阅读说明：本技术 一种含有香鳞毛蕨提取物的抑菌洗手液及其制备方法 (Antibacterial hand sanitizer containing dryopteris fragrans extract and preparation method thereof ) 是由 常缨 陈玲玲 贾雯靖 于 2019-10-28 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种含有香鳞毛蕨提取物的抑菌洗手液及其制备方法,属于抑菌洗手液加工技术领域。该洗手液是由如下重量份的组分制成的：香鳞毛蕨提取物0.1份-0.4份,十二烷基硫酸钠1份-5份,脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠6份-10份,椰子油脂肪酸二乙醇酰胺2份-6份,无水亚硫酸钠1份-4份,氯化钠1份-4份,甘油0.5份-2份,香精0.1份-1份,水60份-90份。本发明的抑菌洗手液抑菌效果好,绿色环保,基质安全无副作用。可以用于工业生产绿色植物抑菌洗手液。(The invention discloses an antibacterial hand sanitizer containing dryopteris fragrans extracts and a preparation method thereof, and belongs to the technical field of antibacterial hand sanitizer processing. The hand sanitizer is prepared from the following components in parts by weight: 0.1-0.4 part of dryopteris fragrans extract, 1-5 parts of sodium dodecyl sulfate, 6-10 parts of fatty alcohol-polyoxyethylene ether sodium sulfate, 2-6 parts of coconut oil fatty acid diethanolamide, 1-4 parts of anhydrous sodium sulfite, 1-4 parts of sodium chloride, 0.5-2 parts of glycerol, 0.1-1 part of essence and 60-90 parts of water. The antibacterial hand sanitizer disclosed by the invention is good in antibacterial effect, green and environment-friendly, and safe in matrix without side effect. Can be used for industrial production of green plant bacteriostatic hand sanitizer.)

一种含有香鳞毛蕨提取物的抑菌洗手液及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种含有香鳞毛蕨提取物的抑菌洗手液及其制备方法，属于抑菌洗手液加工技术领域。

背景技术

近几年，随着人们生活水平的提高，也更加注重个人卫生，尤其是在炎热的夏天，人们更加注重勤洗手，从而带动了洗手液这一市场的发展，对洗手液的需求也大大增加。同时随着人们绿色环保的意识的逐步提高，在洗手液消费上更倾向于手部清洁产品的新星—植物源洗手液。除菌是洗手的主要目的之一，目前市售的各式洗手液所含的除菌物质不尽相同，除菌效果亦有区别。

香鳞毛蕨(Dryopteris fragrans)系鳞毛蕨科鳞毛蕨属植物，由于其叶片具芳香气味，故称香叶鳞毛蕨。经五大连池地区多年的民间验方，发现香鳞毛蕨具有抑菌以及治疗皮肤病的功能，香鳞毛蕨具有重要的开发前景。

CN 201510152148.1公开了一种多功能复合洗涤液及其制备方法和用途，其采用鱼腥草提取物和香鳞毛蕨提取物协同作用，具有高效的去污、增香、面料柔滑性能，满足了消费者对洗涤效果、洗涤功能和洗涤领域的多种需求。

金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿色假单胞菌、枯草芽孢杆菌是手部皮肤常见的代表性细菌。而现有技术中未见以香鳞毛蕨为活性成分的抑菌洗手液。

发明内容

为解决植物源抑菌洗手液稀缺的现象，本发明提供了一种含有香鳞毛蕨提取物的抑菌洗手液，采用的技术方案如下：

本发明的目的在于提供一种含有香鳞毛蕨提取物的抑菌洗手液，所述抑菌洗手液是由如下重量份的组分制成的：香鳞毛蕨提取物0.1份-0.4份，十二烷基硫酸钠1份-5份，脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠6份-10份，椰子油脂肪酸二乙醇酰胺2份-6份，无水亚硫酸钠1份-4份，氯化钠1份-4份，甘油0.5份-2份，香精0.1份-1份，水60份-90份。

优选地，所述抑菌洗手液是由如下重量份的组分制成的：香鳞毛蕨提取物0.2份-0.3份，十二烷基硫酸钠2份-3份，脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠7份-9份，椰子油脂肪酸二乙醇酰胺3份-5份，无水亚硫酸钠1份-2份，氯化钠2份-4份，甘油0.5份-1份，香精0.5份-1份，水70份-85份。

更优选地，所述抑菌洗手液是由如下重量份的组分制成的：香鳞毛蕨提取物0.3份，十二烷基硫酸钠2份，脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠8.5份，椰子油脂肪酸二乙醇酰胺4份，无水亚硫酸钠1.6份，氯化钠2份，甘油0.8份，香精0.6份，水80份。

优选地，本发明所述香鳞毛蕨提取物是通过50％乙醇按照料液比为1：10(g/mL)进行制备的。

更优选地，所述香鳞毛蕨提取物是通过以下方法获得的：称取香鳞毛蕨粉末，按照1：10(g/mL)的料液比加入50％乙醇，于50℃、800W条件下超声波浸提30min，避光浸泡24h后，抽滤得到滤液进行旋转蒸发，制备成浸膏，获得香鳞毛蕨提取物。

本发明还提供了所述一种含有香鳞毛蕨提取物的抑菌洗手液的制备方法，包括如下步骤：

1)称取香鳞毛蕨粉末，按照1：10(g/mL)的料液比加入50％乙醇，于50℃、800W条件下超声波浸提30min，避光浸泡24h后，抽滤得到滤液进行旋转蒸发，制备成浸膏，获得香鳞毛蕨提取物；

2)分别称取十二烷基硫酸钠、无水亚硫酸钠和氯化钠后加入到45℃水中，搅拌溶解；

3)待步骤2)溶解完全后，添加脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠，搅拌至彻底溶解，然后加甘油、椰子油脂肪酸二乙醇酰胺和香精；

4)待步骤3)中的液体呈粘稠状，冷却至40℃时加入香鳞毛蕨提取物，搅拌均匀，装瓶，获得抑菌洗手液。

本发明的有益效果：

1、不同条件下提取香鳞毛蕨获得的提取物由于其提取方法不同获得的香鳞毛蕨提取物的功效不同，本发明通过对提取工艺进行优化进一步获得了适用于杀死手部细菌的香鳞毛蕨提取物，并以优化后的香鳞毛蕨提取物为原料进一步获得了含有香鳞毛蕨提取物的抑菌洗手液。

2、本发明通过在50％乙醇、料液比1：10、提取温度50℃、提取时间30min、超声波功率为800W的条件下提取香鳞毛蕨获得的香鳞毛蕨提取物，获得的提取物对手部细菌具有较好的抑制效果，对手肤细菌的抑菌圈直径最高可达到2.75cm，取得了预料不到的技术效果。相比于专利CN201510152148.1(鱼腥草提取物和香鳞毛蕨提取物协同)，本发明只需要香鳞毛蕨提取物，省略了鱼腥草提取物，还能够达到专利CN201510152148.1的抑菌效果，甚至优于专利申请号为201510152148.1中的抑菌效果。

3、香鳞毛蕨抑菌效果好于其他中草药，用量少，抑菌率高。

4、香鳞毛蕨经提取后，仍保留了植株原有的香味，制备成的洗手液具有植株的特征性气味。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步说明，但本发明不受实施例的限制。

以下实施例中所用试验材料：香鳞毛蕨采自黑龙江省五大连池市火山熔岩处，金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、铜绿色假单胞菌均购自于黑龙江省微生物研究所。

实施例1：香鳞毛蕨提取工艺的优化

采用电子天平精密称取香鳞毛蕨植株粉末每份10g，浸泡于各浓度的乙醇中。根据各因素的时间进行超声波振荡提取。避光静置24h后抽滤。所得液体通过旋转蒸发仪制备成粘稠膏状，4℃冰箱中保存备用。采用L₉(3⁴)正交表，选取乙醇浓度、料液比、提取时间、提取温度4个影响因素，确定3个水平进行正交实验；因素水平表如表1。抑菌效果以试验抑菌圈大小为指导。

表1正交设计因素水平表

培养基的配制：牛肉膏蛋白胨液体培养基：准确称取牛肉膏3g、蛋白陈10g、NaCl5g加入水1000mL即得。固体培养基较液基需添加15g琼脂。使用前121℃高压蒸汽灭菌20min，待用。

菌株的活化：操作于超净工作台内进行。吸取己灭菌的液体培养基20mL，放入已灭菌的50mL锥形瓶中。然后用接菌环挑取一个菌落加到锥形瓶的培养基中，放于培养箱内摇床培养。培养温度为37℃，培养时间为12-16h。

菌悬液的制备：将培养后的菌液，采用10倍稀释法用液体培养基稀释，制成一系列菌悬液，利用血球计数板来计数，将菌悬液的浓度调整到10⁶cfu/mL。

牛津杯法：药物会使致病菌的生长受到抑遏，在牛津杯周围产生清晰的抑菌圈。抑菌圈直径的大小可以呈现出致病菌对药物的敏感程度。抑菌圈直径小，则表示致病菌对药物的敏感程度低；否则，抑菌圈直径大，则是敏感程度高。

灭菌后的牛肉膏蛋白胨固体培养基降温到40-50℃，倒入已灭菌的培养皿内，每皿15mL(下层)，凝固备用。取1mL的菌液用涂布器均匀涂布在已凝固的培养基表面。镊子夹取牛津杯放在培养皿表面，每皿4个。取200uL香鳞毛蕨提取液加入到牛津杯中，对照设置为无菌水。37℃恒温培养箱内培养24h，取出观察牛津杯孔旁是否存在透明圈，测量并记录其大小。

判断标准：抑菌圈直径>20mm为高敏；抑菌圈直径处在15-20mm判定中敏；抑菌圈直径<15mm为低敏；无抑菌圈为无抑菌作用。

实验结果如表2所示。

表2 L₉(3⁴)正交实验结果

工艺优化后提取物抑菌能力验证：根据实施例1中得到的最佳提取工艺(条件50％乙醇，料液比为1：10，提取时间为10min，温度为50℃)进行提取，采用制备成的浸膏进行抑菌能力的验证实验。结果如表3：

表3香鳞毛蕨提取物对4种细菌的抑制大小

结果显示，优化后的提取物抑菌效果明显好于优化以前的抑菌效果。

通过上述实验可知，香鳞毛蕨提取物的最优提取工艺为：称取香鳞毛蕨粉末，按照1：10(g/mL)的料液比加入50％乙醇，于50℃、800W条件下超声波浸提30min，避光浸泡24h后，抽滤得到滤液进行旋转蒸发，制备成浸膏，获得香鳞毛蕨提取物。

实施例2

本实施例按照如下方法和配方制备抑菌洗手液：

1)称取香鳞毛蕨粉末，按照1：10(g/mL)的料液比加入50％乙醇，于50℃、800W条件下超声波浸提30min，避光浸泡24h后，抽滤得到滤液进行旋转蒸发，制备成浸膏，获得香鳞毛蕨提取物；

2)分别称取十二烷基硫酸钠、无水亚硫酸钠和氯化钠后加入到45℃水中，搅拌溶解；

3)待步骤2)溶解完全后，添加脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠，搅拌至彻底溶解，然后加甘油、椰子油脂肪酸二乙醇酰胺和香精；

4)待步骤3)中的液体呈粘稠状，冷却至40℃时加入香鳞毛蕨提取物，搅拌均匀，装瓶，获得抑菌洗手液。

洗手液由如下重量份的组分制成的：香鳞毛蕨提取物0.1份-0.4份，十二烷基硫酸钠2份，脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠8.5份，椰子油脂肪酸二乙醇酰胺4份，无水亚硫酸钠1.6份，氯化钠2份，甘油0.8份，香精0.6份，水80份。每份取1mg。

将不同含量香鳞毛蕨提取物的洗手液制成固体培养基，以未添加香鳞毛蕨提取物的洗手液制成的固体培养基为空白对照(CK)。用移液器吸取0.2mL菌悬液均匀涂布于培养基表面，37℃电热恒温培养箱培养24h，在菌落计数器上数菌落数，每个浓度重复三次，读取平均值。

抑制率＝(CK菌落数一处理菌落数)/CK菌落数x100％

结果如表4所示。

表4不同香鳞毛蕨提取物添加量的洗手液的抑制率

实验结果显示，当香鳞毛蕨提取物添加量在0.1mg-0.4mg之间制备的香鳞毛蕨洗手液对四种细菌的抑制率良好，其中当香鳞毛蕨提取物添加量在0.2mg-0.3mg的效果更好，同时可以看出当香鳞毛蕨添加量为0.3份时，其对四种致病菌的抑制效果与添加量为0.4份时差异不大。故选择0.3份为最佳添加量。

实施例3

本实施例提供了一种含有香鳞毛蕨提取物的抑菌洗手液及其制备方法，配方和制备方法具体如下：

配方：香鳞毛蕨提取物0.1份，十二烷基硫酸钠1份，脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠6份，椰子油脂肪酸二乙醇酰胺2份，无水亚硫酸钠1份，氯化钠1份，甘油0.5份，香精0.1份，水60份。每份取1mg。

香鳞毛蕨洗手液制备方法为：

1)称取香鳞毛蕨粉末，按照1：10(g/mL)的料液比加入50％乙醇，于50℃、800W条件下超声波浸提30min，避光浸泡24h后，抽滤得到滤液进行旋转蒸发，制备成浸膏，获得香鳞毛蕨提取物；

2)分别称取十二烷基硫酸钠、无水亚硫酸钠和氯化钠后加入到45℃水中，搅拌溶解；

3)待步骤2)溶解完全后，添加脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠，搅拌至彻底溶解，然后加甘油、椰子油脂肪酸二乙醇酰胺和香精；

4)待步骤3)中的液体呈粘稠状，冷却至40℃时加入香鳞毛蕨提取物，搅拌均匀，装瓶，获得抑菌洗手液。

对上述方法制备的洗手液进行检测发现抑菌圈的直径为21.5mm。

实施例4

本实施例提供了一种含有香鳞毛蕨提取物的抑菌洗手液及其制备方法，配方和制备方法具体如下：

配方：香鳞毛蕨提取物0.4份，十二烷基硫酸钠5份，脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠10份，椰子油脂肪酸二乙醇酰胺6份，无水亚硫酸钠4份，氯化钠4份，甘油2份，香精1份，水90份。每份取1mg。

香鳞毛蕨洗手液制备方法为：

1)称取香鳞毛蕨粉末，按照1：10(g/mL)的料液比加入50％乙醇，于50℃、800W条件下超声波浸提30min，避光浸泡24h后，抽滤得到滤液进行旋转蒸发，制备成浸膏，获得香鳞毛蕨提取物；

2)分别称取十二烷基硫酸钠、无水亚硫酸钠和氯化钠后加入到45℃水中，搅拌溶解；

3)待步骤2)溶解完全后，添加脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠，搅拌至彻底溶解，然后加甘油、椰子油脂肪酸二乙醇酰胺和香精；

4)待步骤3)中的液体呈粘稠状，冷却至40℃时加入香鳞毛蕨提取物，搅拌均匀，装瓶，获得抑菌洗手液。

对上述方法制备的洗手液进行检测发现抑菌圈的直径为23.4mm。

实施例5

本实施例提供了一种含有香鳞毛蕨提取物的抑菌洗手液及其制备方法，配方和制备方法具体如下：

配方：香鳞毛蕨提取物0.2份，十二烷基硫酸钠2份，脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠7份，椰子油脂肪酸二乙醇酰胺3份，无水亚硫酸钠1份，氯化钠2份，甘油0.5份，香精0.5份，水70份。每份取1mg。

香鳞毛蕨洗手液制备方法为：

1)称取香鳞毛蕨粉末，按照1：10(g/mL)的料液比加入50％乙醇，于50℃、800W条件下超声波浸提30min，避光浸泡24h后，抽滤得到滤液进行旋转蒸发，制备成浸膏，获得香鳞毛蕨提取物；

2)分别称取十二烷基硫酸钠、无水亚硫酸钠和氯化钠后加入到45℃水中，搅拌溶解；

3)待步骤2)溶解完全后，添加脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠，搅拌至彻底溶解，然后加甘油、椰子油脂肪酸二乙醇酰胺和香精；

4)待步骤3)中的液体呈粘稠状，冷却至40℃时加入香鳞毛蕨提取物，搅拌均匀，装瓶，获得抑菌洗手液。

对上述方法制备的洗手液进行检测发现抑菌圈的直径为24.6mm。

实施例6

本实施例提供了一种含有香鳞毛蕨提取物的抑菌洗手液及其制备方法，配方和制备方法具体如下：

配方：香鳞毛蕨提取物0.3份，十二烷基硫酸钠3份，脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠9份，椰子油脂肪酸二乙醇酰胺5份，无水亚硫酸钠2份，氯化钠4份，甘油1份，香精1份，水85份。每份取1mg。

香鳞毛蕨洗手液制备方法为：

1)称取香鳞毛蕨粉末，按照1：10(g/mL)的料液比加入50％乙醇，于50℃、800W条件下超声波浸提30min，避光浸泡24h后，抽滤得到滤液进行旋转蒸发，制备成浸膏，获得香鳞毛蕨提取物；

2)分别称取十二烷基硫酸钠、无水亚硫酸钠和氯化钠后加入到45℃水中，搅拌溶解；

3)待步骤2)溶解完全后，添加脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠，搅拌至彻底溶解，然后加甘油、椰子油脂肪酸二乙醇酰胺和香精；

4)待步骤3)中的液体呈粘稠状，冷却至40℃时加入香鳞毛蕨提取物，搅拌均匀，装瓶，获得抑菌洗手液。

对上述方法制备的洗手液进行检测发现抑菌圈的直径为25.9mm。

实施例7

本实施例将按照最优制备的香鳞毛蕨抑菌洗手液进行理化指标和稳定性指标等指标检测。

香鳞毛蕨洗手液最佳配方为：

香鳞毛蕨提取物0.3份，十二烷基硫酸钠2份，脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠8.5份，椰子油脂肪酸二乙醇酰胺4份，无水亚硫酸钠1.6份，氯化钠2份，甘油0.8份，香精0.6份，水80份。每份取1mg。

香鳞毛蕨洗手液制备方法为：

1)称取香鳞毛蕨粉末，按照1：10(g/mL)的料液比加入50％乙醇，于50℃、800W条件下超声波浸提30min，避光浸泡24h后，抽滤得到滤液进行旋转蒸发，制备成浸膏，获得香鳞毛蕨提取物；

2)分别称取十二烷基硫酸钠、无水亚硫酸钠和氯化钠后加入到45℃水中，搅拌溶解；

3)待步骤2)溶解完全后，添加脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠，搅拌至彻底溶解，然后加甘油、椰子油脂肪酸二乙醇酰胺和香精；

4)待步骤3)中的液体呈粘稠状，冷却至40℃时加入香鳞毛蕨提取物，搅拌均匀，装瓶，获得抑菌洗手液。

对上述方法制备的洗手液进行检测发现抑菌圈的直径为27.0mm。

实施例8

本实施例将实施例7(按照最优配方和最优香鳞毛蕨提取方法制备的香鳞毛蕨抑菌洗手液)制备的香鳞毛蕨抑菌洗手液进行理化指标和稳定性指标等指标检测。

1、香鳞毛蕨抑菌洗手液的理化指标检测

分别对感官指标、理化指标和卫生指标进行检测，结果见表5。

表5香鳞毛蕨抑菌洗手液的理化指标检测结果

2、香鳞毛蕨抑菌洗手液的稳定性考察

在实验室条件下(设定低温-5℃、高温40℃)，洗手液的稳定性检测按如下步骤进行：

1)在低温和高温下各存放1、2、3周，依次观察其稳定性；

2)在高温和低温之间各循环放置24h，按次序循环3次，辩察其稳定性；

3)采用离心机对洗手液试样进行梯度离心：300r/min离心1h、3000r/min离心30min和10000r/min离心10min，观察差异转数和时间对其稳定性变化。

表6 pH稳定性考察结果

表7室温稳定性考察结果

表8高温稳定性考察结果

表9低温稳定性考察结果

表10冷热交替(-5℃-40℃每天循环一次)状态稳定性考察结果

3、香鳞毛蕨抑菌洗手液的安全性评价

采用人体斑贴实验，方法如下：

本实验选取志愿者32人，年龄构成和性别随机确定，符合2015《化妆品安全技术规范》纳入、排除标准；选取前臂内侧皮肤为受试部位，皮肤分为两部分，一部分为空白对照，每个斑贴扣加入25μL不添加抑菌成分的洗手液；一部分为测试区，每个斑贴扣中加入25μL配制好的抑菌洗手液，然后将加有斑试物的斑试器胶带贴牢；斑贴试验时间为48h；贴敷48h后，去除斑试器，30min后观察记录试验结果。详细操作步骤和结果判断参照斑贴试验诊断试剂盒说明书。

表11抑菌洗手液斑贴实验结果

经人体斑贴实验、考察了洗手液的安全性。皮肤斑贴试验结果表明，抑菌洗手液对皮肤几乎无刺激，对照组与实验组没有明显差异，安全性高。

虽然本发明已以较佳的实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可以做各种改动和修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。