”的肠内菌群)施用于“接受者”(慢性疲劳患者)的顺序的图。
[图11-2]示出在施用了本发明的组合物(来自“供体”的肠内菌群)的情况下，“接受者”(慢性疲劳患者)的肠内菌群变化的图。
[图12]示出将基于在实施例B的活体导入辅助溶剂(纳米气泡水B)中含有活体微生物的情况下的保存稳定性与生理盐水相比的结果的图。
具体实施方式
以下具体说明本发明。
[本发明的含有活体微生物的组合物]
本发明的“含有活体微生物的组合物”包含下述(I)至(III)：
(I)至少一种以上的活体微生物，
(II)溶剂，
(III)纳米尺寸以下的气泡。
《本发明中使用的(I)的活体微生物》
(活体微生物的大分类)
本发明中使用的(I)的活体微生物，是指在人及其它生物的包括体内或体表等的所有活体部位常驻的全部的微生物，被分类为例如细菌、真菌、病毒等。
另外，在这些活体微生物中，除了以从活体直接收集状态的微生物以外，也包括将它们培养而人为地使其增殖而成的那些，它们发生突变的那些，或利用转化、其它手段而人为地进行了修饰的微生物等。
(活体微生物中的中分类)
在上述活体微生物的各大分类中，分别包括下述的中分类。
(细菌的中分类)
作为细菌的中分类，具体而言可列举在：肠内、眼睛内、耳鼻内、口腔内、***内、呼吸道内、皮肤等常驻的细菌等。
(真菌的中分类)
作为真菌的中分类，可列举：酵母样真菌、念珠菌、酵母菌等。
(病毒的中分类)
作为病毒的中分类，可列举：疱疹病毒、腺病毒、天花病毒、EB病毒、腮腺炎病毒等DNA、RNA两类病毒等。
另外，在本发明的组合物为“用于调整肠内菌群平衡的组合物”的情况下，作为(I)的活体微生物，可列举优选为肠内微生物，更优选为肠内细菌。
(肠内细菌的小分类)
作为肠内细菌的小分类，具体而言可列举例如如下的这些：
双歧杆菌属(Bifidobacterium)，
乳杆菌目(Lactobacillales)，
拟杆菌属(Bacteroides)，
普雷沃氏菌属(Prevotella)，
梭菌属IV簇(Clostridium cluster IV)，
梭菌属XIVa亚簇(Clostridium subcluster XIVa)，
梭菌属IX簇(Clostridium cluster IX)，
梭菌属XI簇(Clostridium cluster XI)，
梭菌属XVIII簇(Clostridium cluster XVIII)，
其它梭菌。
另外，作为肠内细菌优选来自于同种(例如，以人为对象时，为人)的肠内细菌。
(使用的中分类、小分类的数量)
作为在本发明的“含有活体微生物的组合物”中使用的“活体微生物(I)”，通常优选使用上述“中分类”中的1种，但也有优选使用2种以上的“中分类”的情况。
另外，作为各中分类中的“小分类”，可以将其中一种或两种以上根据后述的施用对象(以下，有时记载为“接受者”)的“属性和/或环境”、其它情况而适当区分使用。
例如在将本发明的“含有活体微生物的组合物”用于后述“用于调整活体微生物平衡的组合物”中的情况下，(I)优选为两种以上的活体微生物的混合物，特别是在“活体微生物(I)”为“肠内微生物”的情况下，优选使用来自健康人的两种以上的肠内微生物、或“肠内菌群”的全部。
这是由于，如果知道特定的肠内微生物的不足是何种疾病的原因，则也许进行仅该微生物种类的施用就足够，但在现阶段，对于疾病与特定的肠内微生物的因果关系在大多情况下还没有明确到该程度，在这种情况下，认为比起利用该特定的肠内微生物的施用，将健康人的肠内微生物以多种或将“肠内菌群”整体进行移植是治疗的更便捷的方式。
(活体微生物的来源)
在本发明的“含有活体微生物的组合物”中使用的“活体微生物(I)”，可以使用来自与施用对象相同或不同的个体的那些。
术语“与施用对象相同的(个体)”是指施用对象(接受者)自身。
另外，在收集具有“作为本发明的组合物而期望的活性、活体内平衡”的“活体微生物(I)”中，优选来自与施用对象不同的个体的那些，其中，与施用对象不同的个体优选为(至少与施用对象的罹患的疾病等相关)健康的动物(优选为人)。
(活体微生物的混合)
对在本发明的“含有活体微生物的组合物”中使用的“活体微生物(I)”而言，也有优选将来自2个以上个体的那些进行混合而使用的情况。
这是由于，即使是属于相同分类的微生物，也因来源个体不同而在微生物本身的生长发育活性、产生的酶量、其它活性方面有差异，通过使用来自2个以上个体的那些，可能由此更确实地在施用对象中植活，在其治疗等中有用。
(活体微生物的种类和种类间的比率)
对使用多种(I)的“活体微生物”时的“种类”、其“种类间的比率”而言，优选基于下述比较而个别地确定：将在期望施用本发明的“含有活体微生物的组合物”的对象(包括人的动物)(接受者)中，原本在其个体内具有的“活体微生物”的“种类”、“种类间的比率”(活体微生物平衡)，与“接受者”不同的健康个体的“活体微生物平衡”进行比较。
另外，对“活体微生物”的“种类”、“种类间的比率”而言，除了上述以外，优选也附加在后述“本发明的组合物的制造方法”的工序(3)等中记载的那样的，在“接受者”的“属性和/或环境”，及“活体微生物移植”的技术领域中至今积累下来的见解、经验等而慎重地确定。
作为实际使用的(I)，也有优选不实行菌体的筛选等而将从与“接受者”不同的例如1个或2个以上的健康个体(优选为人，以下存在记载为“供体”的情况)收集的活体微生物群全部直接使用的情况。
这是由于，能够保持已经确认为健康个体的活体微生物平衡的状态移植至“接受者”，另外，也能够将在健康个体的活体微生物中包含的除了期待治疗效果而进行了有意识选择的主要活体微生物以外的各种活体微生物一并施用。
这样的其它各种活体微生物，也充分可能构成保持“供体”的健康的一个原因。
(组合物中的活体微生物(I)的含有比率)
对本发明的“含有活体微生物的组合物”中的“活体微生物(I)”的浓度(含有比率)而言，因后述“接受者”的“属性和/或环境”、施用方法、施用次数、施用时间等而异，因此，进行适当确定。
(活体微生物的获得方法)
对在本发明的“含有活体微生物的组合物”中使用的“活体微生物(I)”的获得方法没有特别的限制，但从“确保健康身体的活体微生物平衡的再现性”、“获得的简便性”等方面考虑，优选使用将来自健康的“供体”的“生物样品”(在活体微生物为肠内细菌的情况下，为粪便等)利用下述方法进行处理而得到的“活体微生物(I)”，特别优选来自健康人的那些。
(生物样品的处理方法)
对从生物样品获得在本发明的“含有活体微生物的组合物”中使用的“活体微生物(I)”中，可列举例如使用如下所述的方法对生物样品进行过滤、纯化的方法。
将生物样品浸于生物样品处理溶液中，利用轻度的搅拌使其半自然溶解，之后利用灭菌的纱布等多次进行过滤而滤出食物残渣等杂质。
另外，作为生物样品处理溶液，只要不使在本发明的“含有活体微生物的组合物”中使用的“活体微生物(I)”失活即可，没有特别限制，可以使用纯水(纯化水)、生理盐水等。
另外，虽然在利用该生物样品处理溶液处理了生物样品后，再替换为后述“(溶剂(II)”也是没问题的，但为了避免由进行额外的一步导致的活体微生物失活等风险、或者为了更迅速且确实地将“活体微生物(I)”用气泡包进，因此，在该阶段中，优选使用在本发明的“含有活体微生物的组合物”中使用的“(溶剂(II)”。
进一步，更优选在该“(溶剂(II)”中预先产生“纳米尺寸以下的气泡(III)”。
这是由于虽然可以利用从获得包含活体微生物(I)”的“(溶剂(II)”而产生“纳米尺寸的气泡(III)”的方法，但认为使用预先使(III)产生的(II)而制备包含(I)的溶液的情况能够使“活体微生物(I)”的失活为最小限度。
另外，使用的溶剂(II)的量没有特别限制，但可列举例如对于约Ag的“生物样品”使用1.5～4Aml(25～67w/v％)，例如2Aml(50w/v％)的溶剂的方法等。
另外，(II)的量可以根据“生物样品”的状态(包含水分量)等而适当确定。
另外，过滤优选为反复进行1至多次、优选为3次以上。
(供体的类型)
另外，作为用于(获得I)的“生物样品”的提供者的“供体”，特别是在作为“生物样品”使用“粪便”的情况下，从心理方面等而言，有优选“接受者”的二代血亲等以内的近亲的倾向。
但是，认为如果以治疗效果为最优先，则也值得考虑不选认为遗传或生活环境上“活体微生物平衡”接近的近亲，而是特意选择“活体微生物平衡”完全不同的除了近亲以外的第三者“供体”的方式。
(供体数)
另外，该第三者“供体”也不限定于一个人，也存在为了长期改善“活体微生物平衡”而优选为多个的方式的情况。
《本发明中使用的(II)的溶剂》
作为本发明中使用的(II)的溶剂，没有特别限定，可以为：纯化水、生理盐水、矿物质水、软饮料等。
考虑到提高本发明的“含有活体微生物的组合物”的与活体的融合、植活性的观点及防腐效果等，作为(II)可以使用生理盐水等。
另一方面，作为在(II)的溶剂中产生(III)的气泡的装置，在使用不锈钢制等仪器的情况下，从防止仪器生锈的观点出发，存在优选纯化水、矿物质水的情况。
因此，在制造本发明的“含有活体微生物的组合物”的情况下，可以从头到尾使用相同的溶剂(II)，也可以根据制造的各阶段不同而将(II)的溶剂的种类分开使用。
另外，在本发明的“含有活体微生物的组合物”中，包括刚制造成的“原液”、将立即施用给“接受者”的“稀释液”等各个阶段的组合物。
在本发明的“含有活体微生物的组合物”中，也可以在本发明不妨碍的效果，例如不使(I)的活体微生物被杀灭的范围内含有各种添加剂。
《本发明中使用的(III)的纳米尺寸以下的气泡》
作为本发明中使用的(III)的纳米尺寸以下的气泡中“气体成分”，例如优选如下这些，但并非一定限于这些。
(气泡中的气体的种类)
气泡中的“气体成分”优选为下述中的一种或两种以上：
(i)大气，
(ii)氢气，
(iii)氮气，
(iv)臭氧，
(v)氧气，
(vi)二氧化碳，
(vii)氩气。
从可以不准备例如(ii)至(vii)这样的特别的“气体成分”的方面，单独使用(i)的大气的情况较现实而是优选的。
另外，对于准确地测定在将“大气”或“两种以上的混合气体”导入(II)的溶剂中的情况下的“在(溶剂(II)中产生的气泡(III)”中的“各气体成分的封入比率”而言，并不容易。
这是因为在溶剂(II)中产生气泡(III)的过程中，在溶剂(II)中可溶入的“量”、“速度”因“气体成分”而异，另外，准确地判定被封入在产生的气泡(III)中的“气体成分”的“种类”、“比率”本身就并不容易。
然而，在例如使用了由单独种类组成的“气体成分(假设为X)”的情况下，认为与使用大气等混合气体的情况相比，“在(溶剂(II)中产生的气泡(III)”中，“气体成分(X)”的“封入比率”应该变高，由此，能够更活用如上所述“气体成分(X)”的特性。
另外，在制造使用了肠内细菌的“含有活体微生物的组合物”的情况下，气泡中氢气的比率如果比大气中高，则可以期待下述优点，因此是优选的：
1、认为使用了氢气的本发明的纳米气泡水的氧化还原电位(目标为-150mV±15mV)与肠道的氧化还原电位(-50mV～-250mV)为同样程度之低，因此，被其所包覆的细菌容易在肠内定居。
2、认为在肠道内存在炎症的情况下，存在氧化还原电位变高的倾向，免疫反应亢奋从而移植的细菌常常被接受者的免疫弹回，但通过氢气的氧化还原电位之低带来的抗炎作用，可缓和所述反应。
3、认为利用包含氢分子的本发明的“纳米气泡水”，能够将作为肠内细菌的主要群体的兼性厌氧菌和专性厌氧菌中任一种保持不活化不死亡的状态，到移植后在肠道内这样适当的环境中细菌再次开始活动之前的期间，保持菌液的细菌之间的平衡不失衡，能够在较长期间以使细菌休眠的状态进行菌液的保存。
对使气泡中的氢气的比率高于大气中而言，除了单独使用氢气以外，可列举将大气和氢气组合使用的方法等。
在该情况下，可以将大气和单独的氢气同时封入，可列举与逐步增加大气一起封入的氢气的浓度、或者，刚开始单独使用大气，在后半的阶段中，封入氢气等方法，认为通过使用这些方法，由此能够将基于在溶剂中的溶解等导致的氢气的损失抑制至最小限度，从而将更多的氢气封入气泡中。
对将大气和氢气同时使用的情况的比率没有特别限制，但认为例如将封入操作中使用的“(ii)氢气”的量优选设为使用“(i)大气”的量的10倍以上，更优选为使用“(i)大气”的量的100倍以上。
(气泡的大小)
在本发明的“含有活体微生物的组合物”中使用的气泡的大小，首要地需要为纳米尺寸以下，对具体大小而言，可以根据使用的“活体微生物(I)”不同而随机应变进行变更。
在“活体微生物(I)”为病毒的情况下，为了包覆病毒，特别是提高经过粘膜等的植活率，气泡的大小优选小于病毒本身的大小(一般为10～100nm)。
在“活体微生物(I)”为细菌的情况下，为了包覆细菌，特别是提高经过粘膜等的植活率，气泡的大小优选小于细菌本身的大小(一般为1μm(1000nm)左右)。
在“活体微生物(I)”为真菌的情况下，为了包覆真菌，特别是提高经过粘膜等的植活率，气泡的大小优选小于真菌本身的大小(一般为数μm)。
(全部气泡中纳米尺寸以下的气泡的比率)
在“含有活体微生物的组合物”中的全部气泡中，“纳米尺寸以下的气泡(III)”并不必须为100％。
不过，从与常规的“使用了不具有气泡的溶剂的活体微生物移植用组合物”相比，因为认为“本发明的组合物”中包含的“活体微生物(I)”更确实地在活体中植活的原因是比“活体微生物(I)”更小的“纳米尺寸以下的气泡(III)”包覆“活体微生物(I)”从而有助于在活体的植活，所以，优选包含许多而为能够包覆各个“活体微生物(I)”的程度。
进一步，从由大于纳米尺寸的气泡的崩溃造成的组合物变性较少的方面、“活体微生物(I)”的植活率更加提高这样的方面，期望“纳米尺寸以下的气泡(III)”的比率尽可能高。
另外，气泡的大小并不必须是均质的，通常具有一定程度的气泡径分布。
因此，作为具体指标，认为气泡的“平均直径”，如果比使用的“活体微生物(I)”小，则为能够包覆“活体微生物(I)”的程度并也包含许多小的气泡，例如在“活体微生物(I)”为细菌的情况下，优选使用平均气泡径低于1000nm的溶液，更优选平均气泡径为900nm以下。
(组合物中的气泡的数量)
本发明的“含有活体微生物的组合物”中的气泡的数量优选为较多的情形。
具体的数量也根据(I)的浓度(活体微生物(I)的数量)不同而不同，不能总括地说明，但可以确认的是，在使用能够制造“纳米尺寸以下的气泡(III)”的公知的制造仪器的情况下，只要为通常可产生的数千个～数亿个/ml就足够了。
(活体微生物(I)用气泡的包覆)
另外，认为“纳米尺寸以下的气泡(III)”通过将含有气泡的溶剂(II)和“活体微生物(I)”轻轻搅拌或混合，由此以自然地包覆“活体微生物(I)”的周围的方式结合，认为该包覆为足够的程度，能够不被粘多糖类等肠壁的粘膜等所阻，更迅速、确实地在活体植活。
(气泡的制造方法)
在本发明的“含有活体微生物的组合物”中使用的“(III)的纳米尺寸以下的气泡”可以通过后述的本发明的制造方法的工序(1)而产生。
(组合物的制造方法)
本发明的“含有活体微生物的组合物”可以通过后述的本发明的制造方法等制造。
(本发明的“含有活体微生物的组合物”的施用量)
本发明的“含有活体微生物的组合物”的施用量也是根据本发明的组合物中的“活体微生物(I)”的浓度(含有比率)、量，后述“接受者”的“属性和/或环境”等不同而适当确定的，优选大致每次施用50ml～300ml。
(本发明的“含有活体微生物的组合物”的施用次数)
本发明的“含有活体微生物的组合物”的施用次数也是根据本发明的组合物中的“活体微生物(I)”的浓度(含有比率)、量，后述“接受者”的“属性和/或环境”等不同而适当确定的，也存在一次就可以观察到效果的案例，但通常也存在为了使微生物在“接受者”的活体的植活确实，而优选至少分成二次以上而多次施用的情况。对多次施用的次数，没有特别的限制，如果考虑患者的负担等，存在优选设为10次左右以内的情况。
另外，在分多次进行施用时，可以考量后述“接受者”的“属性和/或环境”等，施用时间的长度、施用次数，组合物中的“活体微生物(I)”的量、浓度(含有比率)等而适当确定，但也可以观察各施用之后的过程，而适当灵活地改变刚开始的计划。
另外，在多次施用的情况下，通常存在由于能够容易与活体调和，使得更确实地植活，因此优选使“活体微生物(I)”的浓度改变，并赋予浓度梯度而施用的情况。
(本发明的“含有活体微生物的组合物”的施用时间)
本发明的“含有活体微生物的组合物”的施用时间也是根据本发明的组合物中的“活体微生物(I)”的浓度(含有比率)、量，后述“接受者”的“属性和/或环境”等适当确定的，为了提高植活效果，优选在一次施用和下一次施用之间隔开数小时～数天，另外，作为整体的施用时间，例如在分成10次进行施用的情况下，优选在1～数个月以内。
不将施用与施用之间的间隔隔开过久的情形，是为了容易发挥连续施用的效果。
另外，施用间隔不需要为恒定间隔，除了对每个案例渐渐延长间隔的情况、渐渐缩短间隔的情况以外，可考虑一边观察“接受者”的体质、身体状况、疾病的恢复程度等，从而适当设定无规的间隔等各种方法。
(施用的本发明的“含有活体微生物的组合物”的种类)
对“含有活体微生物的组合物”而言，可以从制造刚开始就以来自多个“供体”的混合物形式制造，也存在优选预先制造多份来自单一“供体”的组合物，而一边观察“接受者”的体质、身体状况、疾病的恢复程度等，从而在每次移植适当使用适当的来自“供体”的组合物的情况。
这是因为根据“接受者”的体质、身体状况、疾病的恢复程度或者有无身体状况不良等难以预料的情形，应该导入的活体微生物的种类也当然会改变。
(本发明的“含有活体微生物的组合物”的施用途径)
本发明的“含有活体微生物的组合物”可以以用于从口腔、眼睛、耳、鼻、***、尿道、皮肤或***等施用的组合物等的形式，利用各种施用方法到达施用对象部位。
另外，在本发明的“含有活体微生物的组合物”之中，用于经由“粘膜”而植活的组合物，由于更活用了本发明的可提高活体微生物的植活效果的优点，因此是优选的。
“粘膜”是指在消化器官、呼吸器官、泌尿器官、生殖器等主要为中空制的体内器官内面的柔软的组织，具体而言，可列举例如在肠道内侧的包含粘多糖类等的肠粘膜等。
(本发明的“含有活体微生物的组合物”的施用器具)
作为用于施用本发明的“含有活体微生物的组合物”的器具，除了后述的本发明的“用于组合物施用的器具”以外，作为用于在活体内施用组合物的公知的器具，可列举例如：大肠内窥镜、十二指肠内窥镜等内窥镜检查装置、市售的肠导管等。
从可利用精确定位选择施用位置的方面，优选内窥镜检查装置等，但从不需要事前的饮食限制、肠道洗涤，事后的泻药的服用等，且优于一切的是在向体内导入长的管时对施用对象的负担也较少的方面出发，优选使用了本发明的“组合物施用用器具”、市售的肠导管进行施用的方案。
另外，在使用了肠导管进行施用的情况下，不一定必须使用囊括肠道内全部的管，利用“十数厘米(例如市售的橡胶制肠导管)”的管，也能够充分使“活体微生物(I)”在活体中植活。
这是考虑到活体微生物都携带有其种类自己固有的生物动作电位，具有为相同带电状态的同种的活体微生物彼此之间发生吸引的性质，因此从***施用的活体微生物会以离得远的活体内的相同种类的活体微生物为目标而自己移动。
另外，由于在本发明的“含有活体微生物的组合物”中，“纳米尺寸以下的气泡(III)”包覆着“活体微生物(I)”因此，可认为有利用该气泡，生物动作电位被扩增，使得活体微生物彼此更容易接近的可能性。
(本发明的“含有活体微生物的组合物”的形式等)
本发明的“含有活体微生物的组合物”，在不引起组合物中的“纳米尺寸以下的气泡(III)”的塌陷、“活体微生物(I)”的失活等的范围内，能够采取公知的组合物的形式，例如优选液态物、凝胶状物等形式。
作为在从口腔施用时的“口腔用组合物”的代表产品，可列举人或非人动物用的“药物”、“准药”等治疗用组合物、“食物和饮料”、“营养补充剂”等。
作为“眼科用组合物”，可列举“眼药水”等。
作为“耳鼻科用组合物”，可列举“滴鼻剂”等。
作为“用于经皮施用的组合物”，可列举“糊剂”等“贴剂”、“软膏”、“喷雾”等“擦剂”。
另外，作为从用于***施用的组合物，可列举“药物”、“准药”等治疗用组合物等。
[本发明的用于调整活体微生物平衡的组合物]
本发明的“用于调整活体微生物平衡的组合物”，其特征在于包含上述本发明的“含有活体微生物的组合物”。
本发明的“含有活体微生物的组合物”对调整由于疾病等而破坏的活体内的微生物的平衡(多个微生物的种类和种类间的比率等)有用。
其中，特别是优选用作“用于调整肠内菌群平衡的组合物”的主要成分。
另外，对“活体微生物平衡”而言，存在指某个体的活体中的“全部活体微生物平衡”的情况、和指“特定的活体器官中的活体微生物平衡”的情况，但本发明的“用于调整活体微生物平衡的组合物”对特定器官的“活体微生物平衡”，其中对“在肠内栖息的活体微生物的平衡”即，所谓“肠内菌群平衡”的调整特别有用。
其具体组成可以为上述“含有活体微生物的组合物”本身，也可以进一步包含其它对活体微生物平衡的调整有用的成分。
本发明的“用于调整活体微生物平衡的组合物”的“施用量”、“施用次数”、“施用时间”、“施用途径”、“用于施用的器具”、“形式”等与在本发明的“含有活体微生物的组合物”文中记载的那样。
[本发明的组合物的制造方法]
本发明的“含有活体微生物的组合物”及“用于调整活体微生物平衡的组合物”(以下，存在一并记载为“本发明的组合物”的情况)的制造方法，至少包括下述(1)及(2)的工序：
(1)在(II)的溶剂中产生(III)的气泡的工序，
(2)使(I)分散和/或溶解于(II)中的工序，
其中(I)为至少一种以上的活体微生物，
(II)为溶剂，
(III)为纳米尺寸以下的气泡(以下，存在记载为“纳米气泡”的情况)。
《工序的顺序》
上述工序可以按照(2)、(1)的顺序进行，但从能够将制造工序中的活体微生物的失活的风险抑制至最小限度的观点出发，优选按照(1)、(2)的顺序实施。
另外，也可以在这些各个工序的前后加入其它工序。
《工序(1)的方法》
作为工序(1)的“在(II)的溶剂中产生(III)的气泡”的方法，可列举例如如下所述方法，或将它们组合使用的方法等，但不限于这些：
气液混合剪切方式：
使气体与液体一起高速回旋的方法。
超声波方式：
对液体施加冲击波、空腔化，将暂时生成的气泡进一步破碎的方法。
加压溶解方式：
对气体和液体施加压力，并一次性放出，由此使气泡产生的方法。
微细孔方式：
使用节流孔等在施加压力的同时供给气体的方法。
电解方式：
从在水溶液中浸泡的细线使气体产生的方法。
在上述之中，“气液混合剪切方式”由于利用微泡的进一步剪切处理，而能够产生稳定的纳米尺寸以下的气泡，因此是优选的。
另外，具体而言，可以组合使用例如：下述1)及2)等市售的装置等而产生纳米气泡：
1)利用协和机设公司制微纳米气泡产生装置“BUVITAS(注册商标)HYK-25”的直径1微米以下的气泡生成(旋转剪切方式)，
2)来自株式会社亚八和公司制“νG7(注册商标)”的微纳米气泡的纳米气泡化(不锈钢制过滤器)。
《工序(2)的方法》
作为工序(2)的“使(I)分散和/或溶解于(II)中的”方法，可列举使用上述的工序(1)中制备的“含有气泡(III)的溶剂(II)”处理“活体微生物(I)”的方法等。
“处理”是指也如在上述(生物样品的处理方法)中记载的那样，例如将从“供体”的活体内取出的包含目标的“活体微生物(I)”的“生物样品”，在“含有气泡(III)的溶剂(II)”中轻轻搅拌之后，使用过滤等方法除去除了(I)以外的不要的物质等，将预先纯化的“活体微生物(I)”利用“含有气泡(III)的溶剂(II)”等溶剂进行稀释等。
另外，对使用的溶剂(II)的量、过滤的次数等而言，也如在上述(生物样品的处理方法)中记载的那样。
另外，也可以在将“含有气泡(III)的溶剂(II)”变为使用“(溶剂(II)”进行上述处理后，在该溶剂(II)中使气泡(III)产生，但为了将“活体微生物(I)”的失活抑制至最小限度，优选使用“含有气泡(III)的溶剂(II)”进行处理。
《工序(3)的追加》
在“本发明的组合物”的制造方法中，可以与(1)、(2)一起进一步包括以下(3)的工序：
(3)根据“接受者”的“属性和/或环境”，确定(I)中的活体微生物的种类和种类间的比率，和/或从中收集(I)的1个或2个以上个体的工序。
术语“属性”包括“接受者”具备的性质、特征等，例如：“接受者”自身的身体状况，携带的疾病的种类和严重程度，年龄、性别、身高、体重、体型、血压、既往病情、包括饮食习惯、吸烟习惯等生活习惯等。
另外，术语“环境”包括生活环境等，所述生活环境包括“接受者”的居住或工作的生活地区的气候带，温、湿度，有无烟草的烟、排气气体等，家属构成，职业，有无宠物，施用时间的季节、气候等。
在以一定程度的“团块”形式收集来自健康的“供体”的“活体微生物(I)”，而直接(例如将全部“肠内菌群”等那样的源自生物样品的多个活体微生物的聚集体整个地)使用的情况下，不是必须需要特别是上述(3)那样的工序，但也存在以下情况：在将来自多个“供体”的“团块”进行混合而使用的情况，在根据疾病的种类、其它条件而需要特意使特定的活体微生物的比率显著变化的情况等下，优选设置如(3)那样的工序。
另外，在实施(3)的工序的情况下，可以在(2)的工序的前后中任一者进行。
[本发明的组合物的组成的确定方法]
“本发明的组合物”的组成的确定方法包括下述工序：
(A)评估要施用的“活体微生物平衡”的类型的工序，
(B)选定能够实现(A)中评估的“活体微生物平衡类型”的来自与施用对象相同或不同的1个或2个以上个体的“活体微生物”的工序。
另外，在本发明中，“组成”是指在本发明的组合物中，
除了“活体微生物(I)中的活体微生物的种类和种类间的比率”、“活体微生物(I)本身的浓度(含有比率)”以外，
包括“(溶剂(II)”的种类、含有比率，
“纳米尺寸的气泡(III)”的“气泡径”、“气体成分的种类”、“气泡的数量”
等的综合性组成，
对于本发明的组合物，“活体微生物(I)中的活体微生物的种类和种类间的比率”及“纳米尺寸的气泡(III)”的“气泡径”、“气泡的数量”特别重要。
在(A)的工序中的“活体微生物平衡类型的评估”，是指在“活体微生物(I)”为多种的活体微生物的聚集体的情况下，以其中特定的种类的微生物的比率为指标，针对各个施用对象(患者)每人而设计认为对罹患的疾病的治疗有效的理想的“活体微生物平衡”。
作为用于设计的具体探讨项目，可列举例如如下所述的这些为例子：
(A)-i：
施用对象的“活体微生物平衡”。
“活体微生物平衡”是指在“个体全部”或者“特定的活体器官内”的活体微生物的种类和种类间的比率(数量比)等。
作为“活体微生物平衡”的测定方法，已知有各种公知的方法，但没有特别限定，可列举例如使用各个活体微生物所具有的“对该活体微生物而言特征性的基因”、DNA序列等进行测定的方法等。
其中，由于已知“身体状况、疾病”等与“肠内菌群平衡”的特征存在一定的相关关系等，因此作为例如后述(A)-iii的“接受者”的属性，如果探讨了身体状况、疾病的种类、程度，则不必须有该(A)-i的探讨。
(A)-ii：
至少关于该疾病认为是健康的不同个体的“活体微生物平衡”的倾向。
例如，在(A)-i的分析等的结果中，当判断与健康个体的活体微生物平衡中A的比率的倾向相比，在施用对象的“活体微生物平衡”中的特定的“肠内细菌A”极端不足的情况下，将充分包含“肠内细菌A”的“活体微生物平衡”作为要施用的理想“活体微生物平衡”设计。
对在(A)的工序中评估的要施用的“活体微生物平衡”的类型而言，除此以外，可以通过例如进一步确认或探讨下述项目等由此加以修正。
(A)-iii：
施用对象(“接受者”)的“属性和/或环境”。
另外，在此所述“属性和/或环境”是指在上述的本发明的组合物的制造方法中记载的那些。
(A)-iv：
至今积累的基于“活体微生物移植”的治疗结果的见解。
在(B)的工序中，以能实现(A)中评估的类型的方式，选定源自与“接受者”相同或不同的1个或2个以上个体的“活体微生物”。
具体而言，例如可以通过与健康的1个或2个以上个体的“活体微生物平衡”相比，识别较多(或较少)的活体微生物，选定源自它们的平衡良好的1个或2个以上个体的“活体微生物”而实施。
[用于本发明的组合物的施用的器具]
本发明的“用于组合物的施用的器具”为用于将上述“含有活体微生物的组合物”、“用于调整活体微生物平衡的组合物”等“本发明的组合物”从***等施用的器具的一例，其具有“管状部分”。
作为“管状部分”，可以使用例如市售的肠导管等的管状物等。
另外，该“管状部分”的长度也根据“接受者”的年龄、体型等而不同，例如优选为5cm以上，更优选为10cm以上，进一步优选为15cm以上，特别优选为18cm以上。
其中，其不一定为必须囊括肠道内全部程度那么长，相反为了避免过长带来的“组合物”的物性变化等风险，也存在例如优选为50cm以内的情况。
在上述器具中也可以具备下述部分：
“储藏部分”：诸如注射器“主体”，大肠内窥镜所带的“容器(Tank)”，冲洗器(irrigator)、点滴输液袋中的“药液容器”等那样的能储藏本发明的“组合物”的部分，
“挤出机构”：诸如泵的能够将“储藏部分”内的“组合物”挤出的机构。
另外，也可以形成为例如诸如开塞露(Ichiiiku灌肠剂)等一次性类型的灌肠容器那样，以“储藏部分”本身将储藏部分内部的储藏物挤出的机构。
[本发明的活体导入辅助溶剂]
本发明的“活体导入辅助溶剂”中包含下述(II)及(III)，在本发明中也记载为“纳米气泡水”：
(II)溶剂，
(III)纳米尺寸以下的气泡。
另外，“活体导入”是指除了植活、附着以外，使其在血管的内外、活体内的空腔(肠道内)等存在等，置于在活体内能发挥导入物的功能的状态。
具体而言，作为施用途径，可列举：口腔、眼睛、耳、鼻、***、尿道、皮肤或***，其中优选经由粘膜导入，特别优选经由肠壁导入。
作为利用该“活体导入辅助溶剂”促进活体导入的对象物，主要可列举有机物，其中，优选为活体微生物，特别优选为肠内细菌，但也可以为矿物质等无机物。
另外，在促进活体导入的对象物为“活体微生物”的情况下，可以利用本发明的“活体导入辅助溶剂”将“活体微生物”导入粘膜上的“粘液”中，由此将活体微生物产生的有机酸等，“经由粘膜”而深深渗透至活体内。
通过使用本发明的“活体导入辅助溶剂”，如根据后述的试验例等可知的那样，能够将作为导入目标的物质更有效地导入活体。
[本发明的体质和/或身体状况改善剂]
本发明的“体质和/或身体状况改善剂”，其包含权利要求1～8中任一项所述的组合物，具体而言包含下述：
(I)至少一种以上的活体微生物，
(II)溶剂，
(III)纳米尺寸以下的气泡。
通过本发明的“体质和/或身体状况改善剂”的导入，如根据后述的试验例等可知的那样，能实现改善苦恼于数量众多的疾病、身体状况不良的患者的体质和/或身体状况，进而对疾病的预防和/或治疗有帮助。
[本发明的体质和/或身体状况改善方法]
本发明的“体质和/或身体状况改善方法”，为将权利要求1～8中任一项所述的组合物导入活体中，进行疾病的预防和/或治疗，或者体质和/或身体状况的改善的方法。
根据本发明的“体质和/或身体状况改善方法”，如根据后述的试验例等可知的那样，能实现改善苦恼于数量众多的疾病、身体状况不良的患者的体质和/或身体状况，进而对疾病的预防和/或治疗有帮助。
[将本发明的目的物导入活体中的方法]
本发明的“将目的物导入活体中的方法”，其特征在于使用上述本发明的“活体导入辅助溶剂”。
通过该“将目的物导入活体中的方法”，如根据后述的试验例等可知的那样，能够将目的物以优于常规方法的效率导入苦恼于数目众多的疾病、身体状况不良的患者的活体内。
实施例
在本发明的“含有活体微生物的组合物”的实施例的记载之前，对这些实施例中使用的本发明的“活体导入辅助溶剂”，即包含“(III)纳米尺寸以下的气泡”的“(II)溶剂”(以下，记载为“纳米气泡水”)及“肠内菌群平衡”的详情进行说明。
[实施例A：活体导入辅助溶剂]
《材料及方法》
(“纳米气泡水A”的制造)
使用上述的装置等，使用矿物质水及大气制作了本发明的“活体导入辅助溶剂A(纳米气泡水A)”。
使用贝克曼库尔特株式会社(Beckman Coulter)制的“Multisizer 3”，将于上述制作的“纳米气泡水A”，为了便于进行气泡径测定而稀释至250倍，测定了该稀释溶液中的气泡的大小、数量等。
将结果示于图1。
本发明中使用的“纳米气泡水A”的分析结果为以“＊”所示的在图中最上部的折线图。
图1的分析结果：
平均气泡径：830nm
气泡个数：约43.5万个/ml
因此，认为本发明中使用的“纳米气泡水A”(250倍稀释前)的气泡个数为约1亿个/ml左右。
[实施例B：活体导入辅助溶剂]
作为使气泡产生时封入的气体，与大气一起使用氢气，将氢气的封入时刻设在封入的后半段，除了提高了气泡中的氢气浓度以外，与实施例A同样地进行，制造了本发明的“活体导入辅助溶剂B(纳米气泡水B)”。
另外，封入中使用的氢气使用了大气的约250倍量。
认为本发明中使用的“纳米气泡水B”(250倍稀释前)的气泡个数也为约1亿个/ml左右。
[“肠内菌群平衡”的测定]
将从各“供体”或者“接受者”收集的粪便进行过滤、纯化而成的溶液中的“肠内细菌的种类和种类间的比率(数量比)”，以每种肠内细菌特有的公知的基因作为指标进行了测定，作为各个个体的“肠内菌群平衡”。
每种肠内细菌特有的基因使用下述装置测定。
DNA测序仪：Illumina株式会社制，“MiSeq”
[实施例1：含有活体微生物(肠内细菌)的组合物(原液)]
《肠内菌群文库的建立》
测定从源自约80名“供体”(健康人)的粪便中的“肠内菌群平衡”，并由该粪便使用上述“纳米气泡水A”(250倍稀释前的)制造了本发明的“含有活体微生物的组合物(原液)”，建立了“肠内菌群文库”。
具体而言，将每个“供体”收集的粪便“50～150g”，分别浸于1.5～4倍，即“75～600ml”的“纳米气泡水A”(250倍稀释前)中，轻轻搅拌而使粪便半自然溶解。
另外，“纳米气泡水A”的量根据“供体”的粪便的状态(包含的水分量)等而适当确定。
接着，使用灭菌的纱布将该溶解液多次过滤，直至利用光学显微镜(低倍率)下不能确认到食物残渣等不要的物质为止，制造了按“供体”分别的“含有活体微生物的组合物(原液)”。
另外，灭菌的纱布使用了具有“活体微生物(I)”、“纳米气泡(III)”可通过的尺寸的空隙。
[实施例2～9：含有活体微生物(肠内细菌)的组合物(稀释液)]
(A)施用的“肠内菌群平衡”的类型的评估：
(A)-i：施用对象的“活体微生物(肠内菌群)平衡”测定
作为施用对象，如图2～9所示，选定了各种疾病的患者。
收集这些患者(以下称为“接受者”)的粪便，通过肠内细菌的基因分析测定了其“肠内菌群平衡”。
将其结果示于图2～9(左边的柱状图)。
(A)-ii：“供体”的“肠内菌群平衡”倾向的确认
对各“接受者”每人，至少关于各自罹患的疾病确认了被认为是健康的“供体”的“肠内菌群平衡”的倾向。
然后，在将(A)-i中测定的“接受者”的“肠内菌群平衡”，与在(A)-ii中确认的倾向进行比较，在此基础上，进一步也综合地考量了除了各(A)-iii的“接受者”的“属性和/或环境”以外的(A)-iv的至今积累的“肠内菌群移植”的见解，评估了对各“接受者”要施用的“肠内菌群平衡”的类型。
(C)来自健康的“供体”的“肠内菌群”的选定：
根据“接受者”不同，从上述“肠内菌群文库”中各选定了4～6名具有能够实现在(B)中确定的“活体微生物平衡类型”的“肠内菌群”的“供体”。
(含有活体微生物的组合物(稀释液)的制造)
对罹患图2～9的各种疾病的“接受者”每人，混合了4～6种的“含有活体微生物的组合物(原液)”(原液混合物)。
之后，将针对各“接受者”每人制造的原液混合物，分别利用生理盐水稀释至多种浓度，制造了多个具有约5～50倍的浓度梯度的“含有活体微生物(肠内细菌)的组合物(稀释液)”。
将针对各种疾病每种选定的来自多个“供体”的“含有活体微生物(肠内细菌)的组合物(稀释液)”的“肠内菌群平衡”，示于图2～9(右边的柱状图)。
[实施例10：用于含有活体微生物(肠内细菌)的组合物的施用的器具]
作为“管状部分”使用12fr(法文：外径)～15fr的肠导管(约50cm左右)，作为组合物的“储藏部分”使用前端与肠导管相连的灌肠容器或冲洗器或点滴输液袋，制造了本发明的组合物的“用于施用的器具”。
“管状部分”的外径、“储藏部分”的种类，根据“接受者”的年龄、性别、症状等复合的原因确定。
在“接受者”为儿童的情况下，使用了12fr，在成人的情况下使用了12～15fr的那些。
[试验例1：活体微生物的植活确认试验-a]
(对“接受者”(患者)的施用)
对各“接受者”施用了在实施例2～9中制造的“含有活体微生物(肠内细菌)的组合物(稀释液)”。
具体而言，将上述实施例10的器具的肠导管部分从“接受者”的******17～20cm左右，通过各50～300ml的肠道输注法，移植了本发明的“含有活体微生物的组合物(稀释液)”。
***的长度根据“接受者”的年龄、体型，及症状等，移植量根据年龄、症状或施用次数等而适当确定。
另外，对移植而言，一边确认“接受者”的疾病的改善程度、身体状况等，一边使用上述约5～50倍的稀释液，在改变活体微生物的含有浓度的同时赋予浓度梯度，分成1～10次左右，经1天～数个月进行施用。
(结果：“肠内菌群平衡”的变化)
从各“接受者”收集实施了1～10次的移植后(移植时期结束后)的便样，通过肠内细菌的基因分析测定了“肠内菌群平衡”。
将其结果示于图2～9(正中的柱状图)。
判明了在图2～9中任一种情况下，使“接受者”的“肠内菌群平衡(正中的柱状图)”大幅改善，与“供体”(右柱状图)的“肠内菌群平衡”非常接近。
另外，也可能会有如下见解：移植后的“肠内菌群平衡”的变化，是由于移植的组合物并不植活而是直接被***的结果导致的。
但是，由于在移植的组合物中包含的细菌的绝对量，远远少于“接受者”自身的肠内细菌，而在移植时期结束后的便中的“肠内菌群平衡”如图中所示的程度发生显著变化，因此，较自然地是认为在肠粘膜下栖息的细菌反复进行对数增殖，而作为“接受者”自身的细菌而反映在便中。
因此，认为图2～9(正中的柱状图)所示的移植后的“肠内菌群平衡”是基于移植后的活体微生物在“接受者”的活体内确实植活的结果。
另外，已报告了在常规的(未使用“纳米气泡水A”)“肠内菌群移植”中，移植后“肠内菌群平衡”的变化较小，另外，对该疾病的改善的程度而言也并不满足。
与此相对，根据上述试验结果，在施用之后，粪便中的“肠内菌群平衡”显著得到改善，与健康的“供体”的“肠内菌群平衡”大幅接近。
即，上述的试验结果在与常规的“肠内菌群移植”相比时十分惊人。
(考察)
上述结果显示，通过使用“纳米尺寸以下”的气泡，由此“作为(I)的活体微生物”肠内细菌更确实地在肠内植活、增殖，能够形成了具有新的活体微生物平衡的“肠内菌群”，即实施例2～9的“含有活体微生物的组合物”作为“用于调整活体微生物平衡的组合物”发挥了功能。
认为这可能是由于，基于由粘多糖类等组成的肠道粘膜等的防止体外物质对活体的侵入的作用被包覆活体微生物的微小的气泡减轻了。
因此，在“本发明的组合物”之中，作为用于经由粘膜而在“接受者”的活体内植活的组合物，本发明的组合物的利用价值特别高。
[试验例2：活体微生物的植活确认试验-b]
(人肠内菌群对小鼠的施用)
将纳米气泡水A变为使用纳米气泡水B，除此以外与实施例1同样地进行，由人的粪便制作了“含有活体微生物的组合物”(原液)。接着，与实施例2～9同样地进行，制作了本发明的“含有活体微生物的组合物”(稀释液)。
另外，为了进行比较，通过将纳米气泡水变为使用生理盐水的常规方法同样地制作了用于比较的“含有活体微生物的组合物”(稀释液)。
将基于本发明及常规方法的“含有活体微生物的组合物”(稀释液)各2cc分别导入3只小鼠中。
提起小鼠的尾进行倒吊，从上方向肠内利用灌肠导入，由此将倒流抑制至最小限度。
(小鼠粪便的收集)
移植后放入笼中，分别在施用前、刚施用后、次日(9点及17点左右)、2天后(9点及17点左右)、3天后(9点及17点左右)、7天后(9点及17点左右)采便，冷藏保存之后，利用下一代测序仪(Illumina公司，Miseq)进行了肠内菌群分析。
(结果：“肠内菌群平衡”的变化)
第7天，与移植的“含有活体微生物的组合物”的肠内菌群平衡无关联地，“布劳特氏菌属(Blautia genus)”激增。
另外，“布劳特氏菌属”的增加率在本发明的“含有活体微生物的组合物”的情况下，即使与常规方法的“含有活体微生物的组合物”相比也显著增高了。
(考察)
对“布劳特氏菌属”而言，有报告称在进行了脏器移植等时，其为了保护宿主而急剧增殖，参与由移植物抗宿主病(Graft-versus-Host Disease)带来的致死率降低(Biology of Blood and Marrow Transplantation Volume 21，Issue 8，August 2015，Pages 1373-1383)。
因此，认为上述结果印证被移植的“源自人的肠内菌群”的至少一部分确实在小鼠的肠中“植活”，且其“植活量”显著多于常规方法。
另外，在从人到人的移植时，利用任意方法均未观察到这样的“布劳特氏菌属”的激增，能够通过利用这样的“异种动物间移植”所特有的变化，确认本发明的“含有活体微生物的组合物”的优异的植活效果。
[试验例3-1：体质和/或身体状况的改善效果确认试验-症例1]
[症例1]：34岁男性
[诊断名]：贾第鞭毛虫感染
[主诉]：恶心
[当前病史]：2011年在印度停留2个月。其时食用水果(使用自来水)，因此持续了腹泻症状。之后，回本国之后(美国)也有腹泻、恶心等消化系统症状，精细检查后被诊断为基于兰氏鞭毛虫(Giardia lamblia)的贾第鞭毛虫病，间歇地在6个月中施用了抗生素。之后，在检验上贾第鞭毛虫病已治愈，但在数个月～1年之后起，变得在摄取砂糖时感到不适。特别是摄取甜品等使用了精制糖的食品、酒、牛奶(酸奶可以)时的症状显著，水果等含膳食纤维的则没有问题。另外，如果大量食用米饭也出现症状，但全麦面粉则不引起症状。
[既往病史]：无特殊注意事项
[确认体质和/或身体状况的改善效果的试验方法]
将移植中使用的“含有活体微生物的组合物”的组成及实施的肠内菌群移植的规程示于以下及图10-1。
[“含有活体微生物的组合物”的组成]
如下所述，准备了在规程中在UB1～UB3的各点移植使用的“含有活体微生物的组合物”。
UB1：使用了图10-2所述的源自供体B的粪便的纳米气泡水B处理完毕的原液5ml/250ml生理盐水稀释物
UB2：使用了图10-2所述的源自供体B的粪便的纳米气泡水B处理完毕的原液8ml/250ml生理盐水稀释物
UB3：使用了图10-2所述的源自供体A的粪便的纳米气泡水B处理完毕的原液10ml/250ml生理盐水稀释物
[方案]
1.在移植前实施肠内菌群检验(粪便)(1)
2.使用生理盐水调整移植菌液，以灌肠方式进行从菌群文库的粪便移植(S1)
3. 2周之后，检验肠内菌群(粪便)(2)
4.之后，以灌肠方式将利用超细气泡水(纳米气泡水B)调整的菌液进行粪便移植(UB1)
5.每周一次，共计3次基于超细气泡水(纳米气泡水B)的粪便移植(UB2、UB3)
6. 2周之后，检验肠内菌群(粪便)(3)
7.通过问诊掌握各自的症状变化。
[经过]
《S1～(2)》
在S1移植后，腹部胀满感强，难以进食的状态。移植3天后有3天的腹泻。
《UB1～UB2》
UB1结束后，无腹部胀满感。也不腹泻，身体状态良好。
《UB2～UB3》
身体状态变好。排便正常(每天1次有形粪便)。
《UB3～(3)》
身体状态良好。一点一点地食用了至今为止出现症状的食品，但没有出现症状。
将调查上述(1)(2)(3)中收集的粪便的肠内菌群平衡的结果示于图10-2。
[结果]
如图10-2中所示，实施使用了纳米气泡水B的本发明的含有活体微生物的组合物的移植(UB1～UB3)后，出现了在实施S1之后未能确认的梭菌属XI簇，另外，梭菌属占整体的平衡增加了。
提示免疫调节及精神症状得到改善。另外，对整体的平衡而言，拟杆菌属(Bacteroides)的过量表达也得到抑制，认为通过本发明的含有活体微生物的组合物的移植(UB1～UB3)存在改善倾向。
[考察]
与通过实施作为最初的常规方法的S1，身体状况反而变差的情形相比，在UB1实施进行以后，顺利地恢复了身体状况，由此可明确，使用了本发明的纳米气泡水B的“含有活体微生物的组合物”比常规的仅在生理盐水中溶解了活体微生物的“含有活体微生物的组合物”更有用，能够用作“体质和/或身体状况改善剂”。
[试验例3-2：体质和/或身体状况的改善效果确认试验-症例2]
[症例2]：52岁男性
[主诉]：慢性疲劳症状
[既往病史]：盲肠切除(20多岁时)腰椎间盘突出(30多岁时)
[当前病史]：日常生活没有障碍，自己所觉从下午开始的疲劳症状。作为受试者参加了这次目标为评价粪便移植的植活率的临床试验。
[确认体质和/或身体状况的改善效果的试验方法]
将移植中使用的“含有活体微生物的组合物”的组成及实施的肠内菌群移植的方案示于以下及图11-1。
[“含有活体微生物的组合物”的组成]
如下所述，准备了在方案中在UB1～UB3的各点移植使用的“含有活体微生物的组合物”。
UB1：使用了图11-2所述的源自供体D的粪便的纳米气泡水B处理完毕的原液5ml/250ml生理盐水稀释物
UB2：使用了图11-2所述的源自供体C的粪便的纳米气泡水B处理完毕的原液8ml/250ml生理盐水稀释物
UB3：使用了图11-2所述的源自供体D的粪便的纳米气泡水B处理完毕的原液10ml/250ml生理盐水稀释物
[方案]
1.在移植前实施肠内菌群检验(粪便)(1)
2.使用生理盐水调整移植菌液，使用内窥镜进行从菌群文库的粪便移植(S1)
3. 2周之后，检验肠内菌群(粪便)(2)
4.之后，以灌肠方式将利用超细气泡水(纳米气泡水B)调整的菌液进行粪便移植(UB1)
5.每周一次，共计3次基于超细气泡水(纳米气泡水B)的粪便移植(UB2，UB3)，分别移植后检验肠内菌群(粪便)((3)(4)(5))
6.通过问诊掌握各自的症状变化
[经过]
《S1～UB1》
实施S1的次日疲劳感更增加，伴有腹部的蠕动亢进的肠鸣，间歇地持续有腹部不适感。
《UB1～UB3》
从实施UB-1后马上腹部不适感消失，疲倦感等自己所觉的症状也改善了。
《UB-3以后》
虽然自己所觉排气有些多，但不伴有腹部不适、疲倦感。
将调查上述(1)(2)(3)(4)(5)中收集的粪便的肠内菌群平衡的结果示于图11-2。
[结果]
如图11-2中所示，实施S1后梭菌属簇IX显著增加，平衡大幅破坏。可以看出为了重获该被破坏的平衡，接着在UB1以后的粪便移植中以使得接近目标平衡的方式移植的细菌与受试者的肠内细菌的互相争斗。对于精神状态，可以看出也提示了在S1实施后暂时性变差的可能性，在UB3结束后收于大致良好平衡而为稳定的精神状态。
[考察]
与通过实施作为最初的常规方法的S1，身体状况反而变差的情形相比，在UBl实施以后顺利地恢复了身体状况，由此可明确，使用了本发明的纳米气泡水的“含有活体微生物的组合物”比常规的仅在生理盐水中溶解了活体微生物的“含有活体微生物的组合物”更明显有用，能够用作“体质和/或身体状况改善剂”。
[试验例4：各种疾病的改善效果确认试验]
另外，使用“本发明的组合物”，对也包括在试验例1(图2～9)中所示的以外的疾病的约300个案例以上的患者进行了上述那样的植活确认试验。
其结果，在可观的数量中观察到与图2～9为同程度(或其以上)的活体微生物平衡的改善，进一步在各种疾病中也观察到改善。
进一步，对800案例以上进行了“肠内菌群移植”(也包括未进行上述那样植活确认试验的案例)，在这些案例的可观的数量中也观察到了疾病症状的改善等效果。
结果显示，尤其对于“溃疡性结肠炎”、“肠易激综合征”、“克罗恩病”、“躁狂抑郁症”、“抑郁症”、“特应性皮炎”、“便秘”等，其改善的程度较大，可以大大期待“本发明的组合物”的对活体的移植作为该疾病的有效的治疗方法。
[试验例5：植活速度的确认试验]
在试验例4中所述的约300病例以上的植活确认试验中，虽然根据“接受者”的“属性和/或环境”等不同，但在使用了“本发明的组合物”的情况下，除了在移植后的几分钟程度可得到温度感觉等带来的移植效果的实感以外，在移植时期结束后的数小时至次日内收集的开始的便样中，在众多案例中确认到了“肠内菌群平衡”的变化。
根据上述结果，可认为与常规的“肠内菌群移植”相比，基于本发明的组合物的“肠内菌群移植”中，肠内细菌以惊人的速度且更确实地植活。
[试验例6：活体导入辅助溶剂的有用性试验(微生物保存稳定性试验)]
从上述试验例明确了使用了本发明的“活体导入辅助溶剂”(纳米气泡水)的本发明的“含有活体微生物的组合物”适于向活体导入微生物等有机物等，以下对本发明的“活体导入辅助溶剂”的作为微生物的保存溶液的适应性进行了试验。
(试验方法：方案)
使用极东制药工业株式会社制的半流体高层活培养基对下述1)及2)的“含有肠内细菌的组合物”培养一周之后，进行了由肠内细菌的增殖带来的培养基的变化和细菌具有的运动性的比较观察。
1)使用本发明实施例B的“活体导入辅助溶剂B”(纳米气泡水B)，由人粪便和实施例1同样地制备了本发明的“含有肠内细菌的组合物”(菌液：原液)
2)使用生理盐水制备了常规的“含有肠内细菌的组合物”(菌液：原液)
使用上述各菌液50μl，以与细菌培养检验相同的手段利用巴斯德移液器穿刺注入上述培养基中，比较、观察了一周之后的情形。
将结果示于图12。
(结果)
如图12的右侧的管中所示，在2)的常规的“含有肠内细菌的组合物”中，在穿刺后不久，由于细菌的生长而在“有氧部分(培养基上部)”和“穿刺的高层部的厌氧部分(培养基的中部～底部)”观察到了由增殖带来的白浊的变化，但经过一周后，在除这些以外的试管内，保持了培养基本身的色调，透明度高。
即，没有看出肠内菌群全部继续培养、繁殖而保持了生物学的活性的倾向。
另一方面，同样地如图12的左侧的管中所示，在1)的本发明的“含有肠内细菌的组合物”中，除了穿刺后不久的细菌的生长带来的“有氧部分(培养基上部)”和“穿刺的高层部的厌氧部分(培养基的中部～底部)”的增殖带来的白浊的变化以外，培养基的全部白浊了，全体培养基的透明感明显消失了。
这显示：肠内菌群全部的生物活性基本被保持了，即，利用本发明的“活体导入辅助溶剂”(纳米气泡水B)制备的“含有肠内细菌的组合物”(菌液：原液)的保存稳定性持续了一周以上。
(考察)
从上所述的结果可知以下两个方面。
首先，可单纯地认为本发明的“活体导入辅助溶剂”更适于活体微生物的保存。
其次，认为其显示了：作为在其它试验例等中，与现有技术相比，本发明的“活体导入辅助溶剂”及使用了其的“含有活体微生物的组合物”均能够远远有效地将微生物等有机物导入活体中的原因之一，其可能为具有活体微生物的高保存稳定性。
工业实用性
与常规方法相比，“本发明的组合物”能够以患者负担更少而简便的方法进行给予，并与施用的方法、途径无关地实现更迅速、确实的植活，因此可大大期待对各种疾病的治疗等的应用。