一种纳米抑菌复合物及其制备方法
阅读说明：本技术 一种纳米抑菌复合物及其制备方法 (Nano antibacterial compound and preparation method thereof ) 是由 许澎 刘彩云 于 2021-06-25 设计创作，主要内容包括：本发明涉及抑菌材料领域,具体为一种纳米抑菌复合物及其制备方法,其为脂质体包覆的纳米抑菌组合物；所述脂质体由左旋聚半乳糖、卵磷脂、胆固醇、聚乙二醇组成；所述纳米抑菌组合物为壳聚糖-三聚磷酸钠纳米粒子和抑菌提取物组成,本发明所制备的纳米抑菌复合物具有广谱抑菌活性和即时抑菌性,对于大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉菌、类白喉杆菌、痤疮杆菌等具有良好的抑菌效果,且能长时间存放,可以被广泛应用于护肤、清洁领域,加入精华水,喷雾、面膜、漱口水中使用。(The invention relates to the field of antibacterial materials, in particular to a nano antibacterial compound and a preparation method thereof, wherein the nano antibacterial compound is a nano antibacterial composition coated by liposome; the liposome consists of levo-polygalactose, lecithin, cholesterol and polyethylene glycol; the nano antibacterial compound prepared by the invention has broad-spectrum antibacterial activity and instant antibacterial activity, has good antibacterial effect on escherichia coli, staphylococcus aureus, aspergillus niger, diphtheroids, acnes and the like, can be stored for a long time, can be widely applied to the fields of skin care and cleaning, and can be added with essence water for use in spraying, facial masks and mouth wash.)
技术领域
本发明涉及抑菌材料领域，具体涉及一种纳米抑菌复合物及其制备方法。
背景技术
壳聚糖为天然多糖甲壳素脱除部分乙酰基的产物，其具有生物降解性、生物相容性、抑菌、抗癌、降脂、增强免疫等多种生理功能，用于化妆品中，可渗透进入皮肤毛囊孔，抑制并杀死毛囊孔中藏匿的霉菌、细菌等有害微生物，从而消除由于微生物侵害而引起的粉刺、皮炎，同时可消除由于微生物积累而引起的黑色素、色斑等，但是由于其不易溶于水，加热后易成糊状团聚，而用有机溶剂又会产生刺激性，这制约了其在化妆品及护肤品领域的广泛使用。
发明内容
发明目的：针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本发明提供了一种纳米抑菌复合物及其制备方法。
本发明所采用的技术方案如下：
一种纳米抑菌复合物，其为脂质体包覆的纳米抑菌组合物；
所述脂质体由左旋聚半乳糖、卵磷脂、胆固醇、聚乙二醇组成；
所述纳米抑菌组合物为壳聚糖-三聚磷酸钠纳米粒子和抑菌提取物组成。
进一步地，所述壳聚糖-三聚磷酸钠纳米粒子的制备方法如下：
S1：将壳聚糖用醋酸溶液溶解得到A溶液；
S2：将三聚磷酸钠用水溶解得到B溶液；
S3：在500-800r/min的搅拌转速下，将B溶液加入A溶液中，继续搅拌10-30min，将悬浮液喷雾干燥即可得到所述壳聚糖-三聚磷酸钠纳米粒子。
进一步地，所述醋酸溶液的质量浓度为1-3％，所述A溶液的质量浓度为0.01-0.1％，所述B溶液的质量浓度为0.01-0.1％。
进一步地，所述抑菌提取物为厚朴提取物、紫锥菊提取物、生姜提取物、大蒜提取物、洋葱提取物、葡萄籽提取物、橄榄叶提取物、黄连提取物、洋金花提取物、蒲公英提取物、白芷提取物、白术提取物、黄柏提取物、甘草提取物、细辛提取物、黄芩提取物、白芨提取物、大力子提取物、牛蒡子提取物、赤芍提取物、连翘提取物、麻黄提取物、穿心莲提取物、马齿苋提取物、紫苏子提取物、牡丹皮提取物、生地提取物、苦参提取物、山豆根提取物、益母草提取物、车前子提取物、龙胆提取物、大青叶提取物、白头翁提取物、千里光提取物、薄荷提取物、石斛提取物、知母提取物、青蒿提取物、射干提取物中的任意一种或多种组合。
上述纳米抑菌复合物的制备方法如下：
S1：制备抑菌提取物纳米乳；
S2：将左旋聚半乳糖、卵磷脂、胆固醇、聚乙二醇溶于有机溶剂中，形成初乳；
S3：将伞花烃加入PBS磷酸盐缓冲液中，作为水相；
S4：先将抑菌提取物纳米乳注入水相中，快速搅拌下，再将初乳注入，减压蒸馏除去有机溶剂，再将壳聚糖-三聚磷酸钠纳米粒子加入，超声处理30-60min后，室温静置10-20h即可。
进一步地，S1中抑菌提取物纳米乳的制备方法如下：
将吐温80、丙三醇混合，升温至35-40℃搅拌至澄清后，再加入肉豆蔻酸异丙酯，继续搅拌10-30min后加水，再搅拌10-30min后将抑菌提取物加入，搅拌至澄清即可。
进一步地，吐温80、丙三醇、肉豆蔻酸异丙酯、水的质量比为4-6：2-3：1：20-30。
进一步地，所述有机溶剂为石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯中的任意一种。
进一步地，所述左旋聚半乳糖、卵磷脂、胆固醇、聚乙二醇的质量比为1-2：1-2：1-2：1-2。
进一步地，伞花烃与PBS磷酸盐缓冲液的质量比为1：200-250。
本发明的有益效果：
本发明提供了一种纳米抑菌复合物，其为脂质体包覆的纳米抑菌组合物，脂质体是一类能够把药物包封于类脂质双分子层内而形成的微型泡囊体，脂质体可以根据形态分为小单室脂质体、大单室脂质体和多层脂质体，脂膜主要由磷脂和胆固醇构成，脂质体具有靶向和淋巴定向性、缓蚀作用、降低药物毒性和提高药物稳定性等优点，其作为药物或者功能性物质的载体在医药、食品和化妆品领域具有巨大的应用前景，但是脂质体的稳定性是限制脂质体工业化的最大原因，包括制备过程中粒径分布不均引起的团聚，脂膜不稳定性引起药物泄露，与其他表面活性剂复配能力差等，将左旋聚半乳糖、卵磷脂、胆固醇、聚乙二醇复合制成能够稳定包覆纳米抑菌组合物的脂质体，具有稳定性好，制作简单，成本低，纳米抑菌组合物能在其中稳定存在，不易团聚，沉淀等优异效果，壳聚糖由于不易溶于水，加热后易成糊状团聚，而用有机溶剂又会产生刺激性，所以将其制作成壳聚糖-三聚磷酸钠纳米粒子，利用脂质体将其和抑菌提取物包覆，改善了其在水溶液中的存在形貌，更有利于消毒抑菌，将抑菌提取物以纳米乳的形式加入体系中进行制备，有利于形成抑菌提取物的均相分散体系，即使减压蒸馏除去有机溶剂后，抑菌提取物仍然能够稳定分布，能很好的减弱因聚集或是重力引起的体系失稳和粒子团聚，经过测试，本发明所制备的纳米抑菌复合物具有广谱抑菌活性和即时抑菌性，对于大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉菌、类白喉杆菌、痤疮杆菌等具有良好的抑菌效果，且能长时间存放，可以被广泛应用于护肤、清洁领域，经过测试将其加入精华水，喷雾、面膜、漱口水中都取得了良好的使用效果。
附图说明
图1为即时抑菌性能测试照片。
图2为纳米抑菌复合物的结构示意图；
图3为实施例1及对比例3所制备的纳米抑菌复合物室温存放30d后外观，可知本发明所制备的纳米抑菌复合物存放稳定性更高。
图4为实施例1制备的纳米抑菌复合物的粒径分析图，由图所示，纳米抑菌复合物的尺寸均一，分布在50-200nm之间。
图5为实施例1制备的纳米抑菌复合物的电镜分析图，由图所示，纳米抑菌复合物的尺寸均一，分布在50-200nm之间。
具体实施方式
实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
实施例1：
纳米抑菌复合物的制备方法：
将4g吐温80、2g丙三醇混合，升温至35℃搅拌至澄清后，再加入1g肉豆蔻酸异丙酯，继续搅拌20min后加20g水，再搅拌20min后将0.5g厚朴提取物加入，搅拌至澄清，得到厚朴提取物纳米乳，将0.75g壳聚糖用1L质量浓度为1％的醋酸溶液溶解得到A溶液，将0.75g三聚磷酸钠用1L水溶解得到B溶液，在800r/min的搅拌转速下，将B溶液加入A溶液中，继续搅拌20min，将悬浮液喷雾干燥即可得到所述壳聚糖-三聚磷酸钠纳米粒子，将1g左旋聚半乳糖、1g卵磷脂、1g胆固醇、1g聚乙二醇溶于500mL二氯甲烷中，形成初乳，将2g伞花烃加入450mLPBS磷酸盐缓冲液中，作为水相；将厚朴提取物纳米乳注入水相中，快速搅拌下，再将初乳注入，减压蒸馏除去有机溶剂，再将壳聚糖-三聚磷酸钠纳米粒子加入，超声处理50min后，室温静置15h即可。
实施例2：
纳米抑菌复合物的制备方法：
将4g吐温80、2g丙三醇混合，升温至40℃搅拌至澄清后，再加入1g肉豆蔻酸异丙酯，继续搅拌30min后加20g水，再搅拌30min后将0.5g厚朴提取物加入，搅拌至澄清，得到厚朴提取物纳米乳，将0.75g壳聚糖用1L质量浓度为2％的醋酸溶液溶解得到A溶液，将0.75g三聚磷酸钠用1L水溶解得到B溶液，在600r/min的搅拌转速下，将B溶液加入A溶液中，继续搅拌30min，将悬浮液喷雾干燥即可得到所述壳聚糖-三聚磷酸钠纳米粒子，将1g左旋聚半乳糖、1g卵磷脂、1g胆固醇、1g聚乙二醇溶于500mL二氯甲烷中，形成初乳，将2g伞花烃加入450mLPBS磷酸盐缓冲液中，作为水相；将厚朴提取物纳米乳注入水相中，快速搅拌下，再将初乳注入，减压蒸馏除去有机溶剂，再将壳聚糖-三聚磷酸钠纳米粒子加入，超声处理30min后，室温静置20h即可。
实施例3：
纳米抑菌复合物的制备方法：
将4g吐温80、2g丙三醇混合，升温至40℃搅拌至澄清后，再加入1g肉豆蔻酸异丙酯，继续搅拌25min后加20g水，再搅拌25min后将0.5g厚朴提取物加入，搅拌至澄清，得到厚朴提取物纳米乳，将0.75g壳聚糖用1L质量浓度为1.5％的醋酸溶液溶解得到A溶液，将0.75g三聚磷酸钠用1L水溶解得到B溶液，在800r/min的搅拌转速下，将B溶液加入A溶液中，继续搅拌25min，将悬浮液喷雾干燥即可得到所述壳聚糖-三聚磷酸钠纳米粒子，将1g左旋聚半乳糖、1g卵磷脂、1g胆固醇、1g聚乙二醇溶于500mL二氯甲烷中，形成初乳，将2g伞花烃加入450mLPBS磷酸盐缓冲液中，作为水相；将厚朴提取物纳米乳注入水相中，快速搅拌下，再将初乳注入，减压蒸馏除去有机溶剂，再将壳聚糖-三聚磷酸钠纳米粒子加入，超声处理40min后，室温静置18h即可。
实施例4：
一种纳米抑菌复合物菌的制备方法：
将4g吐温80、2g丙三醇混合，升温至37℃搅拌至澄清后，再加入1g肉豆蔻酸异丙酯，继续搅拌30min后加20g水，再搅拌30min后将0.5g厚朴提取物加入，搅拌至澄清，得到厚朴提取物纳米乳，将0.75g壳聚糖用1L质量浓度为2％的醋酸溶液溶解得到A溶液，将0.75g三聚磷酸钠用1L水溶解得到B溶液，在800r/min的搅拌转速下，将B溶液加入A溶液中，继续搅拌20min，将悬浮液喷雾干燥即可得到所述壳聚糖-三聚磷酸钠纳米粒子，将1g左旋聚半乳糖、1g卵磷脂、1g胆固醇、1g聚乙二醇溶于500mL二氯甲烷中，形成初乳，将2g伞花烃加入450mLPBS磷酸盐缓冲液中，作为水相；将厚朴提取物纳米乳注入水相中，快速搅拌下，再将初乳注入，减压蒸馏除去有机溶剂，再将壳聚糖-三聚磷酸钠纳米粒子加入，超声处理50min后，室温静置10h即可。
实施例5：
一种纳米抑菌复合物菌的制备方法：
将4g吐温80、2g丙三醇混合，升温至40℃搅拌至澄清后，再加入1g肉豆蔻酸异丙酯，继续搅拌30min后加20g水，再搅拌30min后将0.5g厚朴提取物加入，搅拌至澄清，得到厚朴提取物纳米乳，将0.75g壳聚糖用1L质量浓度为3％的醋酸溶液溶解得到A溶液，将0.75g三聚磷酸钠用1L水溶解得到B溶液，在800r/min的搅拌转速下，将B溶液加入A溶液中，继续搅拌30min，将悬浮液喷雾干燥即可得到所述壳聚糖-三聚磷酸钠纳米粒子，将1g左旋聚半乳糖、1g卵磷脂、1g胆固醇、1g聚乙二醇溶于500mL二氯甲烷中，形成初乳，将2g伞花烃加入450mLPBS磷酸盐缓冲液中，作为水相；将厚朴提取物纳米乳注入水相中，快速搅拌下，再将初乳注入，减压蒸馏除去有机溶剂，再将壳聚糖-三聚磷酸钠纳米粒子加入，超声处理60min后，室温静置20h即可。
实施例6：
一种纳米抑菌复合物菌的制备方法：
将4g吐温80、2g丙三醇混合，升温至35℃搅拌至澄清后，再加入1g肉豆蔻酸异丙酯，继续搅拌15min后加20g水，再搅拌15min后将0.5g厚朴提取物加入，搅拌至澄清，得到厚朴提取物纳米乳，将0.75g壳聚糖用1L质量浓度为1％的醋酸溶液溶解得到A溶液，将0.75g三聚磷酸钠用1L水溶解得到B溶液，在600r/min的搅拌转速下，将B溶液加入A溶液中，继续搅拌15min，将悬浮液喷雾干燥即可得到所述壳聚糖-三聚磷酸钠纳米粒子，将1g左旋聚半乳糖、1g卵磷脂、1g胆固醇、1g聚乙二醇溶于500mL二氯甲烷中，形成初乳，将2g伞花烃加入450mLPBS磷酸盐缓冲液中，作为水相；将厚朴提取物纳米乳注入水相中，快速搅拌下，再将初乳注入，减压蒸馏除去有机溶剂，再将壳聚糖-三聚磷酸钠纳米粒子加入，超声处理40min后，室温静置20h即可。
对比例1：
对比例1与实施例1基本相同，区别在于，将厚朴提取物直接加入。
纳米抑菌复合物的制备方法：
将0.75g壳聚糖用1L质量浓度为1％的醋酸溶液溶解得到A溶液，将0.75g三聚磷酸钠用1L水溶解得到B溶液，在800r/min的搅拌转速下，将B溶液加入A溶液中，继续搅拌20min，将悬浮液喷雾干燥即可得到所述壳聚糖-三聚磷酸钠纳米粒子，将1g左旋聚半乳糖、1g卵磷脂、1g胆固醇、1g聚乙二醇溶于500mL二氯甲烷中，形成初乳，将2g伞花烃加入450mLPBS磷酸盐缓冲液中，作为水相；将厚朴提取物加入水相中，快速搅拌下，再将初乳注入，减压蒸馏除去有机溶剂，再将壳聚糖-三聚磷酸钠纳米粒子加入，超声处理50min后，室温静置15h即可。
对比例2：
对比例2与实施例1基本相同，区别在于，将壳聚糖和三聚磷酸钠分开加入。
纳米抑菌复合物的制备方法：
将4g吐温80、2g丙三醇混合，升温至35℃搅拌至澄清后，再加入1g肉豆蔻酸异丙酯，继续搅拌20min后加20g水，再搅拌20min后将0.5g厚朴提取物加入，搅拌至澄清，得到厚朴提取物纳米乳，将1g左旋聚半乳糖、1g卵磷脂、1g胆固醇、1g聚乙二醇溶于500mL二氯甲烷中，形成初乳，将2g伞花烃加入450mLPBS磷酸盐缓冲液中，作为水相；将厚朴提取物纳米乳注入水相中，快速搅拌下，再将初乳注入，减压蒸馏除去有机溶剂，再将壳聚糖和三聚磷酸钠加入，超声处理50min后，室温静置15h即可。
对比例3：
对比例3与实施例1基本相同，区别在于，将厚朴提取物直接加入且壳聚糖和三聚磷酸钠分开加入。
纳米抑菌复合物的制备方法：
将1g左旋聚半乳糖、1g卵磷脂、1g胆固醇、1g聚乙二醇溶于500mL二氯甲烷中，形成初乳，将2g伞花烃加入450mLPBS磷酸盐缓冲液中，作为水相；将厚朴提取物加入水相中，快速搅拌下，再将初乳注入，减压蒸馏除去有机溶剂，再将壳聚糖、三聚磷酸钠加入，超声处理50min后，室温静置15h即可。
即时抑菌性能测试：
(1)取新鲜配制的无抗性的LB培养基制备平板；
(2)预先接种E.coli大肠杆菌到10ml液体培养基中，摇床200rpm-300rpm培养8小时后待用；
(3)实验组1：1ml实施例1中制备的纳米抑菌复合物+10μL大肠杆菌；
实验组2：1ml对比例1中制备的纳米抑菌复合物+10μL大肠杆菌；
实验组3：1ml对比例2中制备的纳米抑菌复合物+10μL大肠杆菌；
实验组4：1ml对比例3中制备的纳米抑菌复合物+10μL大肠杆菌；
室温下静置30min后平板涂布，涂布完的平板，37℃培养过夜后拍照观察，结果如图1所示，本发明实施例1制备的纳米抑菌复合物具有了明显的抑菌效果，对比例1次之，对比例2又次之，对比例3的快速抑菌效果最差。
广谱抑菌性能测试
分别将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉菌、类白喉杆菌、痤疮杆菌接种到已灭菌的固体斜面培养基中，置于37℃的恒温培养箱中，培养24h，将培养好斜面菌体溶于无菌水中，振荡混匀后，10倍稀释，制成含量约为105个/mL的菌悬液，取菌悬液，用涂布法均匀涂在已灭菌的营养琼脂平板上，在营养琼脂平板的中心滴一滴本发明实施例1-6及对比例1-3所制备的纳米抑菌复合物，然后把培养皿置入37℃的恒温培养箱中培养24h，测量抑菌圈直径D1(mm)，另取空白组滴一滴生理盐水，同样处理，测量抑菌圈直径D2(mm)，计算抑菌率(％)。
抑菌率＝[(D2-D1)/D2]*100％
结果如下表1所示：
表1：
由上表1可知，本发明所制备的纳米抑菌复合物具有广谱抑菌活性，对于大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉菌、类白喉杆菌、痤疮杆菌等具有良好的抑菌性。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
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