含间充质干细胞分泌的活性因子提取物的美容护肤品以及护肤精华液的制备方法
阅读说明：本技术 含间充质干细胞分泌的活性因子提取物的美容护肤品以及护肤精华液的制备方法 (Preparation method of beauty skin care product and skin care essence containing active factor extract secreted by mesenchymal stem cells ) 是由 不公告发明人 于 2020-04-28 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种含间充质干细胞分泌的活性因子提取物的美容护肤品以及护肤精华液的制备方法,该美容护肤品含有间充质干细胞分泌的活性因子提取物,bFGF碱性成纤维细胞生长因子、水溶性胶原蛋白、透明质酸、VE维生素E、海藻糖；间充质干细胞分泌的活性因子提取物、bFGF、水溶性胶原蛋白、透明质酸、VE、海藻糖的重量比为0.02ug-20ug：10ng-5000ng：0.01g-20g：0.01g-3g：0.01g-10g：0.01g-20g；该含间充质干细胞分泌的活性因子提取物的美容护肤品能够改善皮肤的弹性和抗衰老等缺陷,同时该制备方法具有工序简单和操作方便的优点。(The invention discloses a preparation method of a beauty skin care product and a beauty essence containing an active factor extract secreted by mesenchymal stem cells, wherein the beauty skin care product contains the active factor extract secreted by mesenchymal stem cells, bFGF basic fibroblast growth factor, water-soluble collagen, hyaluronic acid, VE vitamin E and trehalose; the weight ratio of active factor extract secreted by the mesenchymal stem cells, bFGF, water-soluble collagen, hyaluronic acid, VE and trehalose is 0.02ug-20 ug: 10ng-5000 ng: 0.01g-20 g: 0.01g-3 g: 0.01g-10 g: 0.01g-20 g; the skin care product containing the extract of the active factors secreted by the mesenchymal stem cells can improve the defects of skin elasticity, aging resistance and the like, and meanwhile, the preparation method has the advantages of simple process and convenient operation.)
技术领域
本发明涉及美容护肤品，具体地，涉及一种含间充质干细胞分泌的活性因子提取物的美容护肤品以及护肤精华液的制备方法。
背景技术
现代人的肌肤由于每天受到大量有害因素的侵袭，如紫外线、有害微生物、各种有害化学物理因子等，当皮肤自身的防御系统和修复系统遭到破坏后，就会伤害皮肤，产生各种皮肤问题，如色斑加重、皱纹增加，皮肤干裂失去弹性、敏感等等。
目前，化妆品的种类众多，按照护肤类型划分，化妆品可以有清洁霜、洗面奶、浴剂、洗发护发剂、剃须膏等；虽然这些化妆品对皮肤具有一定的改善效果，但是很难改善皮肤的弹性和抗衰老等问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种含间充质干细胞分泌的活性因子提取物的美容护肤品以及护肤精华液的制备方法，该含间充质干细胞分泌的活性因子提取物的美容护肤品能够改善皮肤的弹性和抗衰老等缺陷，同时该制备方法具有工序简单和操作方便的优点。
为了实现上述目的，本发明提供了一种含间充质干细胞分泌的活性因子提取物的美容护肤品，含有间充质干细胞分泌的活性因子提取物，bFGF碱性成纤维细胞生长因子、水溶性胶原蛋白、透明质酸、VE维生素E、海藻糖；
其中，间充质干细胞分泌的活性因子提取物、bFGF、水溶性胶原蛋白、透明质酸、VE、海藻糖的重量比为0.02ug-20ug：10ng-5000ng：0.01g-20g： 0.01g-3g：0.01g-10g：0.01g-20g。
本发明还提供了一种如上述的护肤精华液的制备方法，其中，该制备方法包括：
1)将bFGF、水溶性胶原蛋白、VE、海藻糖于水中混合得到混合物W1；
2)将混合物W1过滤并灭菌制得混合物W2，接着将间充质干细胞分泌的活性因子提取物与混合物W2混的制得混合物W3；
3)在无菌条件，将无菌的透明质酸与混合物W3中混合制得护肤精华液。
在上述技术方案中，申请人通过创造性劳动发现传统化妆品成分不能渗透到真皮中以作用于成纤维细胞，只能保护皮肤免受外界伤害，尤其是传统化妆品难以皮肤具有长久的保湿效果，进而难以改善皮肤的弹性和抗衰老等缺陷。
干细胞指的是能够自我更新、分裂以及分化成其它细胞类群的一种细胞。从干细胞在发育中所处的阶段来看，干细胞可以分为胚胎干细胞 (embryonic stem cell，ES细胞)和成体干细胞(adult stem cell)。间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是成体干细胞亚组，可来源于多重组织，如骨髓、脂肪、脐带等，具有干细胞的所有共性，即自我更新和多向分化能力。MSCs具有潜在的免疫调节功能，抗炎症的能力以及修复组织和细胞损伤的作用。MSCs的修复作用主要依赖其分化作用和旁分泌作用。在这两种方式中，主要是通过旁分泌作用，而不是分化作用。间充质干细胞具有独特的细胞因子分泌功能，而分泌的活性因子在修复组织和细胞发挥重要作用。间充质干细胞至少分泌趋化因子(RANTES、SDF-1α、fractalkine、MIP-1α、 MCP-1、MCP-2)、免疫调节因子(HGF、LIF)、支持祖细胞的营养因子(IL-6、FGF-2、PDGF-AA、PDGF-BB)、伤口愈合相关因子(IL-6、IL-8、TGF-β1、 MCP-1、VEGF、GM-CSF、TIMP-1)、抑制疤痕因子(HGF、FGF-2)、抗凋亡因子(VEGF165、FGF-2、HGF)、血管再生因子(VEGF165、FGF-2、 PDGF-AA、PDGF-BB、EGF)、各型胶原蛋白(I、II、III、IV型胶原蛋白)以及各种溶菌酶等。这些细胞因子可有效地调控机体细胞信号传导、活化人体干细胞，进而生理性修复或替代机体损伤、病变及衰老的细胞。例如，血管内皮细胞生长因子(VEGF)促进皮肤再生，组织的恢复及治疗伤口，调节营养成分及表皮细胞增殖；纤连蛋白(Fibronectin)作为皮肤构成成分具有治愈伤口的效能；转化生长因子(TGF-β)复原受损的组织并调节免疫细胞的增殖。肝细胞生长因子(HGF)激活细胞，治疗伤口效果；纤维芽细胞生长因子(bFGF) 促进皮肤再生，老后组织的恢复及治疗伤口，调节营养成分及表皮细胞增殖，移动，调节分化等。
上述活性因子在低氧及低营养的条件下仍然能保持高度活性，克服了干细胞短期内容易凋亡的缺点；同时由于活性因子的直径较小，极易与表皮细胞的细胞膜融合，从而进入受体细胞，为细胞再生和修复提供物质和信号来源，进尔唤醒和激活肌肤基底层处于休眠状态的表皮干细胞，加强细胞再生，促进新陈代谢，增强表皮细胞活性，激活成纤母细胞、修复胶原细胞、增强皮肤弹性、祛皱抗衰老，增强皮肤保水性。
bFGF可促进组织和神经细胞的生长，修复难愈的创面和受损的神经；可诱发一系列的组织修复的细胞反应，再维持皮肤完整，保持皮肤正常色泽和细腻等方面有独到的功效。BFGF能深入到肌肤细胞内部，从细胞自身的调控机制入手，促进其生长分化，促进弹性纤维细胞的发育并增强其功能诱导皮下微血管形成、发育和分化，从而改善皮肤的微循环，多层面全方位改善皮肤的营养状况，使之达到最佳生理状态。
胶原蛋白具有美白、保湿、防皱、修复、营养、减肥等美容美体作用。胶原蛋白是一种脊柱动物结缔组织中的非水溶性纤维状含糖蛋白质，约占人体内蛋白质25％到35％，是皮肤的主要结构性蛋白质，占50％以上，它在人体皮肤中具有非常重要的作用，具有良好的支撑力，就像撑起皮肤组织的钢筋架构一样，能让皮肤看起来非常丰润。胶原蛋白与人体皮肤胶原的结构相似，分子中含有大量氨基酸和亲水基，具有一定的表面活性和很好的相容性，将其作为活性物质用于化妆品中时，后者可以扩散到皮肤的深层，补充人体皮肤所需要的氨基酸，使皮肤中的胶原蛋白活性增强，保持角质层水分以及纤维结构的完整性，促进皮肤组织的新陈代谢，对皮肤产生良好的滋润保湿、消皱美容作用。
VE又名生育酚，是一种脂溶性维生素，被科学家比作神话里的“青春之泉”。它是最主要的天然抗氧化剂之一。VE能保护细胞膜免受自由基的氧化损伤，能帮助修复并巩固肌肤的天然保护屏障，锁住肌肤内水分。皱纹的产生往往是由于皮下脂肪的损失，弹性纤维的断裂以及联结胶原组织的降解。 VE能抑制脂质过氧化反应，保持组织间联系，使皮肤光滑，有弹性。
海藻糖是一种稳定的非还原性双糖，性能稳定，能够在高温、高寒、干燥失水等恶劣的条件下在细胞表面形成特殊的保护膜，有效的保护生物分子结构不被破坏。海藻糖分子量小，易于被皮肤吸收，进入细胞内发挥其独有的水替代应激因子作用和保护细胞膜的功能，提高细胞的抗干燥、抗冷冻能力，从而提高皮肤适应环境的能力。此外，海藻糖还可以防止油脂分离、防止蛋白质变性；具有抗辐射，抗氧化物；还具有优异的保水性、吸湿性等。
透明质酸是构成细胞外基质和细胞间质的主要成分之一，是细胞间的填充物，对于皮肤的形态、结构、功能起着重要的作用；具有保湿、修护、营养等作用。
本发明提供的美容护肤品通过间充质干细胞分泌的活性因子提取物和其他成分的的共同作用，能够亲肤透皮，极易使有效物质进入肌肤基底层，唤醒和激活肌肤基底层处于休眠状态的表皮干细胞，促进新陈代谢，增强表皮细胞活性，激活成纤母细胞、修复胶原细胞、增强皮肤弹性、祛皱抗衰老，增强皮肤保水性；并且该产品不添加任何防腐剂，香精，激素等。
本发明的其他特征和优点将在随后的
具体实施方式
部分予以详细说明。
附图说明
附图是用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本发明，但并不构成对本发明的限制。在附图中：
图1是脐带间充质干细胞的形态特征图
图2是脐带间充质干细胞的P5代流式检测结果；
图3是检测例1中的检测报告图；
图4是检测例2中透皮失水值的检测结果图；
图5是检测例3中皮肤水合度的检测结果图。
具体实施方式
以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
本发明提供了一种含间充质干细胞分泌的活性因子提取物的美容护肤品，含有间充质干细胞分泌的活性因子提取物，bFGF碱性成纤维细胞生长因子、水溶性胶原蛋白、透明质酸、VE维生素E、海藻糖；
其中，间充质干细胞分泌的活性因子提取物、EGF、bFGF、水溶性胶原蛋白、透明质酸、VE、海藻糖的重量比为0.02ug-20ug：10ng-5000ng： 0.01g-20g：0.01g-3g：0.01g-10g：0.01g-20g。
在本发明中，各组分的含量可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高制得的美容护肤品的保湿性以改善皮肤的弹性和抗衰老等缺陷，优选地，间充质干细胞分泌的活性因子提取物、bFGF、水溶性胶原蛋白、透明质酸、 VE、海藻糖的重量比为0.05ug-5ug：500ng-2000ng：0.05g-8g：0.05g-1g： 0.05g-1.2g：0.1g-8g。
在本发明中，间充质干细胞分泌的活性因子提取物的来源可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高制得的美容护肤品的保湿性以改善皮肤的弹性和抗衰老等缺陷，优选地，间充质干细胞分泌的活性因子提取物通过以下方法获得：
1)将间充质干细胞原代细胞进行连续培养，获得P1代、P2代至P5代细胞；
2)收集P3代至P5代的培养液上清，获得间充质干细胞分泌的活性因子粗液；
3)将活性因子粗液进行离心处理，接着收集上清液，然后进行过滤以得到间充质干细胞分泌的活性因子提取物；
其中，间充质干细胞原代细胞为人脐带来源间充质干细胞原代细胞。
在上述间充质干细胞分泌的活性因子提取物的获取方法中，连续培养初始时细胞的密度可以在宽的范围内选择，但是为了提高培养的效率以及效果，优选地，在步骤1)中，连续培养初始时细胞的密度为0.7×104-1.3×104个细胞/cm2。
在上述间充质干细胞分泌的活性因子提取物的获取方法中，连续培养使用的培养基可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高制得的美容护肤品的保湿性以改善皮肤的弹性和抗衰老等缺陷，优选地，连续培养使用的培养基为无血清培养基。
在上述间充质干细胞分泌的活性因子提取物的获取方法中，离心处理的温度可以在宽的范围内选择，但是为了保证间充质干细胞分泌的活性因子提取物的稳定性，优选地，在步骤3)中，离心处理的温度为2-8℃。
在上述间充质干细胞分泌的活性因子提取物的获取方法中，离心处理的步骤可以在宽的范围内选择，但是为了进一步除去残余细胞和细胞碎片，优选地，离心处理的步骤为：先在280-320g离心力下处理8-12min(主要用于除去残余细胞)，接着在1900-2100g离心力下处理18-22min(主要用于除去细胞碎片)。
在上述间充质干细胞分泌的活性因子提取物的获取方法中，过滤的步骤可以在宽的范围内选择，但是为了进一步除去杂质，优选地，在步骤3)中，过滤的步骤为：先将上清液通过0.20-0.25μm孔径过滤器进行过滤，接着将滤液在500-518kPa和氮气保护下进行第一次超滤，然后加入PBS溶液重复超滤2-4次。
在上述超滤过程中，为了进一步提高超滤效果，优选地，每次超滤过程中，旋涡高度为液体高度的0.3-0.4(以液体高度为基准)。
在本发明中，美容护肤品的类型可以宽的范围内选择，但是为了进一步提高美容护肤品的使用范围，优选地，美容护肤品按照分散体系划分，为溶液、凝胶、悬浮液或乳状液；优选地，美容护肤品按照形状划分，为霜剂、膏状、奶液、干粉、湿粉或喷剂。更优选地，美容护肤品为护肤精华液，护肤精华液的分散剂为水；间充质干细胞分泌的活性因子提取物、水的重量比为0.05ug-5ug：50g-150g。
本发明还提供了一种如上述的护肤精华液的制备方法，其中，该制备方法包括：
1)将bFGF、水溶性胶原蛋白、VE、海藻糖于水中混合得到混合物W1；
2)将混合物W1过滤并灭菌制得混合物W2，接着将间充质干细胞分泌的活性因子提取物与混合物W2混的制得混合物W3；
3)在无菌条件，将无菌的透明质酸与混合物W3中混合制得护肤精华液。
在上述制备方法，过滤使用的过滤膜的孔径可以在宽的范围内使用，但是为了进一步提高过滤效果，优选地，在步骤2)中，过滤使用的过滤膜的孔径为0.1-0.3μm；
在上述制备方法，混合条件可以在宽的范围内使用，但是为了进一步混合效果，优选地，混合满足以下条件：混合温度为0-4℃，混合时间为4-8h。
在上述制备方法，间充质干细胞分泌的活性因子提取物的提供方式可以在宽的范围内使用，但是为了进一步混合效果，优选地，间充质干细胞分泌的活性因子提取物由溶液的方式提供，溶剂为PBS缓冲溶液。
以下将通过实施例对本发明进行详细描述。以下实施例中，人脐带来源间充质干细胞原代细胞通过以下方法获得：
将采集的各项检查健康合格的新生儿脐带，用含有双抗的生理盐水完全浸泡漂洗3次，再用不含双抗的生理盐水完全浸泡漂洗2次。将漂洗好的脐带剪成2cm的小段，用不含抗生素的生理盐水漂洗三次。将清洗干净了的脐带小段放入一新的无菌培养皿中，换两把新的镊子，顺着脐静脉剪开，用两把镊子将内侧的静脉和动脉以及外侧的外皮剥除，获得华通氏胶。将剥好的华通氏胶切碎或剪碎，剪成1-4mm3大小的组织块，装入一个新的10cm培养皿，加入15mL的完全培养基，用镊子将组织块均匀分布在培养皿内，然后放入二氧化碳培养箱内培养；5天后，换新的培养液。7到10天左右，人脐带间充质干细胞从组织块中爬出，待细胞密度达到70％到80％，用胰酶消化，获得人脐带来源间充质干细胞原代细胞。
脐带间充质干细胞的形态特征图见图1，脐带间充质干细胞的P5代流式检测结果见图2，图2中CD14、CD19、CD34、CD45、HLA-DR阳性率均小于2％，CD73、CD90阳性率均大于95％，纯度合乎要求。由图1-2可知上述按实施例操作可获得形态及表型符合要求的脐带间充质干细胞。
制备例1
人脐带来源间充质干细胞分泌的活性因子提取物的获取：
将人脐带来源间充质干细胞原代细胞按104个细胞/cm2的密度接种到培养瓶中，使用无血清培养基，连续培养，获得P1代、P2代到P5代细胞。收集P3代到P5代的培养液上清，获得人脐带来源间充质干细胞分泌的活性因子粗液。将人脐带来源间充质干细胞分泌的活性因子粗液分装到50ml离心管中，4℃下300g离心力下离心10min除去残余细胞，2000g离心力下离心20min除去细胞碎片，小心收集上清并用0.22μm孔径过滤器进行过滤获得滤液A1。将A1入装有100000NW-CO超滤膜的Model8050旋转超滤仪中，接通氮气并将最大进气压力控制在517.125kPa以下，打开磁力搅拌器，使旋涡高度为液体高度的1/3。待A1超滤完毕后，加入50ml PBS缓冲溶液并再次超滤，重复3次。超滤完毕后，用0.5mL PBS缓冲溶液悬浮超滤膜上的活性因子，并转移至1.5mL的Eppendorf管中，-80℃冰箱中保存。
实施例1
1)将bFGF、水溶性胶原蛋白、VE、海藻糖用超纯水溶解混匀制得混合物W1；
2)将W1通过具有0.2μm直径微孔的滤膜过滤灭菌制得W2；无菌操作下，将无菌的人脐带间充质干细胞分泌的活性因子提取物溶液(制备例1制得的)加入至上述混合物W2中混匀制得混合物W3；
3)无菌操作下，将无菌的透明质酸钠粉末加入上述混合物W3中，0～ 4℃中搅拌6h，无菌分装，即制得护肤精华液；
其中，间充质干细胞分泌的活性因子提取物、bFGF、水溶性胶原蛋白、透明质酸、VE、海藻糖、水的重量比为1.5ug：1ug：3g：0.4g：0.5g：3g： 100g人脐带间充质干细胞分泌的活性因子提取物溶液中人脐带间充质干细胞分泌的活性因子提取物与PBS缓冲溶液的重量比为20ug：500ug。
实施例2
按照实施例1的方式制得护肤精华液，所不同的是：
间充质干细胞分泌的活性因子提取物、bFGF、水溶性胶原蛋白、透明质酸、VE、海藻糖、水的重量比为20ug：5ug：20g：3g：10g：20g：100g 人脐带间充质干细胞分泌的活性因子提取物溶液中人脐带间充质干细胞分泌的活性因子提取物与PBS缓冲溶液的重量比为20ug：500ug。
实施例3
按照实施例1的方式制得护肤精华液，所不同的是：
间充质干细胞分泌的活性因子提取物、bFGF、水溶性胶原蛋白、透明质酸、VE、海藻糖、水的重量比为0.02ug：10ng：0.01g：0.01g：0.01g：0.01g： 100g人脐带间充质干细胞分泌的活性因子提取物溶液中人脐带间充质干细胞分泌的活性因子提取物与PBS缓冲溶液的重量比为20ug：500ug。
实施例4
按照实施例1的方式制得护肤精华液，所不同的是：
间充质干细胞分泌的活性因子提取物、bFGF、水溶性胶原蛋白、透明质酸、VE、海藻糖、水的重量比为0.05ug：500ng：0.05g：0.05g：0.05g： 0.1g：100g人脐带间充质干细胞分泌的活性因子提取物溶液中人脐带间充质干细胞分泌的活性因子提取物与PBS缓冲溶液的重量比为20ug：500ug。
实施例5
按照实施例1的方式制得护肤精华液，所不同的是：
间充质干细胞分泌的活性因子提取物、bFGF、水溶性胶原蛋白、透明质酸、VE、海藻糖、水的重量比为5ug：2000ng：8g：1g：1.2g：8g：100g；人脐带间充质干细胞分泌的活性因子提取物溶液中人脐带间充质干细胞分泌的活性因子提取物与PBS缓冲溶液的重量比为20ug：500ug。
对比例
按照实施例1的方式制得护肤精华液，所不同的是：配方中不添加间充质干细胞分泌的活性因子提取物和透明质酸。
检测例1
将实施例1-5制得的产品送至宁波出入境检验检疫局检验检疫技术中心，按照《化妆品安全技术规范》(2015年版)进行卫生安全性试验；实施例1 的检测结果如图3，实施例2-5制得的产品也符合卫生安全性要求。
检测例2
TEWL测定：透皮失水(Transepidermal water loss,TEWL)测量邻近皮肤表面水分蒸汽压的变化。该试验仪器的测量原理来源于菲克扩散定律。通过2组温度、湿度传感器测定近表皮(约1cm以内)，由角质层水分散失在不同两点形成的水蒸气气压梯度，直接测量出经表皮散发的水分量。TEWL 值表示角质层水分散失的情况，是评价角质层屏障功能的重要标准。皮肤的 TEWL值越低，说明皮肤的屏障功能越好，反之则越差。
测试环境条件：测试环境温度为22℃±1℃，湿度为50％±5％，并且进行实时动态监控。
测试人群：30人；年龄在16岁到40岁之间；无严重系统疾病、无免疫缺陷或自身免疫性疾病；无活动性过敏性疾病者；既往对护肤类化妆品无严重过敏史者。受试部位测量前2天不能使用任何产品(化妆品或外用药品)， 2小时内不能接触水。
测试仪器：牌号Tewameter TM300皮肤水份流失测试仪
测试样品：实施例1-5、对比例1
对照：空白对照(blank contrast)
测量步骤：正式测量前，应该在符合标准的房间静坐30min，不能喝水，前臂暴露，呈测量状态放置，保持轻松。实验中，左右手臂内侧标记3cm× 3cm试验区域，同一手臂可同时标记多个区域，区域间隔1cm。测试产品和空白对照均随机分布在左右手臂上。先测量各测试区域的空白值，然后按照 2.0mg±0.1mg样品/cm2的用量，使用乳胶指套将试验产品均匀涂于试验区内。每个区域平行测定5次，取平均值。分别测量涂抹前(记为0h)和涂抹1h、2h、3h和4h的TEWL值。测试结果如图4。
由图4所示，涂抹前(记为0h)样品(依次为实施例1-5、对比例1产品)、空白对照的透皮失水值在分别为：46.2、45.7、45.5、45.6、45.9、45.8、45.6。使用样品(依次为实施例1-5、对比例1的产品)至4h时，精华液(依次为实施例1-5、对比例1的产品)的透皮失水值分别为：13.4、22.5、25.1、18.6、 16.5、26.6和初始空白对照相比均有不同程度的降低；具体结果见图5。
由图4可知，相对于实施例2-3的产品，实施例1、4、5的产品的透皮失水值降幅更低，，说明本发明所述的精华液能有效的降低皮肤的透皮水分蒸发，能够改善皮肤的角质层屏障功能，对皮肤有直接或间接的保湿作用。
检测例3
皮肤角质层水合度测定：
测试环境条件、测试人群、测试样品、对照和检测例2一样。
测试仪器：牌号Corneometer CM 825皮肤水份测试仪
测量步骤：正式测量前，应该在符合标准的房间静坐30min，不能喝水，前臂暴露，呈测量状态放置，保持轻松。实验中，左右手臂内侧标记3cm× 3cm试验区域，同一手臂可同时标记多个区域，区域间隔1cm。测试前10min，将被检区域露出，先测量个测试区域的空白值作为空白对照。之后将测试产品和对照均随机分布在左右手臂上。然后按照2.0mg±0.1mg样品/cm2的用量，使用乳胶指套将试验产品均匀涂于试验区内。每个区域平行测定5次，取平均值。涂抹后，分别测量0h、0.5h、1h、1.5h、2h和3h的皮肤水合度值。计算皮肤水合度变化率。皮肤水合度变化率(皮肤水合度提高程度)＝ (皮肤水合度(测试值)-皮肤水合度(对照))/皮肤水合度(对照)×100％测试结果：如图5.
使用精华液后，皮肤的即使水合度最大，之后随着精华液中的水分从皮肤表面迅速蒸发，皮肤水合度迅速降低。之后，保湿成分起作用，水合度逐渐降低至稳定。使用精华液(依次为实施例1-5、对比例1产品)3h后，和最初相比，皮肤水合度分别提高了：47.1％、34.0％、26.1％、15.0％、13.9％、 12.1％；具体结果见图5。说明均有保湿作用，而实施例1的产品的的保湿作用最明显，实施例2-3的产品保湿效果一般，说明本发明的所述的精华液能有效的保湿皮肤。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。
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