阅读说明：本技术 一种动物心脏灌流固定全身组织的装置 (Device for fixing whole body tissue through animal heart perfusion ) 是由 徐良慰 杨仕明 袁硕龙 赵立东 丛涛 陈伟 郭维维 于 2018-06-28 设计创作，主要内容包括：本发明涉及实验动物技术领域,具体地,涉及一种动物心脏灌流固定全身组织的装置。本发明的动物心脏灌流固定全身组织的装置,包括压力泵、缓冲瓶、冲洗液瓶和固定液瓶；其中,所述压力泵通过导气管与缓冲瓶的进气端连接；所述冲洗液瓶的进气端与固定液瓶的进气端分别通过各自的供气管与缓冲瓶的出气端相连接；所述冲洗液瓶的出气端与固定液瓶的出气端各自连接有出液管。利用本发明的装置,通过动物麻醉和动物开胸手术可快速、高效地对动物全身组织细胞进行同步固定。同时,可以同步获得较完整的组织蛋白及核酸分子为后期实验提供优质的实验标本。(The invention relates to the technical field of experimental animals, in particular to a device for fixing whole body tissues through animal heart perfusion. The invention relates to a device for fixing whole body tissues through animal heart perfusion, which comprises a pressure pump, a buffer bottle, a washing liquid bottle and a fixing liquid bottle; the pressure pump is connected with the air inlet end of the buffer bottle through an air guide pipe; the air inlet end of the flushing liquid bottle and the air inlet end of the fixed liquid bottle are respectively connected with the air outlet end of the buffer bottle through respective air supply pipes; the air outlet end of the washing liquid bottle and the air outlet end of the fixing liquid bottle are respectively connected with a liquid outlet pipe. By using the device of the invention, the tissue cells of the whole body of the animal can be quickly and efficiently fixed synchronously through animal anesthesia and animal thoracotomy. Meanwhile, relatively complete tissue protein and nucleic acid molecules can be synchronously obtained, and high-quality experimental specimens are provided for later experiments.)

一种动物心脏灌流固定全身组织的装置

技术领域

本发明涉及实验动物技术领域，具体地，涉及一种动物心脏灌流固定全身组织的装置。

背景技术

动物的组织固定是生命科学研究的第一步，为蛋白的定性定量分析、核酸分子的检测、及形态学观察组织细胞的细微结构提供了实验基础，因此其在形态学、蛋白组学、核酸组学等领域具有十分重要的作用。

动物的组织固定的常用方法是将动物进行麻醉直接获取相应部位然后再对相应部位进行固定。然而对于大动物而言，其一，实验大动物不易获取单一组织取材固定而对其他组织的舍弃实在是对实验动物的浪费。其二，常规对动物的全身取材则不能达到时间上的同步性，造成一些组织自溶蛋白的消失。其三，实验动物的常规取材若麻醉不彻底可引起动物的应激性，造成实验动物组织的实验误差。

发明内容

本发明的目的在于，针对上述现有技术的不足，提供了一种动物心脏灌流固定全身组织的装置。利用本发明的装置可以同步对大动物进行全身组织的固定和同步获得较完整的组织蛋白及核酸分子，为后期实验提供优质的实验标本。

本发明的具体技术方案如下：

本发明的动物心脏灌流固定全身组织的装置，包括压力泵、缓冲瓶、冲洗液瓶和固定液瓶；

其中，所述压力泵通过导气管与缓冲瓶的进气端连接；

所述冲洗液瓶的进气端与固定液瓶的进气端分别通过各自的供气管与缓冲瓶的出气端相连接；

所述冲洗液瓶的出气端与固定液瓶的出气端各自连接有出液管。

根据本发明所述的装置，其中可以选择的，所述冲洗液瓶与固定液瓶各自的供气管并联与缓冲瓶的出气端相连，每个供气管上均设置一阀门。

根据本发明所述的装置，其中进一步优选地，所述冲洗液瓶与固定液瓶各自的供气管并联通过一三通阀与缓冲瓶的出气端相连。

根据本发明所述的装置，其中，所述冲洗液瓶与固定液瓶分别置于恒温水浴锅中，从而保证瓶中液体温度恒定。

根据本发明所述的装置，其中优选地，所述缓冲瓶、冲洗液瓶与固定液瓶的瓶口均通过外压瓶塞密封，各瓶的进气端与出气端通过密封管路连接瓶体内外。

进一步地优选地，本发明可以在所述冲洗液瓶与固定液瓶的瓶口处设置压力表，用于监测瓶内压力。压力表的检测接头密封穿过瓶盖伸入瓶内。

根据本发明所述的装置，其中，所述装置还包括右心室导管与右心室收集瓶，用于收集从心脏右心室流出的液体。所述右心室收集瓶连接于右心室导管的出口。

本发明适用于任意的动物心脏灌流固定全身组织，尤其适用大动物，例如但不限于猪、马、牛、羊等。当然，本发明也可以适用于小动物，例如但不限于狗、兔、大鼠、小鼠、青蛙等。当使用本发明的装置用于小动物时，所用气泵和心脏腔注入针头需要用小号，具体型号可以根据小动物实际情况确定即可。

本发明的动物心脏灌流固定全身组织的装置添加了压力平衡检测装置，避免了因压力过大导致动物心脏或其他器官破裂。并且本发明加有动力装置，避免了大动物血液在灌流后期固定液无法到达心脏远端位置。

本发明的动物心脏灌流固定全身组织的装置，可用于对动物尤其是大动物全身组织的同步固定。利用本发明的装置，通过动物麻醉和动物开胸手术可快速、高效地对动物全身组织细胞进行同步固定。同时，可以同步获得较完整的组织蛋白及核酸分子为后期实验提供优质的实验标本。

附图说明

图1为本发明的动物心脏灌流固定全身组织的装置(含两阀门)；

图2为本发明的动物心脏灌流固定全身组织的装置(含三通阀)。

附图标记

1、压力泵，2、导气管，3、缓冲瓶，4、供气管A，5、冲洗液瓶，51、压力表A，52、出液管A，6、固定液瓶，61、压力表B，62,、出液管B，7、恒温水浴锅A，8、恒温水浴锅B，9、供气管B，10、右心室导液管，11、右心室收集瓶，12、阀门A，13、阀门B，14、三通阀。

具体实施方式

现在结合附图对本发明作进一步详细的说明。

本发明的动物心脏灌流固定全身组织的装置，包括压力泵1、缓冲瓶3、冲洗液瓶5和固定液瓶6；其中，所述压力泵1通过导气管2与缓冲瓶3的进气端连接；所述冲洗液瓶5的进气端与固定液瓶6的进气端分别通过各自的供气管(供气管A4，供气管B9)与缓冲瓶3的出气端相连接；

所述冲洗液瓶的出气端与固定液瓶的出气端各自连接有出液管(出液管A52，出液管B62)。

其中，所述冲洗液瓶与固定液瓶各自的供气管并联与缓冲瓶的出气端相连，每个供气管上均设置一阀门(阀门A12，阀门B13)；

或者，所述冲洗液瓶与固定液瓶各自的供气管并联通过一三通阀(14)与缓冲瓶的出气端相连。

本发明所述冲洗液瓶与固定液瓶分别置于恒温水浴锅(恒温水浴锅A7，恒温水浴锅B8)中，从而保证瓶中液体温度恒定。

本发明所述缓冲瓶、冲洗液瓶与固定液瓶的瓶口均优选通过外压瓶塞密封，各瓶的进气端与出气端通过密封管路连接瓶体内外。

本发明可以在所述冲洗液瓶与固定液瓶的瓶口处设置压力表(压力表A51，压力表B61)，用于监测瓶内压力。压力表的检测接头密封穿过瓶盖伸入瓶内。

进一步地，本发明所述装置还包括右心室导管10与右心室收集瓶11，用于收集从心脏右心室流出的液体。所述右心室收集瓶连接于右心室导管的出口。

实施例1

在本实施例中，利用本发明的动物心脏灌流固定全身组织的装置对动物心脏灌流固定全身组织，包括：大型动物麻醉、测量大动物血压、手术开胸找到大动物的心脏并确定其心脏循环系统、心脏左心室插管及上腔静脉插管利用本发明装置以及获得的心脏体外动力循环固定体系，进行大动物的心脏灌流对其进行全身组织的同步固定、对动物进行取材。具体为：

一、用于动物心脏灌流试剂的配制

1、心脏灌流冲洗剂：150mg/mL的枸橼酸钠溶液，按照大型动物体重的10％～15％。

2、心脏灌流固定液：4％的多聚甲醛溶液，按照大型动物体重的10％～15％剂量准备。

注：以上试剂可以按照实验室常用试剂配制方案配制或者到相应的商店购买。其中，枸橼酸钠溶液可以使用去离子水或生理盐水与枸橼酸钠配置而成。

二、实验装置的准备

准备模拟心脏动力供气压力装置(压力泵)、导气管、缓冲瓶、外压瓶塞、冲洗液瓶、固定液瓶、压力表、出液管A、出液管B、右心室导液管、恒温水浴锅、右心室收集瓶等，组装成本发明的动物心脏灌流固定全身组织的装置。

三、手术装置的准备

外接电源、血压计、简易实验室动物手术台、手术器械，其包括麻醉剂、手术刀、牵开器、心脏剪、无损伤钳、拉钩、肋骨剪(钳)、胸腔吸引管、止血钳、穿刺排气针、血管扩张器、胸腔引流穿刺针、分心耳钳(腔静脉插管)、游离钳(血管游离)、三角肺叶钳(钳夹肺组织)

按上述说明对实验装置各组分进行组装准备操作，即可以同步对大动物进行全身组织的固定和同步获得较完整的组织蛋白及核酸分子为后期实验提供优质的实验标本。

四、猪的心脏灌流装置的应用

1、实验前准备

(1)配制枸橼酸钠水溶液约2L，多聚甲醛溶液2L；

(2)连接实验装置，调试实验装置的密封性，压力。

2、猪的麻醉

(1)取4周龄巴马猪1只，体重约6kg；

(2)吸取动物用麻药速眠新约0.6mL，肌肉注射，待其初步麻醉以后再注射3％的戊巴比妥钠6mL，助其深度麻醉约五分钟后动物可进入深度麻醉；

(3)将猪在实验台上仰卧，用绳子固定四肢，头部低于***高度；

(4)测量猪的血压。

3、猪的心脏暴露与灌流

(1)沿猪最下端提起皮肤，用大剪刀顺着方向从胸骨两边向上剪开肋骨及膈肌，完全暴露心脏将猪的胸骨打开暴露出心脏；

(2)左手持心脏，右手拿眼科剪在左心室前剪一小口，但不要剪穿，因为剪穿后血液流出，心脏不充盈；

(3)右手持出液管A，顺着剪口插进心脏，向左上角***，可明显感觉无阻力且有空间感，此时迅速打开压力泵与阀门A(或调节三通阀连接供气管A)，通过阀门根据心脏的跳动幅度逐渐加大进气量使得枸橼酸钠溶液(冲洗液)顺利进入左心室；

(4)右心耳剪口，将右心室导液管迅速***到剪口处用止血钳使其固定，使血液流出到右心室收集瓶中；

(5)当肝脏发白后，关闭阀门A(或三通阀)取出出液管A，原位置***出液管B，打开阀门B(或者打开并调节三通阀连接供气管B)，换成4％多聚甲醛(固定液)灌流，此时的体外灌流装置按照已测量猪的血压压力泵入多聚甲醛；

(6)当猪身体僵硬后即可停止灌注，完成全身组织固定。

最后所应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制。尽管参照实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应该理解，对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，都不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。